Изобретение касается применения лекарственного средства на основе безбактериальных и безбелковых экстрактов из Escherichia coli для лечения ретровирусных инфекций.
Ретровирусы являются шарообразными, покрытыми оболочкой, РНК-вирусами, из которых два подсемейства патогенны для человека и животных. Характерным признаком ретровирусов является обратная транскриптаза, РНК-зависимая ДНК-полимераза. При репликации однонитевая вирусная РНА транскрибируется обратной транскриптазой в двуниточную промежуточную ступень ДНК и последняя встраивается в качестве провируса в геном хозяйской клети. Провирус через регулярную транскрипцию начинают образование РНК - содержащих вирусных частиц, которые покидают хозяйскую клетку после отпочкования. Ретровирусы вызывают лейкемии, аутоиммунные болезни, а также иммунодепрессии, а именно у человека, в частности, СПИД и ARS, (т.е. aids relafed Syndrome = синдром, родственный или близкий спиду), являющийся предварительной ступенью к полной картине болезни при спиде. Извлечение ретровирусных инфекций у человека до сегодняшнего дня невозможно, так как все попытки создать вакцину против вируса до сих пор оканчивались неудачей из-за его очень высокой скорости мутации. Терапевтически до сих пор применяются медикаменты, которые ингибируют обратную транскриптазу, при этом речь идет большей частью о замещенных дезоксинуклеозидах гуанозина, цитидина и тимидина. До сих пор наиболее известным активным веществом является А Т, который, правда, лишь в состоянии замедлять симптомы ретровирусной инфекции, но не излечивать болезнь.
Совершенно неожиданно было установлено, что известные сами по себе безбактериальные и безбелковые экстракты из Escherichia Coli, возможно в сочетании с экстрактами из Ginkgo biluba, в состоянии заметно замедлять развитие ретровирусных инфекций, не проявляя побочных действий, известных по терапевтическим средствам на основе нуклеозидов. Экстракты из Coli могут применяться вместе с экстрактами из Ginkgo как таковые, но также возможно комбинировать экстракты с лечением терапевтическими средствами, содержащими нуклеозиды, причем возможно уменьшение дозы нуклеозидов и тем самым ожидаемых побочных действий.
Экстракты из листьев Ginkgo biloba применяются уже продолжительное время для терапии периферийных и церебральных артериальных расстройств кровообращения. Способ получения экстрактов из зеленых листьев известен, например, из DE-PS 1767098, 2117429, а также EP-A O 324197, EP-A O 330567 и DE-OS 3940091. Еще один способ получения экстрактов из желтых осенних листьев Ginkgo biloba jgbcfy d EP-A O 352146.
Листьев Ginkgo biluba содержат ряд различных соединений, среди которых преобладают так называемые гинкгофлавонгликозиды. Типичным представителем этого класса веществ является 5, 7, 3', 4'- тетрагидрокси-флавоно-3-O- α рамнопиранозил-4-O- β -D- (6'''-транскумароил)-глюкопиранозид. В меньших количествах содержатся терпенлактоны, как, например, глинкголиды (Ginkgolide) более подробно описанные, например, Okabe at al., J. Chem. Soc. (1967), 2201-2206. Близко родственным с терпенлактонами является также билобалид, применение которого известно для лечения нейропатий и подобных заболеваний из US-PS 4571407.
Кроме того, листья Ginkgo biloba содержат еще так называемые гинкголевые кислоты, т.е. 6-алкилсалициловые кислоты, имеющие алкильные остатки с 13-19 C-атомами и 0-3 двойными связями. Из этих гинкголевых кислот можно получить биогенетически или переработкой листьев соответствующим образом замещенный фенол, известный как аллергизирующее вещество. Способы получения экстрактов различаются в основном попытками по возможности исключить нежелательные компоненты или сопровождающие вещества, в особенности, если экстракты позже должны применяться в инъецируемой форме. Из известной литературы в расположении специалиста имеется, однако, ряд способов отделения нежелательных компонентов.
Имеющиеся сегодня в продаже экстракты Ginkgo поэтому, как правило, хорошо переносимы также и в инъецируемой форме; такие продукты выпускаются в продажу, например, фирмой Dk Wilmfr Schwabe Gmbtt & Co. D-7500 в Карлсруэ под маркой "Tebonin®" .
EP-B-O 352 146 упоминает уже, что экстракты из желтых листьев Ginkgo biloba в состоянии понижать повышенный уровень гамма-глобулина у млекопитающих, как он например, наблюдается также у больных СПИДом. В этой публикации, однако, не содержатся более подробные данные относительно того, может ли этот экстракт и с каким успехом действительно применяться при СПИДе.
Безбактериальные и безбелковые экстракты из культур Escherichia coli применяют уже давно в терапевтических целях, а именно с одной стороны, при нарушениях подвижности и проницаемости слизистой оболочки кишечника, но также и при воспалениях, как то болезнь Крона (Morous Crohn) или после антибиотической, химио- или лучевой терапии. Другой областью применения экстрактов Coli являются аллергии, как то сенный насморк, крапивница, экзема, пищевые аллергии и астма. Наконец, еще одной терапевтической областью применения является их применения при лечении угрей и мигрени и кроме того, эти экстракты, как описано в DE-PS 3816298 являются анаболически активными и приводят к стимуляции иммунной защиты, неспецифической для возбудителя. Способы получения между прочем описаны также в DE-PS 3816298. Безбактериальные и безбелковые экстракты из Escherichia coli содержат относительно короткоцепные олигопептиды и, как следует из исследований, опубликованных в Drug Res. 23, 829-830 (1973), полисахаридную составляющую из преимущественно глюкозы, галактозы, и ксилозы, а также небольшую долю жирных кислот. Однако, нуклеиновые кислоты не были обнаружены. Бросается в глаза, что проводившиеся до сих пор количественные исследования на этих пептидах подтвердили отсутствие ароматических аминокислот, за исключением гистидина.
Такого рода бесклеточные и безбелковые экстракты из культур Escherichia coli могут вводиться перорально или также в виде инъекций. Соответствующие препараты выпущены уже в продажу, например, фирмой Fa.Laves Arzneimittel Gmbtt, Барбараштрассе, 14, 3003, Ронненберг, под маркой Colibiogen®″. .
Действие экстрактов Coli, в частности в комбинации с экстрактами из Ginkgo, при ретровирусных инфекциях в настоящее время не может еще получить однозначного научного объяснения. Правда, клинические опыты четко показали, что при назначении таких лекарств сохраняется и даже большей частью однозначно увеличивается доля T4 -лимфоцитов. Согласно недавно разработанной рабочей гипотезе (WO, A 9214478), наблюдаемое выпадение специфической иммунной защиты предположительно обусловлено тем, что инфекции ретровирусами приводят к уменьшению T4-лимфоцитов и позже также к уменьшению T8-лимфоцитов. Основанное на этом перепроизводство "невыпрямленных" иммуноглобулинов B - лимфоцитами должно способствовать тогда ослаблению специфической иммунной защиты и ее развалу. Из клинических наблюдений есть основания для предположения, что активные вещества в экстракте Coli и Ginkgo уменьшают или, соответственно, тормозят увеличенное производство "невыпрямленных" иммуноглобулинов.
Оказалось, кроме того, что при приеме экстрактов Coli и Ginkgo может быть уменьшена доза ретровирусоспецифических лекарств, благодаря чему существенно уменьшается опасность побочных действий, в частности вторичных анемий. Снижение дозы, кажется, лишь отчасти основано на лучшей восприимчивости к нуклеозидной терапии.
Лекарственные средства согласно изобретению могут вводиться перорально, предпочтительно, однако, в виде инъекции. Оказалось, что экстракты Coli и Ginkgo могут приниматься совместно с нуклеозидными терапевтическими средствами, но что, с другой стороны, имеет также преимущество, если экстракт Coli или Ginkgo применяется заблаговременно перед приемом нуклеозидного терапевтического средства, причем это временное смещение может составлять от нескольких часов до 1-2 дней. Поэтому изобретение касается также так называемого набора (Kit), содержащего отдельные активные вещества для перорального или парентерального применения в пространственно разделенной форме.
Дозировка составляет для одной дозиметрической единицы экстракта безбелковых и бесклеточных продуктов обмена 4-9 • 1012 микроорганизмов, в то время как у экстракта Ginkgo дозиметрическая единица содержит 50-200 мг сухого экстракта. Ежедневная доза должна устанавливаться для каждого пациента индивидуально. И при длительном лечении до сих пор также не было выявлено никаких побочных действий.
Изобретение ниже поясняется подробнее на примерах.
пример 1. Экстракт Coli получают по способу, подробнее описанному в DE-PS 3816298, прививая бульонным культурам штамм желаемых серотипов E.coli и инкубируя по меньшей мере 5 дней при 37oC. Предпочтительно применяют серотип 02:K1:K6. Из этой бульонной культуры с прибл. от 4 до 9 • 1012 образующих колонию единиц на мл затем получают известным способом при стерильных условиях безбактериальные и безбелковые фильтры, которые могут быть либо переработаны известным способом в инъекционные растворы либо применены как таковые для введения в виде пероральных лекарств. Кроме того, экстракты могут быть с помощью щадящей вакуумной сушки освобождены от воды и известным способом переработаны в капсулы и таблетки.
Пример 2. Для получения экстрактов Ginkgo зеленые или желтые листья Ginkgo biloba тонок измельчают и известным способом экстрагируют с ацетоном иди этанолом, в частности смесью воды с ацетоном или этанолом в соотношении 50: 50 в течение нескольких часов при температурах 40 и 60oC. После экстракции жидкость отжимают из листьев, и она может быть подвергнута дальнейшей экстракции. Полученный белый экстракт экстрагируют на первой ступени очистки не смешивающимся с водой растворителем, предпочтительно циклогексаном. Водно-кетонную фазу затем перерабатывают, неполярную фазу выбрасывают. Затем водно-кетонную фазу сгущают приблизительно до половины ее объема и выпавший осадок отфильтровывают. Профильтрованный раствор смешивают известным способом с сульфатом аммония и экстрагируют бутанолом. Полученный экстракт после сушки над сульфатом натрия сгущают под уменьшенным давлением и в заключение исчерпывающе экстрагируют этанолом. Этот остаток затем сгущают под вакуумом для сушки.
Этот экстракт, который затем известным образом может быть превращен в готовый продукт, содержит в среднем прибл. 25% гинкгофлавонгликозидов и прибл. 5% терпенлактонов (эти величины могут колебаться прибл. на 10% вверх или вниз в зависимости от происхождения и возврата листьев).
Пример 3. Проводившиеся до сих пор клинические опыты показывают, что у пациентов с ARS при ежедневной оральной даче одной чайной ложки экстракта Coli перорально или одной инъекции экстракта Coli уже через 2 дня наблюдается заметное улучшение общего самочувствия и увеличение популяции T4-лимфоцитов. Если дополнительно к экстракту Coli давали по одной ампуле экстракта Ginkgo с содержанием сухого экстракта 50 мг, то даже в самых тяжелых случаях достигалось увеличение количества T4-лимфоцитов до более 400/мкл. При дополнительной даче экстрактов Coli и Ginkgo при лечении нуклеозидными препаратами наблюдалось значительно меньше субъективных и объективных побочных действий, так что при длительной терапии теперь впервые можно было предпринять уменьшение дозы.
Использование: ветеринария и медицина. Сущность изобретения: изобретение относится к лекарственному средству для лечения ретровирусных инфекций, которое содержит безбактериальные и безбелковые экстракты из Escherichia coli и при необходимости экстракты зеленых и желтых листьев Ginkgo biloba. 7 з.п. ф-лы.
| WO, заявка, 9214478, кл | |||
| Устройство для сортировки каменного угля | 1921 |
|
SU61A1 |
