СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ ИНФЕКЦИОННЫХ И ДРУГИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 1998 года по МПК C08F6/14 G01N33/531 

Описание патента на изобретение RU2110527C1

Изобретение относится к медицине, ветеринарии и пищевой промышленности, а именно к способу получения диагностикума для определения антигенов и антител инфекционных и онкологических заболеваний, алкоголизма, наркомании, допинг-контроля и СПИД.

В настоящее время для диагностики вирусных инфекций большое распространение получили так называемые непрямые реакции, основанные на методе активированных частиц. В качестве диагностикума в таких реакциях используют специфические антитела и антигены, фиксированные на поверхности неспецифических носителей органической или неорганической природы. Такими носителями чаще всего являются эритроциты, уголь, бетонитовые глины, содержащие белок А, синтетический латекс.

Известен способ получения диагностикума для определения антигенов вирусных и менингококковых инфекций на основе латексного носителя [1]. В соответствии с этим способом 2%-ный синтетический латекс, содержащий функциональные группы, например карбоксильные, альдегидные или эпоксигруппы, инкубируют в 0,1 М глициновом буфере при pH 7,0 - 8,2 в течение 2 ч при 37oC до получения целевого продукта.

Получаемый диагностикум более стабилен, обладает более высокой активностью и специфичностью и дает возможность получения результатов исследования в более короткие сроки.

Наиболее близким к изобретению является способ получения диагностикума для определения антигенов HBs Ag вируса гепатита B, согласно которому полистирольный латекс сенсибилизируют антителами в 0,1 М глициновом буфере, pH которого 7, а затем осуществляют инкубирование при температуре 37oC в течение 2 - 8 ч [2].

Диагностикум, полученный этим и вышеназванным способами, позволяет выявить HBs Ag вируса гепатита B только в концентрации 1 мкГ/мл белка, ему свойственна достаточно высокая частота ложно-положительных реакций (30 - 40%). Специфичность такого диагностикума выражается величиной 68,02 ± 0,88. Кроме того, получаемый диагностикум позволяет получить результаты исследования через 20 мин.

Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности диагностикума к белкам и органическим веществам.

Поставленная цель достигается тем, что в способе получения диагностикума для определения антигенов и антител инфекционных и других заболеваний, включающем сенсибилизацию модифицированного полистирольного латекса антителами или антигенами в буферном растворе, pH которого 7, и инкубирование сенсибилизированного латекса, используют латекс типа "ядро-оболочка", где "ядро" - полистирольный латекс, "оболочка" - силикат натрия, при их массовом соотношении 1 : 0,5 - 2.

Указанный латекс в присутствии ацетата цинка или кобальта, или никеля инкубируют в буфере при pH 6,5 - 9,0 в течение 1 - 3 мес с последующей сенсибилизацией.

Сенсибилизацию проводят в буферном растворе, pH которого 7 - 9, а инкубирование ведут сначала при температуре 37 - 56oC в течение 80 - 300 мин, а затем в течение 24 - 72 ч при температуре 2 - 8oC. Полученный диагностикум используют для определения HBs Ag вируса гепатита B в концентрации 1 пг/мл, гепатита A в концентрации 1 пк/мл, антигенов онкологических заболеваний в концентрации 10 пг/мл, белков антигенов допинг-контроля и алкоголизма в концентрации 50 пг/мл, а также вируса СПИД в известной концентрации, содержащегося в сыворотке крови больных СПИД. Диагностику можно проводить, используя сыворотку крови, слюну и мочу больного. Специфичность диагностикума 98,0 - 0,2.

Для диагностики антигенов и антител инфекционных и других заболеваний (окрашенный диагностикум) используется метод активирования частиц (окрашенных) (МАЧ), заключающийся в том, что оценка результатов реакции проводится по степени активирования окрашенных латексных частиц визуально или оптическим прибором. Оценка результата МАЧ следующая:
4+ - крупные хлопья окрашенных активированных частиц на полностью прозрачном фоне, положительный результат,
3+ - крупные однородные зерна окрашенных активированных частиц с небольшим количеством более мелких на слегка мутном фоне, положительный результат,
2+ - средних размеров окрашенные зерна активированных частиц на мутном фоне, сомнительный результат.

1+ - мелкие окрашенные активированные частицы на мутном фоне, отрицательный результат,
"-" - мутный фон, окрашенные частицы не активированы, отрицательный результат.

Способ получения латекса типа "ядро-оболочка" и диагностикум иллюстрируются следующими примерами.

Пример 1. При получении полистирольного латекса в реактор загружают 10 мас. ч. стирола, 0,1 мас.ч. персульфата калия, 89,9 мас.ч. воды, и реакционную смесь термостатируют при перемешивании при 70oC до полной конверсии мономера. К латексу добавляют 5%-ный раствор гидроокиси натрия, доводят pH латекса до 11 и добавляют 5 мас.ч. от массы полимера силиката натрия в виде 5%-ного раствора. Затем при перемешивании вводят 0,3 мас.ч. от массы полимера ацетата цинка в виде 1%-ного раствора.

Латекс подкисляют 1%-ным раствором уксусной кислоты до pH 7. Полученный латекс отмывают диализом и используют для получения диагностикума.

Латекс перед сенсибилизацией выдерживают в буферном растворе, например 0,01 М глицирино-глициновом буферном растворе, pH которого 6,5, в течение 1 мес.

Следующей стадией способа является присоединение антигена или антител к частицам латекса (сенсибилизация). Согласно изобретению сенсибилизацию осуществляют в буфере при pH 7, используя моноклональные антитела или антигены. Сенсибилизацию осуществляют до полного связывания, то есть образования устойчивых связей между функциональными группами латекса с белковыми и органическими компонентами моноклональных антител или антигена.

Полученную смесь последовательно инкубируют в 0,01 М глициновом растворе при pH 7 в течение 80 мин при 37oC, затем 24 ч при 2oC.

Для определения чувствительности диагностикума используют сыворотку больных СПИД, специфические антигены различных онкологических заболеваний, сыворотку крови беременных, антигены вируса гепатитов B и A. Чувствительность комбинированных латексных антительных диагностиков (ЛАД) приведена в табл. 7.

Результаты диагностических исследований представлены в табл. 1 - 8.

Пример 2. Латекс получают по примеру 1, но используют 20 мас.ч. на массу полимера силиката натрия.

Полученный латекс инкубируют в 1 М глицирино-глициновом буферном растворе при pH 9 в течение 3 мес.

Затем концентрацию латекса доводят с помощью глицинового буферного раствора до значения 2%, после чего смешивают равные объемы 2%-ного латекса и моноклонального антитела в 0,1 М глициновом буферном растворе, pH 9. Полученный сенсибилизированный латекс инкубируют при pH 9 сначала в течение 300 мин при 56oC, а затем в течение 72 ч при 8oC.

Результаты диагностических исследований приведены в табл. 1-8.

Пример 3. Латекс и диагностикум получают по примеру 1, но используют 0,3 мас.ч. от массы полимера ацетата кобальта.

Результаты диагностических исследований представлены в табл. 1.

Пример 4. Латекс и диагностикум получают по примеру 1, но используют 0,3 мас.ч. от массы полимера ацетата никеля. Результаты представлены в табл. 1.

Похожие патенты RU2110527C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОКРАШЕННОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ ИНФЕКЦИОННЫХ И ДРУГИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 1992
  • Ниязматов А.А.
  • Чечик О.С.
RU2110526C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ ИНФЕКЦИОННЫХ И ДРУГИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 1992
  • Ниязматов А.А.
  • Чечик О.С.
RU2110525C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИНА БАКТЕРИЙ РОДА KLEBSIELLA 2003
  • Бокерия Л.А.
  • Ниязматов А.А.
RU2266136C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИНА БАКТЕРИЙ РОДА PSEUDOMONAS 2003
  • Бокерия Л.А.
  • Ниязматов А.А.
RU2266133C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИНА БАКТЕРИЙ РОДА ENTEROBACTER 2003
  • Бокерия Л.А.
  • Ниязматов А.А.
RU2266134C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИНА БАКТЕРИЙ РОДА SERRATIA 2003
  • Бокерия Л.А.
  • Ниязматов А.А.
RU2266135C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ОБЩЕГО ЭНДОТОКСИНА ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ 2003
  • Бокерия Л.А.
  • Ниязматов А.А.
RU2266137C2
СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА НА ОСНОВЕ РЕАКЦИИ ЛАТЕКС-АГГЛЮТИНАЦИИ 1998
  • Гизатулина Н.М.
  • Головлев И.Р.
  • Хлебников В.С.
  • Зимин А.Е.
  • Прокопов Н.И.
RU2130615C1
ДИАГНОСТИКУМ ЛЕГИОНЕЛЛЕЗНЫЙ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 1995
  • Ерусланов Б.В.
  • Борзенков В.Н.
  • Печерских Э.И.
  • Светоч Э.А.
RU2124208C1
ДИАГНОСТИКУМ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЛЕГИОНЕЛЛ В КЛИНИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ И ОБЪЕКТАХ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 1995
  • Ерусланов Б.В.
  • Борзенков В.Н.
  • Печерских Э.И.
  • Светоч Э.А.
RU2129279C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 110 527 C1

Реферат патента 1998 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ ИНФЕКЦИОННЫХ И ДРУГИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Использование: в медицине, ветеринарии, пищевой промышленности для определения антигенов и антител инфекционных и онкологических заболеваний, алкоголизма, наркомании, допинг-контроля, СПИД. Сущность изобретения: способ получения диагностикума, включающий сенсибилизацию латекса типа "ядро-оболочка", где "ядро" -полистирольный латекс, "оболочка" - силикат натрия при массовом соотношении 1 : 0,5 - 2,0, причем латекс предварительно выдерживают в буфере при рН 6,5 - 9,0 в присутствии 0,3 мас.ч. от массы полимера ацетата цинка или кобальта, или никеля в течение 1 - 3 мес с последующей сенсибилизацией при рН 7 - 9 и инкубированием сначала при 37 - 56oC в течение 80 - 300 мин, затем при 2 - 8oС в течение 24 - 72 ч. 8 табл.

Формула изобретения RU 2 110 527 C1

Способ получения диагностикума для определения антигенов и антител инфекционных и других заболеваний, включающий сенсибилизацию полистирольного латекса антителами и антигенами в буферном растворе при рН 7 и инкубирование сенсибилизированного латекса, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичности к белкам и органическим веществам, в качестве латекса используют латекс типа ядро - оболочка, где ядро - полистирольный латекс, оболочка - силикат натрия, при их массовом соотношении 1 : 0,5 - 2,0, причем латекс предварительно выдерживают в буфере при рН 6,5 - 9,0 в присутствии 0,3 ч. от массы полимера ацетата цинка, или кобальта, или никеля в течение 1 - 3 месяцев с последующей сенсибилизацией при рН 7 - 9 и инкубированием сначала при 37 - 56oС в течение 80 - 300 мин, затем при 2 - 8oС в течение 24 - 72 ч.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1998 года RU2110527C1

Печь для непрерывного получения сернистого натрия 1921
  • Настюков А.М.
  • Настюков К.И.
SU1A1
Чайка Н.А., Горбачев Е.Н
Применение реакции агглютинации сенсибилизированного латекса для диагностики вирусных инфекций
- Вопросы вирусологии
Приспособление для установки двигателя в топках с получающими возвратно-поступательное перемещение колосниками 1917
  • Р.К. Каблиц
SU1985A1
Редукционный или предохранительный клапан с диафрагмой, нагруженной пружиной или грузом 1925
  • Горожанкин И.А.
SU516A1
Аппарат для очищения воды при помощи химических реактивов 1917
  • Гордон И.Д.
SU2A1
Фримель Г
Иммунологические методы
- М.: Медицина, 1987, с
Прибор для записи звуковых волн 1920
  • Лысиков Я.Г.
SU219A1

RU 2 110 527 C1

Авторы

Ниязматов А.А.

Чечик О.С.

Даты

1998-05-10Публикация

1992-01-31Подача