Изобретение относится к новым химическим веществам, которые можно применять в качестве ингибитора адгезии клеток, более конкретно к производным 3-алкилокси-, арилокси- или арилалкилокси-бензо[b]тиофен-2-карбоксамида, их фармацевтически приемлемым солям и фармацевтической композиции с активностью, ингибирующей адгезию лейкоцитов к васкулярному эндотелию.
Объектом заявки [1] являются производные бензо[b]тиофен-2- карбоксамида общей формулы
где
R - (а) водород,
(б) низший алкил,
(в) арил, в частности, арил с 6 - 14 атомами углерода, например, нафтил, антрил, фенил, или замещенный фенил формулы
где
X5 и X6 независимы и означают:
(1) Q, где Q означает водород, низший алкил, галоиднизший алкил, незамещенный или замещенный фенил или нафтил,
(2) галоид,
(3) низший алкенил,
(4) низший алкинил,
(5) группа - SQ,
(6) группа - OQ,
(7) группа - CHQCOQ1, где Q означает Q1, при этом Q и Q1 одинаковы или различны,
(8) группа - CHQCOOQ1,
(9) группа - CH2SQ или -CHQSQ1,
(10) группа - CH2OQ или CHQOQ1,
(11) группа - COQ,
(12) группа - COOQ,
(13) группа - OCOQ,
(14) группа - NQQ1,
(15) группа - NQCOQ1,
(16) группа - NQ(OQ1),
(17) группа - NQ(SQ1),
(18) группа - NQSO2Q1,
(19) группа - SO2NQQ1,
(20) группа - SOQ,
(21) группа - SO2Q,
(22) группа - SO3Q,
(23) группа - CH,
(24) группа - NO2,
(25) группа - CONQQ1,
(26) группа - NO,
(27) группа - CSQ,
(28) группа - CSNQQ1,
(29) группа - CF2SQ,
(30) группа - CF2OQ,
(31) группа - NQCONHQ1 или NQCONQ1Q2,
(г) - низший циклоалкил,
(д) - галоиднизший алкил,
(е) - гетероарил, незамещенный или замещенный остатками X5 и X6,
(ж) - бензил или замещенный бензил формулы
где
X5 и X6 имеют вышеуказанное значение,
(з) низший алкинил,
(и) низший алкенил,
(к) фенилнизшийалкенил формулы
где
X5 и X6 имеют вышеуказанные значения
(л) фенилнизшийалкинил формулы
где
X5 и X6 имеют вышеуказанные значения,
(м) группа 
, где R5 имеет то же значение, что и радикал R,
(н) группа 
, где R5 имеет то же значение, что и радикал R,
(о) группа 
, где R6 имеет то же значение, что и R5, при этом R5 и R6 имеет одинаковое или различное значение,
(п) группа 
, где R5 имеет то же значение, что и радикал R,
(р) группа 
, где R5 имеет то же значение, что и радикал R, а m означает 1 или 2,
(с) - группа (CH2)m-CR5, где R5 имеет то же значение, что и радикал R, а m имеет вышеуказанное значение,
(т) группа 
, где R и m имеют вышеуказанные значения,
(у) группа (CH2)m-NR5R6, где R5, R6 и m имеют вышеуказанные значения,
(ф) группа 
, где R5 и R6 имеют вышеуказанные значения,
X1, X2, X3 и X4 независимы и имеют значения радикала R или же значения радикала X5,
n - 0,1 или 2
R1 и R2 независимы и имеют значения радикала R за исключением того, что R не означает хлорфенил, дихлорфенил, трихлорфенил или хлорнитрофенил, или же
R1 и R2 вместе образуют циклическую группу формулы
где
X5 и X6 имеют вышеуказанные значения, а q означает 3 - 7,
и их фармацевтически приемлемые соли.
В [1] указывается, что карбоксамиды вышеприведенной общей формулы могут применяться для лечения воспалительных заболеваний и других заболеваний, в которых участвуют простагландин и лейкотриены. В частности, карбоксамиды тормозят циклооксигеназу и липоксигеназу.
В соответствии с примерами осуществления изобретения по [1] получают следующие соединения:
3-окси-5-хлор(или нитро или метоксикарбонил)-N-(3-хлорфенил)- бензо[b] тиофен-2-карбоксамид,
3-окси-5-хлор-N-[(3-хлорфенил)метил]-бензо[b]тиофен-2- карбоксамид,
3-окси-N-[(3-трифторметилфенил)метил]-бензо[b]тиофен-2- карбоксамид,
3-окси-N-(3-трифторметилфенил)-бензо[b]тиофен-2-карбоксамид, для которых и приводятся данные по их идентификации.
Данные по биологической активности приводятся для следующих соединений: N-(3-хлорфенил)-3-окси-5-(метилтио)бензо[b] тиофен-2- карбоксамид и 3-окси-5-(метилтио)-N-(фенилметил)бензо[b]тиофен-2- карбоксамид.
По приведенной выше информации, в [1] не описывается получение производных 3-алкилокси-, арилокси- или арилоалкилокси-бензо[b]тиофен-2- карбоксамида или их фармацевтически приемлемых солей, не исследуется их биологическая активность.
Объектом изобретения являются производные 3-алкилокси-, арилокси- или арилалкилокси-бензо[b]тиофен-2-карбоксамида общей формулы (I)
где
R1 - низший алкил, фенил или бензил,
R2 - водород, низший алкил, группа (CH2)mQ, где Q означает группу CO2R7, где R7 означает водород или низший алкил, а m - число 0 - 6, фенил, и тиофен, незамещенные или замещенные группой (CH2)mQ, где Q и m имеют вышеуказанные значения,
R3, R4, R5 и R6 независимы и означают водород, хлор, гидроксил, нитро, амино, низший алкил и низший алкокси,
и их фармацевтически приемлемые соли.
Предлагаемые соединения ингибируют адгезию лейкоцитов к стимулированным человеческим эндотелиальным клеткам и поэтому могут применяться для лечения воспалительных заболеваний.
Предлагаемые соединения проявляют существенно лучшую активность, чем известные 3-гидроксильные соединения.
Предпочтительными соединениями общей формулы (I) являются:
5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
5-хлор-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
5-метил-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
3-(1-метилэтокси)-5-нитробензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
7-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
3,5-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
5-метокси-3-(фенилметокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
5-метокси-3-(фенокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
5-окси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
6-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
4-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен- 2-ил]карбонил]амино]-бензойная кислота,
3-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен- 2-ил]карбонил]амино]-бензойная кислота,
сложный этиловый эфир 2-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен- 2-ил]карбонил]амино]-бензолуксусной кислоты,
2-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2-ил] карбонил] амино] - бензойная кислота,
сложный метиловый эфир 4-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]карбонил]амино]-бензолуксусной кислоты,
4-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2-ил] карбонил] амино] - бензолуксусная кислота,
сложный метиловый эфир 3-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]карбонил]амино]-бензолуксусной кислоты,
3-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2- ил] карбонил] амино]-бензолуксусная кислота,
сложный метиловый эфир 3-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]карбонил]амино]-валериановой кислоты,
5-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2- ил]карбонил]амино]-валериановая кислота,
3-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2- ил]карбонил]амино]-2-тиофенкарбоновая кислота,
5-метокси-N-метил-(3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
N-этил-(5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
5-метокси-3-(1-метилэтокси)-N-фенилбензо[b]-тиофен-2-карбоксамид,
5-метокси-3-(1-метилэтокси)-N-(фенилметил)-бензо[b] тиофен-2- карбоксамид,
5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид-1-оксид,
5-метокси-3-(1-метилэтокси)-бензо[b]тиофен-2-карбоксамид- 1,1'-диоксид,
3-(1,1-диметилэтокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
6-хлор-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
5-амино-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
сложный метиловый эфир 4-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]карбонил]амино-2]-адипиновой кислоты,
4-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2- ил]карбонил]амино]адипиновая кислота,
5-метокси-3-(1-метилэтокси)-N-(1-метилэтил)-бензо[b] тиофен- 2-карбоксамид,
сложный этиловый эфир 6-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]карбонил]амино]-3-пиридинкарбоновой кислоты,
6-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2-ил] карбонил]амино]- 3-пиридинкарбоновая кислота,
сложный этиловый эфир 2-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]карбонил]амино]-4-тиазолуксусной кислоты,
2-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2- ил]карбонил]амино]-4-тиазолуксусная кислота,
3-метокси-4-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2- ил]карбонил] амино]-бензойная кислота,
сложный метиловый эфир 2-окси-4-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2-ил]карбонил]амино]бензойной кислоты,
2-окси-4-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2- ил]карбонил]амино]бензойная кислота,
N-[1-(оксиметил)-1-метилэтил] -5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид,
N-этил-5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид- 1-оксид,
5-метокси-N-метил-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиофен-2-карбоксамид- 1-оксид,
5-метокси-3-(1-метилэтокси)-N-(фенилметил)бензо[b] тиофен-2- карбоксамид-1-оксид,
сложный метиловый эфир 1-оксида 3-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]карбонил]амино]бензолуксусной кислоты,
5-окси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид-1-оксид,
5-метил-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид-1-оксид,
5-метокси-3-феноксибензо[b]тиофен-2-карбоксамид-1-оксид,
5-метокси-3-(1-метилэтокси)-N-(1-метилэтокси)-бензо[b]тиофен- 2-карбоксамид-1-оксид,
3,5-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбоксамид-1-оксид,
и их фармацевтически приемлемые соли.
Под термином "фармацевтические соли" понимаются как кислотно-аддитивные соли, так и соли с основаниями.
Фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли соединения общей формулы (I) представляют собой соли, получаемые в результате взаимодействия с нетоксичными неорганическими кислотами, такими, как, например, хлористоводородная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, серная кислота, бромистоводородная кислота, йодистоводородная кислота, фосфорная кислота и т.п. кислота, а также соли, получаемые в результате взаимодействия с нетоксичными органическими кислотами, такими, как, например, алифатические моно- или дикарбоновые кислоты, замещенные фенилом алканкарбоновые кислоты, оксиалканкарбоновые кислоты, диалканкарбоновые кислоты, ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфокислоты и т.п. кислоты. Таким образом, солями являются, например, сульфаты, пиросульфаты, бисульфаты, сульфиты, бисульфиты, нитраты, фосфаты, моногидрогенфосфаты, и гидрогенфосфаты, метафосфаты, пирофосфаты, хлориды, бромиды, йодиды, ацетаты, пропионаты, каприлаты, изобутираты, оксалаты, малонаты, сукцинаты, субераты, себацаты, фумараты, малеаты, соли миндальной кислоты, бензоаты, хлорбензоаты, метилбензоаты, динитробензоаты, фталаты, бензолсульфонаты, толуолсульфонаты, фенилацетаты, цитраты, лактаты, малеаты, тартраты, метансульфонаты и т.п. Изобретение также охватывает соли с аминокислотами, такими, как, например, аргинаты и т. п., глюконаты, галактуронаты, N-метилглюкамин.
Кислотно-аддитивные соли основных соединений формулы (I) получают за счет взаимодействия свободного основания с достаточным количеством желаемой кислоты. Свободное основание можно снова получать за счет взаимодействия соли с основанием и последующего выделения свободного основания известными приемами. Свободное основание несколько отличается от соответствующей соли в части определенных физических свойств, таких, как, например, растворимость в полярных растворителях. Но в основном соли проявляют такую же биологическую активность, что и соответствующее свободное основание.
Фармацевтически приемлемые аддитивные соли с основанием образуютcя путем взаимодействия с неорганическими или органическими основаниями, такими, как, например, металлические основания или амины, такие, как, например, щелочные и щелочноземельные металлы, например, в виде гидроксидов, или органические амины. Примерами металлов, которые применяются в качестве катионов, являются натрий, калий, магний, кальций и т.п. металлы. Примерами подходящих аминов являются N, N'-дибензилметилендиамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, дициклогексиламин, этилендиамин, N-метилглюкамин и прокаин.
Аддитивные соли кислых соединений формулы (I) с основаниями получают путем взаимодействия свободной кислоты с достаточным количеством желаемого основания. Свободную кислоту можно снова получать путем взаимодействия соли с кислотой и последующего выделения свободной кислоты известными приемами. Свободная кислота несколько отличается от соответствующей соли в части определенных физических свойств, таких, как, например, растворимость в полярных растворителях. Но в основном соли проявляют такую же биологическую активность, что и соответствующая свободная кислота.
Некоторые соединения общей формулы (I) могут иметься как в несольватированных формах, так и в сольватированных формах, включая гидратированные формы. В общем сольватированные формы, включая гидратированные формы, проявляют такую же активность, что и несольватированные формы предлагаемых соединений. Поэтому они также охватываются изобретением.
Соединения общей формулы (I) можно получать известными методами.
Предлагаемые соединения, у которых R2 означает водород, предпочтительно получают из соответствующих бензо[b]тиофен-2-карбоновых кислот. Как видно на реакционной схеме 1, представленной в конце описания, бензо[b]тиофен-2-карбоновую кислоту сначала подвергают взаимодействию с агентом сочетания, предпочтительно 1,1'-карбонилдиимидазолом, в среде растворителя, такого, как, например, тетрагидрофуран или ацетонитрил. Другой метод заключается в том, что бензо[b]тиофен-2-карбоновую кислоту переводят в галоидангидрид путем взаимодействия с соответствующим реагентом, таким, как, например, тионилхлорид или предпочтительно оксалилхлорид, в среде растворителя, такого, как, например, хлористый метилен или тетрагидрофуран, в присутствии каталитического количества диметилформамида. Последующее взаимодействие с водным раствором гидроокиси аммония или газообразным аммиаком приводит к получению первичных бензо[b]тиофен-2-карбоксамидов.
Первичные амиды можно также получать путем взаимодействия соответствующего сложного эфира бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты с амидом лития в среде жидкого аммиака, в присутствии дополнительного растворителя, такого, как, например, тетрагидрофуран.
В результате взаимодействия с агентом окисления, предпочтительно перекисью водорода в среде уксусной кислоты, бензо[b]тиофен-2-карбоксамиды переводят в бензо[b]тиофен-2-карбоксамид-1-оксиды или бензо[b]тиофен-2-карбоксамид-1,1'-диоксиды в зависимости от режима окисления. Так, например, бензо[b] тиофен-2-карбоксамид-1-оксид далее окисляется до бензо[b]тиофен-2-карбоксамид-1,1'-диоксида путем повышения температуры или применения избытка агента окисления. Условия реакции по реакционной схеме 1 широко известны или могут определяться на основе аналогичных реакций, известных специалисту.
Вторичный бензо[b] тиофен-2-карбоксамид получают аналогичным образом, о чем свидетельствует реакционная схема 2, приведенная в конце описания. В данном случае промежуточный имидазолид или хлорангидрид подвергают взаимодействию с первичным амином в присутствии или отсутствии основания, такого, как, например, триэтиламин или 1,8-диазабицикло[5.4.0]-ундец-7-ен. Если амин применяют в виде гидрохлорида, то требуется дополнительное количество основания для получения свободного амина. И в данном случае получение 1-оксида или 1,1'-диоксида зависит от конкретного режима реакции окисления. Специалист в данной области может выбирать подходящие условия осуществления реакции окисления в каждом конкретном случае.
Реакционная схема 3, приведенная в конце описания, показывает получение вторичных бензо[b] тиофен-2-карбоксамидов, содержащих карбоксильную группу. Эти соединения получают через промежуточную стадию сложного эфира. Так же как и по реакционной схеме 2, бензо[b]тиофен-2-карбоновую кислоту активируют и затем подвергают взаимодействию с амином, который содержит соответствующий сложноэфирный остаток. Амин можно применять в виде гидрохлорида. Промежуточное соединение выделяют и сложноэфирную группу подвергают гидролизу, предпочтительно гидроокисью натрия в среде водного этанола.
Соединение вышеприведенной общей формулы (I), у которых один или несколько радикалов R3 - R6 означают гидроксильную группу, получают через промежуточное соединение содержащее подходящую защитную группу для гидроксила. На реакционной схеме 4, приведенной в конце описания, представлено получение 5-оксибензо[b] тиофен-2-карбоксамидов. Эти амиды получают из соответствующей кислоты, содержащей гидроксильную группу, защищенную простым бензиловым эфиром, который затем снимают, предпочтительно путем гидрирования. Возможно применение и других защитных групп, таких, как, например, силильные группы, которые затем снимают известными методами.
На реакционных схемах 5 и 6, приведенных в конце описания, представлены другие способы получения бензо[b]тиофен-2-карбоксамид-1-оксидов и бензо[b] тиофен-2-карбоксамид-1,1'-диоксидов. При этом бензо[b]тиофен- 2-карбоновую кислоту можно окислять до соответствующего 1-оксида при помощи транс-2-фенил-сульфонил-3-фенилоксазиридина в среде растворителя, такого, как, например, хлористый метилен или ацетон, или же соответствующего 1,1'-диоксида путем обработки перекисью водорода в среде уксусной кислоты. Бензо[b]тиофен-2-карбоновую кислоту превращают до желаемого амида через начальное образование натриевой соли и затем через хлорангидрид. В результате добавления аммиака получают первичные 2-карбоксамиды, а в результате добавления первичных аминов получают вторичные амиды.
Бензо[b] тиофен-2-карбоксамиды можно также окислять до соответствующих бензо[b] тиофен-2-карбоксамид-1-оксидов путем обработки либо транс-2-фенилсульфонил-3-фенилоксазеридином, либо двуокисью селена и перекисью водорода в среде растворителя, такого, как, например, метанол. Применение избытка двуокиси селена и перекиси водорода приводит к получению бензо[b]тиофен-2-карбоксамид-1,1'-диоксидов.
Получение прелагаемых соединений иллюстрируется следующими примерами.
Примеры 1-9. Первичные бензо[b]тиофен-2-карбоксамиды получают из соответствующей бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты следующим образом. К 1 ммоль соответствующей замещенной бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты в 10 мл сухого тетрагидрофурана добавляют 1,3 моль N,N-карбонилдимидазола. Получаемый раствор нагревают с обратным холодильником в течение 1 ч, после чего ему дают охлаждаться до комнатной температуры. Добавляют избыток водной гидроокиси аммония (2 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин, после чего реакционную смесь распределяют между этилацетатом и солевым раствором, органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют и сушат в вакууме. Сырой продукт очищают путем флэш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси гексана и этилацетата в соотношении 1 : 1. При этом получают соответствующих бензо[b]тиофен-2-карбоксамид аналитической чистоты.
Описанным образом получают следующие карбоксамиды:
Пример 1. 5-метокси-3-(1-метилэтокси)-бензо[b] тиофен-2- карбоксамид с точкой плавления 155-157oC. Выход 88%.
Пример 2. 3-(3-метилэтокси)-бензо[b]тиофен-2-карбосамид с точкой плавления 162-164oC. Выход 90%.
Пример 3. 5-хлор-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2- карбоксамид с точкой плавления 165-167oC. Выход 92%.
Пример 4. 5-метил-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2- карбоксамид с точкой плавления 153-154oC. Выход 94%.
Пример 5. 3-(1-метилэтокси)-5-нитробензо[b]тиофен-2- карбоксамид с точкой плавления 205-207oC. Выход 85%.
Пример 6. 7-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиофен-2- карбоксамид с точкой плавления 157-159oC. Выход 91%.
Пример 7. 3,5-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбоксамид с точкой плавления 184-185oC. Выход 70%.
Пример 8. 5-метокси-3-(фенилметокси)бензо[b] тиофен-2- карбоксамид с точкой плавления 149-151oC. Выход 72%.
Пример 9. 5-метокси-3-(фенокси)бензо[b] тиофен-2-карбоксамид с точкой плавления 197,5-198,5oC. Выход 84%.
При получении данного соединения соответствующую исходную кислоту обрабатывают не 1,1-карбонилдиимидазолом, а оксалилхлоридом и затем водной гидроокисью аммония.
Пример 10. 5-окси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен- 2-карбоксамид.
Смесь 120 мг (0,35 ммоль) 3-(1-метилэтокси)-5-(фенилметокси)- бензо[b] тиофен-2-карбоксамида, полученного вышеописанным образом, и 50 мг 20%-ного палладия на угле в 40 мл уксусной кислоты подвергают гидрированию в течение 72 ч, после чего катализатор удаляют фильтрацией и фильтрат сгущают в вакууме. Получаемый сырой продукт подвергают хроматографии с применением в качестве элюента смесей гексана и этилацетата при градиенте 1 : 1 oC 1 : 2. При этом получают 49,4 мг (56%) 5-окси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2- карбоксамида с точкой плавления 237-240oC (разл.).
Пример 11. 6-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2- карбоксамид.
74 мг (10 ммоль) лития порциями добавляют к имеющему температуру -78oC раствору каталитического количества нитрата железа (II) в 10 мл жидкого аммиака, после чего удаляют баню льда и ацетона с тем, чтобы реакционной смеси дать нагреваться до кипения. Когда серая окраска амида лития сохраняется в течение 10 мин, то медленно добавляют 2 мл свежедистиллированного тетрагидрофурана с последующим добавлением 200 мг (0,71 ммоль) раствора сложного метилового эфира 6-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты в 2 мл тетрагидрофурана. Аммиаку дают упариваться, после чего реакционный раствор разбавляют этилацетатом и последовательно промывают водной соляной кислотой, водой и солевым раствором. Получаемую органическую фазу сушат над фильтратом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. Получаемый кристаллический остаток суспендируют в смеси этилацетата и гексана в соотношении 1 : 9, фильтруют и сушат при температуре 50oC в вакууме. При этом получают 125 мг (66%) бесцветных кристаллов с точкой плавления 164-166oC.
Пример 12. 4-[[[5-метокси-3-(1-метилметокси)бензо[b]тиен- 2-ил]карбонил] амино]бензойная кислота.
К 353 мг (1,32 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиофен-2-карбоновой кислоты в 5 мл сухого тетрагидрофурана добавляют 140 мкл (140 ммоль) оксалилхлорида, после чего добавляют одну каплю диметилформамида. Получаемый раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 1ч и сгущают в вакууме. Получаемое твердое вещество порциями добавляют к имеющему температуру 0oC раствору 250 мг (1,65 ммоль) сложного метилового эфира 4-аминобензойной кислоты и 220 мкл (1,58 ммоль) триэтиламина в 10 мл тетрагидрофурана. Получаемую смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч и затем распределяют между этилацетатом и солевым раствором. Получаемый органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. Получаемый сырой продукт очищают путем флэш-хроматографии с применением в качестве элюента смечи гексана и этилацетата в соотношении 3 : 1. Получают 284 мг сложного метилового эфира 4-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2-ил]карбонил] амино]-бензойной кислоты с точкой плавления 138-142oC. 4 г этого сложного метилового эфира и 2 г 50%-ной окиси натрия в 100 мл 10%-ного водного метанола нагревают на паровой бане в течение 15 мин, после чего подают на лед и подкисляют 10%-ной соляной кислотой. Получаемую смолу экстрагируют 500 мл простого диэтилового эфира, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и сушат в вакууме. В результате обработки получаемого сырого твердого вещества простым трет.-бутилметиловым эфиром получают 2,5 г целевого продукта с точкой плавления 236-329oC (разл.).
Пример 13. 3-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2- ил]карбонил] амино]бензойная кислота.
Повторяют пример 12 с той лишь разницей, что применяют 7,0 (26 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиофен-2-карбоновой кислоты и 4,3 г (26 ммоль) сложного этилового эфира 3-аминобензойной кислоты. При этом получают 8,5 г (78%) промежуточного сложного эфира, который подвергают омылению с последующей перекристаллизацией из водного этанола. Получают 4,2 г (53%) целевого продукта с точкой плавления 197-200oC (разл.).
Пример 14. Сложный этиловый эфир 2-[[[5-метокси-3-(1- метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]карбонил]амино]бензолуксусной кислоты.
Повторяют пример 12 с той лишь разницей, что применяют 1,04 (3,9 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты и 0,67 г (4,1 ммоль) сложного этилового эфира 2-аминобензойной кислоты. При этом получают 0,81 г (51%) целевого продукта с точкой плавления 105-106oC.
Пример 15. 2-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2- ил]карбонил] амино]бензойная кислота.
В результате омыления 0,25 г сложного эфира 2-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2-ил]карбонил]амино]бензолуксусной кислоты получают 0,17 г (72%) целевого продукта с точкой плавления 239-242oC (разл.).
Пример 16. Сложный метиловый эфир 4-[[[5-метокси-3-(1- метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]-карбонил]амино]бензолуксусной кислоты.
К 500 мг (2,0 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты в 20 мл сухого тетрагидрофурана последовательно добавляют 262 мкл (3,0 ммоль) оксалилхлорида, одну каплю диметилформамида, 605 мг (3,0 ммоль) гидрохлорида сложного метилового эфира 4-аминофенилуксусной кислоты и 1,4 мл (10 ммоль) триэтиламина. Получаемую смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, после чего ее распределяют между этилацетатом и 1 н. соляной кислотой, получаемый органический слой последовательно промывают водой и солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. В результате очистки получаемого сырого продукта путем градиентной флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетат и гексана в соотношении 1:1 и этилацетата получают 692 мг (84%) целевого продукта с точкой плавления 111-113oC.
Пример 17. 4-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2- карбонил]амино]бензолуксусная кислота,
300 мг (0,73 ммоль) сложного метилового эфира 4-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2- ил] карбонил]амино]фенилуксусной кислоты и 91 мг водной гидроокиси лития в смеси 5 мл метанола и 2 мл воды нагревают с обратным холодильником в течение 2 ч, после чего реакционную смесь распределяют между этилацетатом и водной соляной кислотой, получаемый органический слой последовательно промывают водой и солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. В результате перекристаллизации из смеси этилацетата и гексана получают 247 мг (85%) целевого продукта с точкой плавления 195,5-196,5oC.
Пример 18. Сложный метиловый эфир 3-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2- ил]карбонил]амино]бензолуксусной кислоты.
Повторяют пример 16 с той лишь разницей, что применяют 500 мг (2,0 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]-тиофен-2-карбоновой кислоты и 605 мг (3,0 ммоль) гидрохлорида сложного метилового эфира 3-аминофенилуксусной кислоты. При этом получают 506 мг (61%) целевого продукта с точкой плавления 103-106oC.
Пример 19. 3-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2- ил]карбонил] амино]бензолуксусная кислота.
Повторяют пример 17 с той лишь разницей, что применяют 250 мг (0,60 ммоль) сложного метилового эфира 3-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)-бензо[b] тиен-2- ил] карбонил] амино]фенилуксусной кислоты и 76 мг водной гидроокиси лития. При этом получают 172 мг (72%) целевого продукта с точкой плавления 155-156oC.
Пример 20. Сложный метиловый эфир 5-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]карбонил]амино]валериановой кислоты.
Раствор 500 мг (2,0 ммоль) 5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты и 421 (2,60 ммоль) 1,1'-карбонилдиимидазола в 20 мл тетрагидрофурана нагревают с обратным холодильником в течение 1 ч, после чего охлаждают до температуры 0oC и последовательно добавляют 787 мг (4,7 ммоль) гидрохлорида сложного метилового эфира 5-аминовалериновой кислоты и 836 мкл (6,0 ммоль) триэтиламина. Реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение ночи, после чего ее распределяют между этилацетатом и 1 н. соляной кислотой, получаемый органический слой последовательно промывают 1 н. соляной кислотой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором. Затем органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. В результате очистки получаемого сырого продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетата и гексана в соотношении 1: 9 получают 530 мг (70%) целевого продукта с точкой плавления 82-84oC.
Пример 21. 5-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2- ил]карбонил] амино]валериановая кислота.
250 мг (0,66 ммоль) сложного метилового эфира 5-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2-ил] карбонил] амино] валериановой кислоты и 83 мг водной гидроокиси лития в смеси 5 мл метанола и 2 мл воды перемешивают при комнатной температуре в течение 7 ч, после чего реакционную смесь распределяют между этилацетатом и водной соляной кислотой, получаемый органический слой последовательно промывают водой и солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. В результате перекристаллизации из смеси этилацетата и гексана получают 205 мг (85%) целевого продукта с точкой плавления 135-137oC.
Пример 22. 3-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2- ил]карбонил] амино]-2-тиофен-карбоновая кислота.
К 7,0 г (26 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензол[b]фиофен-2- карбоновой кислоты в 100 мл сухого тетрагидрофурана последовательно добавляют 2,8 мл (32 ммоль) оксалилхлорида и 4 капли диметилформамида. Получаемый раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 45 мин, после чего сгущают в вакууме, получаемый остаток растворяют в сухом тетрагидрофуране и прикапывают к раствору 4,5 г (29 ммоль) сложного метилового эфира 3-амино-2-тиофенкарбоновой кислоты и 11 мл (79 ммоль) триэтиламина в 754 мл тетрагидрофурана. Получаемую смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, после чего добавляют 10%-ную соляную кислоту, экстрагируют этилацетатом и объединенные органические слои последовательно промывают 5%-ным водным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором. Получаемый органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. В результате перекристаллизации получаемого сырого продукта из трет.-бутилметилового эфира получают 4,5 г белого твердого вещества с точкой плавления 131-137oC. К 4,4 г (11 ммоль) полученного сложного эфира добавляют 4,0 г (50 ммоль) 50%-ного водного раствора гидроокиси натрия в 200 мл 10%-ного водного метанола и 40 мл тетрагидрофурана. Получаемую смесь нагревают на паровой бане в течение 2 ч, охлаждают и добавляют к 60 г льда. Получаемый в результате подкисления 10%-ной соляной кислотой остаток фильтруют и промывают водой. В результате перекристаллизации из 95%-ного этанола получают 3,0 г (71%) целевого продукта с точкой плавления 223-227oC (разл.).
Вторичные бензо[b] тиофен-2-карбоксамиды получают из соответствующей кислоты следующим образом.
Раствор 1 ммоль замещенной бензотиофен-2-карбоновой кислоты и 1,3 ммоль 1,1'-карбонилдиимидазола в сухом тетрагидрофуране нагревают с обратным холодильником в течение 1-2 ч. Реакционный раствор охлаждают до температуры 0oC, после чего добавляют избыточное количество первичного амина, реакционную смесь разбавляют этилацетатом, последовательно промывают водной хлористоводородной кислотой, водой и солевым раствором. Получаемую органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. Получаемый сырой продукт очищают путем колоночной хроматографии и/или перекристаллизации.
Пример 23. 5-метокси-N-метил-(3-(1-метилэтокси)бензо[b]-тиофен- 2-карбоксамид с точкой плавления 104-105oC. Выход 55%.
Пример 24. N-этил-(5-метокси-(3-(1-метилэтокси)бензо[b]-тиофен- 2-карбоксамид с точкой плавления 60-62oC. Выход 62%.
Пример 25. 5-метокси-3-(1-метилэтокси)-N-фенилбензо[b]-тиофен- 2-карбоксамид с точкой плавления 116-118oC. Выход 27%.
Пример 26. 5-метокси-3-(1-метилэтокси)-N-(фенилметил)бензо[b]- тиофен-2-карбоксамид с точкой плавления 85-86oC. Выход 81%.
Пример 27. 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]-тиофен-2- карбоксамид-1-оксид.
Способ А. Раствор 250 мг (0,94 ммоль) 5-метокси-3- (1-метилэтокси)-бензо[b] тиофен-2-карбоксамида и 4 мл (40 ммоль) 30%-ной перекиси водорода в 9,5 мл уксусной кислоты перемешивают при комнатной температуре в течение 8 ч, после чего реакционный раствор разбавляют водой и pH среды доводят до 7 с помощью водного раствора гидроокиси натрия и насыщенного раствора бикарбоната натрия. Получаемую органическую фазу экстрагируют этилацетатом, после чего ее последовательно промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. В результате двукратной кристаллизации получаемого остатка из смеси этилацетата и гексана получают 60 мг (23%) целевого 1-оксида с точкой плавления 163-164oC.
Способ Б. Раствор 30 мг (112 ммоль) 5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b] тиофен-2-карбоновой кислоты и 35 г (135 ммоль) (±)-транс-2-(фенилсульфонил)-3-фенилоксазиридина в 500 мл хлороформа перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч, после чего реакционную смесь фильтруют, получаемое твердое вещество два раза промывают смесью хлороформа и гексана в соотношении 1:1, после чего перемешивают при комнатной температуре в течение 8 ч, добавляют еще 17 г (66 ммоль) (±)-транс-2-(фенилсульфонил)-3-фенилоксазиридина и перемешивание продолжают в течение ночи. Получаемое твердое вещество собирают фильтрацией и фильтрат перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Остаток удаляют путем фильтрации, твердые компоненты объединяют и перекристаллизовывают из смеси этилацетата и метанола. При этом получают 16,6 г (53%) аналитически чистого 5-метокси-3-(1-метилэтокси)-бензо[b]тиофен-2- карбоновая кислота-1-оксида с точкой плавления 184-187oC. В результате дальнейшей перекристаллизации получают еще 4,3 г (14%) и 2,1 (7%) целевого 1-оксида.
326 (8,15 ммоль) гидрида натрия очищают от масла путем промывки, после чего добавляют к имеющему комнатную температуру раствору 2,30 г (8,1 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)-бензо[b] тиофен-2-карбоновая кислота-1-оксида в смеси 5,25 мл диметилформамида и 75 мл тетрагидрофурана. Получаемый после перемешивания при комнатной температуре в течение 90 мин густой остаток охлаждают до температуры -10oC, после чего добавляют 713 мкл (9,78 ммоль) тионилхлорида. Через 2 ч раствор охлаждают до температуры -78oC, в результате чего получают суспензию, под поверхностью которой подают газообразный аммиак в течение примерно 1 мин. Через 10 мин реакционную смесь вливают в смесь 6 н. соляной кислоты и солевого раствора. Получаемую органическую фазу последовательно промывают кислотным солевым раствором, насыщенным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором. Получаемый органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и сгущают в вакууме. В результате перекристаллизации получаемого твердого вещества из смеси этилацетата и гексана получают 1,44 (63%) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)-бензо[b]тиофен-2-карбоксамид- 1-оксида с точкой плавления 168,5-169,5oC.
Пример 28. 5-метокси-3-(1-метилэтокси)-бензо[b] тиофен- карбоксамид-1,1'-диоксид.
Раствор 250 мг (0,94 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)- бензо[b]тиофен-2-карбоксамида и 4 мл (40 ммоль) 30%-ной перекиси водорода в 9,5 мл уксусной кислоты нагревают с обратным холодильником в течение 6 ч, после чего реакционный раствор разбавляют этилацетатом, пять раз промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. В результате кристаллизации получаемого остатка из смеси этилацетата и гексана получают 67 мг (24%) целевого диоксида с точкой плавления 151-153oCo.
Пример 29. 3-(1,1-диметилэтокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2- карбоксамид.
Данное соединение с точкой плавления 180-181oC получают аналогично примерам 1 - 9. Оно имеет точку плавления 180-181oC. Выход 74%.
Пример 30. 6-хлор-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид.
Данное соединение с точкой плавления 176-178oC получают аналогично примерам 1 - 9. Оно имеет точку плавления 176-178oC. Выход 90%.
Пример 31. 5-амино-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2- карбоксиамид.
Смесь 104 мг (0,37 ммоль) 3-(1-метилэтокси)-5-нитробензо[b]тиофен-2-карбоксамида и 10 мг 5%-ного палладия на угле в 20 мл уксусной кислоты подвергают гидрированию в течение 90 мин, после чего катализатор удаляют фильтрацией и фильтрат сгущают в вакууме. Получаемый сырой продукт подвергают хроматографии с применением в качестве элюента смеси гексана этилацетата в соотношении 1: 2. При этом получают 20 мг (67%) 5-амино-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамида с точкой плавления 150-151oC.
Пример 32. Сложный метиловый эфир 4-[[[5-метокси- 3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]-карбонил]амино]адипиновой кислоты. Данное соединение с точкой плавления 35-36,5oC получают аналогично примеру 20. Выход 93%.
Пример 33. 4-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2- ил]карбонил] амино]адипиновая кислота.
Данное соединение с точкой плавления 101-102oC (разл.) получают аналогично примеру 21. Выход 77%.
Пример 34. 5-метокси-3-(1-метилэтокси)-N- (1-метилэтил)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид.
Данное соединение с точкой плавления 64,5-65,5oC получают аналогично примеру 23. Выход 76%.
Пример 35. Сложный этиловый эфир 6-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]-карбонил]амино-3-пиридинкарбоновой кислоты.
Повторяют пример 12 с той лишь разницей, что применяют 1,07 г (4 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты и 690 мг (4,2 ммоль) сложного этилового эфира 6-аминоникотиновой кислоты. При этом получают 90 мг (6%) целевого продукта с точкой плавления 131-133oC.
Пример 36. 6-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил] карбонил] амино-3-пиридинкарбоновая кислота.
В результате омыления 345 мг сложного этилового эфира 6-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиен-2-ил] карбонил] амино- 3-пиридинкарбоновой кислоты получают 94 мг (29%) целевого продукта с точкой плавления 242-247oC (разл.).
Пример 37. Сложный этиловый эфир 2-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]-карбонил]амино-4-тиазолуксусной кислоты.
Повторяют пример 2 с той же лишь разницей, что применяют 1,033 г (3,88 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты и 709 мг (4,37 ммоль) сложного этилового эфира 2-амино-4-тиазолуксусной кислоты. При этом получают 1,22 г (73%) целевого продукта с точкой плавления 191-192oC.
Пример 38. 2-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил] карбонил] амино]-4-тиазолуксусная кислота.
В результате омыления 521 мг сложного этилового эфира 2-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]карбонил]амино]-4- тиазолуксусной кислоты получают 135 мг (28%) целевого продукта с точкой плавления 189-191oC.
Пример 39. 3-метокси-4-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил] карбонил]амино]бензойная кислота.
Повторяют пример 12 с той лишь разницей, что применяют 230 мг (0,86 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты и 310 мг (1,38 ммоль) сложного метилового эфира 4-амино-3-метоксибензойной кислоты (получаемого этерификацией 4-амино-3-метоксибензойной кислоты метанолом в присутствии хлорангидрида уксусной кислоты). Получают 269 мг (73%) сложного метилового эфира 3-метокси-4-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)- бензо[b]тиен-2-ил] карбонил] амино] бензойной кислоты с точкой плавления 278oC (разл.). В результате омыления 100 мг этого сложного метилового эфира получают 48 мг (50%) целевого продукта с точкой плавления 278-281oC (разл.).
Пример 40. Сложный метиловый эфир 2-окси-4-[[[5-метокси-3- (1-метилэтокси)-бензо[b]-тиен-2-ил]карбонил]амино]бензойной кислоты.
Повторяют пример 12 с той лишь разницей, что применяют 200 мг (0,75 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2- карбоновой кислоты и 117 мг (0,70 ммоль) сложного метилового эфира 4-аминосалициловой кислоты (полученного этерификации 4-аминосалициловой кислоты в виде натриевой соли йодометаном). При этом получают 172 мг (59%) целевого продукта с точкой плавления 158,5-160oC.
Пример 41. 2-окси-4-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]- тиен-2-ил] карбонил]амино]бензойная кислота.
В результате омыления 100 мг сложного метилового эфира 2-окси-4-[[[5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиен-2- ил]карбонил]амино]бензойной кислоты получают 74 мг (76%) целевого продукта с точкой плавления 237-238oC.
Пример 42. N-[1-(оксиметил)-1-метилэтил] -5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид.
Повторяют пример 12 с той лишь разницей, что применяют 2,50 г (9,4 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты и 3,7 мл (38,6 ммоль) 2-амино-2-метилпропанола. При этом получают 3,2 г (100%) целевого продукта, который в результате перекристаллизации из смеси этилацетата и гексана имеет точку плавления 138-138,5oC.
Пример 43. N-этил-5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен- 2-карбоксамид-1-оксид.
Двуокись селена добавляют к имеющему комнатную температуру раствору 195 мг (0,66 ммоль) N-этил-5-метокси-3-(1-метилокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамида в 8 мл метанола, содержащего 530 мкл 30%-ной водной перекиси водорода. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, после чего ее подают в этилацетат и насыщенный бикарбонат натрия. Органическую фазу последовательно промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, 1 н. соляной кислотой и солевым раствором, после чего органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. В результате градиентной хроматографии получаемого твердого вещества с применением в качестве элюента смеси этилацетата и дихлорметана в соотношениях 1:9 - 1:1 получают 96 мг (47%) целевого продукта с точкой плавления 88-90oC.
Пример 44. 5-метокси-N-метил-3-(1-метилэтокси)бензо[b] -тиофен- 2-карбоксамид-1-оксид.
Повторяют пример 43 с той лишь разницей, что применяют 200 мг 5-метокси-N-метил-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамида. При этом получают 65 мг (30%) целевого продукта с точкой плавления 123-124oC.
Пример 45. 5-метокси-3-(1-метилэтокси)-N-(фенилметил)бензо[b]- тиофен-2-карбоксамид-1-оксид.
Повторяют пример 27 (способ Б) с той лишь разницей, что применяют 200 мг (0,71 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты в виде 1-оксида и 388 мкл (3,55 ммоль) бензиламина. При этом получают 137 мг (52%) целевого 1-оксида в качестве желтой смолы.
Пример 46. Сложный метиловый эфир 3-[[[5-метокси-3-(1- метилэтокси)бензо[b]тиен-2-ил]карбонил]амино]-бензолуксусной кислоты в виде 1-оксида.
Повторяют пример 27 (способ Б) с той лишь разницей, что применяют 700 мг (2,48 ммоль) 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты в виде 1-оксида и 1,90 г (12,4 ммоль) сложного метилового эфира 4-аминобейзоной кислоты. При этом получают 530 мг (51%) целевого 1-оксида с точкой плавления 162-162,5oC (разл.).
Пример 47. 5-оксо-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофенл-2-карбоксамид -1-оксид.
400 мг (1,5 ммоль) (±)-транс-2-(фенилсульфонил)-3-фенилоксазиридина добавляют к раствору 300 мг (1,2 ммоль) 5-окси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2- карбоксамида в 15 мл ацетона. Получаемую смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, после чего фильтруют и остаток промывают холодным ацетоном. Получают 200 мг (62%) целевого 1-оксида с точкой плавления 190oC (разл.).
Пример 48. 5-метил-3-(1-метилэтокси)бензо[b] тиофен-2- карбоксамид-1-оксид.
Повторяют пример 27 (способ Б) с той лишь разницей, что применяют 235 мг 5-метил-3-(1-метилэтокси)-бензо[b] тиофен-2- карбоновой кислоты. При этом получают 131 мг (53%) 5-метил-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты в виде 1-оксида с точкой плавления 184-187oC. Из 120 мг промежуточного 1-оксида получают 63 мг (52%) указанного 1-оксида с точкой плавления 175-177oC.
Пример 49. 5-метокси-3-феноксибензо[b]тиофен-2-карбоксамид-1- оксид.
Повторяют пример 27 (способ Б) с той лишь разницей, что применяют 500 мг 5-метокси-3-фенокси-бензо[b] тиофен-2-карбоновой кислоты. Получают 108 мг (21%) 5-метокси-3-фенокси-бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты в виде 1-оксида с точкой плавления 204-206oC. Из 100 мг промежуточного 1-оксида получают 58 мг (58%) указанного целевого 1-оксида с точкой плавления 191-193oC (разл. ).
Пример 50. 5-метокси-3-(1-метиэтокси)-N- (1-метилэтокси)бензо[b] тиофен-2-карбоксамид-1-оксид.
Повторяют пример 43 с той лишь разницей, что применяют 200 мг 5-метокси-3-(1-метилэтокси)-N-(1-метилэтокси)бензо[b] тиофен-2- карбоксамида. При этом получают 111 мг (53%) целевого продукта в качестве бесцветного масла.
Пример 51. 3,5-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбоксамид-1-оксид.
Повторяют пример 47 с той лишь разницей, что применяют 500 мг 3,5-диметокси-бензо[b] тиофен-2-карбоксамида. При этом получают 100 мг (19%) целевого продукта с точкой плавления 195oC (разл.).
Как уже указывалось выше, предлагаемые соединения обладают биологической активностью, в частности, они тормозят адгезию лейкоцитов к васкулярному эндотелю. Поэтому дополнительным объектом изобретения является фармацевтическая композиция с тормозящей адгезию лейкоцитов к васкулярному эндотелю активностью, содержащая по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и по меньшей мере одно активное вещество на основе производного бензо[b] тиофена вышеприведенной общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в эффективном количестве.
Само собой разумеется, что решение врачом о применении конкретного ингибитора адгезии клеток зависит, между прочим, от состояния заболевания и его серьезности, а также от возраста, пола и веса пациента.
Требуемое для достижения терапевтического эффекта количество соединения вышеприведенной общей формулы (I) или его фармакологически приемлемой соли зависит, конечно, не только от конкретного соединения и метода его дачи, но и от пациента и серьезности его заболевания. Подходящими дозами соединений формулы (I) или их фармакологически приемлемых солей являются 0,1 мкг - 500 мг/кг веса тела пациента, страдающего от воспаления. В случае системной дачи доза может составлять 0,5-500 мг/кг веса тела, а предпочтительно соединения формулы (I) или их соли дают 2 - 3 раза в дозах 0,5-50 мг/кг/веса тела в сутки. В случае местной дачи, например, на кожух или глаза, подходящей дозой являются 0,1 нг - 100 мкг/кг веса тела в сутки, в частности, примерно 0,1 мкг/кг веса тела в сутки.
В случае оральной дачи соединений формулы (I) или их физиологически приемлемых солей для лечения или профилактики артрита или воспаления подходящая доза может находиться в вышеприведенных пределах, однако предпочтительной дозой является 1-10 мг/кг веса тела, в частности 1-5 мг/кг веса тела.
Само собой разумеется, что врач может без труда определять то количество соединения формулы (I) или его соли, которое предотвращает или останавливает соответствующий воспалительный процесс. При этом в общем начинают с дачи относительно низких доз, которые впоследствии увеличивают до достижения максимального терапевтического эффекта.
Соединения формулы (I) или их соли могут даваться без общепринятого носителя. Но предпочтительно их дают в виде упомянутой фармацевтической композиции, которая, как уже указывалось, является дальнейшим объектом данного изобретения. Под вышеупомянутым фармацевтически приемлемым носителем понимается любое вещество, которое является приемлемым в том смысле, что оно является совместимым с другими ингредиентами и не оказывает отрицательного влияния на активное вещество или пациента.
Соединение общей формулы (I) или их соли могут содержаться в любой фармацевтической композиции, пригодной для оральной, легочной, офтальмологической, ректальной, парентеральной (включая подкожную, внутримышечную и внутривенную дачу), интраартикулярной, местной, назальной или трансбуккальной дачи. В объем изобретения также входят фармацевтические композиции продленного действия.
Фармацевтические композиции в общем представляют собой дозировочные единицы. Они приготовляются любыми методами, известными в области фармации. Любой метод включает контактирование активного вещества с одним или несколькими носителями. В общем композиции приготовляют путем равномерного и интенсивного смешивания активного вещества с жидким носителем или тонкоизмельченным твердым носителем или же жидким и твердым носителями, после чего при необходимости получаемой смеси придают желаемую форму.
Пригодная для оральной дачи композиция может представлять собой дискретную единицу, такую, как, например, капсулы, включая крахмальные капсулы, таблетки, которые содержат заданное количество активного вещества, порошок или гранулы, раствор или суспензия в водной или неводной жидкости, эмульсия типа масла в воде или воды в масле. Активное вещество можно также применять в виде шарика или пасты.
Полезность предлагаемых соединений в качестве ингибитора адгезии лейкоцитов к васкулярному эндотелю, т.е. 5-липоксигеназы и циклооксигеназы, и, следовательно, в качестве средства для лечения связанных с воспалительными процессами заболеваний или состояний подтверждается результатами нижепредставленных стандартных исследований.
Определение торможения адгезии нейтрофилов человека к стимулированным α -фактором опухолевого некроза, 1α -интерлейкином или липополисахаридом эндотелиальным клеткам, выделенным из пупочной вены человека, при применении 3-алкилокси-, арилокси- или арилалкилокси-бензо[b] тиофен-2-карбоксамидов вышеприведенной формулы (I).
Введение нейтрофилов. Нейтрофилы выделяют из обработанной антикоагулянтом венной крови, полученной от здоровых доноров в соответствии с методом по Ферранте и Тзонг (J. Immunol. Methods, 1978, 54, с. 389-393). Клеточные препараты содержат более 98% нейтрофилов.
Эндотелиальная клеточная культура. Выделенные из пупочной вены человека эндотелиальные клетки, полученные от фирмы Клонектикс, Сан Диего, шт. Калифорния, США, подавали в снабженные 24 углублениями пластинки фирмы Бектон Дикинсон, Линкольн Парк, Нью-Йорк, США в количестве 2 • 104 клеток на углубление. Клетки выращивали до получения конфлуэнтных монослоев в эндотелиальной базальной среде (среда ЭБМ вышеупомянутой фирмы Клонетикс), пополненное 5%-ной эмбриональной телячьей сыворотки, 10 нг/мл фактора роста эпидермиса, 1 мкг/мл гидрокортизона, 0,4% экстракта бычьего мозга, полученного от вышеуказанной фирмы Клонетикс, в атмосфере, содержащей 5% двуокиси углерода, при температуре 37oC.
Адгезия нейтрофилов. Нейтрофилы в количестве 30 • 106 маркировали 100 мк Cu Na51CrO4 в 2,0 мл свободного от кальциевых и магниевых ионов солевого раствора HBSS, продукта фирмы Гибко Лейбораторис, Гренд Айленд, Нью-Йорк, США, при температуре 37oC в течение 60 мин. Клетки два раза промывали в солевом растворе HBSS и суспендировали в непополненной среде ЭБМ.
Стимуляция выделенных из пупочной вены человека эндотелиальных клеток α -фактором опухолевого некроза, 1α -интерлейкином или липополисахаридом из E. coli 0111 : B4 в присутствии или отсутствии соединения вышеприведенной формулы (I) начинали за 4 ч до добавления нейтрофилов. В качестве среды применялась непополненная среда ЭБМ или же пополненная среда ЭБМ при проведении исследований с цитокинами или липолисахаридом. Данная обработка содействует максимальной экспрессии лейкоцитной адгезионной молекулы эндотелиальных клеток ELAM-1, а также экспрессии ICAM-1 (J. Immunol., 1986, 137, с. 1893; Proc. Natl. Acad. Sci. США, 1987, с. 9238). Непосредственно до добавления меченых 51Cr нейтрофилов к монослоям выделенные из пупочной вены человека эндотелиальных клеток культуры промывали 1 мл непополненной среды с тем, чтобы удалить раздражитель и/или активное вещество. Затем нейтрофилы добавляли в количестве 5 - 105 к эндотелиальным клеткам в 0,5 мл непополненной среды и инкубировали при температуре 37oC в течение 30 мин. Нейтрофилы, которые не прилипали к клеткам, удаляли путем аспирации. После дополнительной промывки прилипшие нейтрофилы лизировали 0,5 мл 1 н. гидроокиси аммония при температуре 37oC в течение ночи. Лизаты собирали и радиоактивность в каждом углублении определяли путем спектроскопии гамма-лучами.
Результаты опыта сведены в табл. 1 и 2.
Определение торможения адгезии нейтрофилов человека к стимулированным α -фактором опухолевого некроза, α -интерлейкином или липополисахаридом эндотелиальным клеткам, выделенным из пупочной вены человека, при применении 3-алкилокси-, арилокси- или арилалкилокси-бензо[b]тиофен-2-карбоксамидов вышеприведенной формулы (I) (по модифицированному методу).
В данном опыте нейтрофилы маркировали флюоресцентным кальцеином. Данный метод позволяет количественное определение адгезии нейтрофилов путем флюоресцентной спектроскопии.
Клеточная культура. Выделенные из пупочной вены человека эндотелиальные клетки подавали в снабженные 96 углублениями пластинки в количестве примерно 5 • 103 клеток/углубление и выращивали до конфлуэнтности в пополненной эндотелиальной базальной среде ЭБМ (10 нг/мл фактора роста эпидермиса, 1 мкг/мл гидрокортизона, 0,4% экстракта бычьего мозга, 5% эмбриональной бычьей сыворотки). За один день до начала опыта, типично через 3 дня после высеивания, питательную среду заменяли 0,2 мл/углубление пополненной среды ЭБМ.
Подготовка исследуемых соединений. Исследуемые соединения переводили в 1,0-мм растворы объемом 10 мл. Соединение сначала солюбилизировали в 0,1 мл диметилсульфоксида с последующим добавлением 9,9 мл пополненной среды ЭБМ. Затем препараты разбавляли в один прием до концентрации 66,6 мкмоль. Приемы по солюбилизации и разбавлению осуществляли в полистирольных емкостях.
Выделение нейтрофилов человека. Нейтрофилы человека выделяли из обработанной антикоагулянтом венной крови, получаемой от здоровых доноров в соответствии с методом по Ферранте и Тзонг. Полученные клеточные препараты содержат более 98% нейтрофилов.
Стимуляция эндотелиальных клеток, выделенных из пупочной вены человека. Рекомбинантный α -фактор опухолевого некроза человека, продукта фирмы Гензим, Бостон, шт. Массачусетс, США, смешивали с пополненной средой ЭБМ при концентрации 400 ед./мл. Кроме того, приготовляли запасной препарат α -фактора опухолевого некроза в фосфатсодержащем солевом буфере PBS, содержащем 0,1% альбумина бычьей сыворотки. Этот препарат, содержащий 20000 ед./мл хранили при температуре -70oC. Эндотелиальные клетки промывали 0,2 мл теплой непополненной среды ЭБМ и затем стимулировали 200 ед./мл α -фактора опухолевого некроза в присутствии 33,3 мкмоль исследуемого соединения при температуре 37oC в течение 4 ч. Затем добавляли 0,1 мл 400 ед./мл α -фактора опухолевого некроза и 0,1 мл 66,6 мкмоль исследуемого соединения, причем α -фактор и исследуемое соединение добавляли так медленно, чтобы не разрушался монослой эндотелиальных клеток. Каждое исследуемое соединение добавляли к культуре в 6 углублениях. На каждую пластинку также проводились контрольные опыты, т.е. опыт без стимуляции и опыт на стимулированных α -фактором опухолевого некроза клетках в отсутствии исследуемого соединения.
Мечение нейтрофилов. За час до добавления к эндотелиальным клеткам нейтрофилы в количестве 5 • 106/мл маркировали 5 мкмоль кальцеином в среде содержащего 0,45% альбумина бычьей сыворотки фосфатсодержащего солевого раствора HBSS при температуре 37oC в течение 30 мин. Запасной кальцеин приготовляли в виде 5-ммоль препарата в безводном диметилсульфоксиде, который хранили в обезвоженном состоянии при температуре -20oC. После инкубации клетки промывали два раза холодным фосфатсодержащим солевым раствором HBSS и повторно суспендировали в непополненной среде ЭБМ при конечной концентрации 1 • 106 клеток/мл.
Добавление нейтрофилов к эндотелиальным клеткам, выделенным из пупочной вены человека. После 4-часовой стимуляции и непосредственно до добавления нейтрофилов к монослою эндотелиальных клеток пластинки промывали 0,2 мл теплой непополненной среды ЭБМ с тем, чтобы удалить α -фактор опухолевого некроза и исследуемое соединение. Нейтрофилы в количестве 1 • 105 клеток медленно добавляли к каждому углублению и инкубировали при температуре 37oC в течение 30 мин. После инкубации пластинки промывали два раза 0,2 мл теплой непополненной среды ЭБМ с последующим добавлением 0,1 мл этой среды в целях сканирования пластинки.
Определение относительной флюоресценции. Относительную флюоресценцию определяли с помощью системы Миллипор Цитофлуор 2300 (возбуждение 480, эмиссия 530, чувствительность 4).
Расчеты. Опыт считали достоверным, если стимуляция α -фактором опухолевого некроза эндотелиальных клеток приводила к 300%-ному повышению адгезии нейтрофилов по сравнению с адгезией нейтрофилов к нестимулированным эндотелиальным клеткам. Результаты опыта выражали как %-ное торможение стимулированной α -фактором опухолевого некроза адгезии по следующему уравнению
Исследуемые соединения, которые проявляли тормозящую активность, равную 50% или больше, при концентрации 33,3 мкмоль повторно исследовали при концентрациях 33,3; 10,0; 3,3; 1,0 мкмоль соответственно с тем, чтобы определить концентрацию, которая обеспечивает 50%-ное торможение (концентрация КТ50), для чего использовали анализ линейной регрессии.
Результаты данного опыта сведены в табл. 2 (исследуемые соединения примеров 36-47) и в табл. 3 (исследуемые соединения примеров 45-53). Как уже указывалось выше, данные табл. 1 и 2, касающиеся активности исследуемых соединений примеров 1-35, представляют собой результаты вышеописанного первого опыта.
Одно из вышеуказанных соединений, 5-метокси-3- (1-метилэтокси)бензо[b] тиофен-2-карбоксамид (соединение примера 1), является высокоэффективным ингибитором односторонней реакции смешанных лимфоцитов человека. KT50 этого соединения составляет 0.3 мкмоль (n=2). Эта активность выявлена в следующем опыте.
Определение торможения односторонней реакции смешанных лимфоцитов человека 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамидом.
Выделение лимфоцитов. Обработанную гепарином периферическую кровь, полученную от здоровых доноров, собирали. Лимфоциты выделяли путем центрифугирования в градиенте плотности со скоростью 1200 • g при комнатной температуре в течение 20 мин (10 мл крови и 4 мл градиента Фикол-Гипак фирмы Фармация, Швеция, удельный вес 1,09 мл/мл). Лимфоциты (верхний слой) удаляли и три раза промывали фосфатсодержащим солевым раствором HBSS при центрифугировании со скоростью 300 • g в течение 10 мин. Жизнеспособность клеток определяли с применением трипан-синего. Клетки хранили на льду до добавления к пластинкам с питательной средой.
Питательная среда. Питательной средой являлась среда RPMI-1640, пополненная 2 ммоль L-глутамина, 100 ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 10 ммоль буфера HEPES и 10% эмбриональной телячьей сыворотки, инактивированной термообработкой при температуре 56oC в течение 30 мин.
Проведение опыта. Лимфоциты, которые применяли в качестве стимулятора, обрабатывали митомицином C в количестве 50 мкг/мл/107 клеток при температуре 37oC в течение 20 мин. Клетки дважды промывали фосфатсодержащим солевым раствором HBSS, который не содержал магниевых и кальциевых ионов. Клетки-продуценты антител в количестве 50 мкл при концентрации клеток 8•106/мл в 40% эмбриональной телячьей сыворотки подавали в углубления имеющей 96 углублений микротитровой пластинки, которые содержат равные объем и число аллогенных, обработанных митомицином C клеток-стимуляторов (в среде, не содержащей эмбриональной телячьей сыворотки). Пробы применяли в количестве по 50 мкл, так что каждое углубление содержало 2•106 клеток-продуцентов антител/мл (4•105 клеток-продуцентов антител/углубления) в среде, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки. В качестве контрольного опыта применяли нестимулированные клетки-продуценты антител в указанной среде, которая также содержала исследуемые соединения. За 6 ч до конца 6-дневной инкубации культуры обрабатывали 0,5 мкCu3H-тимидина. Клетки собирали, автоматически подсчитывали и подвергали стандартной жидкостной сцинтилляции.
Один из 3-алкокси-бензо[b]тиофен-2-карбоксамидов, а именно 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид-1-оксид (целевой продукт примера 28), проявлял активность в отношении вызываемого микобактериями отека лапы животного, представляющего собой подострую модель воспаления. Согласно этому опыту противовоспалительная активность данного соединения составляла 10,0 мг/кг (эта доза привела к 40%-ному торможению набухания отека). Этот опыт проводился следующим образом.
Определение торможения вызываемого микобактериями в лапе животного отека 5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2- карбоксамид-1-оксидом.
Микобактерии Mycobacterium butyricum (5 мг/мл) получали путем обработки ультразвуком в среде парафинового масла в течение 10 мин на ледяной бане. Отек вызывали путем впрыскивания 0,1 мл суспензии микобактерий в левую заднюю лапу слегка анастезированных крыс. Набухание обработанной таким образом задней лапы определяли через 1, 2 и 3 дня после впрыскивания микобактерий путем ртутной плетизмографии. Крысам давали исследуемое соединение в виде суспензии, содержащей 0,5% гидроксипропилметилцеллюлозы и 0,2% Твина 80 за 1 ч до впрыскивания микобактерий и через 1 и 2 дня после впрыскивания. Контрольным крысам давали в указанные моменты только смесь оксипропилметилцеллюлозы с Твином 80. Торможение набухания определяли путем сравнения изменения объема задней лапы, в которую вводили исследуемое соединение, с объемом задней лапы контрольных крыс.
Данные по торможению циклооксигеназы и 5-липоксигеназы предлагаемыми соединениями сведены в табл.4.
Данные табл.4 получали в следующих опытах.
Опыт по определению торможения 5-липоксигеназы и циклооксигеназы.
Клетки RBL-1 (клеточная линия базофильного лейкоза крыс, полученная от американской коллекции АТСС) выращивали в питательной среде EMEM, пополненной 12% эмбриональной бычьей сыворотки, в атмосфере, содержащей 5% двуокиси углерода, при температуре 37oC. Клетки собирали путем центрифугирования и промывали холодным фосфатсодержащим солевым раствором PBS с pH 7,4, содержащим 7,1 г хлористого натрия, 1,15 г динатрийфосфата, 0,2 г первичного ортофосфата калия и 0,2 г/л хлористого калия. Затем клетки суспендировали в указанном солевом растворе, содержащем 1,0 моль кальция в количестве 2•106/мл. Клетки инкубировали в присутствии или отсутствии исследуемого соединения, которое применяли в виде 1%-ного раствора в диметилсульфоксиде (диметилсульфоксид не влияет на метаболизм арахидоновой кислоты), при комнатной температуре в течение 10 мин, после чего добавляли 5 мкмоль кальциевого йонофора A 23187 и клетки инкубировали при температуре 37oC в течение 7 мин. Реакцию прекращали путем охлаждения льдом в течение 10 мин. Клетки отделяли путем центрифугирования и надосадочную жидкость при температуре -20oC. Аликвоты по 100 мкл подвергали анализу в отношении лейкотриена B4 и 2 α -фактора роста протромбина. Анализ проводили известным радиоиммунным методом.
Торможение 5-липоксигеназы определяли в надосадочной жидкости, получаемой в результате центрифугирования клеток RBL-1 со скоростью 20000•g. Среда, которую подвергали инкубации, содержала 5 об.% надосадочной жидкости в буфере с pH 6,8, состоящем из 10 ммоль BES и 10 ммоль PIPES и содержащем 1 ммоль этилентетраминуксусной кислоты, 0,75 ммоль хлористого кальция, 100 ммоль хлористого натрия и 1 ммоль АТФ. Диметилсульфоксид в количестве 2 об. %, содержащего исследуемое соединение (в контрольном опыте без исследуемого соединения), вместе с энзимом предварительно инкубировали при температуре 37oC в течение 20 мин перед началом катализуемого 5-липоксигеназой реакции, вызываемым добавлением 3,3 нмоль [14C] арахидоновой кислоты (55,8 мCu/ммоль, полученной от фирмы Нью Ингленд Нуклир, Бостон, шт. Массачусетс, США), растворенной в 5 мкл 0,28 об.% водной гидроокиси аммония. Дополнительно инкубировали при температуре 37oC в течение 20 мин, после чего реакцию прекращали путем добавления три объема метанола, содержащего 100 мкг трифенилфосфина. Затем подвергали высокоэффективной жидкостной хроматографии, причем продукты реакции 5-липоксигеназы определяли радиометрической детекцией. Все опыты проводили два раза, %-ное торможение определяли путем сравнения количества продуктов, образовавшихся с применением исследуемых соединений, со средним количеством продуктов, образовавшихся в контрольных опытах, т. е. без применения исследуемых соединений. Концентрацию торможения, обеспечивающую 50%-ное торможение (KT50), определяли путем линейной регрессии %-ного торможения образования 5-окси-эйкозатетраеновой кислоты против кривых log10-концентрации исследуемых соединений.
Соединения согласно изобретению относятся к категории среднетоксичных веществ.
Нижеследующие примеры иллюстрируют возможные лекарственные препараты, содержащие соединения согласно изобретению в качестве активного начала.
Пример 52. Суспензия для оральной аппликации.
Компоненты - Количество
5-метокси-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид - 500 мг
70%-ный раствор сорбита - 40 мл
Бензоат натрия - 150 мл
Сахарин - 10 мг
Вишневый аромат - 50 мг
Дистиллированная вода - До 100 мл
Суспензию готовят следующим образом. Раствор сорбита добавляют к 40 мл дистиллированной воды и в получаемом растворе суспендируют указанное активное начало. Затем при интенсивном перемешивании последовательно добавляют сахарин, бензоат натрия и аромат. Суспензию доводят до 100 мл добавлением дистиллированной воды. Получаемый при этом сироп содержит 5 мг/мл активного начала.
Пример 53. Капсулы из твердой желатины.
Компоненты - Количество, мг/капсулу
5-метокси-N-метил-3-(1-метилэтокси)бензо[b]тиофен-2-карбоксамид - 250
Порошковый крахмал - 200
Стеарат магния - 10
Всего - 460
Данный препарат готовят за счет того, что указанные компоненты смешиваются до гомогенного состояния и затем загружают в капсулы из твердой желатины.
Объектом изобретения являются соединения (I) и фармацевтическая композиция с тормозящей адгезию лейкоцитов к васкулярному эндотелию активность, содержащая по меньшей мере одно активное вещество на основе производного бензо/b/тиофена (I) и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель. 2 с. и 1 з.п. ф-лы, 4 табл.
где n = 0, 1 или 2;
R1 - низший алкил, фенил или бензил;
R2 - водород, низший алкил, группа (CH2)mQ, где Q группа CO2R7, где R7 - водород или низший алкил, а m = 0 - 6, фенил и тиофен, незамещенные или замещенные группой (CH2)mQ, где Q и m имеют указанные значения;
R3 - R6 независимы - водород, хлор, гидроксил, нитро, амино, низший алкил и низший алкокси,
или их фармацевтически приемлемые соли.
где n = 0, 1 или 2;
R1 - низший алкил, фенил или бензил;
R2 - водород, низший алкил, группа (CH2)mQ, где Q группа CO2R7, где R7 - водород или низший алкил, а m = 0 - 6, фенил и тиофен, незамещенные или замещенные группой (CH2)mQ, где Q и m имеют указанные значения;
R3 - R6 независимы - водород, хлор, гидроксил, нитро, амино, низший алкил и низший алкокси,
или его фармацевтически приемлемую соль в эффективном количестве.
| УСТРОЙСТВО ДЛЯ ПРАВКИ ШЛИФОВАЛЬНОГО КРУГА | 2001 |
|
RU2193961C2 |
| DE 3832846, C 07 D 333/70, 1990 | |||
| DE 3832848, C 07 D 333/70, 1990. | |||
