СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ H.PYLORI Российский патент 1998 года по МПК A61K31/12 A61K31/395 

Настоящее изобретение относится к новому способу лечения инфекции Helicobacter известными антибактериальными соединениями нафтиридинкарбоновой кислоты и к новому способу лечения язвы желудка и дуоденальной язвы такими известными соединениями.

Установлено, что H. pylori - патогенная бактерия, открытая в 1982, является причиной язвы желудка и дуоденальной язвы у людей. В клинических испытаниях показано, что уничтожение микроорганизма приводит в результате к излечению язвы и к низкой частоте рецидивов. Хотя рост микроорганизмов Helicobacter in vitro ингибирует многочисленные антибактериальные средства, эти средства, как правило, не приводят к успеху при испытаниях на людях и животных in vitro, когда вводятся как отдельные средства.

Инфекционные болезни у животных вызываются родственными микроорганизмами. Например, H. mustelae является патогенным для хорьков и H.felis для кошек.

Соединения, применяемые в настоящем изобретении, раскрываются в патенте США N 5164402.

Настоящее изобретение относится к способу лечения инфекции, вызываемой Helicobacter pylori, который включает введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I:

где R₁ представляет собой водород ил метил, и R₂ представляет собой водород или L-аланин-L-аланил, и его фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот (активное соединение).

В варианте осуществления настоящего изобретения активное соединение представляет собой метансульфонат 7-( [1α,5α,6α] -6-амино-3-азабицикло [3.1.0] гекс-3-ил)-1-(2,4-дифторфенил)-6- фтор-1,4-дигидро-4-оксо-1,8-нафтгидрин-3-карбоновой кислоты.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения язвы желудка и дуоденальной язвы посредством введения пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества активного соединения. В особом варианте осуществления настоящего изобретения используемое соединение представляет собой метансульфонат 7-( [1α,5α,6α]-6-амино-3-азабицикло-[3.1.0] гекс-3-ил)-1-(2,4-дифторфенил)-6-фтор-1,4-дигидро-4-оксо-1,8-нафтиридин-3-карбоновой кислоты.

Активные соединения и их получение раскрываются в патенте США N 5164402.

В патенте США N 5164402 описано, что соединения формулы I образуют фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот. Все такие соли входят в объем настоящего изобретения и могут быть получены так, как описано в патенте США N 5164402. Примерами подходящих кислот являются уксусная, молочная, янтарная, малеиновая, винная, лимонная, глюконовая, аскорбиновая, бензойная, метансульфоновая, н-толуолсульфоновая, коричная, фумаровая, фосфоновая, хлористоводородная, бромистоводородная, иодистоводородная, сульфаминовая и сульфоновая кислоты.

В соответствии с изобретением, активное соединение может использоваться в сочетании с другими антимикробными средствами, такими как нитроимидазольные антибиотики, например, тинидазол и метронидазол; тетрациклины, например, тетрациклин, доксициклин и миноциклин; пенициллины, например, амоксициллин, ампициллин и меэлоциллин; цефалоспорины, например, цефаклор, цефадроксил, цефадрин, цефуроксим, цефуроксимаксетил, цефалексан, цефподоксимпроксетил, цефтазидим и цефтриаксон; карбапенемы, например, имипенем и меропенем; аминогликозиды, например, парамомицин; макролиды, например, эритромицин, кларитромицин и азитромицин; линкозамидные антибиотики, например, клиндамицин; рифамицины, например, рифампицин; и нитрофурантоин. В объем изобретения также включаются сочетания активного соединения с фармацевтическим соединением, применяемым для лечения расстройств, связанных с кислотностью, таким как ингибитор накачивания кислоты, например, омепразол и лансопразол, или с H₂-антагонистами, например, ренитидином, циметидином и фамотидином.

Предпочтительным сочетанием, в соответствии с изобретением, является сочетание метансульфоната 7-([ 1α,5α,6α) ] -6-амино-3-азабицикло[3.1.0]гекс-3-ил)-1-(2,4-дифторфенил)-6-фтор-1,4-дигидро-4-оксо-1,8-нафтиридин-3-карбоновой кислоты и амоксициклина.

Другим сочетанием, в соответствии с изобретением, является сочетание метансульфоната 7-([ 1α,5α,6α) ]-6-амино-3-азабицикло[3.1.0]гекс-3-ил)-1-(2,4-дифторфенил)-6-фтор-1,4-дигидро-4-оксо-1,8-нафтгидрин-3-карбоновой кислоты и тетрациклина.

Третьим предпочтительным сочетанием, в соответствии с настоящим изобретением, является сочетание метансульфоната 7-[ [1α,5α,6α] ]-6-амино-3-азабицикло[3.1.0] гекс-3-ил)-1-(2,4-дифторфенил)-6-фтор-1,4-дигидро-4-оксо-1,8-нафтиридин-3-карбоновой кислоты и омерпразола.

Активные соединения являются полезными для лечения H. pylori у людей и родственных Helicobacter инфекций у животных. Они также пригодны для лечения язвы желудка и дуоденальной язвы. Используемый здесь термин "лечение" включает уничтожение микроорганизма Helicobacter и облегчение при язве желудка и дуоденальной язве.

Активные соединения изобретения могут вводиться одни, но будут вводится в смеси с фармацевтически носителем, выбираемым с учетом предлагаемого способа введения и общепринятой фармацевтической практикой. Например, они могут быть введены перорально или в форме таблеток, содержащих такие эксципиенты, как крахмал или лактоза, или в капсулах - одни или в смеси с эксципиентами, или в форме эликсиров или суспензий, содержащих агенты, придающие вкус или цвет. При лечении животных активные соединения преимущественно заключают в корм или питьевую воду в концентрации 5-5000 част. на млн, предпочтительно - 25-500 част. на млн.

Активные соединения, в которых R₂ представляет собой L-аланин-L-аланин, могут быть введены парентерально, например, внутримышечно, внутривенно или подкожно. Активные соединения для парентерального введения лучше всего применять в виде стерильного водного раствора, который может содержать другие растворенные вещества, например, достаточное количество соли или глюкозу, для придания раствору изотоничности. В случае животных соединения могут вводиться внутримышечно или подкожно при уровнях дозировки 0,1-560 мг/кг/день, преимущественно - 1-5 мг/кг/день, которые дают в виде разовой суточной дозы или разделяют на 3 дозы,
Людям соединения изобретения могут вводиться либо перорально, либо парентеральным способом, и перорально могут вводиться при уровнях дозировки 0,1-50 мг/кг/день, преимущественно - 1-5 мг/кг/день, которые дают в виде разовой дозы или в виде до 3 разделенных доз. Для внутримышечного или внутривенного введения уровня дозировки составляют 0,1-50 мг/кг/день, преимущественно - 1-5 мг/кг/день. В то время, как внутримышечное введение может быть осуществлено разовой дозой или в виде до 3 разделенных доз, внутривенное введение может включать длительное капельное вливание. При необходимости могут быть внесены изменения, в зависимости от веса и состояния пациента, которого лечат, и конкретного выбранного способа введения, и о чем будут иметь представление специалисты в этой области техники.

Активность активных соединений in vitro может быть показана с помощью следующих далее процедур.

Разбавление агаром антимикробного препарата.

Растворяют 6 мг соединения, которое оценивают, в 0,6 мл 100% диметилсульфоксида (DMCO) и затем доводят до 6 мл стерильным бульоном бруцеллы, и отмечают растворимость. Конечная концентрация DMCO составляет 10% от общего объема. Затем осуществляют серийные 2-кратные разбавления стерильным бруцелловым бульоном (3 мл соединения + 3 мил бруцеллового бульона).

В отдельные стерильные чашки Петри помещают 2-мл аликвоты каждого разбавления бульоном, в которые добавляют 18 мл расплавленного и охлажденного (приблизительно 50^oC) бруцеллового агара, в который добавлено 7% лошадиной крови. Это приводит к конечному разбавлению соединения в агаре 1:10, и к конечной концентрации DMCO 1%. Например, если наивысшая концентрация (I-ое разбавление бульоном) соответствует 1000 u г/мл, и разбавляется агаром 1:10, конечная концентрация лекарственного средства в агаре составляет 100 u г/мл. Агаровые пластинки могут быть изготовлены за день до инокулировния и храниться в холодильнике в течение ночи.

Приготовление инокулятов.

Культуры Helicobacter pylori поддерживают на агаровых пластинках с триптиказой сои и 5% крови овцы, и переносят каждые 48 ч. Культуры Helicobacter musfelae поддерживают на таком же агаре, и переносят каждые 48-60 ч, в зависимости от степени роста при предыдущем переносе. Пластинки инкубируют при 37^oC в сосудах Gas Pak с активированными водой (10 мл) пакетами Campy Pak Plus (BBL Microbio Systems) с палладиевым катализатором.

Культуры Helicobacter могут быть выращены в бруцелловом бульоне с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки в объеме 10 мл в глубоких чашках Петри. Пластинки инкубируют в течение 18-20 ч при 37^oC в сосудах Gas Pak с активированными водой (10 мл) пакетами Compy Pak Plus с палладиевым катализатором в шейкере при 50 об/мин.

Культуры (приблизительно 10⁸ KOE/мл) разбавляют в течение ночи в 10 раз бруцелловым бульоном (без фетальной телячьей сыворотки) в завинчивающихся крышками пробирках для применения в качестве стандартного инокулята. Ячейки репликации Steere наполняют 0,8 мл разбавленного микроорганизма, и приблизительно 2•10⁴ клеток в 0,002 мл помещают на поверхность агара. Инокулированные пластины помещают в сосуды Gas Pak, в которые добавлены активированные водой (10 мл) пакеты Campy Pak Plus с палладиевым катализатором, и инкубируют при 37^oC в течение 48 ч.

После инкубации все опытные пластинки сравнивают с контрольной пластинкой с культурой без соединения. MIC представляет собой концентрацию, которая ингибирует рост культуры при сравнении с контрольной пластинкой. Тонкая пленка культуры может быть видимой при более высоких концентрациях, но это в расчет не принимается, и не рассматривается как истинная MIC. Контрольные микроорганизмы также инокулируют на каждой пластинке, и разбавляют в 1000 раз для использования в качестве инокулянтов. Контрольные микроорганизмы включают Campylobacter jejuni (# 6686) и отобранные культуры E. coli (# 51A266 и #51A470), Euterobacter aerogenes (# 67A040), E. eloacae (# 678009), Providencia stuartii (# 77A013) и P. rettgeri (# 77C1025). Пластинки и/или переносимые инокулянты не должны находится вне микроаэрофильной среды более 2 ч. Также рекомендуется все манипуляции с участием культур Helicobacter проводить в вытяжном шкафу с ламинарным потоком, чтобы снизить возможность загрязнения культур плесенью.

Чтобы предсказать активность соединения in vivo против H. pylory у человека, используют мышиную модель Lee et al., Gastrocuterology, 99, 1315-23 (1990).

Helicobacter felis выращивают в бруцелловом бульоне с 10% фетальной коровьей сыворотки. Замороженную культуру быстро размораживают, культуру проверяют на подвижность, и 0,5 см³ оттаявшей замороженной культуры инокулируют в глубокую чашку Петри, содержащую 9,5 см³ смеси бруцеллы с сывороткой. Чашки помещают в сосуд Campy Pak (BBL), чтобы обеспечить микроаэрофильную атмосферу. Сосуд помещают в инкубатор при 37^oC на шейкер со скоростью вращения 60 об/мин. Культуру проверяют на чистоту и подвижность под фазовым микроскопом, и затем собирают в колбе. Самок мышей Swiss-Webster (18-20 г) перестают кормить за 18 ч до заражения. Мышей заражают три раза в разные дни в течение одной недели. Подачу лекарственного средства начинают через две недели после последней дозы микроорганизма. Лечебный препарат дают один раз в сутки в течение четырнадцати дней подряд. Умерщвление осуществляют через три недели после завершения лечения. У каждой мыши иссекают желудок и вскрывают вдоль большой кривизны. Берут кусок (plug) (срез ткани 3 мм) из полостной области желудка. Его поверхность промывают, затем кусок мелко рубят и помещают в пробирку со 100 микролитрами уреазного реагента. Уреазный реагент представляют собой реагент Hagell et al., Am. j. Gastroeuterology, 82, 292-296 (1982). Уреазный реагент (pH 6,3-6,5) содержит мочевину и фениловый красный. Если присутствует Helicobacter, уреаза будет разрушать мочевину с изменением pH. Красная окраска (щелочная реакция) является положительным указанием на Helicobacter; красно-желтая (нет изменений) является отрицательной реакцией. Любое изменение цвета регистрируют через 18 ч. Обычно в испытательной группе находится двадцать мышей, устанавливают процент положительной реакции для каждой группы.

Существует несколько способов, применяемых в клинике для установления присутствия Helicobacter у пациента-человека. Их применяют для начальной диагностики перед лечением, а также для определения успешного лечения по уничтожению микроорганизма у человека.

Дыхательный тест с мочевиной включает прием вовнутрь помеченной радиоактивным изотопом мочевины. H. pylori продуцирует фермент уреазу, который разрушает мочевину, желудочные клетки млекопитающих не содержит такого фермента. Выдыхание диоксида углерода с радиоактивной меткой (определяется масс-спектрометрией или по радиоактивности, в зависимости от используемого изотопа) указывает, следовательно, что H. pylori присутствует.

Для определения заражения H. pylori может быть также использована серология. Определение сывороточных антител к H. pylori, таких как иммуноглобулин G и иммуноглобулин A, осуществляют, используя ферментный иммуносорбентный анализ (EL ISA). В качестве антигенов могут быть использованы многочисленные белки H. pylori. Эндоскопия пациента дате образцы ткани, которые могут быть культурированы в микроаэрофильной среде для диагностики E. pylori инфекции. С другой стороны, образец может быть проверен гистологически путем использования одного или ряда красителей, таких как Giemsa или гематоксилинэозин. Также может быть применен тест с мочевиной, который, кроме того, дает преимущество образования уреазы H. pylori. Такое испытание дает уверенность в образовании аммиака при гидролизе мочевины, что приводит в результате к заметному изменению pH.

Изобретение относится к медицине и касается лечения инфекционных заболеваний, вызываемых Helicobacter pylori. Для этого предлагается использовать соединение формулы I:

в которой R₁ представляет собой водород или метил, и R₂ представляет собой водород или L-аланин-L-аланил, и его фармацевтически приемлемыми солями присоединения кислот. Это соединения являются пригодными и для лечения язвы желудка и дуоденальной язвы.

1. Способ лечения инфекционной болезни, вызываемой Helicobacter pylori, или язвы желудка, или дуоденальной язвы путем введения антибактериального средства, отличающийся тем, что включают введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, от 0,1 до 50 мг/кг/день соединения формулы I

в которой R₁ - водород или метил;
R₂ - водород или L-аланин-L-аланил,
или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное соединение представляет собой метансульфонат 7-([ 1α,5α,6α ] -6-амино-3-азабицикло [3.1.0] гекс-3-ил)-1-(2,4-дифторфенил)-6-фтор-1,4-дигидро-4-оксо-1,8- нафтиридин-3-карбоновой кислоты. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что R₂ представляет собой L-аланин-L-аланил и указанное соединение вводят парентерально. 4. Способ по любому из пп.1 - 3, отличающийся тем, что соединение формулы I вводят в сочетании с другим антимикробным средством. 5. Способ по п.4, отличающийся тем, что указанное другое антимикробное средство представляет собой амоксициллин. 6. Способ по п.4, отличающийся тем, что указанное другое антимикробное средство представляет собой тетрациклин или омепразол.