ВАКЦИНА "ТРИВАК (ВИЭВ)" ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА, ПАРАГРИППА-3 И ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ - БОЛЕЗНИ СЛИЗИСТЫХ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 1998 года по МПК A61K39/295 A61K39/15 A61K39/155 A61K39/265 

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарной вирусологии и касается вакцины для специфической профилактики респираторных болезней крупного рогатого скота, а также других патологий, обусловленных вирусами инфекционного ринотрахеита, парагрипппа-3 и вирусной диареи - болезни слизистых.

Эти возбудители играют ведущую роль в этиологии респираторных болезней крупного рогатого скота, в особенности в крупных хозяйствах и откормочных площадках.

Вирус инфекционного ринотрахеита (ИРТ) вызывает заболевание крупного рогатого скота независимо от породы и возраста, поражая респираторную (ринотрахеит), генитальную (пустулезный вульвовагинит и аборты у коров и баланопостит у быков), нервную (энцефаломиелит) системы, слизистые оболочки и глазное яблоко у телят (конъюнктивит и кератоконъюнктивит). Широко распространен во всем мире.

Вирус диареи - болезни слизистых (ВД-БС) - virus diarrhea-mucosal disense bovinum вызывает пневмоэнтериты у телят, аборты у коров в первой половине беременности, а заражение плода в более поздние сроки приводит к рождению телят с врожденными уродствами, слаборазвитых, толерантных, впоследствии превращающихся в постоянный источник инфекции в стаде. Широко распространен во многих странах.

Вирус парагриппа-3 (ПГ-3) - Paramyxovirus вызывает у крупного рогатого скота респираторное заболевание, но наиболее характерной является латентная форма парагриппозной инфекции. Часто осложняет течение других болезней, в сочетании с пастереллами обусловливают тяжелые формы респираторных инфекций у телят. Распространен повсеместно.

Указанные инфекции возникают у крупного рогатого скота как в виде моноинфекций, так и смешанных вирусных и вирусно-бактериальных инфекций, которые наносят значительный экономический ущерб из-за гибели и выбраковки животных, снижения продуктивности и нарушения воспроизводства.

Для профилактики респираторных вирусных болезней крупного рогатого скота и других заболеваний, обусловленных вирусами ИРТ, ВД-ВС и ПГ-3, используют моновалентные и ассоциированные вакцины (Инфекционные болезни животных: Справочник. Под ред. Д.Ф.Осидзе, - М.: Агропромиздат, 1987, с. 19, 77, 99).

Недостатком моновалентных вакцин является то, что они стимулируют образование иммунитета у животных только к одной инфекции, требуют проведения профилактических обработок против каждой инфекции в отдельности, что сказывается на затратах труда, растягивают сроки формирования иммунитета у животных, способствует возникновению стрессовых явлений и осложнений.

Известна также ассоциированная вакцина для профилактики респираторных болезней крупного рогатого скота, содержащая антиген вируса ИРТ из штамма Herpes virus bovis "ТК-А(ВИЭВ)-В2", антиген вируса ВД-БС из штамма Virus diarrhea-muco "ВК-1(В-1) N 28", антиген хламидий, инактивированные формалином и масляный адъювант (Авт. св. СССР N 1789219, A 61 K 39/118, 1993).

Недостатком этой ассоциированной вакцины является то, что она не создает иммунитет против парагриппа, что требует дополнительного применения моновакцин, и кроме того, вакцина является инактивированной и недостаточно иммуногенной.

Наиболее близким аналогом является ассоциированная вакцина для профилактики инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота, содержащая аттенуированный вирус ИРТ штамма JBR-JPV, аттенуированный вирус ВД-ИС штамм ВУД-МД, аттенуированный штамм вируса ПГ-3 и защитную среду (патент СРР N 58827, C 12 K 5/00, 1975).

Недостатком известной ассоциированной вакцины является недостаточно высокая эффективность вследствие неполноценности антигенного состава входящих в нее компонентов и сложных взаимодействий вирусов, из которых она изготовлена.

Задачей изобретения является разработка безвредной вакцины на основе синергетической ассоциации вирусов, создающей напряженный иммунитет против ИРТ, ВД-БС и ПГ-3.

Технический результат изобретения заключается в получении ассоциированной вакцины против ИРТ, ВД-БС и ПГ-3, обладающей высокой иммуногенной активностью и повышенным защитным эффектом.

Сущность изобретения заключается в следующем: вакцина "Тривак (ВИЭВ)" для профилактики ИРТ, ВД-БС и ПГ-3 содержит антиген из аттенуированного вируса ИРТ штамма Herpesvirus bovis "ТК-А (ВИЭВ)В-2" с активностью 10^4,5 - 10^6,5 ТЦД_50/мл, антиген из аттенуированного вируса ВД-БС штамма Virus diarrhea-mucosal disease bovinum "ВК-1(В-1) N 28" с активностью 10^4,0 - 10^6,0 ТЦД_50/мл, антиген из аттенуированного вируса ПГ-3 штамма Paramyxovirus "ПТК-45/86" с активностью 10^5,0 - 10^7,0 ТЦД_50/мл и защитную среду на основе желатина и сахарозы.

Входящие в вакцину "Тривак (ВИЭВ)" штаммы вирусов известны и являются производственными при изготовлении моно- и бивалентной вакцины. Однако неожиданно было обнаружено, что при объединении известных штаммов в предлагаемом по изобретению соотношениях наблюдается образование синергетической ассоциации вирусов, проявляемой в увеличении напряженности и длительности иммунитета.

Пример 1. Производственный аттенуированный вакцинный штамм вируса ИРТ "ТК-А(ВИЭВ)В-2" размножают в первичнотрипсинизированных культурах клеток почки теленка (ПТ), тестикулов бычка (ТБ), почки эмбриона коровы (ПЭК) или их субкультурах. Заражение культур проводят вируссодержащей культуральной жидкостью в дозе 0,2-1 ТЦД_{50/клетку}. Зараженные культуры в плоских культуральных колбах или вращающихся сосудах инкубируют при 37,0 - 37,5^oC в течение 24 - 48 ч до полного поражения монослоя. Затем вируссодержащую культуральную жидкость собирают, определяют активность суспендированного в ней вируса и используют для изготовления вакцины.

Производственный вакцинный аттенуированный штамм ВД-БС "ВК-1(В-1) N28" размножают в первичнотрипсинизированной культуре клеток ПТ или ее субкультуре или перевиваемой культуре клеток "КСТ". Заражение культур проводят вируссодержащей культуральной жидкостью в дозе 0,2-1 ТЦД_{50/клетку}. Зараженные культуры в плоских культуральных колбах или вращающихся сосудах инкубируют при 37,0 - 37,5^oC в течение 24 - 72 ч, затем вируссодержащую культуральную жидкость собирают, определяют активность и используют для изготовления вакцины.

Производственный вакцинный аттенуированный штамм вируса ПГ-3 "ПТК-45/86" размножают в первичнотрипсинизированной культуре клеток ПТ или ее субкультуре. Заражение культур проводят вируссодержащей жидкостью в дозе 0,1-1 ТЦД_{50/клетку}. Зараженные культуры в плоских культуральных колбах или вращающихся сосудах инкубируют при 37,0 - 37,5^oC в течение 72 - 96 ч, затем вируссодержащую культуральную жидкость собирают, определяют активность и используют для изготовления вакцины.

Для изготовления 1 л вакцины берут вирус ИРТ с титром 10⁶ ТЦД_50/мл - 300 см³, вирус ВД-БС с титром 10^5,5 ТЦД_50/мл - 300 см³, вирус ПГ-3 с титром 10^6,5 ТЦД_50/мл - 300 см³ и среду высушивания, состоящую из 20%-ного раствора желатина и 40%-ного расхода сахарозы - 100 см³, расфасовывают в ампулы или флаконы и лиофилизируют.

Контроль полученной вакцины на стерильность, массовую долю влаги, внешний вид, инфекционную активность, безвредность, реактогенность и иммуногенность проводят общепринятыми методами. Срок годности препарата не менее 1 года.

Пример 2. Вакцину готовят аналогично примеру 1, но для приготовления 1 л вакцины берут вирус ИРТ с титром 10⁶ ТЦД_50/мл - 200 см³, вирус ПГ-3 с титром 10^6,5 ТЦД_50/мл - 200 см³, вирус ВД-БС с титром 10⁵ и ТЦВ_50/мл - 400 см³ и среду высушивания - 200 см³, расфасовывают и лиофилизируют.

Пример 3. Полученную вакцину "Тривак (ВИЭВ)" применяют в неблагополучных хозяйствах для профилактики ИРТ, ПГ-3 и ВД-БС крупного рогатого скота. В животноводческих комплексах откормочного типа телят с месячного возраста вакцинируют впервые два дня после поступления в хозяйство по группам, обеспечив в последующем сохранение этих групп, разрешая перемещение животных не ранее, чем через 2 недели со дня повторной вакцинации. В хозяйствах репродукторного типа вакцину применяют в случае вспышки болезней. При этом вынужденно вакцинируют всех животных, находящихся под угрозой заражения.

Вакцину вводят внутрикожно в среднюю треть шеи, предварительно обработав место введения этиловым спиртом. При этом используют шприцы для туберкулинизации или безыгольные инъекторы. Телятам в возрасте до 3-х месяцев и старше вакцину вводят двукратно внутрикожно по 0,2 мл с интервалом 14 - 20 дн. Взрослым животным в случае угрозы заражения вакцину вводят двукратно внутрикожно по 0,4 мл с интервалом 14 - 20 дн.

Иммунитет формируется через 2 недели после начала вакцинации, после повторной вакцинации иммунитет длится не менее 6 месяцев.

Вакцина апробирована на крупном рогатом скоте в условиях хозяйств различного хозяйственного направления и в разной эпизоотической ситуации. Эта апробация подтвердила безвредность препарата и его противоэпизоотическую эффективность, проявляемую в усилении иммунизирующей активности отдельных компонентов ассоциированной вакцины.

Применение вакцины "Тривак(ВИЭВ)" позволяет существенно снизить уровень респираторной патологии в стадах крупного рогатого скота.

Использование: в биотехнологии и ветеринарной вирусологии и касается вакцины для специфической профилактики респираторных болезней крупного рогатого скота, а также других патологий, обусловленных вирусами инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи - болезни слизистых. Вакцина "Тривак (ВИЭВ)" содержит антиген из аттенуированного вируса инфекционного ринотрахеита штамма "ТК-А(ВИЭВ)В-2" с активностью 10^4,5 - 10^6,5 ТЦД_50/мл, штамм вируса вирусной диареи - болезни слизистых "ВК-1(В-1)" N 28 с активностью 10^4,0 - 10^6,0 ТЦД_50/мл, штамма вируса парагриппа-3 с активностью 10^5,0 - 10^7,0 ТЦД_50/мл и защитную среду. Применение вакцины позволяет существенно снизить уровень респираторной патологии в стадах крупного рогатого скота. 1 з.п. ф-лы.

1. Вакцина для профилактики инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи - болезни слизистых крупного рогатого скота, содержащая антигены из аттенуированных штаммов вирусов инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и диареи - болезни слизистых - и защитную среду, отличающаяся тем, что из аттенуированных штаммов вирусов она содержит штамм Herpes virus bovis "ТК - А (ВИЭВ)В-2" с активностью 10^4 , 5 - 10^6 , 5 ТЦД_{5 0 / м л}, штамм Virus diarrhea - mucosal disease bovinum "ВК-1 (В - 1) N 28" с активностью 10^4 , 0 - 10^6 , 0 ТЦД_{5 0 / м л}, штамм Paramyxovirus "ПТК - 45/86" с активностью 10^5 , 0 - 10^7 , 0 ТЦД_{5 0 / м л} при следующем соотношении компонентов, об. %: Антиген вируса инфекционного ринотрахеита из штамма Herpes virus bovis "ТК - А (ВИЭВ)В-2" с активностью 10^4 , 5 - 10^6 , 5 ТЦД_{5 0 / м л} - 15 - 32
Антиген вируса диареи - болезни слизистых - из штамма Virus diarrhea - mucosal disease bovinum "ВК - 1 (В - 1) N 28" с активностью 10^4 , 0 - 10^6 , 0 ТЦД_{5 0 / м л} - 20 - 40
Антиген вируса парагриппа-3 из штамма Paramyxovirus "ПТК - 45/86" с активностью 10^5 , 0 - 10^7 , 0 ТЦД_{5 0 / м л} - 15 - 32
Защитная среда - Остальное
2. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что из защитных сред она содержит сахарозожелатиновую защитную среду.