СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИНА БАКТЕРИЙ РОДА KLEBSIELLA Российский патент 2005 года по МПК A61K39/40 G01N33/547 

Описание патента на изобретение RU2266136C2

Изобретение относится к медицине, ветеринарии и пищевой промышленности.

Известен способ получения диагностикума для определения антигенов вируса гепатита В, согласно которому латекс сополимера стирола и метакрилат цинка сенсибилизируют антителами в 0,1 М глициновом буфере, рН которого 7,0, а затем осуществляют инкубацию при 37°С в течение 2-8 ч (Чайка Н.А., Горбачев Е.Н. Применение реакции агглютинации сенсибилизированного латекса для диагностики вирусных инфекций. Вопросы вирусологии, 1985, №5, с.516-523).

Данный способ позволяет достаточно быстро получить диагностикум, выявляющий вирус гепатита В при концентрации 1 мг/мл. К недостаткам диагностикума относятся: невысокая чувствительность, специфичность - 68,02±0.88 и длительное время получения результата - 20 мин.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ получения диагностикума для определения эндотоксина бактерии рода Klebsiella с использованием антительного диагностикума US 5316911 A1, 31.05.1994).

Технической задачей изобретения является сокращение времени получения диагностикума для определения эндотоксина бактерий рода Klebsiella при высоких значениях чувствительности, специфичности и сокращения времени получения результата при его применении.

Техническая задача изобретения решается при получении диагностикума для определения эндотоксина бактерий рода Klebsiella, причем вначале получают латекс типа ядро-оболочка. Например, реактор продувают 30 мин азотом, загружают: 10% стирола, 0,1% персульфата калия, 89,9% воды, термостатируют, перемешивая при 70°С 7 ч до полной конверсии мономера. В полученный латекс вводят 0,2% стирола, 0,1% метакрилата цинка и 0,05% персульфата калия. Латекс перемешивают до растворения всех компонентов и затем термостатируют при 70°С 2 ч.

Частицы полученного латекса состоят из двух частей: внутреннее ядро - полистирол, наружная оболочка (0,2-20% от массы всей частицы) - статический сополимер стирола и метакрилата цинка в массовом соотношении 1:0,8-1:0,4. Массовое соотношение между звеньями метакрилата цинка и стирола, входящего как в ядро, так и в оболочку, составляет 1-12:100.

Далее проводят сенсибилизацию латекса моноклональными антителами фракции IgG2а и IgG2b фирм "Biogenesis" UK и "Chemicon" USA и др. в 0,01 М глициновом буфере, рН которого 7,2-8,8 до полного связывания, при отсутствии предварительной выдержки латекса в буфере, с последующей инкубацией сначала при 37°С в течение 130-150 мин, а затем при 8°С в течение 18 ч.

Сокращение времени получения диагностикума достигнуто за счет выбора параметров сенсибилизации и инкубации без предварительной выдержки латекса в буфере.

На получение диагностикума с высокой чувствительностью и специфичностью влияют: рН буферного раствора, в котором осуществляют сенсибилизацию, начальная температура инкубации, начальное время инкубации, температура завершения инкубации, время завершения инкубации, В таблице 1 приведены данные зависимости чувствительности диагностикумов от величины рН глицинового буфера при начальной температуре инкубации 37±0,4°С в течение 140±5 мин, а затем при 8±0,4°С в течение 18±0,5 ч.

Таблица 1Количество исследованийрН глицинового буфераЧувствительность диагностикумов (микробные тела/мл)11007,025000021007,28000031008,02000041008,86000051009,0120000

В таблице 2 приведены данные зависимости чувствительности диагностикумов от начального времени инкубации при рН буфера, равном 8,0, начальной температуре инкубации, равной 37±0,4°С, и температуры завершения инкубации, равной 8±0,4°С в течение 18±0,5 ч.

Таблица 2Количество исследованийНачальное время инкубации (мин)Чувствительность диагностикумов (микробные тела/мл)1211206000022113030000321140100004211501000052116030000

Специфичность и чувствительность полученных диагностикумов для определения эндотоксина бактерий рода Klebsiella проверяли в реакции агглютинации латекса с сыворотками крови доноров, не содержащими эндотоксин, больных сердечно-сосудистыми заболеваниями, не подтвержденными бактериологическими посевами, и больных гнойно-воспалительными заболеваниями. Учет результата реакции проводился по степени активированных частиц.

1. Максимальная степень - крупные хлопья на прозрачном фоне - 4-я степень активированных частиц (4СА) (положительный результат).

2. Средняя степень - хлопья или крупные зерна на слегка мутном фоне - 3-я степень активированных частиц (3СА) (положительный результат).

3. Минимальная степень - много зерен на мутном фоне - 2-я степень активированных частиц (2СА) (положительный результат).

4. Контроль - абсолютно мутный фон или единичные зерна - 1-я степень активированных частиц (1СА) (отрицательный результат).

В таблице 3 приведены результаты исследований.

Таблица 3Исследуемые сывороткиКоличество исследованийРезультат определения эндотоксина бактерий рода KlebsiellaKleb.spp.Kleb. oxyKleb. pneu.полож.отр.полож.отр.полож.отр.1Донорские30-30-30-302Больных сердечно-сосудистыми заболев.204161193173Больных гнойно-воспалительными заболев.29623227425

Специфичность полученного диагностикума для определения эндотоксина бактерий рода Klebsiella составляет 97±0,6 при чувствительности до 10 пг/мл, при этом время получения результата исследования не более 10 мин. Время получения диагностикума для определения эндотоксина бактерий рода Klebsiella сокращено с нескольких месяцев до нескольких часов.

Похожие патенты RU2266136C2

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИНА БАКТЕРИЙ РОДА ENTEROBACTER 2003
  • Бокерия Л.А.
  • Ниязматов А.А.
RU2266134C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИНА БАКТЕРИЙ РОДА SERRATIA 2003
  • Бокерия Л.А.
  • Ниязматов А.А.
RU2266135C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИНА БАКТЕРИЙ РОДА PSEUDOMONAS 2003
  • Бокерия Л.А.
  • Ниязматов А.А.
RU2266133C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ОБЩЕГО ЭНДОТОКСИНА ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ 2003
  • Бокерия Л.А.
  • Ниязматов А.А.
RU2266137C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОКРАШЕННОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ ИНФЕКЦИОННЫХ И ДРУГИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 1992
  • Ниязматов А.А.
  • Чечик О.С.
RU2110526C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ ИНФЕКЦИОННЫХ И ДРУГИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 1992
  • Ниязматов А.А.
  • Чечик О.С.
RU2110525C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ ИНФЕКЦИОННЫХ И ДРУГИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 1992
  • Ниязматов А.А.
  • Чечик О.С.
RU2110527C1
ДИАГНОСТИКУМ ЛЕГИОНЕЛЛЕЗНЫЙ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 1995
  • Ерусланов Б.В.
  • Борзенков В.Н.
  • Печерских Э.И.
  • Светоч Э.А.
RU2124208C1
ДИАГНОСТИКУМ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПАПРИНА И СПОСОБ ЕГО ПРИГОТОВЛЕНИЯ 1991
  • Парфенова Е.В.
  • Прокопов Н.И.
  • Черкасов В.Р.
RU2008020C1
ДИАГНОСТИКУМ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ESCHERICHIA COLI O157 : H7 И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2001
  • Ерусланов Б.В.
  • Светоч Э.А.
  • Гусев В.В.
  • Степаншин Ю.Г.
  • Борзенков В.Н.
RU2189253C1

Реферат патента 2005 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИНА БАКТЕРИЙ РОДА KLEBSIELLA

Изобретение относится к медицине, ветеринарии и пищевой промышленности. Предложен способ получения диагностикума для определения эндотоксина бактерий рода Klebsiella. Способ включает получение латекса типа ядро-оболочка, где ядро - полистирольный латекс, а оболочка - латекс сополимера стирола и метакрилата цинка при массовом соотношении звеньев 1:0,8-1:0,4, сенсибилизацию латекса моноклональными антителами фракции IgG2a и IgG2b в 0,01 М глициновом буфере при рН 7,2-8,8 без предварительной выдержки и инкубацию сначала при 37°С в течение 130-150 мин, а затем при 8°С в течение 18 ч. Предложенный способ позволяет сократить время получения диагностикума, при этом полученный диагностикум обладает специфичностью 97±0,6 при чувствительности до 10 пг/мл, а время получения результата исследования составляет не более 10 мин. 3 табл.

Формула изобретения RU 2 266 136 C2

Способ получения диагностикума для определения эндотоксина бактерий рода Klebsiella с использованием антительного диагностикума на латексном носителе, отличающийся тем, что в качестве носителя используют латекс типа ядро-оболочка, где ядро - полистирольный латекс, а оболочка - латекс сополимера стирола и метакрилата цинка при массовом соотношении звеньев 1:0,8-1:0,4, который сенсибилизируют моноклональными антителами в 0,01 М глициновом буфере при рН 7,2-8,8 до полного связывания, без предварительной выдержки латекса, а затем инкубируют сначала при 37°С в течение 130-150 мин, а затем при 8°С в течение 18 ч.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2005 года RU2266136C2

US 5316911 А1, 31.05.1994
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ ИНФЕКЦИОННЫХ И ДРУГИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 1992
  • Ниязматов А.А.
  • Чечик О.С.
RU2110525C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛАТЕКСНОГО ДИАГНОСТИКУМА 1991
  • Смелянский В.П.
  • Зыкин Л.Ф.
  • Манолов А.Д.
  • Мананков В.В.
  • Зайцев А.А.
RU2012888C1
ДИАГНОСТИКУМ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ESCHERICHIA COLI O157 : H7 И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2001
  • Ерусланов Б.В.
  • Светоч Э.А.
  • Гусев В.В.
  • Степаншин Ю.Г.
  • Борзенков В.Н.
RU2189253C1
Способ приготовления эритроцитарного диагностикума для иммуноанализа 1989
  • Плаксин Дмитрий Юрьевич
SU1704090A1
Способ получения бруцеллезного эритроцитарного диагностикума 1978
  • Иванов Николай Петрович
  • Бельченко Виктор Бонифатьевич
SU784879A1

RU 2 266 136 C2

Авторы

Бокерия Л.А.

Ниязматов А.А.

Даты

2005-12-20Публикация

2003-07-17Подача