ПРОИЗВОДНЫЕ МЕТОТРЕКСАТА, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 1998 года по МПК C07D475/08 A61K31/505 A61K31/535 A61K31/54 A61K31/675 C07D475/08 C07D209/04 C07D215/00 C07D239/70 C07D241/36 C07D265/34 C07D279/16 

Изобретение относится к производным метотрексата, более конкретно, к новым производным метотрексата, пригодным в качестве антиревматического агента, агента, излечивающего псориаз, и концеростатического агента.

Метотрексат описан как препарат, тормозящий рост лимфоцитов, злокачественных новообразований, псориатических клеток, рост активно пролиферирующих тканей, подавляющий клеточный митоз (Агаджанян Р.Н., Терапевтический архив, М.: Медицина, 1987, N1, с.118-121).

Метотрексат был известен как агент для лечения лейкемии и Gubner et.al. сообщал о его эффективности при лечении ревматоидных артритов (RA) или псориаза в 1951 г. и с тех пор он использовался как лечебный агент для (RA) в Европе и США. Относительно недавно подробные исследования способа применения и доз привели к выводу, что терапия метотрексата в малых дозах дает великолепную эффективность при относительно органических побочных эффектах. Однако такие побочные эффекты, как гепатопатия или фиброма легкого, вызванные приемом метотрексаты, нельзя игнорировать, так что было бы желательно получить лекарство, обладающее меньшими побочными эффектами и повышенной эффективностью.

В качестве производных метотрексата, в которых алкильная группа, отличающаяся от метильной, вводится по N¹⁰, были известны, например, следующие формулы:
,
(J. Med. Chem., 22, р. 862/1979/) или формулы:
, (J. Med. Chem. 25, р. 877 /1982/) и тому подобное, однако они не обязательно обладают достаточной активностью.

Краткое содержание изображения
Настоящее изобретение обеспечивает получение нового производного метотрексата, представленного следующей формулой (I):
,
где
R¹ является группой, выбранной из группы, состоящей из CH₂, CH₂CH₂, CH₂O, CH₂S и CH₂SO; R² является атомом водорода, низшей алкильной группы, содержащей от 1 до 4 атомов водорода, или бензильной группой; n является целым числом от 1 до 4; R³ является группой, представленной формулой: COOR⁴ (где R⁴ является атомом водорода или низшей алкильной группой, содержащей от 1 до 4 атомов углерода), NHCOR⁵ (где R⁵ является фенильной группой, у которой могут быть заместители), CONR⁶R⁷ (где R⁶ является атомом водорода или низшей алкильной группой, содержащей от 1 до 4 атомов углерода; R⁷ является группой низшего алкила, содержащей от 1 до 4 атомов углерода, фенильной группой или карбоксиалкильной группой, каждая из которых может быть замещенной или низшей алкилсульфонильной группой), PO₃H₂ или SO₃H,
Соединение настоящего изобретения обладает отличным противоревматическим действием, пригодно для лечения псориаза и обладает канцеростатическим действием, а также характеризуется тем, что имеет низкую токсичность по сравнению с обычным метотрексатом.

На фиг. 1-3 представлены количества (отношения) 3H-UdR, подлежащие поглощению при соответствующих концентрациях лекарств, подлежащих тестированию; на фиг. 4 - функция ингибирования роста кератиноцитов у крыс; на фиг. 5 - функция ингибирования роста кератиноцитов у человека. Поглощение при соответствующих концентрациях, подлежащих тестированию лекарств, представлено на основании того, что поглощение в отсутствии лекарства составляет 100%; на фиг. 6 - функция ингибирования роста клеток Р388; на фиг. 7 - функция ингибирования роста колонии 26. Поглощение при соответствующих концентрациях лекарств, подлежащих тестированию, представлено в расчете на то, что поглощении в отсутствии лекарства составляет 100%; га фиг. 8 - изменение веса у крыс при введении метотрексата или соединения настоящего изобретения; на фиг. 9 - изменение числа белых кровяных телец (WBC) и красных кровяных телец (RBC); на фиг. 10 - изменения в функции печени и содержании в печени TG.

Описание предпочтительных вариантов
Соединения настоящего изобретения каждое являются новыми и до сих пор не были описаны в каких-либо ссылках, могут быть получены, например, следующим образом (способ А см. фиг. 11-15), где R¹, R², R³ и n имеют те же значения, что и указанные ранее, R' представляет атом водорода или низшую алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода, A¹ и A² каждый представляют защитную группу, а X представляет атом галоида.

В способе A реакцию получения соединения формулы (2) из соединения формулы (I) проводят суспендируя соединение формулы (I) в кислотном галоидирующем агенте, таком как тионилхлорид, оксалилхлорид и т.д., и перемешивая смесь при комнатной температуре в одновременном присутствии каталитического количества диметилформамида и т. д. В этой формуле в качестве защитной группы, представленной A¹, можно указать карбобензоксигруппу, группу тозила, группу ацетила и т.д.

Реакцию получения соединения формулы (4) из соединения формулы (2) и соединения формулы (3) проводят, добавляя раствор соединения формулы (2), растворенный в таком растворителе, как дихлорметан, к водному раствору соединения формулы (3) при охлаждении льдом или водой, а затем перемешивая смесь при комнатной температуре при одновременном присутствии такого органического основания, как карбонат калия, гидроксид натрия, бикарбонат натрия и т.д.

Реакцию получения соединения формулы (5) из соединения формулы (4) ведут, добавляя соединение формулы (4) к раствору анизола или фенола и т.д., растворенного в растворе гидробромидуксусной кислоты, и перемешивая полученную смесь при температуре 10-60^oC, предпочтительно при комнатной температуре. Кроме того, реакцию получения соединения формулы (5) из соединения формулы (4) можно вести растворяя соединение формулы (4) в таком растворителе, как метанол, этанол, уксусная кислота, а затем перемешивая полученную смесь после добавления на угле в атмосфере водорода при комнатной температуре.

Реакцию получения соединения формулы (7) из соединения формулы (6) и соединения формулы (5) ведут при взаимодействии соединения формулы (6) и соединения формулы (6) и соединения формулы (5) в таком растворителе, как диметилформамид, диметилацетамид и т.д., при температуре 0-100^oC, предпочтительно 50-60^oC, при перемешивании. В частности, если R² является атомом водорода, 1н. водный раствор гидроксида натрия добавляют к такому растворителю, как метанол, этанол и т.д., и перемешивают полученную смесь при температуре 0-60^oC, предпочтительно при 35^oC, до получения целевого соединения. В этой формуле в качестве атома галоида, представленного X, можно указать атом брома, атом хлора и т.д.

В способе B реакцию получения соединения формулы (9) из соединения формулы (6) и соединения формулы (8) осуществляют, проводя реакцию соединения формулы (6) и соединения формулы (8) в таком растворителе, как диметилацетамид, диметилформамид и т. д. при температуре 0-100^oC, предпочтительно, 55^oC, при перемешивании.

Реакцию получения соединения формулы (7) из соединения формулы (9) и соединения формулы (3) ведут, перемешивая соединение формулы (9) при одновременном присутствии цианида диэтилфосфорной кислоты или дициклогексилкарбодиимида и 1-гидроксибензотриазола, в таком растворителе, как диметилформамид, диметилацетамид, N-метилпирролидинон и т.д. а затем добавляя соединение формулы (3) и перемешивая смесь при температуре от 0 до 200^oC, предпочтительно от 10 до 80^oC, при перемешивании. В частности, если R² является атомом водорода, IN-водный раствор гидрохлорида натрия добавляют к смеси, и перемешивают смесь при температуре 0-60^oC, предпочтительно при комнатной температуре до получения целевого соединения.

В способе C реакцию получения соединения формулы (12) из соединения формулы (10) и соединения формулы (11) ведут, растворяя соединение формулы (10) в таком апротонном растворителе, как хлороформ, дихлорметан, тетрагидрофуран, диоксан и т.д., добавляя соединения формулы (11), воду и, например, карбонат калия, триэтиламин, бикарбонат натрия, пиридин и т.д., к смеси и перемешивали смесь при комнатной температуре. В этой формуле в качестве защитной группы, представленной A², можно указать карбобензоксигруппу, группу тозила, группу ацетила и т.д.

Реакцию получения соединения формулы (13) из соединения формулы (12) ведут в таком растворителе, как метанол и т.п., перемешивая при температуре -60 до -20^oC, предпочтительно при -30^oC, и затем добавляя тионилхлорид, осуществляя кипячение с обратным холодильником полученной смеси.

Реакцию получения соединения формулы (14) из соединения формулы (13) ведут, растворяя соединение формулы (13) в этаноле, метаноле, тетрагидрофуране, диоксане и т.д. и перемешивая полученную смесь в присутствии одновременно палладия на угле в атмосфере водорода при комнатной температуре. Реакцию получения соединения формулы (15) из соединения формулы 14 и соединения формулы (2) ведут, растворяя соединение формулы (2) в дихлорметане и т. д., добавляя соединение формулы (14) и карбонат калия или триэтиламин и воду и перемешивая полученную смесь при комнатной температуре, но амидирование можно вести, используя смешанный ангидрид кислоты, активный сложный эфир или активный амид.

Реакцию получения соединения формулы (16) из соединения формулы (15) ведут, добавляя гидробромидуксусную кислоту в которой ранее был растворен анизол или фенол, к соединению формулы (15) и перемешивая смесь при комнатной температуре.

Реакцию получения соединения формулы (17) из соединения формулы (6) и соединения формулы (16) осуществляют после перемешивания в апротонном растворителе, таком как диметилформамид и диметилацетамид, при температуре 25-100^oC, предпочтительно, от 50 до 65^oC, перемешивая смесь в воде, содержащей, например, триэтиламин, карбонат калия или бикарбонат натрия и т.д.

Реакцию получения соединения (1) из соединения формулы (17) ведут в растворителе, таком как этанол, добавляя водный раствор гидроксида натрия и перемешивая полученную смесь при комнатной температуре.

Соединение, представленное формулой (I), полученное по способу настоящего изобретения, обладает противоревматической эффективностью, лечит псориаз и обладает канцеростатической активностью. Кроме того, по сравнению с метотрексатом, оно обладает меньшей токсичностью. Эти свойства подтверждены в испытаниях в следующих экспериментах.

1. Функция ингибирования роста лимфоцитов, полученных из периферической крови человека (противоревматическая функция).

2. Эксперимент по ингибированию роста кератиноцитов у крыс и человека (функция лечения псориаза).

3. Эксперимент по ингибированию роста раковых клеток у мышей (канцеростатическая функция).

4. Сравнение токсичности метотрексата (МТХ) и соединения настоящего изобретения при внутрибрюшинном непрерывном введении крысам.

Экспериментальный пример 1. Функция ингибирования роста лимфоцитов, полученных из периферической крови человека (противоревматическая функция) (способ)
Лимфоциты выделяют из периферической крови человека, используя Ficoll-Paque^R, и лекарство подходящим образом разбавляют и 105 лимфоциты культивируют с PHA(0,3 мкг/мл) в культурных пластинах с 96 ячейками в течение 2 дней. За 5 ч до завершения культивирования добавляют ³H-UdR (по 1μкCi/ячейку) и захват ³H-UdR лимфоцитами измеряют сцинтилляционным счетчиком)(здесь PHA обозначает фитогемагглутинин, а UdR - деоксиуридин). Использованные лекарства приведены ниже.

На фиг.1-3 изображены отношения в расчете на захват ³H-UdR PHA стимулус лимфоцитами, причем за 100% принято для отсутствия лекарства. Как хорошо видно на фиг.1-3, было подтверждено, что соединения настоящего изобретения прекрасно ингибируют рост лимфоцитов (противоревматическая функция) по сравнению с контрольными соединениями.

Экспериментальный пример 2. Эксперимент по ингибированию роста кератиноцитов у крыс и человека (лечение псориаза).

(1) Эксперимент по ингибированию роста кератиноцитов у крыс.

1) Вначале культивировали кератиноциты крыс, используя ЗТЗ клетки штамма Swiss в качестве фидерного слоя, который засевали концентрацией 4 • 10⁴ клеток/мл/ячейку на пластине с 24 ячейками, обработанными коллагеном типа IV, используя МСДВ 153 /ДМЕ/10% FCS среду, содержащую факторы роста (инсулин, гидрокортизон, EGF, токсин холеры), и культивируют под 5% CO₂ и 95% воздуха при 37^oC.

2) Спустя 24 ч все это дважды промывают средой МСДВ 153, не содержащей ни тимидина, ни аденина, а среду меняют на среду МСДВ 153 (1,8 мМ Ca), содержащую фактор роста (инсулин, гидрокортизон, EGF, токсин холеры) и не содержащую ни тимидина, ни аденина, и после добавления к ней лекарства культивирование ведут под 5% CO₂ и 95% воздуха при 37^oC в течение 4 дней.

3) 0,5% МТТ [3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолийбромид] добавляют по 100 мкл/ячейку, и оставляют выстаиваться при 37^oC в течение 4 ч, а затем среду отсасывают. Краситель (формазан), образуемый живыми клетками, растворяют, добавляя ДМСО (диметисульфокид) по 200 мкл на ячейку. Измеряют поглощение (A 540) красителя, растворенного, и среднее из 6 ячеек рассчитывают как относительное значение числа клеток.

(2) Эксперимент по ингибированию роста кератиноцитов человека.

1) Кератиноциты человека, полученные от Kurabou K.K., засевают при концентрации 2 • 10⁴ клеток/мл/ячейку в пластину с 24 ячейками, обработанную коллагеном типа IV, используя МСДВ 153 среду (0,15 мМ Ca), содержащую фактор роста (инсулин, гидрокортизон, rhEGF, этаноламин, фосфоэтаноламин) и не содержащую ни тимидина, ни аденина, и культивируют при 5% CO₂ и 95% воздуха при 37^oC.

2) Спустя 24 часа к этому добавляют образец, и полученную смесь культивируют при 5% CO₂ и 95% воздуха при 37^oC в течение 4 дней.

3) 0,5% МТТ [3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолийбромид] добавляют в количестве 100 мкл/ячейку и оставляют выстаиваться при 37^oC в течение 4 часов, полученную среду отсасывают. Краситель (формазан), образовавшийся за счет живых клеток, растворяют, добавляя ДМСА (диметилсульфоксид) по 200 мкл/ячейку. Поглощение (A 550) растворенного красителя измеряют и среднее из 6 ячеек рассчитывают как относительное значение числа клеток.

Использованные лекарства изображены ниже.

На фиг. 4 представлены результаты эксперимента по ингибированию роста кератиноцитов у крыс, на фиг. 5 - результаты эксперимента по ингибированию роста кератиноцитов у человека. Каждый из результатов представлен в виде отношения в расчете на поглощение, равное 100%; когда вообще не добавляли никакого лекарства.

Как хорошо видно на фиг.4 и 5, было подтверждено, что соединения настоящего изобретения обладают отличной способностью ингибировать рост кератиноцитов (функция лечения псориаза) по сравнению с контрольными соединениями.

Экспериментальный пример 3. Эксперимент по ингибированию роста раковых клеток у мышей (канцеростатическая функция).

Клетки P388 лимфоидной неоплазмы у мышей суспендированные в среде RPM 11640 (добавляют так, чтобы было 5% сыворотки плода теленка, и 10^-6M 2-меркаптоэтанола), или клетки карциномы колонии 26 мышей помещают в каждую ячейку плоскодонной микропластины (доступной от Corning Co. # 25870) с 5 • 10³, и раствор лекарства, приготовленный в той же среде, помещают таким образом, чтобы получить 0,2 мл лекарства в каждой ячейки. Все это культивируют в устройстве для культивирования с углекислым газом (5% углекислого газа, 95% воздуха, влажность 100%) в течение 3 дней, а затем раствор МГТ/3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолийбромида растворяют в фосфатном буфере физиологического раствора (pH 7,4; 4,10 мМ) с количеством 5 мг/мл), добавляют в каждую ячейку в количестве 10 мкл, культивируют еще в течение 4 часов. Культивированную надосадочную жидкость удаляют по 150 мкл, образовавшийся краситель (формазан) растворяют в ДМСО (диметилсульфоксиде; 150 мкл/ячейку) и поглощение (540 нм) измеряют на спектрофотометре для микропластины.

Использованные лекарства изображены далее.

На фиг. 6 изображен пример с использованием клеток P388, на фиг. 7 - пример использования колонии 26. Данные представлены в % по отношению к ячейке, в которой клеточный рост проходил без добавления лекарства, то есть ее поглощение принято за 100%, и определялась степень ингибирования роста за счет добавления лекарств.

Как ясно видно на фиг. 6 и 7, они подтверждают, что соединения настоящего изобретения обладают гораздо более высокой эффективностью по ингибированию роста раковых клеток (канцеростатическая функция), нежели эффективность контрольного лекарства.

Экспериментальный пример 4. Cравнение токсичности метотрексата (МТХ) и соединения настоящего изобретения при внутрибрюшинном непрерывном введении крысам.

Восьминедельным самцам крыс штамма SD внутрибрюшинно вводят МТХ или соединение настоящего изобретения раз в день с частотой 5 дней в неделю в течение 5 недель непрерывно. Вводимые дозы двух видов: 0,25 и 0,5 мг/кг каждого из МТХ и соединения настоящего изобретения. Для контрольной группы аналогичным образом вводят растворитель (фосфатный буфер, pH 7,4). В каждой группе было по пять крыс.

Наблюдения вели по следующим пунктам:
1) Жизнь или гибель и симптомы: наблюдали каждый день.

2) Изменение веса тел: измеряли раз в неделю.

3) Исследования крови: в последнюю неделю введения лекарства определяли количество белых кровяных телец (WBC) и красных кровяных телец (RBC).

4) Вес печени и содержание триглицеридов (TG) в печени: после окончания введения лекарств проводили вскрытие и определяли вес и содержание TG в печени.

Использование лекарства приведены далее:

Результаты.

1) Жизнь или гибель, симптомы.

Среди групп животных, которым вводили МТХ, в группе, которой вводили дозу 0,25 мг/кг, не погибла ни одна крыса и ненормальные симптомы не наблюдались. Однако в группе, которой вводили дозу 0,5 мг/кг, наблюдали анемию, плохое питание, снижение количества дефекаций, отеки вокруг рта и т.д., и одна из пяти крыс погибла.

С другой стороны, в группе, которой вводили соединение настоящего изобретения, мыши не гибли ни в группе, которой вводили 0,25 мг/кг, ни в группе, которой вводили 0,5 мг/кг, и никаких ненормальных симптомов не наблюдали.

2) Изменения в весе тела.

На фиг. 8 представлены изменения в весе. Изменения в инкременте веса тела были меньше для соединений настоящего изобретения нежели для МТХ.

3) Исследования крови.

На фиг. 9 представлены результаты исследований крови. Снижение количества WBC и RBC были значительно меньше у соединений настоящего изобретения, нежели для МТХ.

4) Вес печени и содержание TG в печени.

На фиг. 10 представлены вес печени и содержание TG в печени. Инкремент веса печени и содержание TG в печени оба были ниже для соединений настоящего изобретения нежели для МТХ.

Обсуждение.

Токсичности МТХ и соединений настоящего изобретения сравнивали, используя крыс, которым непрерывно вводили внутрибрюшинно препараты. В результате все указания по количеству погибших, по симптомам, по изменению веса тел, по исследованию крови, веса печени и содержанию в печени TG, свидетельствует о том, что токсичность соединений настоящего изобретения ниже, нежели токсичность МТХ.

Сравнительный пример 1. Получение 1-карбобензокси-5-карбоксииндолина.

К смеси воды (20 мл) и диэтилового эфира (20 мл) добавляют 2,0 г 5-карбоксииндолин и гидроксид натрия (0,6 г), а затем, при охлаждении льдом, к смеси поочередно добавляют карбобензоксихлорид (2,59) и воду (10 мл), содержащую гидроксид натрия (2,1 г). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь подкисляют 2н, соляной кислотой и выпавшие в осадок кристаллы собирают фильтрованием. Осадки промывают эфиром и сушат воздухом до получения указанного в заглавии соединения (2,8 г).

¹H ЯМР (DMCO-d₆) δ 3,10 (2H, т, J = 8 Гц), 4,03 (2H, т, J = 8 Гц), 5,23 (2H, с), 7,2 - 8,0 (8H, м).

Т. плавления 194 - 196^oC.

Сравнительный пример 2. Получение диэтил-N-(1-карбоксибензоксииндолин-5-карбонил) -L-глютамата.

После суспендирования соединения (2,5 г) ссылочного примера 1 в тионилхлориде (10 мл) к полученной смеси добавляют каталитическое количество диметилформамида и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем избыток тионилхлорида удаляют при пониженном давлении, а остаток тщательно растирают в н-гексане. полученные кристаллы фильтруют и растворяют в дихлорметане (20 мл), и полученный дихлорметановый раствор прикапывают к водной (50 мл) суспензии, содержащей гидрохлорид диэтилглютамата (3,0 г) и триэтиламина (2,8 г) при охлаждении льдом. После перемешивания смеси при комнатной температуре в течение 2,5 ч растворитель удаляют при пониженном давлении и к остатку добавляют смешанный раствор этилацетата (200 мл) и разбавленной соляной кислоты (200 мл) при охлаждении льдом. После перемешивания смеси в течение 5 мин органический слой получают разделением. Органический слой промывают 5% водным бикарбонатом натрия, а затем сушат над сульфатом магния. Затем удаляют этилацетат при пониженном давлении, и остаток обрабатывают на хроматографической колонке, используя смесь растворителей хлороформ - метанол = 30:1 в качестве элюента, до получения указанного в заглавии соединения (3,1 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,19 (3H, т, J = 7 Гц), 1,25 (3H, т, J = 7 Гц); 2,1 - 2,6 (4H, м), 3,06 (2H, т, J = 8 Гц), 3,8 - 4,3 (6H, м), 4,75 (1H, м), 5,20 (2H, с), 6,79 (1H, д, J = 7 Гц), 7,2 - 7,7 (8H, м).

Т.плавления 120 - 121^oC.

Сравнительный пример 3. Получение диэтил-N-(индолин-5-карбонил)-L-глютамата.

Соединение (1,8 г) сравнительного примера 2 растворяют в 80 мл тетрагидрофурана и после добавления 10% палладия на угле (0,4 г) полученную смесь перемешивают в атмосфере водорода в течение 5 часов. Палладий на угле удаляют фильтрованием, используя целит до получения указанного в заглавии соединения (1,2г).

¹H ЯМР (CDCl₃, δ : 1,21 (3H, т, J = 7 Гц), 1,29 (3H, т, J = 7 Гц), 2,0 - 2,6 (4H, м), 3,00 (2H, т, J = 8 Гц), 3,59 (2H, т, J = 8 Гц), 4,07 (2H, кв. J = 7 Гц), 4,19 (2H, кв. J = 7 Гц), 4,75 (1H, м), 6,47 (1H, д, J = 9 Гц), 6,68 (1H, д, J = 7 Гц), 7,45 (1H, д, J = 9 Гц), 7,49 (1H, с).

Т.плавления 96 - 97^oC.

Пример 1. Получение диэтил-N-[1-(2,4-диамино-6-птеридинил)-метил-индолин-5-карбонил]-L-глютамата.

В диметилацетамиде ( 3 мл) суспендируют соединение (214 мг) сравнительного примера 3 и аддукт 6-бромметил-2,4-диамино-птеридингидробромида изопропанола (250 мг), и полученную смесь перемешивают при 50 - 55^oC в течение 4 ч. После охлаждения к реакционной смеси добавляют воду (15 мл), содержащую 124 мг триэтиламина, а затем полученную смесь экстрагируют хлороформом (350 мл), разделяя на четыре раза. После этого органический слой сушат над сульфатом магния, растворитель удаляют при пониженном давлении, а остаток обрабатывают на хроматографической колонке с силикагелем, используя смешанный растворитель хлороформ-метанол = 10:1 в качестве элюента, до получения указанного в заглавии соединения (200 мг).

¹H ЯМР (DMCO-d₆, δ) : 1,22 (3H, т, J = 7 Гц), 1,30 (3H, т, J = 7 Гц), 2,0 - 2,5 (4H, м), 3,07 (2H, т, J = 8 Гц), 3,57 (2H, т, 8 Гц), 4,10 (2H, кв. J = г Гц), 4,23 (2H, кв. J = 7 Гц), 4,79 (1H, м), 5,24 (2H, с), 6,51 (1H, д, J = 9 Гц), 6,76 (1H, д, J = 7 Гц), 7,57 (1H, с), 7,59 (1H, д, J = 9 Гц), 8,82 (1H, с). T. плавления 168-170^oC.

Пример 2. Получение N-[1-((2,4-диамино-6-птеридинил)метил) индолин-5-карбонил]-L-глютаминовой кислоты (соединение I).

Соединение (170 мг) примера 1 растворяют в 33 мл этанола и к этому раствору добавляют 1 н. водный раствор гидроксида натрия (0,84 мл) при 35^oC, и полученную смесь перемешивают при этой же температуре в течение 4,5 часов. После непрерывного перемешивания при 25^oC еще в течение 20 часов реакционной смеси добавляют воду (2 мл). Реакционную смесь выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в воде (15 мл), pH полученного раствора устанавливают 3,7 1н. соляной кислотой при охлаждении льдом и оставляют выстаиваться в холодном месте в течение ночи. Полученный осадок собирают фильтрованием до получения указанного в заглавии соединения (130 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): (2H, м), 2,32 (2H, m), 2,98 (2H, т. J=8 Гц), 3,56 (2H, т, J=8 Гц), 4,29 (IH, м), 4,53 (2H, с), 6,71 (IH, д, J=9 Гц), 7,57 (IH, с), 7,59 (IH, д, J=9 Гц), 8,72 (IH, с). T. плавления 201-204^oC (с разложением).

Сравнительный пример 4. Получение диметил-N-(1-карбобензоксииндолин -5-карбонил)-L-α-аминоадипата.

После суспендирования 1-карбобензоксииндолин-5-карбоновой кислоты (3,1 г) в 10 мл тионилхлорида к этой суспензии добавляют каталитическое количество диметилформамида и полученную смеси перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем избыток тионилхлорида удаляют при пониженном давлении, а остаток тщательно растирают в н-гексане. Полученные кристаллы фильтруют и растворяют в 30 мл дихлорметана, полученный раствор дихлорметана прикапывают к водному раствору (30 мл), содержащему диметил-L-α-аминоадипатгидрохлорида (2,7 г) при охлаждение ледяной водой. Далее к реакционному раствору добавляют карбонат калия (5,6 г). После перемешивания смеси при комнатной температуре в течение ночи реакционную смесь выливают в насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют хлороформом. Хлороформовый слой промывают 1 н. соляной кислотой и сушат над безводным сульфатом натрия, а затем растворитель удаляют при пониженном давлении. Затем полученный остаток обрабатывают на хроматографической колонке с силикагелем, используя смешанный растворитель хлороформ-метанол = 100:1 в качестве элюента, до получения указанного в заглавии соединения (3,1 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6-2,1 (4H, м), 2,36 (2H, т, J=6,8 Гц), 3,13 (2H, м), 3,66 (3H, с), 4,09 (2H, м), 4,78 (IH, д, J=7,8 Гц), 7,2-7,5 (6H, м), 7,63 (2H, м).

Сравнительный пример 5. Получение диметил-N-(индолин-5-карбонил)-L-L-α-аминоадипата.

К 30% раствору бромистого водорода в уксусной кислоте (15 мл), содержащему 1,5 г анизола, добавляют соединение (1,5 г) сравнительного примера 4, и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Затем, когда к реакционной смеси добавляют большие количества эфира, в осадок выпадает красновато-коричневый маслянистый продукт. Почти весь эфирный слой удаляют, а маслянистый суспендируют в хлороформе. Полученную суспензию промывают затем насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, а слой хлороформа собирают разделением. Слой хлороформа сушат над сульфатом натрия, а растворитель удаляют при пониженном давлении до получения указанного в заглавии соединения (960 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,1 (4H, м), 2,36 (2Y, т, J=6,8 Гц), 3,07 (2H, м), 3,66 (3H, с), 3,66 (2H , м), 3,77 (2H, c), 4,78 (IH, м), 6,62 (2H, м), 7,54 (2H. м).

Пример 3. Получение диметил-N-[-((2,4-диамино-6-птеридинал) метил)-индолин-5-карбонил]-L- α -аминоадипата.

В 20 мл диметилацетамида суспендируют соединение (960 мг) сравнительного примера 5, аддукт 6-бромметил-2,4- диаминотеридингидробромида изопропанола (1140 мг), полученную суспензию перемешивают при 50-60^oC в течение 6 ч. После охлаждения полученную смесь выливают в насыщенный водный раствор бикарбоната натрия, целевой продукт экстрагируют хлороформом, разделенным на три порции. Органический слой сушат над сульфатом натрия, растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток помещают в колонку с силикагелем, используя в качествен элюента смешанный растворитель хлороформ-метанол = 100:10, до получения указанного в заглавии соединения (520 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,1 (4H, м), 2,38 (2H, т, J=6,8 Гц), 3,07 (2 H, м), 3,57 (2H, м), 3,67 (3H, с), 3,78 (3H, с), 4,53 (2H, с), 4,74 (IH, м), 6,52 (IH, д, J=8,33 Гц), 7,01 (IH, д, J=7,8 Гц), 7,57 (2H, м), 8,77 (IH, с).

Пример 4. Получения N-[-((2,4-диамино-6-птеридинил) метил)индолин-5-карбонил]-L- α -аминоадипиновой кислоты.

Соединение (400 мг) 3 растворяют в этаноле (22 мл) 1н. водный раствор гидроксида натрия (3,1 мл) добавляют к раствору при 35^oC, и полученную смесь перемешивают при той же температуре в течение 4 ч. После продолжения перемешивания при 25^oC в течение дальнейших 20 ч к реакционной смеси добавляют 3 мл воды, а реакционную смесь выпаривают при пониженном давлении досуха. Во время процесса сушки внешнюю температуру контролируют, чтобы она не превышала 30^oC. Желтоватый твердый материал, полученный при этом, растворяют в воде (10 мл), и полученный раствор доводят до pH 3,7 1н. соляной кислотой и оставляют выстаиваться в холодильнике в течение 2 ч. Образовавшийся осадок собирают фильтрованием до получения указанного в заглавии соединения (320 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,4 - 1,9 (4H, м), 2,23 (2H, т, J=6,8 Гц), 3,01 (2H, м), 3,58 (2H, м), 4,32 (IH, м), 4,55 (2H, с), 6,69 (IH, д, J=8,3 Гц), 7,63 (2H, м), 8,10 (IH, д, О=8,3 Гц), 8,72 (IH, с).

Сравнительный пример 6. Получение N^α -(1-карбобензоксииндолин- 5-карбонил) N^δ - бензоил-L-орнитинового метилового сложного эфира.

К тионилхлориду (1,5 мл) добавляют 1-карбобензоксииндолин-5- карбоновую кислоту (180 мг) до получения суспензий, к ней добавляют каталитическое количество диметилформамида. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем полученную смесь выпаривают досуха. Полученный твердый материал растворяют в дихлорметане (4 мл), и к этому раствору добавляют N^δ -бензоил-L-орнитиновый метиловый эфир ( 150 мг) и 750 мг карбоната калия, 4 мл воды, и полученную смесь интенсивно перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч. Затем реакционную смесь выливают в воду, экстрагируют хлороформом, и слой хлороформа промывают раствором 1н. соляной кислоты и сушат над сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении, а полученный остаток наносят на силикагель и хроматографируют, используя в качестве элюента смесь хлороформ-метанол = 100:3, до получения указанного в заглавии соединения (140 кг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,2 (4H, м), 3,15 (2H, т, J=8,8 ГЦ), 3,56 (2 H, м), 3,78 (3H, с), 4,10 (2H, т, J=8,8 Гц), 4,82 (IH, м), 5,27 (2H, с), 6,70 (IH, м), 6,89 (IH, м), 6,89 (IH, д, J-8,8 Гц), 7, (8H, м), 7,80 (2H. м).

Сравнительный пример 7. Получение N^α -(индолин-5-карбонил)- N^δ -бензоил-L-орнитинового метилового эфира.

Соединение (140 мг) сравнительного примера 6 добавляют к 30% раствору бромистого водорода - уксусной кислоты (2 мл), содержащему фенол (150 мг), и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Затем, когда большое количество эфира добавляют к реакционному раствору, в осадок выпадает красновато-коричневый продукт. Почти весь эфирный слой удаляют, а маслянистый продукт суспендируют в хлороформе. Полученную суспензию промывают насыщенным водным раствором бикарбонатом натрия, и экстрагируют хлороформом. Слой хлороформа сушат над сульфатом натрия, и растворитель удаляют при пониженном давлении до получения указанного в заглавии соединения (50 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,1 (4H, м), 3,02 (2H, т, H=8,8Гц) 3,56 (2H, м), 3,62 (2H, т, H=8,8 Гц), 3,75 (3H, с), 4,79 (IH, м), 6,55 (IH, д, J=7,8 Гц), 6,86 (2H, м), (2H, м), 6,99 (IH, м), 7,1 - 7,6 (5H, м), 7,82 (1H, м).

Пример 5. Получение N^α -[-((2,4-диамино-6-птеридилин)метил] индолин-5-карбонил]- N^δ -бензоил-L-орнитинового метилового эфира.

В 1 мл диетилацетамида суспендируют соединение (50 кг) сравнительного примера 7, аддукт 6-бромметил-2,4-диаминоптеридингидробромида изопропанола (44 мг), и полученную смесь перемешивают при температуре 50-55^oC в течение 4 ч. После охлаждения к реакционной смеси добавляют 3 мл воды, содержащей триэтиламин (22 мг), и полученную смесь экстрагируют хлороформом. После того как хлороформовый слой сушат над сульфатом натрия, растворитель удаляют при пониженном давлении, а остаток обрабатывают хроматографически на силикагеле, используя в качестве элюента смешанный растворитель хлороформ-метанол = 10: 1. до получения указанного соединения (34 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,2 (4H, м), 3,07 (2H, т, J=8,8 Гц), 3,50 (2H. м), 3,56 (2H, т, J=8,8 Гц), 3,79 (3H, с), 4,53 (2H, с), 4,76 (IH, с), 6,52 (IH, д, J=8,3 Гц), 7,19 (IH, д, J=7,6 Гц), 7,45 (3H, м), 7,62 (2H, м), 7,80 (2H, м), 8,76 (IH, с).

Пример 6. Получение N^α -[1-[(2,4-диамино-6-птеридинил)метил) индолин-5-карбонил]- N^δ -бензоил-L-орнитидина.

В 5 мл этанола растворяют соединение (34 мг) примера 5, к этому раствору добавляют 1н. водный раствор гидроксида натрия (0,1 мл), и полученную смесь перемешивают при 35^oC в течение 4,5 ч. После перемешивания в течение 20 ч при 25^oC к реакционной смеси добавляют 1 мл воды, и реакционную смесь выпаривают досуха при пониженном давлении. Во время этой процедуры внешнюю температуру регулируют таким образом, чтобы она не превышала 30^oС. Получают желтоватый твердый продукт и его растворяют в 5 мл воды, а pH раствора доводят до 3,7, добавляя 1н. соляную кислоту и оставляя выстаиваться в холодильнике в течение 2 ч. Выпавший осадок собирают фильтрованием до получения указанного в заглавии соединения (26 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): 1,64 (2H, м), 1,83 (2H, м), 2,98 (2H, т, J = 8,3 Гц), 3,57 (2H, т, J = 8,3 Гц), 4,36 (2H, м), 4,53 (2H, с), 6,64 (2H, м), 7,45 (3H, м), 7,59 (2H, м), 7,82 (2H, м), 8,12 (1H, д, J = 8,6 Гц), 8,43 (1H, м), 8,69 (1H, с).

T.плавления 179-183^oC (с разложением)
Сравнительный пример 8. Получение N^δ -фталоил- N^α -карбобензоксиорнитинового метилового эфира.

2,45 г фталевого ангидрида добавляют к 70 мл дихлорметановому раствору N^α -карбобензокси-L-орнитина (2,0 г), а затем к этой смеси добавляют 70 мл воды и 1,12 г карбоната калия, и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 часов. Полученную смесь конденсируют до 60 мл при пониженном давлении и pH устанавливают 3 с помощью 1н. соляной кислоты. Выпавшие осадки собирают фильтрованием и сушат в вакууме. Полученные белые кристаллы растворяют в метаноле с малым содержанием воды (80 мл), и полученный раствор охлаждают до -30^oC и перемешивают в течение 10 минут. Затем медленно прикапывают 2 мл тионилхлорида при той же температуре. Реакционной смеси дают медленно нагреться до комнатной температуры и кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении, а полученный остаток обрабатывают хроматографически на силикагеле, используя в качестве элюента смесь хлороформ-метанол = 100:1, до получения указанного в заглавии соединения (2,16 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,0 (4H, м), 3,69 (5H, м), 4,20 (1H, м), 5,096 (2H, с), 5,70 (1H, м), 7,29 (5H, м), 7,66 (2H, м), 7,81 (2H, м).

Сравнительный пример 9. Получение N^δ -фталоилорнитинового метилового эфира.

После добавления 500 мг 10% палладия на угле к метанольному раствору (100 мл) соединения (2,16 г) сравнительного примера 8 полученную смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 20 ч. Палладий на угле удаляют фильтрованием, используя целит, и полученный растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток обрабатывают на хроматографической колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь хлороформ-метанол = 100: 3, до получения указанного в заглавии соединения (223 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,7 - 2,1 (4H, м), 3,75 (2H, м), 3,83 (3H, с), 7,76 (2H, м), 7,84 (2H, м).

Сравнительный пример 10. Получение N^α -/1-карбобензоксииндолин- 5-карбонил/- N^δ -фталоилорнитинового метилового сложного эфира.

Добавляя 2,5 мл тионилхлорида к 1-карбобензоксииндолин-5-карбоновой кислоте (297 мг) до получения суспензии и каталитическое количество диметилформамида к полученной суспензии, полученную смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем полученную смесь выпаривают досуха при пониженном давлении. Полученный твердый материал растворяют в дихлорметане (7 мл), и к этому раствору добавляют соединение (250 мг) сравнительного примере 9 и карбонат калия (640 мг). Затем к этому добавляют 7 мл воды, полученную смесь интенсивно перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч. Затем реакционную смесь выливают в воду, экстрагируют хлороформом, а хлороформовый слой промывают 1 н. соляной кислотой и сушат над сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток обрабатывают на хроматографической колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь хлороформ - метанол = 100:3, до получения указанного в заглавии соединения (330 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,1 (4H, м), 3,12 (2H, т, J = 8,8 Гц), 3,72 (2H, м), 3,76 (3H, с), 4,08 (2H, т, J = 8,8 Гц), 4,84 (1H, м), 5,27 (2H, с), 6,80 (1H, д, J = 7,8 Гц), 7,1 - 7,5 (6H, м), 7,5 - 7,9 (6H, м).

Сравнительный пример 11. Получение N^α -(индолин-5-карбонил)- N^δ -фталоилорнитинового метилового сложного эфира.

К 30% раствору бромистого водорода - уксусной кислоты (8 мл), содержащему 300 мл фенола, добавляют соединение (330 мг) сравнительного примера 10, полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Затем к реакционной смеси добавляют большое количество эфира, получают в осадке красновато-коричневый маслянистый продукт. Почти весь этиловый слой удаляют, а маслянистый продукт суспендируют в хлороформ. Полученную суспензию промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагируют хлороформом. Хлороформовый слой сушат над сульфатом натрия и растворитель удаляют при пониженном давлении до получения указанного в заглавии соединения (147 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,1 (4H, м), 3,04 (2H, т, J = 8,3 Гц), 3,62 (2H, т, J = 8,3 Гц), 3,72 (2H, м), 3,75 (3H, с), 4,86 (1H, м), 6,5 - 6,7 (2H, м), 7,52 (2H, м), 7,68 (2H, м), 7,82 (2H, м).

Пример 7. Получение N^α -[1-(2,4-диамино-6-птеридинил)метил) индолин-5-карбонил]- N^δ -фталоилорнитинового метилового эфира.

146 мг соединения сравнительного примера 11 и 115 г аддукта 6-бромметил-2,4-диаминоптеридингидробромида изопропанола суспендируют в 1,0 мл диметилацетамида, полученную суспензию перемешивают при 50-55^oC в течение 4 ч. После охлаждения к полученной смеси добавляют 4 мл воды, содержащей 30 мг триэтиламина, и полученную смесь перемешивают, а затем экстрагируют хлороформом. Хлороформовый слой сушат над сульфатом натрия, растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток обрабатывают на хроматографической колонке, используя смешанный растворитель хлороформ-метанол = 10:1 в качестве элюента, до получения указанного в заглавии соединения (140 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,7 - 2,2 (4H, м), 3,06 (2H, т, J = 8,3 Гц), 3,56 (2H, т, J = 8,3 Гц), 3,72 (2H, м), 3,76 (3H, с), 4,53 (2H, с), 4,88 (2H, м), 6,45 - 6,62 (2H, м), 7,56 (2H, м), 7,71 (2H, м), 7,84 (2H, м), 8,82 (1H, с).

Пример 8. Получение N^α -[1-(2,4-диамино-6-птеридинил)метил) индолин-5-карбонил]- N^δ -гемифталоилорнитина (соединение 3).

140 мг соединения примера 7 суспендируют в 2 н. водном гидроксиде натрия (10 мл), полученную смесь перемешивают при 30^oC в течение 12 ч. Полученную смесь выпаривают досуха при пониженном давлении, а полученный желтоватый твердый материал растворяют в воде (5 мл). pH этого раствора устанавливают 3,7 1 н. соляной кислоты и оставляют выстаиваться в холодильнике в течение 2 ч. Выпавший осадок собирают фильтрованием. Полученный желтоватый твердый продукт обрабатывают на хроматографической колонке с силикагелем, используя смешанный растворитель хлороформ - метанол - 28% водный аммиак = 5:4:1 в качестве элюента, до получения указанного в заглавии соединения (20 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆: δ): 1,5 - 2,1 (4H, м), 3,14 (2H, т, J = 8,3), 3,58 (2H, т, J = 8,3), 4,38 (1H, м), 4,54 (2H, с), 6,71 (1H, м), 7,3 - 7,6 (4H, м), 7,6 - 7,8 (3H, м), 8,08 (1H, м), 8,71 (1H, с).

T.плавления 195-199^oC (с разложением).

Сравнительный пример 12. Получение N^δ -(3-метоксикарбонилбензоил)-N^α-карбобензоксиорнитинового метилового эфира.

К дихлорметановому раствору (40 мл) N^α -карбобензокси-L-орнитина (2,4 г) добавляют 2,1 г метилизофталата, а затем 40 мл воды и 2,4 г карбоната калия, полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч. Полученную смесь конденсируют при пониженном давлении до 30 мл, pH устанавливают 3 1 н. соляной кислотой; полученный осадок собирают фильтрованием и сушат в вакууме. Полученный белый твердый материал растворяют в 10 мл метанола с низким содержанием воды, полученный раствор охлаждают до 30^oC и перемешивают в течение 10 мин. Затем 3 мл тионилхлорида постепенно прикапывают при той же температуре. Реакционный раствор медленно возвращают к комнатной температуре, а затем кипятят с обратным холодильником еще в течение 2 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении, а полученный остаток обрабатывают на хроматографической колонке с силикагелем, элюируя смесью хлороформ-метанол = 100:1, до получения указанного в заглавии соединения (600 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,0 (4H, м), 3,46 (2H, м), 3,70 (3H, с), 3,89 (3H, с), 4,34 (1H, м), 5,08 (2H, с), 5,88 (1H, д, J = 7,8 Гц), 7,31 (5H, с), 7,45 (1H, м), 8,05 (2H, м), 8,41 (1H, с).

Сравнительный пример 13. Получение N^δ -(3-метоксикарбонилбензоил)орнитинового метилового эфира.

После добавления 10% палладия на угле (100 мг) к раствору метанола (100 мл) соединения (600 мг) сравнительного примера 12, полученную смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 20 ч. Палладий на угле удаляют фильтрованием, используя целит, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Этот остаток обрабатывают на хроматографической колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь хлороформ - метанол = 100:3, до получения указанного в заглавии соединения (360 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,0 (4H, м), 3,50 (3H, м), 3,72 (3H, с), 3,92 (3H, с). 7,49 (1H, т, J = 7,8 Гц), 7,63 (1H, м), 8,0 - 8,2 (2H, м), 8,43 (1H, с).

Сравнительный пример 14. Получение N^α -(1-карбобензоксииндолин-5-карбонил)- N^δ - (3-метоксикарбонилбензоил)орнитинового метилового эфира.

Добавляя тионилхлорид (5 мл) к 1-карбобензоксииндолин-5-карбоновой кислоте (350 мг) до получения суспензии, а затем к ней каталитическое количество диметилформамида, полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем полученную смесь выпаривают досуха при пониженном давлении. Полученный твердый материал растворяют в дихлорметане (7 мл), а к этому раствору добавляют соединение (360 мг) сравнительного примера 13 и 650 мг карбоната калия. Затем добавляют 7 мл воды, полученную смесь интенсивно перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч. Затем реакционную смесь выливают в воду и экстрагируют хлороформом, а хлороформовый слой промывают 1 н. соляной кислотой, а затем сушат над сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении, а остаток обрабатывают на хроматографической колонке с силикагелем, элюируя смесь хлороформ-метанол = 100:3, до получения указанного в заглавии соединения (390 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,1 (4H, м), 3,08 (2H, т, J = 8 Гц), 3,52 (2H, м), 3,75 (3H, с), 3,88 (3H, с), 4,06 (2H, т, J = 3 Гц), 4,78 (1H, м), 5,26 (2H, шир.с.), 7,16 (1H, д, J = 7,3 Гц), 7,2 - 7,6 (7H, м), 7,65 (2H, м), 7,9 - 8,1 (2H, м), 8,43 (1H, с).

Сравнительный пример 15. Получение N^α (индолин-5-карбонил)- N^δ -(3-метоксикарбонилбензонил)орнитинового метилового эфира.

К 30% раствору бромистоводородоуксусной кислоты (6 мл), содержащему анизол (0,5 г), добавляют соединение (390 мг) сравнительного примера 14, полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Затем к реакционной смеси добавляют большое количество эфира, получают красновато-коричневый маслянистый осадок. Почти весь эфирный слой удаляют, а маслянистый продукт суспендируют в хлороформе. Эту суспензию промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагируют хлороформом. Хлороформовый слой сушат над сульфатом натрия, растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученное белое твердое вещество перекристаллизовывают из смеси н-гексан-хлороформ-метанол до получения указанного в заглавии соединения (192 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,7 - 2,1 (4H, м), 3,05 (2H, т, J = 8,3 Гц), 3,53 (2H, м), 3,67 (2H, т, J = 8,3 Гц), 3,75 (3H, с), 3,89 (3H, с), 4,75 (1H, м), 6,73 (1H, д, J = 7,8 Гц), 7,16 (1H, д, J = 7,8 Гц), 7,47 (1H, м), 7,55 (2H, м), 8,09 (2H, м), 8,45 (1H, с).

Пример 9. Получение N^α -[1-[(2,4-диамино-6-тперидинил)метил) индолин-5-карбонил] - N^δ -/3-метоксикарбонилбензоил)орнитинового метилового сложного эфира.

В диметилацетамиде (2,5 мл) суспендируют соединение (192 мг) сравнительного примера 15, 6-бромметил-2,4-диаминоптеридингидробромид (142 мг), и полученную суспензию перемешивают при 50-55^oC в течение 4 ч. После охлаждения к этой смеси добавляют воду (5 мл), содержащую триэтиламин (43 мг), и полученную смесь перемешивают, а затем экстрагируют хлороформом. Хлороформовый слой сушат над сульфатом натрия, растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток обрабатывают на хроматографической колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь хлороформ-метанол = 10:1, до получения указанного в заглавии соединения (110 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,7 - 2,1 (4H, м), 3,06 (2H, т, J = 8,3 Гц), 3,55 (4H, м), 3,78 (3H, с), 3,93 (3H, с), 4,52 (2H, с), 4,79 (1H, м), 6,51 (1H, д, J = 7,8 Гц), 7,05 (1H, д, J = 7,8 Гц), 7,4 - 7,7 (3H, м), 8,0 - 8,2 (2H, м), 8,45 (1H, м), 8,77 (1H, с).

Пример 10. Получение N^α -[1-[(2,4-диамино-6-тперидинил)метил) индолин-5-карбонил]- N^δ -изофталоилорнитина.

110 мг соединения примера 9 растворяют в 14 мл этанола и далее к раствору добавляют 0,48 мл 1 н. водного раствора гидроокиси натрия, смесь перемешивают при 35^oC в течение 4,5 ч. Затем смесь перемешивают при 25^oC в течение 20 ч, к реакционной смеси добавляют 1 мл воды, и реакционную смесь упаривают досуха при пониженном давлении. В течение этой процедуры внешняя температура контролируется таким образом, чтобы не превышала 30^oC. Получают желтое твердое вещество, растворяют в 5 мл воды и раствор доводят до pH 3,7 раствором 1 н. соляной кислоты и доставляют в холодильник на 2 часа. Выпавший осадок собирают фильтрованием до получением 78 мг указанного в заглавии соединения.

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): 1,5-2,0 (4H, м), 3,0 (2H, т, J = 8,8 Гц), 3,32 (2H, м), 3,59 (2H, т, J = 8,81 Гц), 4,40 (1H, м), 4,56 (2H, с), 6,69 (1H, d, J = 8,3 Гц), 7,56 (1H, м), 7,63 (2H, м), 8,0 - 8,2 (2H, м), 8,44 (1H, с), 8,65 (1H, м), 8,73 (1H, с).

Сравнительный пример 16. Получение метилового эфира N^δ -(4-метоксикарбонилбензоил)- N^α -карбобензоксиорнитина.

К 60 мл раствора (2 г) N^α -карбобензокси-L-орнитина в дихлорметане добавляют 3,0 г метилтерефталатхлорида и затем к смеси добавляют 60 мл воды и 4,8 г карбоната калия, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч. Смесь конденсируют при пониженном давлении до 50 мл и доводят до pH 3 раствором 1 н. соляной кислоты, выпавший осадок собирают фильтрованием и сушат в вакууме. Получают белое твердое вещество, растворяют в 100 мл метанола с низким содержанием воды, раствор охлаждают до -30^oC и перемешивают в течение 10 мин. Затем постепенно по каплям добавляют 3 мл тионилхлорида при той же температуре. Реакционный раствор оставляют постепенно нагреться до комнатной температуры и кипятят далее с обратным холодильником в течение 2 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и полученный остаток подвергают хроматографической обработке на силикагеле с использованием в качестве элюента смеси хлороформ-метанол = 100:1 до получения 710 мг указанного в заглавии соединения.

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,1 (4H, м), 3,51 (2H, м), 3,74 (3H, с), 3,94 (3H, с), 4,43 (1H, м), 5,11 (2H, с), 5,53 (1H, м), 6,63 (1H, бс), 7,34 (5H, с), 7,83 (2H, d, J = 8,8 Гц), 8,08 (2H, d, J = 8,8 Гц).

Сравнительный пример 17. Получение метилового эфира N^δ -(4-метоксикарбонилбензоил)орнитина.

После добавления 10% (100 мг) палладиевой сажи к раствору 710 мг соединения сравнительного примера 16 в 100 мл метанола смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 20 часов. Палладиевую сажу удаляют фильтрованием, используя целит, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке на силикагеле с использованием в качестве элюента смеси хлороформ-метанол = 100:3 до получения 410 мг указанного в заглавии соединения.

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,1 (4H, м), 3,49 (3H, м), 3,73 (3H, с), 3,94 (3H, с), 7,20 (1H, м), 7,84 (2H, d, J = 8,3 Гц), 8,09 (2H, d, J = 8,8 Гц).

Сравнительный пример 18. Получение метилового эфира N^α-(1-карбобензоксииндолин-5-карбонил)- N^δ - (4-метоксикарбонилбензоил)орнитина.

Для приготовления суспензии к 260 мг 1-карбобензоксииндолин-5-карбоновой кислоты добавляют 2,5 мл тионилхлорида и далее к суспензии добавляют каталитическое количество диметилформамида, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем смесь упаривают досуха при пониженном давлении. Полученное твердое вещество растворяют в 6 мл дихлорметана и к раствору добавляют 245 мг соединения сравнительного примера 17 и 812 мг карбоната калия. Затем к этому раствору добавляют 6 мл воды и смесь интенсивно перемешивают при комнатной температуре в течение 12 часов. Затем реакционную смесь выливают в воду и экстрагируют хлороформом, хлороформовый слой промывают раствором 1н. соляной кислоты, сушат над сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке на силикагеле, используя в качестве элюента смесь хлороформ-метанол = 100:3, до получения указанного в заглавии соединения (310 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,7 - 2,2 (4H, м), 3,16 (2H, т, J=8,3 Гц), 3,61 (1H, м), 3,79 (3H, с), 3,94 (3H, с), 3,94 (3H, с), 4,11 (2H, т, J=8,3 Гц), 4,83 (1H, м), 5,29 (2H, с), 6,89 (1H, d, J=7,3 Гц), 7,02 (1H, м), 7,40 (5H, м), 7,66 (2H, d, J=7,3 Гц), 7,90 (2H, d, J=8,8 Гц), 8,08 (2H, d, J=8,8 Гц).

Сравнительный пример 19. Получение метилового эфира N^α -(индолин-5-карбонил)- N^δ -(4-метоксикарбонилбензой)орнитина.

К 10 мл раствора 1 г фенола в 30%-ной гидробромидуксусной кислоте добавляют 400 мг соединения сравнительного примера 18, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Затем, после добавления к реакционной смеси большого количества эфира, осаждается красно-коричневый маслообразный продукт. Почти весь эфирный слой удаляют и маслообразный продукт суспендируют в хлороформ. Суспензию промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют хлороформом. Слой хлороформа сушат над сульфатом натрия и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученное белое твердое вещество перекристаллизовывают из смеси н-гексан-хлороформ-метанол до получения указанного в заглавии соединения (145 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,1 (4H, м), 3,05 (2H, т, J=8,3 Гц), 3,48 (2H, м), 3,62 (2H, т, J=8,3 Гц), 3,76 (3H, с), 3,94 (3H, с), 4,75 (1H, м), 6,57 (1H, d, J=7,8 Гц), 7,19 (1H, d, J=7,8 Гц), 7,55 (2H, м), 7,89 (2H, d, J=8,3 Гц), 8,07 (2H, d, J=8,3 Гц).

Пример 11. Получение метилового эфира N^α -[1-((2,4-диамино-6-птеридинил)метил)индолин-5-карбонил]- N^δ -(4- метоксикарбонилбензоил)орнитина.

В 2 мл диметилацетамида суспендируют 140 мг соединения сравнительного примера 19 и 105 мг 6-бромметил-2,4-диаминоптеридингидробромида и суспензию перемешивают при 50-55^oC в течение 4 ч. После охлаждения к смеси добавляют 4 мл воды, содержащей 27 мг триэтиламина, смесь перемешивают и затем экстрагируют хлороформом. Слой хлороформа сушат над сульфатом натрия и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке на силикагеле с использованием в качестве элюента смеси хлороформ-метанол = 10:1 до получения указанного в заглавии соединения (180 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,6 - 2,1 (4H, м), 3,08 (2H, т, J=8,8 Гц), 3,4 - 3,7 (4H, м), 3,79 (3H, с), 3,94 (3H, с), 4,54 (2H, с), 4,83 (1H, м), 6,52 (1H, d, J=8,3 Гц), 6,79 (1H, d, J=6,8 Гц), 7,17 (1H, м), 7,59 (2H, М), 7,92 (2H, d, J=8,3 Гц), 8,09 (2H, d, J=8,3 Гц), 8,81 (1H, с).

Пример 12. Получение N^α -[1-(2,4-диамино-6-птеридинил)метил) индолин-5-карбонил]- N^δ -телеизофталоилорнитина.

150 мг соединения примера 11 растворяют в 11 мл этанола и затем к раствору добавляют 0,8 мл 1 н. водного раствора гидроксида натрия, и смесь перемешивают при 35^oC в течение 4,5 ч. Затем смесь перемешивают при 25^oC в течение 20 ч, добавляют 1 мл воды к реакционной смеси и упаривают досуха при пониженном давлении. В течение этой процедуры внешняя температура поддерживается таким образом, чтобы не превышать 30^oC. Полученное желтоватое твердое вещество растворяют в 5 мл воды и раствор доводят до pH 3,7 раствором 1 н. соляной кислоты и оставляют в холодильнике на 2 ч. Выпавший осадок собирают фильтрованием до получения указанного в заглавии соединения (109 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,5 - 2,0 (4H, м), 3,00 (2Н, т, J=8,8 Гц), 3,30 (2h, м), 3,58 (2H, т, J=8,8 Гц), 4,36 (1H, м), 4,54 (2H, с), 6,68 (1H, d, J=8,8 Гц), 7,62 (2H, м), 7,91 (2H, d, J=8,3 Гц), 7,99 (2H, d, J=8,3 Гц), 8,10 (1H, d, J=7,8 Гц), 8,61 (1H, м), 8,71 (1H, с).

Т.плавления 215-220^oC (разлагается).

Сравнительный пример 20. Получение α -бензил-N-т- бутоксикарбонил- γ -анилидо-L-глутамата.

К 8 мл раствора 2,2 г α -бензил-N-т-бутоксикарбонил-L- глутамата и 0,92 мл триэтиламина в тетрагидрофуране добавляют 2 мл раствора 0,8 мл изобутилхлоркарбоната в тетрагидрофуране при -20^oC в атмосфере азота и смесь перемешивают в течение 30 минут. Затем к смеси добавляют 0,5 мл анилина и смесь перемешивают в течение 1 ч. Смесь оставляют постепенно нагреться до комнатной температуры и перемешивают далее в течение 20 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении и полученный остаток растворяют в хлороформе. Слой хлороформа промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия, сушат над сульфатом натрия и затем конденсируют при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке на силикагеле с использованием в качестве элюента смеси хлороформ-метанол = 99:1 до получения указанного в заглавии соединения (1,7 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,44 (9H, с), 1,79 - 1,97 (1Н, м), 2,27 - 2,4- (2Н, м), 4,32 - 4,44 (1H, м), 5,16 (2H, с), 5,22 - 5,38 (1H, м), 7,08 (1H, т, J= 7,3 Гц), 7,26 - 7,33 (7H, м), 7,55 (2H, d, J=7,8 Гц), 8,42 (1H, с).

Сравнительный пример 21. Получение α -бензил- γ -анилидо-L- глутамата.

1,7 г соединения сравнительного примера 20 растворяют в 8 мл трифторуксусной кислоты при охлаждении льдом и смесь перемешивают в течение 30 минут. Растворитель удаляют при пониженном давлении, а остаток растворяют в хлороформе. Слой хлороформа промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и затем сушат над сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении до получения указанного в заглавии соединения (1,3 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,86 - 2,0 (1H, м), 2,17 - 2,38 (1H, м), 2,42 - 2,53 (2H, м), 3,53 - 3,60 (1H, м), 5,15 (2H, с), 7,07 (1H, т, J=7,3 Гц), 7,29 - 7,35 (7Н, м), 7,48 (2H, d, J=7,8 Гц), 8,27 (1H, бс).

Сравнительный пример 22. Получение α -бензил-N-(1- карбобензоксииндолин-5-карбонил)- γ -анилидо-L-глутамата.

2 мл тионилхлорида добавляют к 419 мг 1-карбобензоксииндолин- 5-карбоновой кислоты и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем смесь упаривают досуха при пониженном давлении. Полученный твердый продукт растворяют в 2 мл дихлорметана и к раствору добавляют раствор, содержащий 400 мг соединения сравнительного примера 21, в 2 мл дихлорметана и 0,21 мл триэтиламина при охлаждении льдом в атмосфере азота, и смесь перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь последовательно промывают раствором 1 н. соляной кислоты, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водой, сушат над сульфатом натрия и затем удаляют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке на силикагеле с использованием в в качестве элюента дихлорметана до получения указанного в заглавии соединения (317 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 2,10 - 2,20 (1H, м), 2,29 - 2,51 (3H, м), 3,05 (2H, т, J=8,8 Гц), 4,06 (2H, т, J=8,8 Гц), 4,76 - 4,88 (1H, м), 5,18 (2H,с), 5,28 (2H, бс), 7,05 (1H, т, J=7,3 Гц), 7,18 (1H, d, J=7,8 Гц), 7,23 - 7,30 (2H, м), 7,33 (5H, с), 7,39 (5H,с), 7,43 - 7,66 (4H, м), 7,80 - 7,84 (4H, м), 8,57 (1H, бс).

Сравнительный пример 23. Получение N-(1-карбобензоксииндолин- 5-карбонил)- γ -анилидо-L-глутамовой кислоты.

580 мг соединения сравнительного примера 22 растворяют в 30 мл смешанного растворителя хлороформ-метанол = 1:2 и к раствору добавляют 0,98 мл водного раствора 1н. гидроокиси натрия, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Температура водяной бани поддерживается при этом до 30^oC или ниже, растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в воде, затем раствор подкисляют 1н. соляной кислотой и смесь экстрагируют хлороформом. Затем хлороформный слой сушат над сульфатом натрия, растворитель удаляют при пониженном давлении до получения указанного в заглавии соединения (413 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 2,17 - 2,29 (2H, м), 2,52 - 2,56 (2H, м), 2,79 (2H, т, J= 7,8 Гц), 3,81 (2H, т, J=7,8 Гц), 4,51 - 4,61 (1H, м), 5,17 (2H, с), 6,94 (1H, т, J=7,3 Гц), 7,13 (2H, т, J=7,8 Гц), 7,34 (5H, с), 7,43 - 7,65 (5H, м), 8,03 (1H, бс), 9,02 (1H, с).

Сравнительный пример 24. Получение α -метил-N-(1-карбобензоксиинодолин-5-карбонил)- γ -анилидо-L-глутамата.

470 мг соединения сравнительного примера 23 растворяют в 20 мл сухого метанола, добавляют 2 мл триметилсилилдиазометана к раствору и смесь перемешивают в течение 10 ч. Затем добавляют 3 мл триметилсилилдиазометана и смесь перемешивают в течение 20 ч. После удаления растворителя при пониженном давлении полученный остаток подвергают хроматографической обработке на силикагеле с использованием в качестве элюента хлороформа и затем смеси хлороформ метанол = 199:1 до получения указанного в заглавии соединения (252 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 2,06-2,21 (1H, м), 2,31 - 2,56 (3H,м), 3,08 (2H, т, J= 8,8 Гц), 3,77 (3H,с), 4,08(2H, т, J=8,8 Гц), 4,77 - 4,87 (1H, м), 5,28 (2H, с), 7,07 (1H, т, J=7,3 Гц), 7,15 (1H, d,J=7,8 Гц), 7,28 (2H, т, J=7,8 Гц), 7,37 - 7,43 (5H, м), 7,58 (2H, d, J=7,8 Гц), 7,62-7,68 (2H, м), 7,86 (1H, бс), 8,67 (1H, бс).

Сравнительный пример 25. Получение α -метил-N-(индолин-5-карбонил)-γ -анилидо-L-глютамата.

После добавления 10% (50 мг) палладиевой сажи к 10 мл раствора 250 мг соединения сравнительного примера 25 в метаноле смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 15 ч. Палладиевую сажу удаляют фильтрованием с использованием целита и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с силикагелем, с использованием в качестве элюента смеси хлороформ-метанол = 99: 1 и затем хлороформ - метанол = 19:1 до получения указанного в заглавии соединения (172 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,99-2,13 (1H, м), 2,36-2,55 (3H, м), 3,03 (2H, т, J= 8,8 Гц), 3,64 (2H, т, J=8,8 Гц), 3,77 (3H,с), 4,08 (1H, бс), 4,79-4,88 (1H, м), 6,55 (1H, d, J=8,3 Гц), 6,92 (1H, d, J=7,3 Гц), 7,08 (1H, т, J=7,3 Гц), 7,30 (2H, т, J=7,8 Гц), 7,53-7,65 (4H, м), 9,01 (1H, бс).

Пример 13. Получение α - метил-N-[1-(2,4-диамино-6-птеридинил)метил)-индолин-5-карбонил]-γ-анилидо-L-глютамата.

169 мг соединения сравнительного примера 25 и 223 мг аддукта 6-бромметил-2,4-диаминоптеридингидробромида и изопропанола суспендируют в 5 мл диметилацетамида и суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционную смесь подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента этилацетата и затем смеси хлороформ-метанол = 19:1 до получения указанного в заглавии соединения (82 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 2,01-2,09 (1H, м), 2,39-2,48 (3H, м), 3,04 (2H,т, J= 8,8 Гц), 3,58 (2H, т, J=8,8 Гц), 3,78 (3H, c), 4,53 (2H, с), 4,79-4,89 (1H, м), 6,48 (1H, d, J=7,8 Гц), 6,87 (1H, d, J=7,8 Гц), 7,08 (1H, т, J=7,8 Гц), 7,26-7,32 (2H, м), 7,59-7,64 (4H, м), 8,81(1H, с).

Пример 14.

Получение N-[1-((2,4-диамино-6-птеридинил)метил)индолин-5-карбонил] -γ -анилидо-L-глютамовой кислоты.

82 мг соединения примера 13 растворяют в смешанном растворителе (15 мл) этанол - воды = 2:1 и затем добавляют 0,15 мл водного 1 н. раствора гидроокиси натрия, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 60 ч. Температура водяной бани при этом поддерживается до 30^oC или ниже, растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в насыщенном водном растворе гидрокарбоната натрия и pH раствора доводят до 3,7 1н. соляной кислотой. Выпавший оранжевый осадок собирают фильтрованием до получения указанного в заглавии соединения (61 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): 1,99-2,23 92H, м), 2,42 - 2,51 (2H, м), 2,98 (2H, т, J= 7,8 Гц), 3,59 (2H, т, J=8,3 Гц), 4,32-4,43 (1H, м), 4,56 (2H, с), 6,70 (1H, т, J=7,8 Гц), 6,90 (2H, бс), 7,00 (1H, d, J=7,8 Гц), 7,26 (2H, т, J=7,8 Гц), 7,55-7,66 (4H, м), 7,72-7,85 (1H, м), 7,89-7,97(1H, м), 8,20 (1H, d, J= 7,3 Гц), 8,75 (1H, c), 9,93 (1H, с).

Сравнительный пример 26. Получение α - бензил-N-т-бутоксикарбонил-γ -(2-метоксикарбониланилидо)-L-глютамата.

262 мг N, N'-карбонилдиимидазола добавляют к 5 мл раствора α-бензил-N-т-бутоксикарбонил-L-глутамата в тетрагидрофуране в атмосфере азота при охлаждении льдом и смесь перемешивают в течение 1 ч. Затем добавляют 2 мл раствора 0,19 мл метил o-аминобензоата в тетрагидрофуране и смесь перемешивают в течение 5 часов. Затем смесь оставляют постепенно нагреваются до комнатной температуры и перемешивают далее в течение 48 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля в качестве элюента до получения указанного в заглавии соединения (273 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,41 (9H, с), 2,04-2,18 (1H, м), 2,20-2,32 (1H, м), 2,48-2,57 (2H, м), 3,92 (3H, с), 4,34 - 4,47 (1H, м), 5,18 (2H, с), 5,19-5,27 (1H, м), 7,08 (1H, т, J=7,8 Гц), 7,34 (5H, с), 7,53 (1H, т, J=7,3 Гц), 8,02 (1H, d, J=7,8 Гц), 8,68 (1H, d, J=7,8 Гц), 11,06 (1H, с).

Сравнительный пример 27. Получение α -бензил- γ -(2-метоксикарбониланилидо)-L-глютамата.

632 мг соединения сравнительного примера 26 растворяют в 4,5 мл трифторуксусной кислоты при охлаждении льдом и смесь перемешивают в течение 90 мин. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток растворяют в хлороформе. Хлороформовый слой промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и сушат над сульфатом натрия и удаляют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента хлороформа и затем смеси хлороформ-метанол = 97:3 до получения указанного в заглавии соединения (413 мг),
¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,91-2,02 (1H, м), 2,20-2,30 (1H, м), 2,55-2,64 (2H, м), 3,56 -3, 62 (1H, м), 3,92 (3H, с), 5,17 (2H, с), 7,07 (1H, т, J=8,3 Гц), 7,35 (5H, с), 7,53 (1H, т, J=8, Гц), 8,02 (1H, d, J=8,3 Гц), 8,69 (1H, d,J= 8,8 Гц), 11,08(1H, бс).

Сравнительный пример 28. Получение 1 -[(2,4-диамино-6-птеридинил)метил] индолин-5-карбоновой кислоты.

87 мг 1-карбобензоксиндолин-5-карбоновой кислоты и 136 мг аддукта 6-бромметил-2,4-диаминоптеридин гидробромида и 1/2 изопропанола суспендируют в 2 мл диметилацетамида и суспензию перемешивают при 55^oC в течение 4 ч. К реакционной смеси добавляют 20 мл воды и смесь оставляют в холодильнике на ночь. Выпавшее твердое вещество собирают фильтрованием, растворяют в небольшом количестве 1 н. водного раствора гидроокиси натрия и раствор доводят до pH 6,5 1н. соляной кислотой. Выпавший коричневый осадок собирают фильтрованием до получения указанного в названии соединения (56 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): 3,01 (2H, т, J=8,8 Гц), 3,64 (1H, т, J=8,8 Гц), 4,60 (2H, с), 6,68 (1H, d, J=8,3 Гц), 7,16 (2H, ,c), 7,58 (1H, c), 7,65 (1H, d, J=8,3 Гц), 8,09 (1H, бс), 8,25 (1H, бс), 8,77 (1H, с).

Пример 15. Получение α - бензил-N-[1-[(2,4-диамино-6-птеридинил)-метил] -индолин-5-карбонил]-γ - (2-метоксикарбониланилидо)-L-глютамата.

К 5 мл суспензии 134 мг соединения сравнительного примера 28 и 108 мг 1-гидроксибензтриазола и диметилформамиде добавляют 1,5 мл раствора 123 мг дициклогексилкарбодиимида в диметилформамиде при охлаждении льдом в атмосфере азота и смесь перемешивают в течение 30 мин. Затем 1,5 мл раствора соединения сравнительного примера 27 в диметилформамиде добавляют к смеси, смесь оставляют нагреваться постепенно до комнатной температуры и перемешивают в течение 24 ч. Реакционную смесь подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента этилацетата, а затем смеси хлороформ-метанол = 19:1 до получения соединения, указанного в заглавии (29 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 2,32-2,46 (2H, м), 2,46 - 2,70 (2H, м), 2,96 (2H, т, J= 8,8 Гц), 3,49 (2H, т, J=8,3 Гц), 3,89 (3H, с), 4,46 (2H, с), 4,83-4,90 (1H, м), 5,20 (2H, с), 6,40 (1H, d, J=8,3 Гц), 7,05(1H, т, J=8,3 Гц), 7,14 (1H, d, J= 7,8 Гц), 7,34 (5H, c), 7,41 - 7,59 (3H, м), 7,96 (1H, d, J=8,3 Гц), 8,64 (1H, d, J=8,3 Гц), 8,77 (1H, с).

Пример 16. Получение N-[1-[2,4-диамино-6-птеридинил)метил)индолин-5-карбонил]-γ- (2-метоксикарбониланилидо)-L-глютамовой кислоты.

28 мг соединения примера 15 суспендируют в 2,5 мл метанола, к суспензии добавляют 0,41 мл 1 н. водного раствора гидроокиси натрия и смесь перемешивают при 10^oC в течение 5 ч. Температуру водяной бани при этом поддерживают до 30^oC и ниже, растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в насыщенной водном растворе гидрокарбоната натрия и раствор доводят до pH 3,7 1н. соляной кислотой. Выпавший оранжевый осадок собирают фильтрованием до получения указанного в названии соединения (21 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): 1,95-2,25 (2H,м), 2,39-2,58 (2H,м), 2,98 (2H, т, J= 8,3 Гц), 3,59 (2H, т, J=8,3 Гц), 4,38 - 4,50 (1H, м), 4,57 (2H, с), 6,69 (1H, d, J = 8,3 Гц), 7,12 (1H, т, J = 7,8 Гц), 7,24 - 7,35 (2H, м), 7,51 - 7,64 (3H, м), 7,96 (1H, d, J = 7,8 Гц), 8,04 - 8,39 (4H, м), 8,47 (1H, d, J = 7,8 Гц), 8,78 (1H, с), 11,25 (2H, с).

Сравнительный пример 29. Получение α -метил- γ -бензил-N-т-бутоксикарбонил-L-глютамата.

В 75 мл раствора γ-бензил-N-т-бутоксикарбонил-L-глютамата в диметилформамиде суспендируют 2,5 г гидрокарбоната натрия и затем к суспензии добавляют 75 мл раствора 10,52 г метилиодида в диметилформамиде, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Затем реакционную смесь конденсируют при пониженном давлении, добавляют 70 мл воды к остатку и смесь экстрагируют раствором этилацетата - н-гексана = 1:1. Органический слой промывают водой и сушат над сульфатом натрия, растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента смеси этилацетата - н-гексана = 1:2 до получения указанного в заглавии соединения (5,2 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ ) : 1,43 (9H, с), 1,92 - 2,01 (1H, м), 2,11 - 2,37 (1H, м) 2,42 - 2,51 (2H, м) 3,73 (3H, с) 4,23 - 4,40 (1H, м), 5,12 (2H, с), 7,35 (5H, с).

Сравнительный пример 30. Получение α -метил-N-т-бутоксикарбонил-L-глютамата.

После добавления 10% (1,1 г) палладиевой сажи к 30 мл раствора 5,2 г соединения сравнительного примера 29 в метаноле смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 15 ч. Палладиевую сажу удаляют фильтрованием, используя целит, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в насыщенном водном растворе гидрокарбоната натрия и раствор промывают хлороформом. После отделения водного слоя доводят pH раствора до 4 5%-ной лимонной кислотой и затем экстрагируют хлороформом. Хлороформовый слой сушат над сульфатом натрия и удаляют растворитель при пониженном давлении до получения указанного в заглавии соединения (3,9 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,44 (9H, с), 1,89 - 2,04 (1H, м), 2,09 - 2,27 (1H, м), 3,75 (3H, с), 4,34 (1H, м), 5,17 - 5,21 (1H, м), 9,38 (1H, бс).

Сравнительный пример 31. Получение α -метил-N-т-бутоксикарбонил- γ -(3-этоксикарбониланилидо)-L -глютамата.

К 10 мл суспензии 1,6 г соединения сравнительного примера 30 и 0,8 г 1-гидроксибензотриазола в дихлорметане добавляют 5 мл раствора 1,5 г дициклогексикарбодиимида в дихлорметане при охлаждении льдом в атмосфере азота и смесь перемешивают в течение 30 мин. Затем добавляют 1,5 г этил м-аминобензоата и смесь оставляют постепенно нагреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение 20 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении, к полученному остатку добавляют этилацетат и отфильтровывают нерастворимое белое вещество. Фильтрат конденсируют при пониженном давлении и полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента хлороформа, а затем смеси хлороформ-метанол = 99:1 до получения указанного в заглавии соединения (2,5 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,33 (3H, т, J = 7,1 Гц), 1,47 (9H, с), 1,82 - 2,04 (1H, м) 2,20 - 2,39 (1H, м), 2,45 - 2,51 (2H, м), 3,74 (3H, с), 4,32 - 4,43 (1H, м), 4,37 (2H, d, J = 7,1 Гц), 5,37 (1H, бd, J = 7,3 Гц), 7,40 (1H, т, J = 7,8 Гц), 7,78 (1H, d, J = 7,8 Гц), 7,96 (1H, d, J = 9,3 Гц), 8,13 (1H, с), 8,83 (1H, бс).

Сравнительный пример 32. Получение α -метил- γ -(3- этоксикарбониланилидо)-L-глютамата.

2,5 г соединения сравнительного примера 31 растворяют в 15 мл трифторуксусной кислоты при охлаждении льдом и раствор перемешивают в течение 1 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток растворяют в хлороформе. Хлороформовый слой промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и сушат над сульфатом натрия, и удаляют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента смеси хлороформ-метанол = 19:1 до получения указанного в заглавии соединения (1,6 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,39 (3H, т, J = 7,1 Гц), 1,74 (2H, с), 1,82 - 1,99 (1H, с), 2,15 - 2,32 (1H, м), 2,52 - 2,62 (2H, м), 3,54 - 3,60 (1H, м), 3,74 (3H, с), 4,37 (2H, q, J = 7,1 Гц), 7,39 (1H, т, J = 7?3 Гц), 7,77 (1H, d J= 7,3 Гц), 7,94 (1H, d, J = 7,8,Гц), 7,99 (1H, с), 8,63 (1H, бс).

Сравнительный пример 33. Получение α -метил-N-(1-карбобензоксииндолин-5-карбонил)- - γ -(3-этоксикарбониланилидо)-L-глютамата.

4 мл тионилхлорида добавляют к 612 мг 1-карбобензоксииндолин- 5-карбоновой кислоты и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем смесь упаривают досуха при пониженном давлении. Полученное твердое вещество растворяют в 4 мл дихлорметана и добавляют 4 мл раствора, содержащего 529 мг соединения сравнительного примера 32 и 0,36 мл триэтиламина в дихлорметане при охлаждении льдом в атмосфере азота, и смесь перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь последовательно промывают раствором 2 н. соляной кислоты и насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водой и сушат над сульфатом натрия, а затем удаляют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента хлороформа, а затем смеси хлороформ-метанол = 99:1 до получения указанного в заглавии соединения (870 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,37 (3H, т, J = 7,1 Гц), 2,08 - 2,22 (1H, м), 2,36 - 2,57 (3H, м), 3,06 (2H, т, J = 8,8 Гц), 3,77 (3H, с), 4,07 (2H, т, J = 8,8 Гц), 4,30 - 4,40 (2H, d, J = 7,1 Гц), 4,78 - 4,87 (1H, м), 5,28 (2H, бс), 7,13 (1H, d, J = 7,8 Гц), 7,30 - 7,43 (6H, м), 7,60 - 7,67 (2H, м), 7,74 (1H, d, J = 7,8 Гц), 7,89 (1H, d, J = 7,8 Гц), 8,12 (1H, бс), 8,96 (1H, бс).

Сравнительный пример 34. Получение α -метил-N-(индолин-5-карбонил)- γ -(3-этоксикарбониланилидо)-L- глютамата.

После добавления 10% (0,17 г) палладиевой сажи к 11 мл раствора 842 мг соединения сравнительного примера 33 в метаноле смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 15 часов. Палладиевую сажу удаляют фильтрованием с использованием целита и удаляют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента хлороформа, а затем смеси хлороформ-метанол = 99:1 до получения указанного в заглавии соединения (448 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,36 (3H, т, J = 7,1 Гц), 2,0 - 2,25 (1H, м), (2,25 - 2,48 (1H, м), 2,48 - 2,59 (2H, м), 2,93 (2H, т, J = 8,8 Гц), 3,57 (2H, т, J = 8,8 Гц), 3,71 (3H, с), 4,18 (1H, бс), 4,34 (2H, т, J = 7,1 Гц), 4,73 -4,48 (1H, м), 6,46 (1H, d, J = 8,8 Гц), 7,16 (1H, d, J - 7,8 Гц), 7,32 (1H, т, J = 7,8 Гц), 7,50 - 7,53 (2H, м), 7,73 (1H, d, J = 7,8 Гц) 7,87 (1H, d, J = 7,3 Гц), 8,19 (1H, с), 9,39 (1H, бс).

Пример 17. Получение α -метил-N-[1-[(2,4-диамино-6-птеридинил)метил)индолин-5-карбонил]- γ -(3-этоксикарбониланилидо)-L-глютамата.

В 5 мл диметилацетамида суспендируют 448 мг соединения сравнительного примера 34 и 587 мг аддукта 6-бром-2,4-диаминоптеридин гидробромида и изопропанола и суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 36 ч. Реакционную смесь подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента этилацетата, а затем смеси хлороформ-метанол = 9:1 до получения указанного в заглавии соединения (653 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ) : 1,34 (3H, т, J = 6,8 Гц), 1,96 - 2,32 (2H, м), 2,32 - 2,59 (2H, м), 3,00 (2H, т, J = 7,3 Гц), 3,56 - 3,66 (5H, с), 4,32 (2H, q, J = 6,5 Гц), 4,40 - 4,56 (3H, м), 6,66 - 6,71 (3H, бс), 7,39 (1H, т, J = 7,8 Гц), 7,63 - 7,67 (3H, м), 7,84 (1H, d, J = 7,3 Гц), 8,22 (1H, с), 8,32 (1H, d, J = 7,3 Гц) 8,63 (1H, с), 10, 11 (1H, с).

Пример 18. Получение N-[1-[(2,4-диамино-6-птеридинид)метил)индолин-5-карбонил]- γ -(3-карбоксианилидо)-L-глютамовой кислоты.

303 мг соединения примера 17 растворяют в 10 мл метанола, добавляют 1,06 мл 1 н. водного раствора гидроокиси натрия и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч. Добавляют 1 мл воды и затем смесь далее перемешивают в течение 2 ч. При этом поддерживают температуру водяной бани до 30^oC или ниже, удаляют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в насыщенном водном растворе гидрокарбоната натрия и раствор доводят до pH 3,7 1 н. раствором соляной кислоты. Выпавший оранжевый осадок собирают фильтрованием до получения указанного в заглавии соединения (157 мг).

¹H-ЯМР (DМCO-d₆, δ) : 1,97 - 2,25 (2H, м), 2,42 - 2,58 (2H, м), 2,99 (1H, т, J = 8,8 Гц), 3,59 (2H, т, J = 8,8 Гц), 4,33 - 4,45 (1H, м), 4,59 (2H, с), 6,71 (1H, d, J = 8,3 Гц), 6,93 (2H, бс), 7,39 (1H, т, J = 7,8 Гц), 7,57 - 7,82 (5H, м), 7,88 - 8,04 (1H, м), 8,06 - 8,12 (1H, м), 8,15 - 8,26 (2H, м), 8,75 (1H, с), 10,12 (1H, с).

Сравнительный пример 35. Получение α -бензил-N-карбобензокси-N',N'-диметил-L-глютамината.

0,14 мл этилхлоркарбоната добавляют к 2 мл тетрагидрофуранового раствора, содержащего 508 мг α -бензил-N-карбобензокси-L-глютамата и 0,19 мл триэтиламина при -20^oC в атмосфере азота и смесь перемешивают в течение 30 мин. Затем добавляют 3 мл дихлорметанового раствора, 112 мг диметиламингидрохлорида и 0,19 мл триэтиламина и смесь перемешивают в течение 1 ч. Смесь оставляют постепенно нагреваться до комнатной температуры, и полученный остаток растворяют в хлороформе. Хлороформовый слой промывают последовательно насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и 1 н. раствором соляной кислоты и сушат над сульфатом натрия, а затем удаляют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента смеси хлороформ - метанол = 49:1 до получения указанного в заглавии соединения (453 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,97 - 2,37 (4H, м), 2,86 (3H, c), 2,90 (3H, c), 4,39 - 4,41 (1H, м), 5,10 (2H, c), 5,17 (2H, c), 5,86 - 5,89 (1H, м), 7,34 (10H, c).

Сравнительный пример 36. Получение N-карбобензокси-N',N'-диметил-L-глютамина.

К 5 мл раствора 450 мг соединения сравнительного примера 35 в метаноле добавляют 1 н. водный раствор гидроокиси натрия и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. При этом поддерживают температуру водяной бани до 30^oC или ниже, растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в воде, а затем раствор подкисляют 1 н. соляной кислотой, смесь экстрагируют с использованием хлороформа. Затем хлороформовый слой сушат над сульфатом натрия, растворитель удаляют при пониженном давлении до получения указанного в заглавии соединения (341 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,93 - 2,06 (1H, м), 2,21 - 2,33 (1H, м), 2,42 - 2,56 (1H, м), 2,76 - 2,84 (1H, м), 2,98 (3H, c), 3,00 (3H, c), 4,19 - 4,27 (1H, м), 5,09 (2H, c), 6,04 - 6,06 (1H, м), 7,37 (10H, c).

Сравнительный пример 37. Получение α -метил-N-карбобензокси-N',N'-диметил-L-глютамината.

В 4 мл сухого метанола растворяют 3530 мг соединения сравнительного примера 36, добавляют 5 мл триметилсилилдиазометана и смесь перемешивают в течение 5 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении до получения указанного в заглавии соединения (338 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,96 - 2,43 (4H, м), 2,92 (3H, c), 2,95 (3H, c), 3,74 (3H, c), 4,28 - 4,40 (1H, м), 5,10 (2H, c), 5,80 (1H, м), 7,35 (5H, c).

Сравнительный пример 38. Получение α -метил-N',N'-диметил-L-глютамината.

После добавления 10% (70 мг) палладиевой сажи к 10 мл метанолового раствора 580 мг соединения сравнительного примера 37 смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 15 ч. Палладиевую сажу удаляют фильтрованием с использованием целита и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента смеси хлороформ-метанол = 19:1 до получения указанного в заглавии соединения (160 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,74 - 1,92 (1H, м), 2,06 - 2,23 (1H, м), 2,47 (2H, т, J = 7,3 Гц), 2,95 (3H, c), 3,02 (3H, c), 3,49 - 3,56 (1H, м), 3,73 (3H, c).

Сравнительный пример 39. Получение α -метил-N-(1-карбобензоксииндолин-5-карбонил)-N',N'-диметил- L -глютамината.

2 мл тионилхлорида добавляют к 295 мг 1-карбобензоксииндолин-5-карбоновой кислоты и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 чв. Затем упаривают досуха при пониженном давлении. Полученное твердое вещество растворяют в 2 мл дихлорметана и к раствору добавляют 2,5 мл дихлорметанового раствора, содержащего 160 мг соединения сравнительного примера 38 и 0,18 мл триэтиламина при охлаждении льдом в атмосфере азота, и смесь перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь последовательно промывают раствором 1 н. соляной кислоты, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и водой, сушат над сульфатом натрия и затем удаляют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента хлороформа, а затем смеси хлороформ=метанол = 99:1 до получения указанного в заглавии соединения (359 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 2,22 - 2,32 (2H, м), 2,43 - 2,55 (2H, м), 2,94 (3H, c), 2,98 (3H, c), 3,15 (2H, т, J = 8,8 Гц), 3,76 (3H, c), 4,10 (2H, т, J = 8,8 Гц), 4,58 - 4,68 (1H, м), 5,28 (2H, c), 7,36 - 7,41 (6H, м), 7,71 (1H, c), 7,90 (1H, d, J = 5,9 Гц).

Сравнительный пример 40. Получение α -метил-N-(индолин-5-карбонил)-N', N'-диметил-L-глутамината.

После добавления 10% (70 мг) палладиевой сажи к 5 мл метанолового раствора 359 мг соединения сравнительного примера 39 смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 15 ч. Палладиевую сажу удаляют фильтрованием с использованием целита и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента смеси хлороформ-метанол = 99:1 до получения указанного в заглавии соединения (131 мг).

¹H-ЯМР(CDCl₃, δ) : 2,19 - 2,30 (2H, м); 2,44 - 2,53 (2H, м), 2,93 (3H, c), 3,04 (2H, т, J = 8,3 Гц), 3,62 (2H, т, J = 8,3 Гц), 3,75 (3H, c), 4,14 (1H, бс), 4,60 - 4,70 (1H, м), 6,56 (1H, d, J = 7,8 Гц), 7,51 - 7,62 (3H, м).

Пример 19. Получение α -метил-N-[1-((2,4-диамино-6-птеридинил)метил)-индолин-5-карбонил] -N',N'-диметил-L-глутамината.

В 4 мл диметилацетамида суспендируют 131 мг соединения сравнительного примера 40 и 233 мг аддукта 6-бромметил-2,4-диаминоптеридингидробромида и изопропанола и суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционную смесь подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля в качестве элюента этилацетата и затем смеси хлороформ-метанол = 9:1 до получения соединения, указанного в заглавии (95 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,98 - 2,17 (2H, м), 2,42 (2H, т, J = 6,8 Гц), 2,84 (3H, c), 2,94 (3H, c), 3,00 (2H, т, J = 8,3 Гц), 3,59 (2H, т, J = 8,3 Гц), 3,64 (3H, c), 4,30 - 4,42 (1H, м), 4,55 (2H, c), 6,68 (1H, d, J = 7,3 Гц), 7,60 - 7,64 (2H, м), 8,34 (1H, d, J = 7,3 Гц), 8,71 (1H, c).

Пример 20. Получение N-[1-((2,4-диамино-6птеридинил)метил) -индолин-5-карбонил]-N',N'-диметил-L-глутамина.

70 мг соединения примера 19 растворяют в 5 мл метанола и к раствору добавляют 0,15 мл 1 н. водного раствора гидроокиси натрия, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч. Затем к раствору добавляют 2 мл воды и смесь далее перемешивают в течение 5 ч. Температуру водяной бани при этом поддерживают до 30^oC или ниже, удаляют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в насыщенном водном растворе гидрокарбоната натрия и раствор доводят до pH 3,7 1н. соляной кислотой. Выпавший оранжевый осадок собирают фильтрованием до получения соединения, указанного в заглавии (16 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,96 - 2,08 (2H, м), 2,41 (2H, т, J = 7,1 Гц), 2,82 (3H, c), 2,92 (3H, c), 3,01 (2H, т, J = 7,8 Гц), 3,62 (2H, т, J = 7,8 Гц), 4,27 - 4,37 (1H, м), 4,62 (2H, c), 6,72 (1H, d, J = 8,8 Гц), 7б61 - 7,64 (2H, м), 8,24 (1H, d, J = 6,8 Гц), 8,87 (1H, c), 12,46 (1H, бс).

Сравнительный пример 41. Получение [1-(2,4-диамино-6-птеридинил)метил] -1,2,3,4-тетрагидро -6-хинолинкарбоновой кислоты.

В 3 мл диметилацетамина суспендируют 178 мл аддукта 6-бромметил2,4-диаминоптеридингидробромида и изопропанола и 55 мг 1,2,3,4-тетрагидро-6-хинолинкарбоновой кислоты и суспензию перемешивают при 60-65^oC в течение ночи. После охлаждения добавляют 10 мл воды к реакционной смеси и смесь доводят до pH 3,5 1н. соляной кислотой при охлаждении ледяной водой и оставляют на ночь в холодном месте. Выпавший осадок собирают фильтрованием до получения указанного в заглавии соединения (70 мл).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): 2,08 (2H, т, J = 8 Гц), 2,88 (2H, т, J = 8 Гц), 3,68 (2H, т, J = 8 Гц), 4,72 (2H, с), 6,62 (1H, d, J = 9 Гц), 7,48 (2H, м), 8,51 (1H, с).

Пример 21. Получение диэтил-N-[1-((2,4-диамино-6-птеридинил) -метил)-1,2,3,4,-тетрагидро-6-хинолинкарбонил]-L-глютамата.

В 6 мл безводного диметилформамида суспендируют 60 мг триэтиламина и 98 мг диэтилфосфорцианидата и далее к суспензии добавляют 60 мг соединения сравнительного примера 41, и смесь перемешивают. После растворения смесь перемешивают при 80^oC в течение 3 мин и охлаждают до комнатной температуры с последующим перемешиванием в течение 10 мин. Затем к смеси добавляют 20 мг триэтиламина и 40 мг диэтилглутаматгидрохлорида и смесь перемешивают при 80^oC в течение 2 ч. После окончания реакции растворитель удаляют при пониженном давлении, к остатку добавляют хлороформ и хлороформовый слой промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. После сушки хлороформового слоя над сульфатом магния растворитель удаляют при пониженном давлении и полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента смеси хлороформ-метанол = 10:1 до получения соединения, указанного в заглавии (50 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ) : 1,1 - 1,4 (6H, м), 1,8 - 2,4 (4H, м), 2,40 (2H, т, J = 8 Гц), 2,82 (2H, т, J = 8 Гц), 3,51 (2H, т, J = 8 Гц), 4,0 - 4,3 (4H, м), 4,64 (1H, м), 4,75 (2H, с), 6,65 (1H, d, J = 9 Гц), 7,47 (2H, м), 8, 65 (1H, с).

Пример 22. Получение N-[1-((2,4-диамино-6-птеридинил)метил)- -1,2,3,4, -тетрагидро-6-хинолинкарбонил]-L-глутамовой кислоты.

В 10 мл этанола растворяют 50 мг соединения примера 21 и к раствору добавляют 0,24 мл 1н. водного раствора гидроокиси натрия при 35^oC, и смесь перемешивают при той же температуре в течение 4,5 ч. Перемешивание далее продолжают при 25^oC в течение 20 ч и к реакционной смеси добавляют 1 мл воды. При охлаждении ледяной водой реакционную смесь доводят до pH 3,7 1н. соляной кислотой и оставляют на ночь в холодном месте. Выпавший осадок собирают фильтрованием до получения соединения, указанного в заглавии (27 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): 1,8 - 2,2 (4H, т, J = 8 Гц), 2,75 (2H, т, J = 8 Гц), 3,60 (2H, т, J = 8 Гц), 4,36 (1H, м), 4,70 (2H, с), 6,62 (1H, d, J = 9 Гц), 7,51 (2H, м), 8,62 (1H, с).

Т.плавления 204-208^oC (разлагается).

Сравнительный пример 42. Получение метил-4-[(2,4-диамино-6-птеридинил)метил)-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-7-карбоксилата.

В 10 мл диметилацетамида суспендируют 410 мг аддукта 6-бромметил-2,4-диаминоптеридингидробромида и изопропанола и 200 мг метил-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-7-карбоксилата и суспензию перемешивают при температуре бани 65^oC в течение 4 ч и при температуре 90^oC в течение 19 ч. После охлаждения диметилацетамид конденсируют при пониженном давлении и добавляют хлороформ и водный раствор гидрокарбоната натрия к конденсату. Затем осадок, отфильтровывают, органический слой промывают водой и сушат над сульфатом магния, и удаляют растворитель при пониженном давлении. Осадок подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента смеси хлороформ-метанол = 97: 3 до получения указанного в заглавии соединения (100 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃:CD₃OD=9:1, δ) : 3,63 (2H, шир.т), 3,84 (3H, с), 4,32 (2H, брт), 4,72 (2H, с), 6,68 (1H, d, J = 9,0 Гц), 7,47 (1H, с), 7,50 (1H, d, J = 9,0 Гц), 8,71 (1H, c).

Сравнительный пример 43. Получение 4-[(2,4-диамино-6-птеридинил)метил] -3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-7-карбоновой кислоты.

60 мг соединения сравнительного примера 42 суспендируют в смешанном растворителе 20 мл 1н. водного раствора гидроокиси натрия и 20 мл метанола и суспензию кипятят с обратным холодильником при нагревании в течение 2,5 ч. После охлаждения растворителя удаляют, добавляют воду и смесь доводят до pH 5 (суспендируют) раствором 1н. соляной кислоты. Смесь оставляют в холодном месте, выпавший осадок собирают фильтрованием и сушат до получения соединения указанного в заглавии (60,8 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ) : 3,63 (2H, м), 4,22 (2H, м), 4,71 (2H, с), 7,21 (1H, с), 8,29 (1H, с).

Пример 23. Получение диэтил-N-[4-((2,4-диамино-6-птеридинил) метил)-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-7-карбонил]-L-глютамата.

К раствору 64 мкл диэтилфосфорцианидата, 60 мкл триэтиламина и 5 мл безводного диметилформамида добавляют 50 мл соединения сравнительного примера 43 и смесь перемешивают в атмосфере азота при 80^oC в течение 5 мин. После охлаждения до комнатной температуры добавляют 20 мкл триэтиламина и 34 мг диэтилглутамата и смесь вновь нагревают до 80^oC при перемешивании в течение 2,5 ч. После охлаждения реакционную смесь экстрагируют хлороформом и хлороформовый слой последовательно промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и солевым раствором. После сушки хлороформого слоя над сульфатом магния растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и в качестве элюента смеси хлороформ-метанол = 19:1 до получения указанного в заглавии соединения (10 мл).

¹H-ЯМР (CDCl₃ : CD₃OD = 9:1, δ): 1,23 (3H, т, J = 6,8 Гц), 1,29 (3H, т, J = 6,8 Гц), 3,60 (2H, м), 4,11 (2H, q, J = 6,8 Гц), 4,22 (2H, q, J = 6,8 гц), 4,32 (2H, м), 4,71 (2H, с), 6,69 (1H, d, J = 10 Гц), 7,29 (1H, d, J = 10,0 Гц), 7,36 (1H, с), 8,70 (1H, с).

Пример 24. Получение N-[4-((2,4-диамино-6-птеридинил-метил-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-7-карбонил]-L-глютамовой кислоты.

В 3 мл этанола растворяют 9 мг соединения примера 23 и к раствору добавляют 1н. водный раствор гидроокиси натрия, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 дней. Растворитель удаляют и остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагеля и смешанного растворителя хлороформ-метанол-водный аммиак = 5:4:1. Фракции, содержащие указанное в названии соединение, собирают и удаляют растворитель. Остаток растворяют добавлением насыщенного водного раствора гидрокарбоната натрия (200 мкл) и раствор водяной до pH около 4 (суспендированный) добавлением по каплям 1н. раствора соляной кислоты и оставляют на ночь в холодном месте. Выпавший осадок собирают фильтрованием до получения указанного в заглавии соединения (2,8 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): 1,86 - 1,95 (1H, м), 1,95 - 2,03 (1H, м), 2,24 - 2,38 (2H, м), 3,67 (2H, т, J = 3,8 Гц), 4,25 (2H, т, J = 3,8 Гц), 4,30 (1H, м), 4,70 (2H, с), 6,83 (1H, d, J = 8,6 Гц), 7,26 (1H, с), 7,30 (1H, d, J = 8,6 Гц), 8,09 (1H, м), 8,70 (1H, с).

ИК (KBr) ν_макс 3464, 1642 и 1512 см^-1.

Пример 25. Получение метил-N-[1-((2,4-диамино-6-птеридинил) метил)-индонил-5-карбонил]-DL-2-амино-4-фосфонобутирата.

В 30 мл водного диметилформамида суспендируют 272 мг триэтиламина и 440 мг диэтилцианфосфоновой кислоты. Затем к суспензии добавляют 303 мг 1[(2,4-диамино-6-птеридинил-метил] индолин-5-карбоновой кислоты и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи (раствор A). С другой стороны, в 5 мл водного метанола растворяют DL-2-амино-4-фосфонобутировую кислоту при 0^oC и затем постепенно к раствору добавляют 1 мл тионилхлорида при той же температуре. Затем смесь оставляют нагреться до комнатной температуре и перемешивают в течение ночи и удаляют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в водном диметилформамиде (раствор Б). Затем растворы А и Б смешивают. К смешанному раствору затем добавляют 505 мг триэтиламина и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 дней. Затем удаляют растворитель при пониженном давлении до получения 700 мг остатка. Из полученного остатка отбирают 100 мг и проводят фракционирование с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (колонка УMC - A323) и элюента смеси вода-ацетонитрил-трифторуксусная кислота = 87,5: 12,5:1 до получения указанного в заглавии соединения (2 мг).

¹H-ЯМР (D₂O, δ) : 1,7 - 2,3 (4H, м), 3,06 (2H, т, J = 7 Гц), 3,58 (2H, т, J = 8 Гц), 3,84 (3H, с), 4,36 (1H, м), 4,70 (2H, с), 6,63 (1H, d, J = 8,6 Гц), 7,60 (2H, м), 8,78 (1H, с).

Сравнительный пример 44. Получение метил-4-амино-3-гидроксибензоата.

В 40 мг метанола суспендируют 4-амино-3-гидроксибензойную кислоту и через суспензию пропускают газообразный хлористый водород в течение 10 мин, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 ч. Выпавший осадок собирают фильтрованием, промывают три раза эфиром и затем сушат в вакууме до получения указанного в заглавии соединения (4,15 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 3,83 (3H, с), 6,68 (1H, d, J = 8 Гц), 7,41 (2H, м).

Сравнительный пример 45. Получение 4-метоксикарбонил-2-гидроксихлорацетиланилида.

В 30 мл дихлорметана растворяют 1,0 г соединения сравнительного примера 44 и 4,0 мл триэтиламина и раствор охлаждают до 0^oC. К раствору по каплям добавляют 5 мл дихлорметанового раствора 1,0 мл хлорацетилхлорида в атмосфере азота в течение 8 мин, и смесь перемешивают при той же температуре в течение 1 ч. Затем к реакционной смеси добавляют насыщенный водный раствор хлористого аммония, и выпавший осадок собирают фильтрованием. Используя смесь хлороформацетон, проводят перекристаллизацию до получения соединения указанного в заглавии (0,83 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 3,90 (3H, с), 4,25 (2H, с), 7,52 (2H, м), 8,37 (1H, d, J = 8 Гц).

Сравнительный пример 46. Получение метил-3-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-7-карбоксилата.

В 300 мл этанола суспендируют 6,0 г соединения сравнительного примера 45 и к суспензии добавляют 5,0 г ацетата калия, и смесь кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 90 минут. После охлаждения реакционной смеси осадок собирают фильтрованием и сушат в вакууме до получения указанного в названии соединения (5,2 г).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ) : 3,80 (3H, с), 4,63 (2H, с), 6,95 (1H, м), 7,43 (1H, м), 7,56 (1H, м).

Сравнительный пример 47. Получение метил-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-7-карбоксилата.

В атмосфере азота к 30 мл тетрагидрофурана добавляют комплекс тетрагидрофуранборана (1 М раствора, 10 мл) и 440 мг соединения сравнительного примера 46 при 0^oC, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин и затем кипятят с обратным холодильником в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и добавляют к ней 2,5 мл раствора 6 н. соляной кислоты. Реакционную смесь конденсируют при пониженном давлении, выливают в воду и подщелачивают 2 н. водным раствором гидроокиси натрия. Затем указанное в названии соединение экстрагируют этилацетатом и полученный органический слой промывают солевым растворами и сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя при пониженном давлении полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагелевой колонки. Остаток проявляют и элюируют смешанным растворителем гексан-этилацетат = 3:2 до получения указанного в заглавии соединения (310 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 3,46 (2H, м), 3,84 (3H, с), 4,22 (2H, т, J = 4,4 Гц), 4,30 (1H, м), 6,53 (1H, d, J = 9,8 Гц), 7,45 (1H, с), 7,47 (1H, d, J = 9,8 Гц).

Сравнительный пример 48. Получение метил-N-карбобензокси-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-7-карбоксилата.

В 50 мл тетрагидрофурана растворяют 1,4 г соединения сравнительного примера 47 и к раствору постепенно добавляют 700 мг натрия, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем добавляют 3 мл карбобензоксихлорида и смесь перемешивают в течение ночи. После добавления к реакционной смеси нескольких капель воды реакционную смесь выливают в холодную воду и указанное в названии соединение экстрагируют этилацетатом. Полученный органический слой сушат над сульфатом натрия и удаляют растворитель при пониженном давлении. Остаток перекристаллизовывают из смеси гексан-этилацетат до получения указанного в заглавии соединения (1,79 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 3,85 (3H, с), 3,91 (2H, м), 4,25 (2H, м), 5,34 (2H, с), 7,35 (5H, м), 7,53 (2H, м), 7,99 (1H, м).

Сравнительный пример 49. Получение N-карбобензокси-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-7-карбоновой кислоты.

В 50 мл этанола суспендируют 1,79 г соединения сравнительного примера 48 и к суспензии добавляют 8,2 мл 1 н. водного раствора гидроокиси натрия, и смесь перемешивают в течение ночи. Растворитель удаляют при пониженном давлении, полученный остаток растворяют в 20 мл воды. Затем к раствору постепенно добавляют раствор 1 н. соляной кислоты для доведения pH 2, выпавший осадок собирают фильтрованием и сушат в вакууме до получения указанного в заглавии соединения (1,39 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 3,82 (2H, м), 4,14 (2H, м), 5,13 (2H, с), 7,2 - 7,7 (7H, м), 7,95 (1H, м).

Сравнительный пример 50. Получение диметил-N-(3,4-дигидро-2H-4,4-бензоксазин-7-карбонил-L- α -аминодипата.

В 5 мл тионилхлорида суспендируют 800 мг соединения сравнительного примера 49, к смеси добавляют каталитическое количество диметилформамида, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем избыток тионилхлорида удаляют при пониженном давлении и остаток растирают с гексаном. После сбора полученных кристаллов фильтрованием кристаллы растворяют в 20 мл дихлорметана и к дихлорметановому раствору по каплям добавляют водный раствор, содержащий 1,0 гидрохлорида диметилового эфира-L-α-аминоадипиновой кислоты и 1,0 г триэтиламина при охлаждении ледяной водой. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и удаляют растворитель при пониженном давлении. К остатку добавляют смешанный раствор этилацетата и разбавленной соляной кислоты при охлаждении ледяной водой. После перемешивания в течение 5 мин отделяют органический слой и затем органический слой промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. После сушки над сульфатом магния растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в 80 мл этанола и после добавления 10% (400 мг) палладиевой сажи смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение ночи. Палладиевую сажу удаляют фильтрованием с использованием целита, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагелевой колонки и в качестве элюента смеси хлороформ-метанол = 100:1 до получения указанного в заглавии соединения (230 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,6 - 2,1 (4H, м), 2,38 (2H, т, J = 6,8 Гц), 3,46 (2H, м), 3,68 (3H, с), 3,77 (3H, с), 4,24 (2H, м), 4,72 (1H, м), 6,59 (1H, d, J = 8,3 Гц), 7,33 (2H, м).

Пример 26. Получение диметил-N-[I-((2,4-диамино)-6-птеридинил)метил]-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин -7-карбонил]-L- α -аминоадипата.

В 3 мл диметилацетамида суспендируют 20 мл соединения сравнительного примера 50 и аддукта (226 мг) 6-бромметил-2,4-диаминоптеридингидробромида и изопропанола, и суспензию перемешивают при 60^oC в течение 6 ч. После охлаждения реакционную смесь выливают в насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют хлороформом. Органический слой сушат над сульфатом магния, и удаляют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагелевой колонки и в качестве элюента смешанного растворителя хлороформ-метанол = 10:1 до получения соединения, указанного в названии (260 мг).

¹H-ЯМР (CD₃OD, δ) : 1,6 - 2,0 (4H, м), 2,36 (2H, т, J = 6,8 Гц), 3,58 (2H, м), 3,66 (3H, с), 3,76 (3H, с), 4,39 (2H, м), 4,67 (2H, бс), 4,73 (1H, м), 6,66 (1H, d, J = 8,3 Гц), 6.99 (1H, т, J = 7,3 Гц), 7,29 (2H, м), 8,70 (1H, с).

Пример 27. Получение N-[1-((2,4-диамино)-6-птеридинил)метил] -3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин -7-карбонил]-L- α -аминоадипиновой кислоты.

260 мг соединения примера 26 растворяют в 12 мл этанола, к раствору добавляют 0,45 мл 1 н. водного раствора гидроокиси натрия при 35^oC, и смесь перемешивают при той же температуре в течение 4 ч. Затем продолжают перемешивание при 25^oC в течение 20 часов, добавляют 0,5 мл воды к реакционной смеси и удаляют этанол при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в 6 мл воды, доводят до pH 3,7 1н. раствором соляной кислоты при охлаждении ледяной водой и оставляют в холодном месте на ночь. Выпавший осадок собирают фильтрованием до получения указанного в заглавии соединения (176 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ) : 1,5 - 2,0 (4H, м), 2,14 (2H, т, J = 6,8 Гц), 3,68 (2H, м), 4,28 (3H, м), 4,71 (2H, бс), 6,80 (1H, т, J = 8,3 Гц), 7,31 (2H, м), 8,13 (1H, d, J = 7,3 Гц), 8,71 (1H, с).

Сравнительный пример 51. Получение α -метил- γ - бензил -N-т-бутоксикарбонил-L-глютамата.

В 75 мл диметилформамидового раствора 5,0 г γ -бензил-N-т-бутоксикарбонил-L-глютамата суспендируют 2,5 г гидрокарбоната натрия и к суспензии добавляют 75 мл диметилформамидного раствора 10,5 г метилиодида, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Затем реакционную смесь конденсируют при пониженном давлении, остаток выливают в 70 мл воды и экстрагируют смешанным раствором этилацетата-н-гексана = 1:1. Органический слой промывают водой и сушат над сульфатом натрия, растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагелевой колонки и в качестве элюента смеси этилацетат-н-гексан = 1:2 до получения соединения, указанного в заглавии (5,2 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 1,43 (9H, с), 1,92 - 2,01 (1H, м), 2,11 - 2,37 (1H, м), 2,42 - 2,51 (2H, м), 3,73 (3H, с), 4,23 - 4,40 (1H, м), 5,12 (2H, с), 7,35 (5H, с).

Сравнительный пример 52. Получение α -метил-N-т- бутоксикарбонил-L-глютамата.

После добавления 10% (1,1 г) палладиевой сажи к 30 мл метанола, содержащего 5,2 соединения сравнительного примера 51, смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 15 ч. Палладиевую сажу удаляют фильтрованием с использованием целита и удаляют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в насыщенном водном растворе гидрокарбоната натрия и раствор промывают хлороформом. После отделения водного слоя доводят его pH до 4 5%-ной лимонной кислотой и экстрагируют хлороформом. Хлороформовый слой сушат над сульфатом натрия и удаляют растворитель при пониженном давлении до получения указанного в заглавии соединения (3,9 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,44 (9H, с), 1,89 - 2,04 (1H, м), 2,09 - 2,27 (1H, м), 2,33 - 2,59 (2H, м), 3,75 (3H, с), 4,24 - 4,44 (1H, м), 5,17 - 5,21 (1H, м), 9,38 (1H, бс).

Сравнительный пример 53. Получение гидрохлорида метил-4-амино-п-бутирата.

В 20 мл метанолового раствора 1,0 г 4-амино-п-бутировой кислоты пропускают газообразный хлористый водород в течение 10 минут и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении до получения указанного в заглавии соединения (1,5 г).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): 1,83 - 2,24 (2H, м), 2,32 - 2,60 (2H, м), 2,76 - 3,26 (2H, м), 3,61 (3H, с), 8,26 (2H, шир.с).

Сравнительный пример 54. Получение α -метил-N-т- бутоксикарбонил-N'-/3-метоксикарбонилпропил/-L-глутамината.

К 5 мл тетрагидрофуранового раствора 518 мг соединения сравнительного примера 52 добавляют 0,33 мл триэтиламина и 1 мл тетрагидрофуранового раствора, 0,31 мл изобутилхлоркарбоната при -20^oC в атмосфере азота, и смесь перемешивают в течение 30 мин. Затем после добавления к смеси 5 мл тетрагидрофурановой суспензии 366 мг соединения сравнительного примера 53 и 0,33 мл триэтиламина, смесь перемешивают в течение 1 часа. Смесь оставляют постепенно нагреться до комнатной температуры и затем перемешивают еще 24 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении, и полученный остаток растворяют в этилацетате. Этилацетатовый слой промывают последовательно 5%-ным водным раствором лимонной кислоты, насыщенным водным раствором лимонной кислоты, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и водой и сушат над сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении, полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагелевой колонки и в качестве элюента смеси хлороформ:метанол = 99:1 до получения указанного в заглавии соединения (575 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,44 (9H, с), 1,78 - 1,99 (3H, м), 2,16 - 2,19 (1H, м), 2,22 - 2,31 (2H, м), 2,39 (2H, т, J = 7,1 Гц), 2,70 (2H, q, J = 6,5 Гц), 3,68 (3H, с), 3,74 (3H, с), 4,14 - 4,31 (1H, м), 5,35 (1H, бс), 6,43 (1H, бс).

Сравнительный пример 55. Получение α -метил-N'-(3-метоксикарбонилпропил)-L-глютаминаттрифорацетата.

726 мг соединения сравнительного примера 54 растворяют в 2 мл трифторуксусной кислоты при охлаждении льдом, и смесь перемешивают в течение 1 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении до получения указанного в заглавии соединения (754 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃: CCD₃OD = 20:1, δ): 0,92 (2H, q, J = 6,3 Гц), 2,04 - 2,42 (4H, м), 2,50 (2H, т, J = 6,3 Гц), 3,17 - 3,24 (2H, м), 3,67 (3H, с), 3,81 (3H, с), 4,09 - 4,15 (1H, м), 7,44 (1H, т, J = 6,0 Гц).

Сравнительный пример 56. Получение α -метил-N-(1- карбобензоксииндолин-5-карбонил)-N'-(3-метоксикарбонилпропил)-L- глютамината.

5 мл тонилхлорида добавляют к 599 мг 1-карбобензоксииндолин-5-карбоновой кислоты, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем смесь упаривают досуха при пониженном давлении. Полученное твердое вещество растворяют в 7 мл метиленхлорида, к раствору добавляют 3 мл водного раствора 754 мг соединения сравнительного примера 55 и 534 мг гидрокарбоната натрия при комнатной температуре и смесь перемешивают в течение 15 ч. К смеси добавляют гидрокарбонат натрия до тех пор, пока pH не станет равным 8, и нерастворимую часть удаляют фильтрованием с использованием целита и отделяют метиленхлоридный слой. Метиленхлоридный слой промывают последовательно 1 н. раствором соляной кислоты и водой, сушат над сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении и полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагелевой колонки и в качестве элюента смеси хлороформ-метанол = 99:1 до получения указанного в заглавии соединения (474 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,81 (2H, q, J = 7,0 Гц), 2,09 - 2,27 (4H, м); 2,34 (2H, т, J = 7,3 Гц), 3,15 (2H, т, J = 9,0 Гц), 3,27 (2H, т, J = 5,4 Гц), 3,65 (3H, с), 3,77 (3H, с), 4,10 (2H, т, J = 8,8 Гц), 4,65 - 4,75 (1H, м), 5,28 (2H, с), 6,38 - 6,45 (1H, м), 7,36 - 7,46 (6H, м), 7,66 - 7,68 (2H, м).

Сравнительный пример 57. Получение α -метил-N-(индолин-5- карбонил)-N'-(3-метоксикарбонилпропил)-L-глютамината.

После добавления 10% (90 мг) палладиевой сажи к 10 мл метанолового раствора 470 мг соединения сравнительного примера 56 смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 15 ч. После удаления палладиевой сажи фильтрованием с использованием целита удаляют растворитель при пониженном давлении до получения указанного в заглавии соединения (350 мг).

¹H-ЯМР-(CDCl₃, δ): 1,66 - 2,48 (8H, м), 2,81 - 3,30 (4H, м), 3,50 (2H, т, J = 6,0 Гц), 3,64 (3H, с), 3,73 (3H, с), 4,49 - 4,81 (1H, м), 6,51 (2H, d, J = 9,0 Гц), 6,62 - 6,84 (1H, м), 7,21 - 7,33 (1H, м), 7,42 - 7,57 (2H, м).

Пример 28. Получение α -метил-N-[1-[(2,4-диамино-6-птеридинил)- индолин-5-карбонил]-N'-(3-метоксикарбонилпропил)-L-глютамината.

В 7 мл диметилацетамида суспендируют 350 мг соединения сравнительного примера 57 и 414 мг аддукта 6-бромметил-2,4-диаминоптеридингидробромида и изопропанола и суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. К смеси добавляют 0,29 мл триэтиламина, и смесь перемешивают в течение 10 мин, а затем подвергают хроматографической обработке с использованием силикагелевой колонки и в качестве элюента этилацетата и затем смеси хлороформ-метанол = 9:1 до получения соединения, указанного в заглавии (263 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆: CDCl₃ = 7:3, δ): 1,67 (2H, q, J = 6,9 Гц), 1,91 - 2,14 (2H, м), 2,19 - 2,33 (4H, м), 2,97 - 3,13 (4H, м), 3,56 - 3,59 (5H, м), 3,65 (3H, с), 4,34 - 4,44 (1H, м), 4,55 (2H, с), 6,67 (1H, d, J = 8,3 Гц), 7,32 (4H, бс), 7,62 - 7,66 (2H, м), 7,84 (1H, т, J = 8,3 Гц), 8,33 (1H, d, J = 7,3 Гц), 8,71 (1H, с).

Пример 29. Получение N-[1-((2,4-диамино-6-птеридинил)метил) индолин-5-карбонил]-N'-(3-карбоксипропил)-L-глютамина.

К 5 мл раствора 250 мг соединения примера 28 в метаноле добавляют 0,95 мл 1 н. водного раствора гидроокиси натрия и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч. Температуру водяной бани при этом поддерживают до 30^oC или ниже и удаляют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагелевой колонки и в качестве элюента смеси хлороформ-метанол-28%-ный водный раствор аммиака = 5:4:1 до получения коричневого твердого вещества. Полученное твердое вещество растворяют в воде, отфильтровывают нерастворимую часть и доводят раствор до pH 3,7 раствором 1 н. соляной кислоты. Выпавший коричневатый осадок собирают фильтрованием до получения указанного в заглавии соединения (144 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆: CDCl₃= 9:1, δ): 1,61 (2H, q, J=7,0 Гц), 1,89-2,09 (2H, м), 2,13-2,30 (4H, м), 2,95-3,10 (4H, м), 3,58 (2H, т, J=8,0 Гц), 4,25-4,38 (1H, м), 4,55 (2H, c), 6,70 (1H, d, J=8,3 Гц), 7,61-7,65 (1H, м), 7,85 (1H, т, J=5,8 Гц), 8,21 (1H, d, J=7,3 Гц), 8,73 (1H, c).

Пример 30. Получение N-[1[[2,4-диамино-6-птеридинил)метил)нидолин-5-карбонил]гомоцистеата аммония.

К 6 мл суспензии 330 мл гидробромида гомоцистеиновой кислоты в бензоле добавляют 870 мкл триэтиламина и 630 мкл хлортриметилсилана в атмосфере азота, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 суток. Выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат конденсируют до получения силированной гомоцистеиновой кислоты (450 мг). В атмосфере азота в 18 мл диметилформамида растворяют 213 мкл диметилцианфосфоната и 172 мкл триэтиламина и малыми порциями добавляют 170 мг 1-(2,4-диамино(-6-птеридинил)метил)индолин-5-карбоновой кислоты при комнатной температуре и смесь перемешивают при той же температуре в течение 3 ч. К раствору добавляют 2 мл диметилформамидового раствора 450 мг силированной гомоцистеиновой кислоты и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 дней. Затем к реакционной смеси добавляют 1 мл воды и удаляют растворитель при пониженном давлении. К остатку добавляют 3%-ный водный раствор бикарбоната аммония и после удаления нерастворимой части фильтрованием фильтрат подвергают обработке с использованием колонки с DEAE-целлюлозой, промывают водой и элюируют 3%-ным водным раствором бикарбоната аммония до получения указанного в заглавии соединения (18 мг).

¹H-ЯМР (D₂O, δ) : 2,0-2,4 (2H, м), 3,15 (4H, м), 3,49 (2H, м), 4,34 (1H, м), 4,49 (2H, с), 6,66 (1H, м), 7,55 (2H, м), 8,69 (1H, с).

Сравнительный пример 58. Получение метил-3,4-дигидро-2Н-1,4-бензотиазинкарбоксилата.

Смесь 15 г 2-аминобензотиазол-6-карбоновой кислоты, 22 г гидроокиси калия и 22 г воды кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 3 ч. Смесь охлаждают до комнатной температуры и добавляют к ней 20 мл воды, 40 мл 1,2-диброэтана и 3 г гексадецилтрибутифосфонийбромида, и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 6 ч. Смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют к смеси воду и хлороформ, и нерастворимую часть удаляют декантацией. Водный слой доводят до pH 3 соляной кислотой и собирают хлороформовый слой. Полученный хлороформовый слой промывают насыщенным солевым раствором и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток растворяют в метаноле. Через раствор пропускают газообразный хлористый водород в течение 10 мин и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. К остатку, полученному удалением растворителя при пониженном давлении, добавляют воду и этилацетат, водный слой доводят до pH 5 1н. водным раствором гидроокиси натрия и затем экстрагируют этилацетатом. Полученный органический слой промывают насыщенным солевым раствором и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток подвергают хроматографической обработке с использованием силикагелей колонки и в качестве элюента смеси этилацетат-гексан=1:4 до получения указанного в заглавии соединения (721 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ) : 2,9-3,1 (2H, м), 3,6-3,9 (2H, м), 3,83 (3H, c), 4,0-5,0 (1H, бг), 6,39 (1H, d, J-8,4 Гц), 7,45-7,75 (2H, м).

Сравнительный пример 59. Получение N-карбобензокси-3,4-дигидро-2H-1,4-бензотиазин-7-карбоновой кислоты.

313 мг соединения сравнительного примера 58 растворяют в 10 мл тетрагидрофурана и к раствору постепенно добавляют 180 мг гидрида натрия, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин. Затем к смеси добавляют 1,3 мл карбобензоксихлорида, и смесь перемешивают в течение ночи. После добавления воды смесь экстрагируют этилацетатом. Полученный органический слой сушат над безводным сульфатом натрия и затем удаляют растворитель при пониженном давлении. Остаток подвергают хроматографической обработке на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь этилацетат гексан= 1: 10, получают метил-N-карбобензокси-3,4-дигидро-2H-1,4-бензотиозин-7-карбоксилат и суспендируют в 15 мл этанола. К суспензии добавляют 1,9 мл 1 н. водного раствора гидроокиси натрия и смесь перемешивают в течение ночи. Растворитель удаляют при пониженном давлении и полученный остаток растворяют в 20 мл воды. Затем постепенно добавляют раствор 1 н. соляной кислоты до pH 3 и смесь экстрагируют хлороформом. Органический слой промывают насыщенным солевым раствором и сушат над безводным сульфатом натрия. Остаток, полученный удалением растворителя при пониженном давлении, подвергают хроматографической обработке с использованием колонки с силикагелем и в качестве элюента смеси хлороформ-метанол=95:5 до получения указанного в заглавии соединения (208 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃ : CD₃OD)=9:1, δ): 3,0-2,3 (2H, м), 3,8-4,1 (2H, м), 5,25 (2H, с), 7,3-7,9 (8H, м).

Сравнительный пример 60. Получение диэтил-N-(3,4-дигидро-2H-1,4-бензотиазин-7-карбонил)-глютамата.

К 5 мл диметилформамидного раствора, содержащего 208 мг соединения сравнительного примера 59, 151 мг диэтил-L-глютаматгидрохлорида, 90 мг 1-гидроксибензотриазола и 70 мкл N-метилморфолина, добавляют 145 мг дициклогексикарбодиимида при охлаждении льдом, и смесь перемешивают при той же температуре в течение 1 ч и затем при комнатной температуре в течение ночи. К смеси добавляют этилацетат, осадок отфильтровывают и фильтрат промывают последовательно водным раствором гидрокарбоната натрия и насыщенным солевым раствором и сушат над безводным сульфатом натрия. Остаток, полученный удалением растворителя при пониженном давлении, подвергают хроматографической обработке с использованием колонки с силикагелем и в качестве элюента смеси этилацетат-гексан= 1:2, получают диэтил-N-(N'-карбобензокси-3,4-дигидро-2H-1,4-бензотиазин-7-карбонил)-L- глутамат и растворяют в 20 мл этанола. После добавления 10% (700 мг) палладиевой сажи к раствору, раствор перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение ночи. Палладиевую сажу удаляют фильтрованием с использованием целита, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием колонки с силикагелем и в качестве элюента смеси этилацетат-гексан=2:3 до получения указанного в заглавии соединения (83 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃ : CD₃OD=9:1, δ): 1,24 (6H, м), 2,0-2,7 (4H, м), 2,9-3,1 (2H, м), 3,6-3,8 (2H, м), 3,9-4,4 (5H, м), 6,45 (1H, d, J=8,0 Гц), 7,2-7,6 (2H, м).

Пример 31. Получение диэтил-N[1-[(2,4-диамина)-6-птеридинил)метил] -3,4-дигидро-2H-1,4- бензотиазин-7-карбонил]-L-глютамата.

В 3 мл диметилацетамида суспендируют 83 мг соединения сравнительного примера 60 и 85 мг аддукта 6-бромметил-2,4-диааминоптеридин гидробромида и изопропанола, и суспензию перемешивают при 60^oC в течение 3 ч и затем при 100^oC в течение 30 мин. После охлаждения реакционную смесь выливают в насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и экстрагируют три раза хлороформом. Органический слой сушат над безводным сульфатом натрия и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток подвергают хроматографической обработке с использованием колонки с силикагелем и в качестве элюента смеси хлороформ-метанол=93:7 до получения указанного в заглавии соединения (21 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃ : CD₃OD=9:1, δ): 1,26 (6H, м), 2,0-2,3 (2H, м), 2,46 (2H, м), 3,12 (2H, м), 3,91 (2H, м), 4,1-4,3 (4H, м), 4,62 (1H, м), 4,78 (2H, с), 6,69 (1H, d, J=8,9 Гц), 7,04 (1H, м), 7,60 (1H, d, J=2,2 Гц), 8,66 (1H, c).

Пример 32. Получение N-[1-[(2,4-диамино)-6-птеридинил] метил]-3,4-дигидро-2H- 1,4-бензотиазин-7-карбонил]-L-глютамовой кислоты.

20 мг соединения примера 31 растворяют в 2 мл этанола и к раствору добавляют 170 мкл 1 н. водного раствора гидроокиси натрия при 35^oC, и смесь перемешивают при той же температуре в течение 4 ч. Затем продолжают перемешивание при 25^oC в течение 20 часов, добавляют к реакционной смеси 0,5 мл воды и удаляют этанол при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в 6 мл воды, доводят до pH 3,7 1 н. раствором соляной кислоты при охлаждении ледяной водой и оставляют в холодном месте на ночь. Выпавший осадок собирают фильтрованием до получения соединения, указанного в заглавии (18 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): 1,8-2,2 (2H, м), 2,30 (2H, м), 3,18 (2H, м), 3,95 (2H, м), 4,37 (1H, м), 4,76 (2H, с), 6,79 (1H, d, J=8,8 Гц), 7,42 (1H, м), 7,59 (1H, d, J=2,0 Гц), 8,22 (1H, d, J=7,3 Гц), 8,67 (1H, с).

Пример 33. Получение N-[1[(2,4-диамино-6-птеридинил)метил)-1-оксо-3,4-дигидро-2H-1,4- бензотиазин-7-карбонил]-L-глютамовой кислоты.

10 мг соединения примера 32 суспендируют в 1 мл воды и к раствору добавляют 1 н. водный раствор гидроокиси натрия до растворения смеси. К раствору при охлаждении льдом добавляют 50 мкл 0,5 М метапериодата натрия и смесь перемешивают при той же температуре в течение 5 часов. Реакционную смесь доводят до pH 3,5 и выпавший осадок собирают фильтрованием до получения соединения, указанного в заглавии (4 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): 1,8-2,2 (2H, м), 2,33 (2H, м), 2,9-3,3 (2H, м), 3,8-4,0 (1H, м), 4,2-4,5 (2H, м), 4,83 (1H, d, J=17,1 Гц), 5,19 (1H, d, J= 17,1 Гц), 7,07 (1H, d, J=9,2 Гц), 7,7 - 7,9 9 (1H, м), 8,1-8,2 (1H, м), 8,42 (1H, м), 8,72 (1H, с).

ИК (KBr) ν_макс 2800-3600, 1644, 1608, 1552, 1504 и 1008 см^-1.

Полевая Масс-спектрометрия MS 515 (M+1)⁺
Сравнительный пример 61. Получение бензил-N-т-бутоксикарбонил-N'-метансульфонилглютамината.

В 268 мл тетрагидрофурана растворяют 13,6 г N,N'-карбонилдиимидазола и 25 г α -бензил-N-(т-бутоксикарбонил)глютамата и смесь перемешивают при охлаждении льдом в течение 1 ч. Затем раствор по каплям добавляют к 132 мл тетрагидрофуранового раствора, содержащего 20,5 г метансульфонамида и 32,9 г 1,8-диазабицикло-(5,4,0)-7-ундецена при охлаждении льдом. После добавления раствора по каплям смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение 4 дней. После добавления к смеси 500 мл 1 н. соляной кислоты смесь экстрагируют хлороформом. Органический слой сушат над безводным сульфатом магния и растворитель удаляют при пониженном давлении до получения соединения, указанного в заглавии (30 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃, δ): 1,42 (9H, c), 1,8-2,8 (4H, м), 3,25 (3H, с), 4,32 (1H, м), 5,14 (2H, с), 7,40 (5H, с).

Сравнительный пример 62. Получение бензил-N'-метансульфонилглутаминаттрифторацетата.

4,65 г соединения сравнительного примера 61 растворяют в 60 мл трифторуксусной кислоты и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение одного часа. Затем реакционную смесь конденсируют при 30^oC и растворяют, добавляя эфир до получения соединения, указанного в заглавии (4,5 г).

¹H-ЯМР(CDCl₃, δ ): 1,8 - 2,8 (4H, м), 3,20 (3H, с), 4,50 (1H, м), 5,28 (2H, с), 7,42 (5H, с).

Пример 34. Получение бензил-N-[1-[(2,4-диамино-6- птеридинил)метил]индолин-5-карбонил]-N'-метансульфонилглютамината.

В 18 мл диметилформамида растворяют 213 мкл диэтилацианфосфоната и 172 мкл триэтиламина в атмосфере азота и к раствору добавляют 160 мг 1-[(2,4-диамино-6-птеридинил)метил]индолин-5-карбоновой кислоты небольшими порциями, и смесь перемешивают при той же температуре в течение 3 ч. К смеси добавляют 3 мл диметилформамидового раствора, содержащего 450 мг соединения сравнительного примера 62 и 180 мкл триэтиламина, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 дней. Затем к реакционной смеси добавляют 1 мл воды и удаляют растворитель при пониженном давлении. Остаток подвергают хроматографической обработке с использованием колонки с силикагелем и в качестве элюента смешанного растворителя хлороформ - метанол - водный раствор аммиака = 15:5:1 до получения указанного в заглавии соединения (60 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): 1,9 - 2,1 (2H, м), 2,3 - 2,5 )2H, м), 2,98 (2H, т, J=8,6 Гц), 3,28 (3H, с), 3,55 (2H, т, J=8,6 Гц), 4,21 (1H, м), 4,53 (2H, с), 5,04 (2H, с), 6,71 (1H, d, J=8,6 Гц), 7,34 (5H, с), 7,55 (2H, м), 8,72 (1H, с).

Пример 35. Получение N-[1-[(2,4-диамино-6-птеридинил)метил]индолин-5- карбонил]-N'-метансульфонилглутамина.

25 мг соединения примера 34 суспендируют в 15 мл этанола и к суспензии добавляют 200 мкл 1 н. водного раствора гидроокиси натрия, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем к смеси добавляют 0,5 мл воды и удаляют этанол при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в 6 мл воды и раствор доводят до pH 3,7 1 н. раствором соляной кислоты при охлаждении ледяной водой и оставляют в холодном месте на ночь. Выпавший осадок собирают фильтрованием до получения соединения, указанного в заглавии (20 мг).

¹H-ЯМР (DMCO-d₆, δ): 1,9 - 2,1 (2H, м), 2,2 - 2,4 (2H, м), 3,00 (2H, т, J=8,6 Гц), 3,19 (3H, с), 3,60 (2H, т, J=8,6 Гц), 4,35 (1H, м), 4,56 (2H, с), 6,70 (1, d, J=8,6 Гц), 7,63 (2H, м), 8,75 (1H, с).

Пример 36. Синтез диметилового эфира N-(4-карбобензокси-3,4-дигидро-2H-1,4-бензотиазин-7-карбонил)-L- α -аминоадипиновой кислоты.

Тионилхлорид (10 мл) прибавляли к 4-карбобензокси-3,4-дигидро-2H-1,4-бензотиазин-7-карбоновой кислоте (2,0 г) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем реакционный раствор концентрировали под пониженным давлением досуха. Получившийся твердый материал растворяли в дихлорметане (25 мл), и к получившемуся раствору прибавляли последовательно водный раствор (25 мл) диметил-L- α -аминоадипата гидрохлорида (1,4 г) и затем карбонат калия (3,4 г) с последующим перемешиванием в течение ночи. Реакционный раствор выливали в насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и экстрагировали органическое вещество хлороформом. Далее слой хлороформа промывали 1н. гидрохлористой кислотой, сушили над сульфатом натрия, и растворитель отгоняли под пониженным давлением. Получившийся остаток подвергали хроматографии в колонке с силикагелем, используя в качестве элюирующего раствора хлороформ-метанол = 100:1 и получая вышеуказанное соединение (2,35 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, значения δ): 1,6-2,1 (4H, м), 2,37 (2H, т, J=7,1 Гц), 3,20 (2H, м), 3,67 (3H, с), 3,78 (3H, с), 3,98 (2H, м), 4,77 (1H, м), 5,23 (2H, с), 6,75 (H, д, J=7,3 Гц), 7,36 (5H, м), 7,48 (2H, м), 7,63 (1H, д, J= 1,5 Гц).

Синтез диметилового эфира N-(3,4-дигидро-2H-1,4-бензотиазин-7-карбонил)- L- α -аминоадипиновой кислоты.

Полученный выше диметиловый эфир N-(4-карбобензокси-3,4-дигидро-2H-1,4- бензотиазин-7-карбонил)-L- α -аминоадипиновой кислоты (14,8 г) прибавляли к 30%-ному раствору (200 мл) анизола (15 г) в бромистом водороде и уксусной кислоте с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 4 ч. Затем к реакционному раствору добавляли большое количество эфира, вследствие чего образовывался осадок красно-коричневого маслянистого вещества. Большую часть эфирного слоя удаляли, а маслянистое вещество суспендировали в хлороформе. Получившуюся суспензию промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали хлороформом. Слой хлороформа сушили над сульфатом натрия, а растворитель отгоняли под пониженным давлением, получая вышеуказанное соединение (7,6 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃-CD₃OD, значения δ): 1,6-2,0 (4H, м), 2,40 (2H, т, J=6,8 Гц), 3,01 (2H, м), 3,68 (5H, м), 3,78 (3H, с), 4,5 (1H, м), 6,50 (H, д, J= 8,8 Гц), 7,41 (2H, м), 7,51 (1H, д, J=2,0 Гц).

Синтез диметилового эфира N-(1-((2,4-диамино-6-птеридинил)метил)-3,4- дигидро-2H-1,4-бензотиазин-7-карбонил)-L- α -аминоадипиновой кислоты.

Полученный выше диметиловый эфир N-(3,4-дигидро-2H-1,4-бензотиазин-7-карбонил)-L- α -аминоадипиновой кислоты (7,6 г) и аддукт (8,2 г) бромистоводородной соли 6-бромометил-2,4-диаминоптеридина с изопропанолом суспензировали в диметилацетамиде (120 мл) с последующим перемешиванием при 60^oC в течение 13 ч После охлаждения реакционный раствор выливали в насыщенный водный раствор бикарбоната натрия, и смесь экстрагировали смешанным раствором хлороформа и метанола в соотношении 10:1. Органический слой сушили над сульфатом натрия, а растворитель затем отгоняли под пониженным давлением. Получившийся остаток подвергали хроматографии в колонке с силикагелем, используя в качестве элюирующего раствора хлороформ-метанол = 10:1 и получая вышеуказанное соединение (5,8 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃ - CD₃OD, значения δ): 1,6-2,0 (4H, м), 2,39 (2H, т, J=7,1 Гц), 3,17 (2H, м), 3,68 (3H, с), 3,76 (3H, с), 3,94 (2H, м), 4,66 (1H, м), 4,79 (2H, с), 6,70 (1H, д, J=8,8 Гц), 7,42 (2H, м), 7,62 (1H, д, J=2,4 Гц), 8,67 (1H, с).

Синтез N-(1-((2,4-диамино-6-птеридинил)метил)-3,4-дигидро-2H-1,4-бензотиазин-7-карбонил)-L- α -аминоадипиновой кислоты.

Полученный выше диметиловый эфир N-(1-((2,4-диамино-6-птеридинил)метил)-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоьтиазин-7-карбонил)-L-α-аминоадипиновой кислоты (5,8 г) растворяли в этаноле (300 мл) и к полученному раствору прибавляли 1н. водный раствор гидроксида натрия (32,2 мл) при 35^oC с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакционный раствор выпаривали под пониженным давлением досуха. Полученное твердое вещество растворяли в воде (100 мл) и раствор доводили до pH 3,7 1н. хлористоводородной кислотой, после чего давали ему постоять в течение 2 ч в прохладном месте. Отделенный осадок выделяли фильтрацией, получая вышеуказанное соединение (4,5 г).

¹H-ЯМР (DMSO-d₆, значения δ): 1,5-1,9 (4H, м), 2,21 (2H, т, J=7,1 Гц), 3,15 (2H, м), 3,96 (2H, м), 3,96 (2H, м), 4,30 (1H, м), 4,76 (2H, с), 6,78 (1H, д, J=8,8 Гц), 7,44 (1H, м), 7,60 (1H, с), 8,17 (1H, д, J=7,8 Гц), 8,65 (1H, с).

Пример 37. Рецептура таблеток.

Состав используемых наполнителей, %:
Кристаллическая лактоза (100 M) - 75,5
Кристаллическая целлюлоза PH101 - 20,00
Кукурузный крахмал - 4,0
Стеарат магния - 0,5
N-(1-((2,4-диамино-6-птеридинил)метил)-3,4-дигидро-2H-1,4-бензотиазин-7- карбонил)-L- α -аминоадипиновую кислоту (0,3 г) смешивали с вышеуказанными наполнителями (2,7 г) для приготовления композиции. Полученную таким образом смесь указанного состава (100 мг) прессовали при статическом давлении 1 т/таб, используя пуансон и матрицу (6,5 мм в диаметре, сахарное покрытие), получая таблетки.

Рецептура капсул. Желатиновую капсулу N2 заполняли смесью (100 мг) того же состава, что и использованный выше, и получали капсулы.

Предлагается соединение формулы представленной в описании, где R¹ является CH₂, CH₂CH₂, Ch₂o, ch₂s, ch₂so; R² является атомом водорода, низшей алкильной группой, содержащей от 1 до 4 атомом углерода, или бензильной группой; n является целым числом от 1 до 4; R³ является COOR⁴, NHCOR⁵, CONR⁶R⁷, PO₃H₂, SO₃H. Это соединение обладает потенциальной противоревматической функцией, пригодно для лечения псориаза и обладает канцеростатическими свойствами, а также имеет низкую токсичность, что деляет пригодным его использование в качестве медикамента. 3 с. и 5 з.п. ф-лы, 15 ил.

1. Производные метотрексата общей формулы I

где R¹ выбирают из группы, состоящей из -СН₂-, -СН₂СН₂- СН₂О, СН₂S - или -CH₂SO;
R² - водород, С₁-С₄-алкил или бензил;
R³ - COOR⁴ (где R⁴ - водород или С₁-С₄-алкил), NHCOR⁵ (где R⁵-фенил, который может быть замещен алкоксикарбонильной или карбоксильной группой), CONR⁶R⁷ (где R⁶ - водород или С₁-С₄-алкил, R⁷ - C₁-C₄-алкил, фенильная или карбоксиалкильная группа, каждая из которых может быть замещена алкоксикарбонильной, карбоксильной или алкильной группой, или R⁷ - низшая алкилсульфонильная группа), PO₃H₂ или SO₃H;
n=1 - 4, целое число. 2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R³ - COOR⁴ (где R⁴ имеет указанные значения), PO₃H₂ или SO₃H. 3. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R³ - NHCOR⁵, где R⁵ имеет указанные значения. 4. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R³ - CONR⁶R⁷, где R⁶ и R⁷ имеют указанные значения. 5. Фармацевтическая композиция, ингибирующая рост лимфоцитов, кератиноцитов и рост раковых клеток, содержащая активное начало совместно с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем, отличающаяся тем, что в качестве активного начала она содержит эффективное количество соединения по п.1. 6. Способ получения соединений общей формулы I

где R¹ - R³ и n имеют указанные в п.1, значения,
отличающийся тем, что соединение общей формулы I - 1

где R¹ имеет указанные значения;
A¹ является защитной группой,
подвергают взаимодействию с соединением формулы I - 2

где R², R³ и n имеют указанные значения,
в соответствии с обычными способами синтеза амида кислоты, у полученного амида общей формулы I - 3

где R¹ - R³, n и A¹ имеют указанные значения,
удаляют защиту и подвергают взаимодействию с соединением формулы I - 4

где Х - галоид. 7. Способ получения соединений формулы I по п.1, отличающийся тем, что соединение формулы I - 4

где Х - галоид,
подвергают взаимодействию с соединением формулы I - 5

где R¹ имеет указанные значения;
R' - водород или низший алкил,
полученное соединение общей формулы I - 6

где R¹ и R' имеют указанные значения,
подвергают гидролизу с последующим взаимодействием с соединением формулы I-2;

где R², R³ и n имеют указанные значения. 8. Способ получения соединения формулы I'

где R¹, R², n и R' имеют указанные значения,
отличающийся тем, что соединение формулы I - 7

где R² и n имеют указанные значения;
A² - защитная группа,
подвергают взаимодействию с соединением формулы I - 8

у полученного соединения формулы I - 9

где R², n и A² имеют указанные значения,
удаляют защиту и подвергают взаимодействию с соединением формулы I - 1

где A¹ и R¹ имеют указанные значения,
в соответствии с обычными методами синтеза амида кислоты и полученный амид формулы I - 10

где R¹, R², n и A¹ имеют указанные значения,
подвергают взаимодействию с соединением формулы I - 4

где Х - галоид,
с последующей реакцией раскрытия кольца полученного соединения до получения целевого соединения.

Приоритет по признакам и пунктам формулы:
14.08.90 при R¹ - CH₂, CH₂CH₂; R² - водород, С₁-С₄-алкил; R³ - COOR⁴; R⁴ - водород, С₁-С₄-алкил; n = 1 - 4, целое число.