Изобретение связано с лечением кетоацидозных состояний у сельскохозяйственных и других животных, особенно у важных с экономической точки зрения животных, таких как овцы и крупный рогатый скот.
Связанные с кетоацидозом заболевания наблюдаются тогда, когда потребность животных в энергии превышает ее поступление за счет пищевых продуктов и большинство жиров организма катаболизируется для возмещения ее недостатка. При этом наблюдается дефицит глюкозы и в крови накапливаются кетоновые тела. (Veterinary Medicine, 7-th Edition, by Blood, DC & Radosbib, OM Pull: Bailliere Tindall, 1989).
У овец кетоацидоз (токсикоз беременности) обычно наблюдают в период ранней беременности, особенно у животных, вынашивающих более одного утробного плода или один крупный плод. Причина заключается в очень высокой потребности в глюкозе или в других пищевых субстратах.
Известно, что овцы с токсикозом беременности часто имеют затруднения в рождении ягнят. Кроме того, особенно когда ягненок погибает в утробе, у овец развивается метрит, что в конечном счете приводит к токсемии.
У высокопродуктивного молочного скота умеренный кетоацидоз распространен в период ранней лактации и обусловлен очень высокими потребностями в глюкозе и в других питательных субстратах для биосинтеза молока. Может наблюдаться и клинический кетоацидоз. Коровы, которые чрезмерно упитаны, при отеле могут страдать более серьезно, когда избыточная мобилизация жиров организма приводит к их накапливанию в печени. Это состояние известно как синдром жирной коровы.
Лечение кетоацидозных состояний - обычно возмещение глюкозы или ее предшественников, например, внутривенным введением глюкозы или декстрозы, пероральным назначением пропионата, глицерина, пропиленгликоля, мелассы и т.п. Используемое в дальнейшем понятие "глюкоза" имеет в виду также и ее предшественников и заменителей. Назначение глюкозы может сопровождаться инъекциями инсулина. Глюкокортикоиды или анаболические стероиды также могут быть использованы (см., например, Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных под ред. И.Г.Шарабрина. -М.: Агропромиздат, 1985, 288 - 295).
Известно, что назначение соматотропина часто приводит к увеличению мобилизации и метаболизма жиров организма и может вызвать увеличение концентрации в крови кетоновых тел. Кронфилд (1982, J.Diary Science, 65 : 2204 - 2212) предположил, что использование экзогенного соматотропина может по этой причине вызвать кетоацидоз у молочного скота.
В животноводчестве соматотропин, а также его усиливатели и предшественники, используют главным образом для увеличения привесов скота и улучшения лактации (см. патент США N 4792546, кл. A 61 K 37/36, 1988).
Теперь было неожиданно открыто, что явление избыточной мобилизации жиров организма во время беременности или лактации, проявляющееся в виде токсикоза беременности или синдрома жирной коровы, может излечиваться или предотвращаться назначением заболевшим животным глюкозы, ее заменителей или предшественников на фоне увеличения концентрации или активности соматотропина в крови. Уровень соматотропина в крови может быть увеличен назначением соматотропина или соматотропиносвобождающих факторов. Активность соматотропина может быть увеличена назначением антител, таких как антиидиотипические антитела.
Настоящее изобретение, таким образом, связано с методом лечения избыточной мобилизации жиров организма у животных в период беременности или лактации, который включает назначение заболевшим животным глюкозы и/или ее предшественников совместно с ветеринарно-эффективным количеством агента, увеличивающего уровень или активность соматотропина.
Проявлениями этого синдрома являются токсикоз беременности и синдром жирной коровы.
Глюкоза может назначаться как таковая или в форме одного из предшественников, как отмечалось ранее. Токсикоз беременности часто осложняется гипокальцемией и в таких случаях удобно назначать глюкозу в виде бороглюконата кальция как одного из ее предшественников. Другие формы предшественников глюкозы включает декстрозу, мелассу, кукурузный сироп, патоку, пропионат, глицерин, пропиленгликоль и другие подходящие составы, которые метаболизируются по 3-С фрагменту.
Перекрестная видовая активность гормонов хорошо известна из литературы. Так, хорошо известно, например, что бычий соматотропин биологически активен по отношению к овцам и животным других видов. Поэтому любой биологически активный гормон или фактор, освобождающий или активирующий гормон, оказывающие эффект на животных в нормальных условиях, могут быть использованы.
Гормоны, используемые в настоящем изобретении, могут быть связаны с металлами, такими как цинк, железо, кальций, магний, марганец, натрий, калий или с их солями. Когда используют такой связанный с металлом гормон, то предпочтительно, чтобы он был связан с цинком.
Примеры других солей, пригодных для осуществления изобретения, включают кислотные аддитивные соли с неорганическими кислотами и соли с поливалентными органическими катионами.
Понятия "гормон" и "гормоносвобождающий фактор", используемые в настоящем изобретении, касаются веществ, которые обладают биологической активностью и химической структурой, подобной активности и структуре соединений, естественно образующихся в животном организме. Они включают природные продукты и полученные синтетическим путем гормональные составы, имеющие ту же самую или сходные аминокислотные последовательности, что и у природных продуктов. Такие синтетические продукты могут быть получены химической модификацией встречающихся в природе соединений, или могут быть получены биотехническими методами, например, экспрессией или бактерии, например, E.coli. Продукты для использования в настоящем изобретении охватывают, следовательно, природные и синтетические гормоны и гормоносвобождающие факторы и их биологически активные аналоги, имеющие близкую химическую структуру. Активность соматотропина может быть усилена использованием методом иммунизации против соматотропина и использованием моноклональных антител. Инсулинподобный ростовой фактор I (IGF-I), который может опосредовать эффекты гормонов роста, охватывается понятием "агент, усиливающий активность соматотропина", используемым выше.
Глюкоза или предшественник глюкозы, гормон или гормоносвобождающий фактор, предшественник или активатор назначаются в обычном порядке и любым обычным путем. Так, глюкоза или ее предшественник могут, например, назначаться перорально, внутривенно или подкожно. Они могут назначаться в виде одной суточной дозы или с другими подходящими или приемлемыми интервалами, например, 2 - 3 раза в день. Гормональный препарат обычно назначается один раз в день в виде подкожной инъекции раствора в подходящем растворителе, таким как забуференный изотонический солевой раствор. Однако его можно назначать с другой частотой или в виде рецептуры с замедленным освобождением активного начала, как, например, в форме масляной суспензии в натуральном масле, в форме солей жирных кислот или смол, или другими методами, чтобы обеспечить длительное освобождение активного начала из зоны инъекции или имплантации. Период, требуемый для лечения, зависит от вида животного и тяжести заболевания и составляет обычно от приблизительно 5 дней до приблизительно 56 дней. Глюкозу и гормональный препарат можно назначать одновременно или вводить в разные сроки.
Количество глюкозы или предшественника глюкозы, получаемое заболевшим животным, зависит от вида животного и веса его тела. Оно обычно составляет от 0,4 до 2 г/кг веса. Так, для овец общая суточная доза составляет от приблизительно 25 до приблизительно 125 г/день, предпочтительно от приблизительно 50 до приблизительно 100 г/день, в то время как для крупного рогатого скота она обычно лежит в пределах от приблизительно 100 до приблизительно 500 г/день, предпочтительно от приблизительно 200 до приблизительно 400 г/день.
Аналогичным образом назначаемая доза гормонального препарата зависит от вида животного и веса его тела. Дальнейшее уточнение дозировки зависит от особенностей используемого гормонального препарата и от его активности. Выбор назначаемой дозы препарата должен основываться на эффективности действия и легко может быть сделан квалифицированным специалистом. Когда гормональным препаратом является гормон роста или освобождающий этот гормон фактор, требуемое количество такого препарата обычно такое же, как и его эффективное количество, необходимое для стимулирования роста у здоровых животных. Требуемая дозировка легко может быть определена квалифицированным специалистом. В основном требуемое количество гормона роста лежит в пределах от 0,02 до 0,25 мг/кг веса. Таким образом, суточная доза составляет от приблизительно 10 до приблизительно 50 мг для крупного рогатого скота и от приблизительно 4 до приблизительно 15 мг для овец, что является предпочтительной нормой. Для освобождающего гормона роста фактора или его химического производного дозировка зависит от активности конкретных составов. Используемое количество такого соединения должно быть таким, чтобы оно было способно увеличить скорость освобождения соматотронина у используемых животных. Это количество обычно находится в пределах 1/3 от количества самого гормона, но может широко варьироваться. Квалифицированному специалисту не составляет труда определить соответствующее количество соединения.
Способ по настоящему изобретению может быть использован в отношении любых животных, страдающих от связанных с кетозом заболеваний, особенно в отношении животных, важных с экологической точки зрения, таких как крупный рогатый скот и овцы. Особенно ценно применение метода в отношении овец, так как известно, что овцы, страдающие токсикозом беременности, часто испытывают затруднения в рождении ягнят. Кроме того, метод весьма ценен тем, что предотвращает ситуацию, при которой ягненок погибает в утробе матери, что вызывает у овец метрит и в конечном счете токсемию. Является фактом и высокое распространение токсикозов беременности у овец, ожидающих двойню, что особенно важно с экономической точки зрения. Использование способа по настоящему изобретению по этой причине особенно важно для лечения овец.
Второй аспект настоящего изобретения касается использования соматотропина, или предшественника соматотропина, или соматотропиносвобождающего фактора, или агента, усиливающего активность соматотропина для приготовления лекарственных препаратов для лечения синдрома избыточной мобилизации жиров в организме животных в период беременности или лактации, проявляющего в форме токсикоза беременности или синдрома жирной коровы у важных с экономической точки зрения животных, осуществляемого на фоне лечения животных глюкозой. Изобретение также касается рецептур, содержащих один или более упомянутых агентов, пригодных для использования в процессе такого лечения. Рецептуры могут иметь форму растворов в подходящем ветеринарно приемлемом растворителе. Таким растворителем может быть, например, вода или буферный изотонический солевой раствор. Альтернативно они могут назначаться в виде рецептур с медленным высвобождением активного начала, таких как масляная суспензия в натуральных маслах, в виде солей жирных кислот или смол или в виде других иньектабильных или имплантируемых форм. Они могут быть смешаны с ветеринарно приемлемыми вспомогательными веществами, такими как консерванты или антиокислители, например, с пропилгалатом.
Изобретение в дальнейшем описывается со ссылкой на представленные ниже результаты испытаний. Последние предназначены лишь для иллюстрации изобретения и не должны толковаться в ограничительном смысле. Возможные варианты представленных методик легко могут быть определены квалифицированными специалистами.
Опыт 1. Использование рекомбинантного бычьего соматотропина в виде инъекций для лечения овец, страдающих токсикозом беременности.
Материалы и методы.
Исследование охватывает овец, клинически пораженных токсикозом беременности. Всех овец лечили внутривенными инъекциями глюкозы и пероральным назначением полиэтиленгликоля, но половина из них также получала рекомбинантный бычий соматотропин. Свежеприготовленный соматотропин вводили ежедневно подкожно в дозе 0,15 мг/кг веса тела.
В опыте были использованы 34 овцы, пораженные токсикозом беременности. Из них 4 животных погибли в течение 24 ч после начала опыта частично в результате поствакцинных осложнений. Оставшиеся 30 овец были распределены на равные группы. Животные одной группы (контрольной) ежедневно получали внутривенные инъекции глюкозы и дважды в день перорально пропиленгликоль. Животные в тяжелом состоянии получали глюкозу дважды в день. Животные другой группы (опытной) получали ту же терапию и дополнительно подкожно рекомбинантный бычий соматотропин в дозе 0,15 мг/кг веса.
Замечания.
Выжили 11 овец в опытной группе (73%) и 12 овец в контрольной группе (80%). Все, кроме одной погибшей, принесли затем ягнят. Время, в течение которого после рождения ягнят наступала смерть овец, было продолжительнее в опытной группе по сравнению с контрольной группой (6, 3 дня и 2, 7 дня соответственно). Обычно причиной смерти были осложнения при родах и метриты. Длительность лечения была меньшей у животных опытной группы (6,5 + 1,2 дня против 7,8 + 1,47 дня у животных контрольной группы). Леченные соматотропином овцы оценивались как имеющие лучшее состояние - "кажущуюся живость", чем овцы контрольной группы.
Животные контрольной группы принесли 16 ягнят, а животные опытной группы - 20 ягнят. При родах погибли 14 овец контрольной группы и 8 овец опытной группы. Все ягнята, родившиеся живыми, выжили.
Соматотропин не оказывал неблагоприятного эффекта на овец, страдающих связанными с кетозом состоянием. Чрезвычайно высокий уровень выживаемости овец затрудняет четкую дифференциацию эффективности лечения, однако имеется тенденция более низкой внутриутробной смертности ягнят, более длительного выживания овец после рождения ягнят и улучшения общего состояния, что соответствующим образом обсуждается в дальнейшем.
Краткий отчет и результаты.
Животные.
34 овцы с токсикозом беременности, 4 овцы погибли в первые 24 ч. В опыте подвергались лечению 15 овец.
Лечение.
Контроль; глюкоза внутривенно ежедневно (в тяжелых случаях дважды в день);
пропиленгликоль перорально дважды в день.
Опыт: глюкоза внутривенно ежедневно (в тяжелых случаях дважды в день);
пропиленгликоль перорально дважды в день;
бычий соматотропин подкожно 0,15 мг/кг веса ежедневно (табл. 1).
Опыт 2. Использование рекомбинантного бычьего соматотропина и пропиленгликоля по сравнению с использованием глюкозы и пропиленгликоля при лечении токсикоза беременности.
Материалы и методы.
В опыте были использованы 9 овец. Все они были с одной фермы, где наблюдалась серьезная вспышка токсикоза беременности и гипокальцемии. Каждой овце в начале опыта было введено 50 мл 40%-ного бороглюконата кальция.
В начале опыта каждая овца контрольной и опытной группы получила внутривенно глюкозу и пропиленгликоль, как и в предыдущем опыте. Однако впоследствии животные опытной группы получали 60 мл пропиленгликоля дважды в день и не получали глюкозы. Животные опытной группы получали также ежедневно инъекцию бычьего соматотропина, как и в предыдущем опыте. Контрольная группа велась, как в опыте 1.
Замечания.
Все овцы в обеих группах выжили. Несмотря на то, что животные контрольной группы ежедневно получали внутривенно глюкозу, в то время как животные опытной группы, леченной соматотропином, ее не получали, имела место тенденция повышения уровня глюкозы в крови у животных, леченных соматотропином.
Краткий отчет и результаты.
Животные.
9 овец с токсикозом беременности и гипокальцемией. В начале опыта все животные получили бороглюконат кальция. В опытной группе было 6 животных, в контрольной - 3 животных.
Лечение.
Контроль; глюкоза внутривенно ежедневно (в тяжелых случаях дважды в день);
пропиленгликоль перорально дважды в день.
Опыт: глюкоза внутривенно лишь в первый день;
пропиленгликоль перорально дважды в день;
бычий соматотропин подкожко 0,15 мг/кг веса ежедневно (см. табл. 2).
Опыт 3. Использование рекомбинантного бычьего соматотропина и пропиленгликоля по сравнению с использованием глюкозы и пропиленгликоля при начальной инъекции при лечении токсикоза беременности.
Материалы и методы.
Опытом было охвачено 57 овец, клинически пораженных токсикозом беременности. Животные были произвольно распределены между опытной и контрольной группами. Животные опытной группы первоначально получили инъекцию 100 ил 50%-ной декстрозы совместно с 60 мл пропиленгликоля перорально и дополнительно подкожную инъекцию 0,15 мг/кг веса бычьего соматотропина. В последующие дни животные получали утром только инъекцию соматотропина и 60 мл пропиленгликоля перорально. Последнее назначение повторялось после полудня. В контрольной группе овцы получили ту же начальную терапию, но без назначения соматотропина. В последующем они получали инъекцию 100 мл 50%-ной декстрозы утром и перорально пропиленгликоль утром и после обеда.
Замечания.
В этом опыте не было выявлено различий в оценке общего состояния и клинического состояния между животными опытной и контрольной группы. В первые 24 ч опыта погибло 8 овец (2 из опытной группы и 6 из контрольной группы). Это было значительно больше, чем в предыдущих опытах. Общий уровень смертности составил 11 особей в опыте и 20 особей в контроле (34% и 80% соответственно). Это явно показывает заметное различие между коэффициентом выживания в двух группах, т.е. 21 особью в опыте и 5 особями в контроле, что составляет 66% и 20% соответственно, и эти значения возрастают до 70% и 26%, когда животные, погибшие в первые 24 ч, не учитываются. При использовании метода средних квадратических отклонений этот результат показывает высокую достоверность различий (p<0,001) между двумя группами.
В этом опыте животные страдали тяжелым токсикозом беременности, что имело результатом высокий общий уровень смертности. Лечение соматотропином и пропиленгликолем привело к заметному повышению выживаемости овец и повышению числа живых ягнят по сравнению с использованием традиционной схемы лечения глюкозой и пропиленгликолем.
Овцы, леченные соматотропином, имели более высокий коэффициент выживаемости и большее число ягнят, родившихся живыми. Представляется, что многие из овец контрольной группы, в начальной стадии отказавшиеся на лечение глюкозой и пропиленгликолем, но впоследствии погибшие в момент рождения ягнят, погибли по причине стресса при родах или по причине смерти ягненка в утробе.
Краткий отчет и результаты.
Животные.
57 овец с токсикозом беременности. В опытной группе было 32 животных, в контрольной - 25 животных.
Лечение.
Контроль: декстроза внутривенно ежедневно:
припиленгликоль перорально дважды в день.
Опыт: декстроза внутривенно лишь в первый день;
пропиленгликоль перорально дважды в день;
бычий соматотропин подкожно 0,15 мг/кг веса ежедневно (см. табл. 3).
Опыт. 4 Использование рекомбинантного бычьего соматотропина в форме рецептуры с длительным освобождением.
Материалы и методы.
Две группы овец получили по 100 мл 50%-ной декстрозы внутривенно в начале опыта, а впоследствии по 60 мл пропиленгликоля дважды в день. Животные опытной группы получили единственную инъекцию 320 мг препарата рекомбинантного бычьего соматотропина пролонгированного действия в масляном носителе (Optiflex 320 Somidobove Elanco Animal Health). Инъекцию осуществляют, используя аппликатор, который позволяет распределять половину порции (160 мг).
Замечания.
Из 15 овец опытной группы одна погибла в первые 24 ч, а другая погибла после рождения ягненка. Выжившие 13 овец принесли 17 живых и 13 мертвых ягнят. В контрольную группу были включены 13 овец, из которых 3 погибли в первые 24 ч, еще 3 погибли до рождения ягнят, а одна погибла после родов (родились два мертвых ягненка). Выжившие 6 овец принесли 6 живых и 8 мертвых ягнят. Общий коэффициент выживания был равен 47% в контроле и 87% в опыте (p = < 0,05). При исключении из расчета погибших в первые 24 ч овец коэффициент выживаемости составил в контроле 60% и в опыте 93% (p = < 0,05). Балльная оценка клинического состояния животных контрольной группы была ниже (3,81 + 0,95), чем балльная оценка клинического состояния животных опытной группы (4,40 + 0,78), в то время как балльная оценка общего состояния была 1,88 + 0,30 для животных контрольной группы и 2,00 + 0,33 для животных опытной группы. В контрольной группе выжившие животные лечились 7,17 + 4,26 дня, а в опытной группе 6,08 + 2,75 дня. Когда у большинства животных исследовалась кровь, уровень глюкозы был выше у животных опытной группы, но уровень бета-гидроксибутирата был ниже, а исходный уровень неэстерифицированных жирных кислот выше. Средний уровень белка в плазме обычно выше у животных опытной группы, в то время как уровень альбусина и глобулина был ниже. Средний уровень мочевины в плазме был выше у животных опытной группы, как обычно было и с уровнем креатининкиназы. Уровень кортизона в плазме был выше в начале опыта, а затем снижался (см. табл. 4).
Опыт 5. Использование рекомбинантного бычьего соматотропина в виде инъекцией для лечения синдрома жирной коровы.
Высокий уровень послеродовых заболеваний, встречающийся в молочном стаде, диагносцируется как синдром жирной коровы. Рекомбинантный бычий соматотропин использовался в дополнение к традиционной схеме лечения коров после отела. Это лечение также использовалось для лечения коров до отела. Пробы крови брались у каждого животного до начала лечения и дважды в неделю до прекращения лечения. Концентрации глюкозы, бета-гидроксибутирата, мочевины, альбумина, общего белка и кальция определялись и сравнивались у животных опытной и контрольной группы.
Материалы и методы.
Животные, показавшие клинические симптомы заболевания или внушавшие опасения быстрого ухудшения состояния, содержались отдельно от основной части молочного стада. Для опыта было выделено 11 таких животных и оценку их общего состояния проводили методом, описанным Министерством сельского хозяйства, рыболовства и пищевой промышленности (Advisory leaflet 612; 1978). Все животные были клинически обследованы, и любые аномалии зарегистрированы. Они были разделены на две группы в 5 и 6 животных, распределение их по общему состоянию, клиническим симптомам и ожидаемым срокам отела было оценено как равновозможное в обеих группах. Животные одной группы получали 640 мг бычьего соматропина (Sonidobove, Elanco) подкожно в боковую поверхность тела от хвоста до лопатки. Предполагалось, что этот препарат будет проявлять активность в течение 28 дней. Было оценено общее состояние 10 яловых коров и они также были подвергнуты лечению соматотропином. Эта группа была отобрана таким образом, чтобы животные могли быть подвергнуты лечению по крайней мере за 2 недели до ожидаемого срока отела. Для опытной группы контрольная группа из 8 животных была подобрана, исходя из оценки общего состояния животных и ожидаемого срока отела. Животные контрольной группы не подвергались лечению. Шесть других животных лечили в более поздние сроки, когда действие соматотропина ставится более эффективным. Пробы крови отбирали у всех коров дважды в неделю до прекращения лечения.
Пробы отбирали из брюшных кровеносных сосудов задней части тела, используя эвакуаторную трубку, содержащую антикоагулянт (система "Vacubainer"; Becton, Dickson, Rutherford, New Jersey). Пробы отбирали приблизительно в одно и то же время суток.
От каждой коровы брали две пробы крови, одну для определения концентрации глюкозы, используя оксалат калия и фторид натрия в качестве антикоагулянтов, и вторую для определения других биохимических показателей, используя гепаринат лития.
Плазма отделялась от цельной крови в тот же день центрифугированием и хранилась в замороженном виде при температуре -20oC до конца опыта. Пробы, полученные от каждого животного, анализировались последовательно, чтобы уменьшить вероятность ошибки в процессе определения. Были использованы автоанализатор Guifford 58A 300 и стандартная аналитическая техника. Измерялись следующие биохимические показатели: содержание общего белка, альбумина, мочевины, бета-гидроксибутирата, кальция и глюкозы.
Замечания.
Средние величины и стандартная ошибка средних были вычислены для биохимических параметров внутри каждой группы для каждого дня отбора проб. Соответствующая статическая значимость наблюдаемых отклонений средних величин между группами была оценена при использовании критерия Стьюдента.
Результаты.
Полученные данные не доказывают, что концентрации в плазме глюкозы, бета-гидроксибутирата, альбумина, общего белка или кальция достоверно отличаются у животных опытной и контрольной групп. Значительное уменьшение в плазме средней концентрации мочевины наблюдалось у коров перед отелом, если они лечились соматотропином. Это могло быть связано с усилением анаболизма белка. Субъективные впечатления от клинической картины позволяли полагать, что соматотропин полезен в лечении коров, страдающих синдромом жирной коровы.
Изобретение касается способа лечения синдрома избыточной мобилизации жиров организмом животных в период беременности или лактации. В крови животных увеличивают количество или активность соматотропина при одновременном назначении больным животным глюкозы или глюкозосодержащих субстратов, или предшест-венников глюкозы. 2 с. и 30 з.п. ф-лы, 4 табл.
| Печь для непрерывного получения сернистого натрия | 1921 |
|
SU1A1 |
| Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных / Под ред | |||
| И.Г.Шара брина | |||
| -М.: Агропромиздат, 1985, с.288-295 | |||
| Аппарат для очищения воды при помощи химических реактивов | 1917 |
|
SU2A1 |
| SU, патент, 4792546, к л | |||
| Устройство для сортировки каменного угля | 1921 |
|
SU61A1 |
