СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СМЕСИ СЕННОЗИДОВ А, В И А*001, СМЕСЬ СЕННОЗИДОВ А, В И А*001 И СЛАБИТЕЛЬНОЕ СРЕДСТВО НА ИХ ОСНОВЕ Российский патент 1998 года по МПК C07H15/244 A61K35/78 

Изобретение относится к способу выделения сеннозидов A, B и A₁, которые в основном свободны от сеннозидов C, D и D₁ и алоэ-амодиновых компонентов, а также к получаемым по этому способу сеннозидам и фармацевтическим средствам, которые содержат эти сеннозиды.

Сеннозиды представляют собой слабительно действующие вещества, которые находятся в высушенных лекарственных растениях родов Cassia и Rheum. Высушенное лекарственное сырье сенна состоит из высушенных листьев и стручков растений сенны, например, индийской сенны (Cassia acutifolia).

Слабительно действующие сеннозиды представляют собой производные диантронглюкозиды реина и алоэ-амодина. Важнейшими являются сеннозиды A, B, C, D и D₁. Они соответствуют формуле

У сеннозидов A, B, и A₁, R обозначает COOH, а у сеннозидов C, D и D₁, R обозначает CH₂OH. Сеннозиды A, B и A₁, соответственно, C, D и D₁ представляют собой стереоизомеры и различаются друг от друга конфигурацией у C-атомов 10 и 10'.

Сырое лекарственное сырье содержит наряду с сеннозидами также агликоны (сеннидины), полугликозидированные сеннидины, полимеры, продукты разложения сеннозидов, алоэ-эмодин и его производные и т.д., которые могут вызывать нежелательные побочные действия, как недомогания, рвота, вздутия и колики.

Способ выделения сеннозидов из высушенных лекарственных растений сенны описаны, например, в пат. ФРГ B-16 30 H 203 17 667, пат. Франции M-6611, пат. Великобритании A-832017 81(1)B и пат. ФРГ A-3 200 131 C 07 H 15/24. Выделенные согласно этим известным способам сеннозиды содержат, каждый в зависимости от лекарственного сырья, смесь сеннозидов с 1,5-5% сеннозидов C, D и D₁. Как уже указывалось выше, они содержат в соей молекуле производную часть алоэ-эмодина формулы

Было бы желательно иметь возможность выделения сеннозидов, которые в основном свободны от сеннозидов C, D и D₁.

Полное в основном отделение сеннозидов C, D и D₁ от смеси сеннозидов согласно уровню техники на настоящий момент неизвестно.

Поэтому цель изобретения - разработка способа выделения сеннозидов A, B и A₁, которые в основном свободны от нежелательных примесей, в частности, сеннозидов C, D и D₁.

Цель достигнута способом, который отличается тем, что
а) смесь сеннозидов подвергают восстановлению до реин-9-антрон-глюкозида;
б) осуществляют жидкостно-жидкостное распределение полученных соединений между только частично смешивающимся с водой, полярным органическим растворителем и водной фазой и
в) содержащийся после распределения в водной фазе реин-9-антрон-8-глюкозид окисляют до сеннозидов A, B и A₁ и его выделяют.

Стадия А.

В качестве исходного материала для способа согласно изобретению в общем используются смеси сеннозидов, которые образуются при экстракции лекарственных растений сенны по вышеупомянутым способам. Например, в качестве исходного материала пригодна смесь сеннозидов, которая получается по описанному в пат. ФРГ А-32 00 131 способу. Затем сначала экстрагируют лекарственные растения сенны водным метанолом. Остающийся после полного удаления метанола концентрат содержит сеннозиды в форме калиевой соли. Этот концентрат можно использовать в качестве исходного материала для предлагаемого в изобретении способа.

Концентрат можно еще очистить путем жидкостно-жидкостной экстракции с помощью частично растворимых в воде спиртов или кетонов (например, бутанол-2, 2-бутанон, ацетон) (рафинат). Рафинат подкисляют до pH примерно 1,5-2,0 и сеннозиды доводят до кристаллизации при внесении затравки. Полученная смесь сырых сеннозидов также пригодна в качестве исходного продукта для способа согласно изобретению. При желании смесь сырых сеннозидов также еще можно перекристаллизовать.

Альтернативно можно применять смешанный с частично растворимым в воде спиртом или кетоном, в частности, бутанолом-2, концентрат в качестве исходного материала.

При экстракции лекарственных растений сенны соотношение лекарственного сырья к растворителю для экстракции составляет предпочтительно 1:4 - 1:15, в особенности 1:4 - 1:10.

Экстракцию осуществляют предпочтительно в присутствии буфера, например, тринатрийцитрата, глицина, бикарбоната натрия или сахарозы.

Согласно предлагаемому в изобретении способу эти исходные материалы подвергают полному восстановлению до соответствующего реин-9-антрон-8-глюкозида (R = COOH) и соответствующего алоэ-эмодин-9-антрон-8-глюкозида (R = CH₂OH) формулы

Восстановителем с пригодным восстановительным потенциалом являются хлорид олова-II, диоксид серы, бороводороды щелочных металлов и предпочтительно дитиониты щелочных металлов, в частности, дитионит натрия.

Для проведения восстановления исходный материал может быть представлен в водном растворе или суспензии и восстановитель добавляют в твердой форме или растворенным в воде. Возможно также, в частности, при применении первичного экстракта плодов сенны работать в двухфазной смеси согласно DE-A-3200131 (= водный концентрат) таким образом, что добавляют частично смешивающийся с водой полярный органический растворитель, в частности, 2-бутанол или ацетон.

Восстановление можно проводить при температуре окружающей среды или при повышенной температуре. Восстановление целесообразнее осуществлять при 40-60^oC, в частности, при 50-55^oC. Работают при слабокислом, вплоть до слабощелочного pH-значении исходного раствора сеннозидов, соответственно суспензии сеннозидов, предпочтительно при pH-значении 5-10,5. При желании можно осуществлять восстановление многократно, в частности, 2-10 раз.

Образовавшиеся 9-антрон-8-глюкозиды осаждают путем добавки кислоты, например, серной кислоты, вплоть до примерно pH-значения 2-4,5. При этом температура целесообразнее должна составлять не более, чем 40^oC. Целесообразнее работать при осаждении антронглюкозидов и при их выделении (например, путем фильтрации) в атмосфере азота, чтобы избежать неконтролируемого окисления этих соединений.

Существенно, чтобы восстановление протекало полностью. Целесообразнее поэтому применять восстановитель в большом избытке. Дитиониты, в особенности дитионит натрия, применяют в общем в 1-4-х-кратном весовом количестве, в расчете на содержание в исходном материале сеннозидов. Кроме того, восстановителем можно воздействовать минимально 2 ч, предпочтительно минимально 3 ч. В общем восстановление осуществляют не больше, чем 10 ч. Предпочтительно проводят дополнительное восстановление в указанных условиях.

Полученный продукт перед его введением в стадию В предпочтительно переосаждают тем, что его растворяют в водном растворе за счет добавки основания (NaOH, KOH) примерно вплоть до pH-значения 6-7, водный раствор экстрагируют 2-бутанолом, 2-бутаноном или ацетоном и продукт снова осаждают за счет добавки кислоты вплоть до pH-значения 2-4.

Стадия Б.

В этой стадии удаляют алоэ-эмодиновые компоненты, в частности, алоэ-эмодин-9-антрон-8-глюкозид. Для этой цели осуществляют жидкостно-жидкостную экстракцию полученного продукта путем распределения между только частично смешивающимся с водой полярным органическим растворителем и водной фазой. Пригодными полярными органическими растворителями являются C₄-C₅-спирты и ди-C₁-C₃-алкилкетоны, такие как 1-бутанол, 2-бутанол, 2-бутанон и ацетон. Предпочтительно применяют 2-бутанол или ацетон.

Предпочтительно добавляют к водной фазе восстановитель, чтобы придать водной фазе во время всей жидкостно-жидкостной экстракции редокс-потенциал-210 mV или отрицательнее. Целесообразнее применять тот же восстановитель, что и в стадии А. При применении дитионита щелочного металла в качестве восстановителя в общем достаточно 2-4 мас.%-ного раствора при pH-значении 7-10,5, чтобы соблюдать упомянутые условия потенциала. pH-значения целесообразнее поддерживать в этой области путем добавки буфера.

Объемное соотношение водной фазы (тяжелая фаза) к органической фазе (легкая фаза) составляет в общем величину в области 1:5 - 1:40.

Предпочтительно осуществляют жидкостно-жидкостную экстракцию противотоком. Смесь антроновых соединений при этом подают в форме полученного после восстановления раствора или, если антроновые соединения выделяются, в форме 3-15 мас.%-ного раствора.

После экстракции желательный реин-9-антрон-8-глюкозид находится в водной фазе. Его осаждают путем кислоты вплоть до pH-значения примерно 2-4 и получают обычным образом.

Стадия B.

В этой стадии реин-9-антрон-8-глюкозид снова окисляют до соответствующих сеннозидных соединений. Пригодными окислителями для этой цели являются пероксид водорода, диоксид марганца, перманганат, ацетонилацетонат марганца-III.

Однако предпочтительно окисление осуществляют с помощью кислорода. В качестве источника кислорода может служить, например, воздух.

Так как реин-9-антрон-8-глюкозид нерастворим в воде, его для окисления переводят в растворимую форму. Это осуществляется, например, благодаря тому, что за счет добавки пригодного основания вплоть до pH-значения примерно 6-7 его переводят в соль щелочного металла или в кальциевую соль. В желательном случае можно добавлять в раствор небольшое количество (вплоть до примерно 30 об. %) только частично смешивающегося с водой растворителя, в особенности 2-бутанола.

Окисление осуществляют в по-возможности концентрированном растворе, так как таким образом благоприятствуют образованию желательных сеннозидов. Целесообразнее проводить окисление с помощью раствора, который содержит примерно 250-300 г реин-9-антрон-8-глюкозида на литр растворителя. При применении кислорода в качестве окислителя целесообразнее пропускать его через раствор.

Окисление кислородом можно облегчать за счет применения катализатора. Пригодными катализаторами являются, например, палладиевая чернь или соль железа-III, в особенности хлорид железа-III. Количество катализатора в общем составляет величину в пределах 0,2-2 мас.% в расчете на количество реин-9-антрон-8-глюкозида и в особенности в области 0,5-1 мас.%.

Альтернативно окисление можно осуществлять с помощью солей железа-III, например, Fe₂(SO₄)₃ или FeCl₃, при pH-значении 8-8,5. Предпочтительно при этом работают при 30-50^oC и в присутствии тринатрийцитрата.

Окисление осуществляют до тех пор, пока более не будет обнаруживаться никакого реин-9-антрон-8-глюкозида. (Отсутствие УФ-флуоресценции антроновых соединений).

Сеннозиды получают обычным образом путем подкисления полученного раствора. Целесообразно разбавлять раствор перед добавкой кислоты с помощью подходящего растворителя (например, вода/2-бутанол) до 2-3-х-кратного имеющегося объема. Таким образом, достигают того, что образующийся в качестве побочного продукта реин-8-глюкозид при осаждении сеннозидов далее переходит в раствор.

Отделение реин-8-глюкозида также можно осуществлять через кальциевые соли, так как кальциевая соль реин-8-глюкозида нерастворима и, осаждается, тогда как кальциевая соль сеннозидов остается в растворе.

Сеннозиды осаждают путем добавки кислоты вплоть до pH-значения примерно 2-4 и затем получают обычным образом.

В случае полученных сеннозидов речь идет по существу о сеннозидах A, В и A₁. Они по существу лишены сеннозидов C, D и D₁ и других алоэ-эмодиновых примесей. Содержание сеннозидов C, D и D₁ в получаемом согласно изобретению продукте составляет менее, чем 100 ppm (определено согласно указанному в примерах методу анализа).

Изобретение относится также к получаемой согласно изобретению смеси сеннозидов А, В и А₁, а также к фармакологическому средству, которое содержит упомянутую смесь.

Область применения, используемая доза и пригодные дозировочные формы известны из упомянутых вначале публикаций.

Пример 1. Получение используемой в качестве исходного материала смеси сеннозидов. В соединенные в ряд два перколятора объемом 250 л помещают, смотря по обстоятельствам, 40 кг высушенных лекарственных растений сенны и покрывают их перфорированной стальной плитой. В качестве растворителя для экстракции применяют 70%-ный метанол, который вводится на высушенное лекарственное сырье в первый перколятор. Образовавшийся в первом перколяторе раствор направляют на лекарственное сырье, которое находится во втором перколяторе. При этом растворитель может свободно протекать через первый перколятор. Для экстракции 40 кг высушенных лекарственных растений сенны применяют в целом 160 л растворителя. После того как этот объем 70%-ного метанола пропускают через оба перколятора и получают соответствующее количество перколята, выпускной шланг перколятора соединяют с дополнительной емкостью для перколята и через перколяторы пропускают еще дополнительно 60 л 70%-ного метанола. После этого остаточный свободный растворитель из первого перколятора вводят в верхнюю часть второго перколятора и собирают дополнительный перколят до тех пор, пока в целом он не составит 120 л. Затем опорожняют первый перколятор, заполняют его снова 40 кг лекарственного сырья сенны и дополнительный перколят перекачивают на высушенные лекарственные растения, причем достаточно 120 л дополнительного перколята, чтобы покрыть высушенное лекарственное сырье в перколяторе. Затем доводят температуру раствора до +30^oC. После этого оставляют стоять в течение ночи. Соединяют этот перколятор с прежде используемым для экстракции перколятором и осуществляют экстракцию, как описано выше. Смотря по обстоятельствам, из 40 кг высушенных лекарственных растений получают 160 л перколятора, из которого удаляют метанол на ротационном вакуумном испарителе, который снабжен колонкой с наполнителем. Получают примерно 30 л продукта. Этот концентрат экстрагируют с помощью такого же объема 2-бутанола, который насыщен водой. Фазы разделяют, и водную фазу перерабатывают далее.

Стадия А. Восстановление сеннозидов до реин-9-антрон-8-глюкозидов.

1,0 л проэкстрагированного концентрата доводят до pH-значения = 7,5 с помощью 48%-ного раствора гидроксида натрия. Нагревают до 60^oC и при перемешивании в течение получаса в раствор добавляют 90 г дитионита натрия в твердой форме. После окончания добавления перемешивают следующий час. Затем при перемешивании добавляют концентрированную серную кислоту вплоть до pH-значения 2. В течение двух часов охлаждают до температуры окружающей среды, фильтруют выделившийся кристаллический осадок и промывают его содержащей диоксид серы водой.

В случае необходимости сырой реин-9-антрон-8-глюкозид переосаждают. Еще влажный осадок на фильтре растворяют в смеси 15 об. ч. 2-бутанола и 85 об. ч. воды, которая содержит 0,5 мас.% пиросульфита натрия, так чтобы благодаря добавке 48%-ного раствора гидроксида натрия вплоть до pH-значения = 7 получался 10%-ный раствор (вес/объем). Раствор подкисляют с помощью концентрированной соляной кислоты вплоть до pH-значения 2,8 или ниже и оставляют стоять в течение 2 ч. Выпавший осадок фильтруют и промывают содержащей диоксид серы или пиросульфит натрия водой и высушивают. Выход 90 %.

Для полученного таким образом продукта проводят новое восстановление (дополнительное восстановление) следующим образом.

3,0 г сырого высушенного реин-9-антрон-8-глюкозида или соответствующее количество влажного продукта вместе с 1,4 г дитионита натрия и 2,3 мл 5н NaOH растворяют в 15 мл воды. Затем доливают водой до 24 мл и нагревают раствор в течение 20 мин при 55^oC. После этого добавляют следующие 1,5 г дитионита натрия в раствор и нагревают 20 мин при 55^oC. Затем добавляют 0,9 мл 5 н NaOH и 1,5 г дитионита натрия. После нагревания в течение 20 мин при 55^oC добавляют еще раз 0,9 мл NaOH. Полученный раствор вводят прямо в последующую жидкостно-жидкостную экстракцию.

Стадия Б. Отделение алоэ-эмодиновых компонентов.

Отделение алоэ-эмодиновых компонентов осуществляют путем жидкостно-жидкостной экстракции 9-антрон-8-глюкозидов в противотоке с помощью аппаратуры из 60 единиц смеситель-сепаратор (Mixer-Settler - аппаратура). В качестве водной, более тяжелой фазы применяют раствор 3,0 г дитионита натрия в 3,5 мл 5н NaOH и 96 мл воды. В качестве органической, более легкой фазы применяют (насыщенный водой) 2-бутанол или ацетон. Обе фазы пропускают через аппаратуру так, чтобы объемное соотношение более тяжелой фазы к более легкой фазе составило 1:10.

Разделяемую смесь вводят в аппаратуру в виде свежевосстановленного раствора или в форме раствора с соответствующим pH-значением и соответствующей концентрации, которые содержат полученные из стадии А 9-антрон-8-глюкозиды, а именно так, что на объемную часть разделяемой смеси используются 30 об. ч. органической фазы.

pH-значения содержащего смесь раствора поддерживают с помощью глицинового буфера при 9-9,5. Буфер из 3 об. ч. 7,5%-ного раствора глицина, 1 об. ч. 1 н NaOH добавляют в количестве 240 мл буферного раствора на 150 г сырого реин-9-антрон-8-глюкозида. Нежелательные алоэ-эмодиновые соединения обогащают органическую фазу, в то время как реин-9-антрон-8-глюкозид остается в водной фазе. Водную фазу подкисляют серной кислотой вплоть до pH-значения, равного 2,8; образовавшийся осадок фильтруют и промывают водой и ацетоном и высушивают на воздухе при температуре окружающей среды. Получают таким образом реин-9-антрон-8-глюкозид с содержанием алоэ-эмодиновых компонентов 49 ppm (определено в виде алоэ-эмодина). Выход 97 % в расчете на реин-9-антрон-8-глюкозид.

Стадия B. Окисление реин-9-антрон-8-глюкозидов.

18,8 г полученного реин-9-антрон-8-глюкозида растворяют в 56 мл воды и 11 мл 2-бутанола, причем добавляют 17 н NaOH вплоть до pH-значения 6,5. Через этот раствор в цилиндрообразном сосуде со стеклянной фриттой в течение 5 ч при перемешивали продувают воздух. Скорость потока воздуха составляет 40 мл/мин. За ходом окисления следят с помощью жидкостной хроматографии высокого давления (ЖХВД).

Если более не обнаруживают никакого реин-9-антрон-8-глюкозида, раствор разбавляют примерно до 200 мл смесью воды с бутанолом в соотношении 56/11. Добавляют концентрированную соляную кислоту вплоть до pH-значения = 1,5-2,0, перемешивают 2 ч при температуре окружающей среды, фильруют выделившиеся кристаллы и промывают их водой и ацетоном, высушивают. Получают 14,4 г (76 %) чистой смеси сеннозидов с содержанием 41 ppm алоэ-эмодиновых компонентов (определено в виде алоэ-эмодина) согласно указанному в стадии В, пример 2, способу анализа.

Пример 2. Повторяют описанный в примере 1 способ, причем, однако, окисление в стадии В осуществляют следующим образом. 150 г чистых реин-9-антрон-8-глюкозидов и 75 г гексагидрата хлорида железа-III растворяют в 480 мл воды и 120 мл 2-бутанола. Добавляют 48%-ный раствор гидроксида натрия вплоть до достижения pH = 6,5, и реин-9-антрон-8-глюкозид растворяется. Раствор вносят в сосуд с агломерированной на дне пластиной. Затем через раствор пропускают интенсивный ток воздуха. Окисление заканчивается спустя примерно 30 мин. После этого раствор разбавляют смесью из 120 мл 2-бутанола и 480 мл воды, добавляют 7,5 г дитионита натрия и устанавливают pH-значение раствора = 2,0 за счет добавки концентрированной соляной кислоты. Раствор перемешивают 18 ч. Затем фильтруют выпавший осадок, промывают 600 мл воды и 800 мл ацетона и высушивают. Содержание в продукте антроноидных соединений составляет 94-95%. Продукт растворяют в 200 мл 2-бутанола и доливают 800 мл воды при добавлении 5,5 г пиросульфита натрия. После фильтровывания и высушивания выпавшего осадка получают 95,4 г продукта из антроноидных соединений состава (согласно ЖХВД, анализ типичного опыта), %:
Реин-8-глюкозид - 1,5
Cеннозид B - 49,7
Сеннозид A₁ - 13,3
Сеннозид A - 33,6
Сеннидин-моноглюкозиды - 1,1
Реин - 0,02
Итого - 99,22%
Сеннозиды C и D алоэ-эмодин-глюкозид нельзя более обнаружить с помощью ЖХВД. Общее содержание алоэ-эмодина и его производных определяют до 30 ppm согласно следующему методу. Сеннозиды C,D и алоэ-эмодин-8-глюкозид более не могут достоверно определяться в области ppm с помощью ЖХВД-хроматографии как сеннозиды. Поэтому необходимо исследуемые вещества путем окисления с помощью хлорида железа-III при одновременном гидролизе с помощью соляной кислоты в двухфазной смеси из водного раствора и четыреххлористого углерода переводить в реин, соответственно, алоэ-эмодин. Реин затем переводят в соль, так что его можно экстрагировать из водной фазы, а алоэ-эмодин можно определять в органической фазе с помощью ЖХВД. Таким образом, можно указать общее содержание сеннозидов C, D и алоэ-амодин-8-глюкозидов и других алоэ-эмодиновых компонентов, выраженных в виде алоэ-эмодинов.

Пример 3. Повторяют описанную в примере 1 экстракцию высушенных лекарственных растений сенны и восстановление сеннозидов. Дополнительное восстановление тогда осуществляют следующим образом. 14,0 г сахарозы, 4,5 г дитионита натрия (85%) и 13,3 г ацетата калия растворяют в 133 мл воды и добавляют 1,3 мл 48%-ного раствора гидроксида натрия и 17,3 г карбоната калия. Затем смешивают с 293 мл ацетона и 50 мл воды. Смесь встряхивают в делительной воронке и фазы разделяют, причем получают 375 мл верхней фазы (ацетоновая фаза) и 130 мл нижней фазы. В 98 мл нижней фазы растворяют 1,4 мл 48%-ного раствора гидроксида натрия и 10 г сырого реин-9-антрон-8-глюкозида. Нагревают до 45-50^oC и выдерживают в течение 20-30 мин при этой температуре. Затем добавляют 160 мл 48%-ного раствора гидроксида натрия и 3,4 г дитионита натрия и нагревают следующие 20-30 мин при 45-50^oC. После этого снова добавляют 1,0 мл 48%-ного раствора гидроксида натрия и 3,4 г дитионита натрия и нагревают 20-30 мин при 45-50^oC. Отделение алоэ-эмодиновых компонентов осуществляют путем жидкостно-жидкостной экстракции восстановленного раствора противотоком к вышеупомянутой верхней фазе (ацетоновая фаза). Вытекающая, содержащая реин-9-антрон-8-глюкозид рафинатная фаза концентрируется до объема 400 мл и смешивается с 20 мл 2-бутанола или ацетона. Добавляют соляную кислоту или серную кислоту вплоть до pH-значения 4,0-4,2. Образовавшийся осадок фильтруют, промывают 40 мл воды и 30 мл ацетона и затем высушивают. Последнее окисление проводят, как описано в примере 2.

Пример 4. Полученный после экстракции высушенных лекарственных растений сенны концентрат смешивают примерно с 2 л бутанола-2. Восстановление смеси концентрата плодов сенны с бутанолом-2 осуществляют затем в 7 стадий в атмосфере азота в качестве защитного газа. После стадии восстановления 1 осуществляют осаждение реин-9-антронов-8-глюкозида.

Стадия восстановления I.

100 л смеси концентрата плодов сенны с бутанолом-2, содержащей примерно 4 кг сеннозидов, помещают в сосуд с перемешиванием и устанавливают атмосферу азота. При перемешивании последовательно добавляют 6 л 20%-ного (по весу) раствора гидроксида натрия, затем 350 л насыщенного водой бутанола-2 (например, из стадии II) и перемешивают в течение 15 мин. Смесь нагревают до 42-50^oC и смешивают с 7 кг дитионита натрия. Перемешивают еще 45 мин. pH-значение поддерживают равным 7,5-8,0 с помощью 20 мас.%-ного раствора гидроксида натрия. Восстановительный потенциал (против Ag/AgCl-электрода) в случае необходимости поддерживают ниже - 630 mV за счет добавки дитионита натрия. После охлаждения до 30-35^oC осаждают с помощью 10 мас.%-ного раствора серной кислоты вплоть до pH < 4 в течение 1,5 ч. Образовавшуюся суспензию перемешивают при маленькой скорости мешалки примерно в течение 10 ч при < 25^oC. Образовавшийся осадок фильтруют. Осадок суспендируют в 60 л 15%-ного (по весу) бутанола-2, перемешивают 30 мин при 50-60^oC и затем фильтруют. Осадок промывают с помощью 100 л деминерализованной воды. Сырой выход реин-9-антрон-8-глюкозида в расчете на используемые сеннозиды составляет более 82%.

Стадия восстановления II.

3,3 кг сырого реин-9-антрон-8-глюкозида из стадии I суспендируют в смеси из 42 л деминерализованной воды и 764 л бутанола-2. С помощью 2 л 20 мас. %-ного раствора гидроксида натрия и 9,9 кг тринатрийцитрата суспензию переводят в раствор и затем смешивают с 3,3 кг дитионита натрия и 350 л насыщенного водой бутанола-2 (например, из стадии III). Смесь нагревают до 42-45^oC, pH-значение поддерживают при 8,5-9 с помощью 20 мас.%-ного раствора гидроксида натрия. Восстановительный потенциал (против Ag/AgCl-электрода) в случае необходимости поддерживают ниже - 750 mV за счет добавки дитиннита натрия. После времени выдерживания 30 мин верхнюю фазу удаляют, а нижнюю фазу перерабатывают далее в стадии III.

Стадия восстановления III.

При использовании нижней фазы из стадии II при добавке химикалиев повторяют описанный в стадии II восстановительно-экстракционный способ:
1,65 кг дитионита натрия,
0,8 л 20 мас.%-ного раствора гидроксида натрия,
350 л насыщенного бутанола-2 (например, из стадии IV).

Стадия восстановления IV-VII.

При использовании нижней фазы из предыдущей стадии, смотря по обстоятельствам, при добавке следующих химикалиев повторяют описанный в стадии II восстановительно-экстракционный способ:
0,825 кг дитионита натрия,
0,4 л 20 мас.%-ного раствора гидроксида натрия,
350 л насыщенного бутанола-2 (например, из одной из последующих стадий - принцип противотока).

Отдельную в стадии VII нижнюю фазу охлаждают до 30-35^oC и осаждают реин-9-антрон-8-глюкозид, как описано в стадии I. Образовавшийся осадок фильтруют и промывают с помощью 100 л деминерализованной воды. Затем заливают 10 л раствора сульфата железа III (28 кг Fe₂(SO₄)₃ в 100 л деминеральзованной воды).

Реин-9-антрон-8-глюкозид затем переводят в сеннозиды, как описано в примере 1 или примере 2.

Пример 5.

Окисление реин-9-антрон-8-глюкозида можно осуществлять также следующим образом. 6,0 кг влажного после отфильтрования реин-9-антрон-8-глюкозида смешивают с 12,6 кг тринатрийцитрата. Эту смесь при интенсивном перемешивании растворяют в 7,0 л 1 н NaOH и смешивают с 0,7 л бутанола-2. После этого смешивают с 8,8 л раствора сульфата железа III (28 кг Fe₂(SO₄)₃ в 100 л деминерализованной воды) и с таким количеством 20%-ного NaOH, чтобы pH-значение составило примерно 8,3. Оставляют реагировать в течение 3-4 ч примерно при 40^oC, затем подкисляют с помощью 52 %-ной серной кислоты до pH-значения = 1,8-2,0 и обрабатывают, как описано в примере I.

Пример 6. Альтернативно реин-9-антрон-8-глюкозид растворяют в 50 л воды благодаря добавке раствора гидроксида кальция с сахарозой (получен путем суспендирования 7,0 г гидроксида кальция в растворе 30,0 г сахарозы в 100 мл воды и путем удаления нерастворившегося гидроксида кальция). Добавляют 20 мл бутанола-2 и в течение 90 мин пропускают интенсивный ток воздуха через раствор. Добавляют 5,0 г CaCl₂•2H₂O и устанавливают pH-значение = 8,5 с помощью раствора сахарозы с гидроксидом кальция. Образовавшийся осадок фильтруют, и фильтрат разбавляют водой до 340 мл, смешивают с 60 мл бутанола-2 и с помощью концентрированной соляной кислоты доводят до pH-значения = 2,0. Дальнейшую обработку осуществляют, как описано в примере 1.

Фармакологические исследования.

Слабительное действие.

Слабительный эффект предлагаемой согласно изобретению смеси сеннозидов определяли у мышей. Использовали самцов NMRI i-мышей, которые в течение опытов содержались в ящиках из плексиглаза и которые получали стандартную кормовую смесь с водопроводной водой (1:1) в бульонообразной консистенции. Отдельная подача питьевой воды во время опытов не осуществлялась.

Животные получают 100, 200 и 400 мг/кг смеси сеннозидов в 10 мл 0,5%-ного бикарбоната натрия /кг через желудочный зонд.

После приема исследуемых соединений в течение 24 ч собирали кал и мочу животных и анализировали. Полученные результаты в расчете на кг веса тела представлены в таблице.

Отсюда вытекает, сто сеннозиды обладают хорошим слабительным действием, которое наступает относительно быстро. Время вплоть до появления первого мягкого кала (2 ч), однако, согласуется с предыдущим транзитом к толстому кишечнику и разложением сеннозидов благодаря флоре толстого кишечника. Относительные действующие дозы имеются.

Острая токсичность.

С помощью желудочного зонда самцам и самкам, по 10 особей, крыс Vistar вводят однократно сеннозиды в дозах 2000-25 000 мг/кг.

Обусловленные веществом мароскопические повреждения органов не смогли наблюдать в случае крыс. Определенные ЛД₅₀-значения следующие: - + 840)
самцы крыс: - 5.200-720) мг/кг - + 380)
самки крыс: - 3.530-340) мг/кг
В случае самцов и самок мышей (п=8, вид NMRI) максимально вводимая доза 5.000 мг/кг не приводит ни к каким смертельным случаям. Диареи наступают у всех мышей, однако, также в меньшей мере, чем у крыс. ЛД₅₀-значения в случае обоих полов составляет > 5.000 мг/кг.

Изобретение относится к способу выделения сеннозидов A, B и A₁. Способ состоит в том, что смесь сеннозидов подвергают восстановлению до соответствующих антрон-8-глюкозидов, осуществляют жидкостно-жидкостное диспергирование антрон-8-глюкозидов для удаления алоэ-эмодиновых компонентов и полученный после экстракции реин-9-антрон-8-глюкозид окисляют до сеннозидов A, B и A₁. Изобретение относится также к полученным по этому способу сеннозидам A, B и A₁ и фармацевтическому средству на их основе. 2 с. и 6 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Способ получения смеси сеннозидов A, B и A₁ формулы

содержащей менее 100 млн^- 1 сеннозидов C, D и D₁ и компонентов алоэ-эмодина, отличающийся тем, что смесь сеннозидов, выделенную экстракцией из лекарственного растительного сырья, подвергают восстановлению дитионитом щелочного металла с получением продукта восстановления, содержащего реин-9-антрон-8-глюкозид и алоэ-эмодин-9-антрон-8-глюкозид, продукт восстановления экстрагируют с помощью двухфазного растворителя, содержащего водную фазу и фазу 2-бутанола при объемном соотношении фаз 1 5 40 соответственно, перешедший в водную фазу в результате экстрагирования реин-9-антрон-8-глюкозид окисляют кислородом при pН 6 7 или солью железа III при pН 8,0 8,5 до соответствующих сенносидов с их последующим выделением. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют исходную смесь сеннозидов, выделенную путем экстракции из лекарственного растительного сырья сенны водным метанолом предпочтительно в присутствии буфера. 3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что восстановление осуществляют при pН 5,0 10,5. 4. Способ по пп.1 3, отличающийся тем, что водная фаза двухфазного растворителя имеет редокс-потенциал -210 мВ или еще более отрицательный. 5. Способ по пп.1 4, отличающийся тем, что экстракцию осуществляют противотоком. 6. Способ по пп.1 5, отличающийся тем, что окисление кислородом проводят в присутствии катализатора, предпочтительно соли железа III. 7. Смесь сеннозидов A, B и A₁, содержащая сеннозиды C, D, D₁ и компоненты алоэ-эмодина в количестве менее 100 млн^- 1. 8. Слабительное средство, включающее смесь сеннозидов A, B, A₁, C, D, D₁ и компоненты алоэ-эмодина, вспомогательные вещества и наполнитель, отличающееся тем, что она содержит менее 100 млн^- 1 сеннозидов C, D, D₁ и компонентов алоэ-эмодина.