СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ В ВИДЕ ВОДНОГО ЭКСТРАКТА РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 1998 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицине, в частности к фитотерапии, и касается средства для лечения онкологических заболеваний, представляющего собой водный экстракт растительного сырья, и способа его получения.

Известен противораковый препарат, включающий экстракт растения Geranium, в состав которого входят также серная и борная кислоты, спирт и глицерин [1] .

Недостатком этого препарата является то, что он может быть рекомендован только для наружного применения.

Известен состав, рекомендованный в качестве вспомогательного средства, повышающего противоопухолевую активность, включающий в числе прочих водных (или водно-органических) экстрактов растений экстракты Astragalus, Paconia, Angelica [2].

Известен многокомпонентный состав противоопухолевого назначения, включающий в качестве прочих компонентов растения рода Plantago и Angelica [3].

Недостатком этих композиций является их многокомпонентность.

Задачей данного изобретения являлось изыскание средства для лечения онкологических заболеваний в виде водных экстрактов растительного сырья, представляющего достаточно простую композицию, и способа его получения.

Для решения этой задачи предложено средство, содержащее в виде водных экстрактов растения Calendula officinalis (свежая), Plantago lanceolata (сухой), Pentaphilloides fruticosa (сух) и Angelica sylvestris (сух) при следующем соотношении компонентов, г:
Calendula officinalis (свеж) - 200 - 360
Plantago lanceolata (сух) - 10 - 60
Pentaphilloides fruticosa (сух) - 10 - 60
Angelica sylvestris (сух) - 25 - 60
Вода - 3000
Применение отдельных компонентов предлагаемого средства в количествах меньших, чем нижний предел указанных диапазонов значений, снижает терапевтический эффект; верхние же пределы указанных диапазонов ограничены объемом воды, необходимым для получения водных экстрактов.

Известен способ получения экстракта растений путем обработки их водой или водно-органическим растворителем [4].

Известен также способ получения средства растительного происхождения, включающий экстракцию измельченной травы водой путем вымачивания (мацерации), фильтрацию и повторную мацерацию растительного сырья [5].

Этот метод представляется технологически сложным, т.к. требует двухстадийной мацерации.

Задачей предлагаемого изобретения являлась разработка технологически простого способа получения водного экстракта растений.

Для решения этой задачи предложено вымачивание растений (в виде травы, листьев или корней) в воде с последующим процеживанием и центрифугированием.

Биологическая активность растительных экстрактов проверялась путем определения антиоксидантной и цитотоксической активности in vitro и токсичности и противоопухолевой активности in vivo.

Антиоксидантную активность экстрактов определяли по способности образца ингибировать процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) в гомогенате печени мышей [6].

Цитотоксическую активность экстрактов in vitro определяли с использованием биотеста, основанного на ингибировании пролиферации перевивной культуры клеток аденокарциномы легкого человека А-549 по методу [7].

Оценку противоопухолевой активности экстрактов проводили на мышах BDF₁ с лейкемией, используя различные дозы препаратов. Критерием оценки служили: торможение роста опухоли (ТРО) и увеличение продолжительности жизни животных (УПЖ), средняя продолжительность жизни (СПЖ). Кроме того, оценивали влияние экстрактов на терапевтическую активность цитостатикацисдихлордиаминоплатины (ДДП) [8].

Нижеследующие примеры иллюстрируют предлагаемое изобретение.

Пример 1. Берут измельченные свежие листья Calendula officinalis (300 г), сухие листья Plantago lanceolata (25 г), побеги Pentaphilloides fruticosa (25 г) и корни Angelica sylvestris (60 г), помещают в стеклянный или эмалированный герметически закрывающийся сосуд, заливают 3 л воды и оставляют при температуре 28^oC в течение 8 дней при периодическом перемешивании. Полученный экстракт процеживают и центрифугируют (20^oC, 3000 об/мин, 40 мин). Осадок отбрасывают, а фильтрат используют.

Примеры 2-7. Экстракты растений получают по методике, описанной в примере 1, но меняют количество компонентов смеси и условия мацерации.

Составы приведены в табл. 1.

Определение антиоксидантной активности растительных экстрактов
Антиоксидантную активность изучали с использованием метода, основанного на способности исследуемого образца ингибировать процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) в гомогенате печени мышей [6]. Печень мышей (линий CBA, BDF-1 беспородных) гомогенизировали в стеклянном гомогенизаторе с последующим центрифугированием. Гомогенат печени вносили из расчета 5-6 мг белка на пробу. Объем пробы доводили до 0,5 мл раствором исследуемого на антиоксидантную активность образца. Пробы инкубировали в течение 3 ч при 37^oC. Концентрацию продуктов ПОЛ определяли по цветной реакции с тиобарбитуровой кислотой. За условную единицу активности исследуемого образца принимали количество антиоксиданта, необходимое для 50% ингибирования ПОЛ.

Результаты представлены в табл. 2.

Как видно из табл. 2, растительные экстракты 1, 2 и 3 обладают значительной антиоксидантной активностью в тесте in vitro, которая превышает таковую известных антиокислительных витаминов C и β-каротина). При хранении растительных экстрактов (табл. 2а) в течение 16-30 дней активность их практически не снижается.

Определение цитотоксической активности экстрактов in vitro
При постановке цитотоксического биотеста in vitro в лунки плоскодонного 96-луночного микропланшета (Sarstedt, США) вносили по 100 мкл суспензий клеток линии А-549 в концентрации 1•10⁵ клеток/мл с добавлением через 24 ч разведения образцов растительных экстрактов (2,2 мг/мл) в объеме 100 мкл/лунку. В качестве внутреннего лабораторного контроля использовали ДДП в диапазоне концентраций 40-1,25 мкг/мл в конечном разведении. Цитотоксическую активность образцов экстрактов и ДДП оценивали колориметрическим методом [7].

Биологически значимым эффектом считали ингибирование пролиферации клеток культуры А-549 более, чем на 50%.

Результаты приведены в табл. 3.

Исследованные образцы растительных экстрактов обладают цитиотоксической активностью в экспериментах in vitro, однако она существенно ниже таковой препарата ДДП, традиционно используемого как контрольный препарат в тесте ингибирования пролиферации in vitro (экстракт - 2,2 мг/мл, ДДП - 0,01 мг/мл обеспечивают 70-80% ингибирования).

Изучение переносимости образцов растительных экстрактов.

Изучение переносимости и безвредности образцов проводили на животных с L-1210, привитой подкожно. Образцы экстрактов вводили внутрь через зонд многократно в течение всей жизни животных, начиная с первого дня роста опухоли, в разовой дозе 10,8 мл/кг в объеме 0,2 мл или однократно внутрибрюшинно в объеме 1 мл. Контрольные мыши получали 0,9% раствором NaCl вместо растительных экстрактов.

Токсический эффект оценивали по изменению массы тела мышей, а также их внешнему виду (поведению, виду шерстного покрова, их двигательной активности). Для количественной оценки изменений двигательной активности вводили интегральный показатель: (a/b x 100%, где a - общее количество мышей с пониженной двигательной активностью с 1-го по 6-й дни роста опухоли, b - общее количество наблюдений с 1-го по 6-й дни роста опухоли (1 наблюдение - 1 живая мышь за день).

Результаты проведенных экспериментов показали, что растительные экстракты в разовой дозе 10,8 мл/кг не влияют на массу тела, поведение, вид шерстного покрова и подвижность мышей (рис.1).

Увеличение разовой дозы растительных экстрактов до 1 мл (максимально допустимый объем) при однократном внутрибрюшинном введении препаратов 1, 2, 3 не приводило к развитию видимых нарушений в поведении и внешнем виде животных и не вызывало их гибели, что указывает на отсутствие возможности определения величин ЛД₁₀, ЛД₅₀, ЛД₁₀₀ для данных растительных экстрактов.

Определение противоопухолевой активности образцов растительных экстрактов
Лимфоидную лейкемию L1210 прививали мышам-самцам BDF₁ в стерильном физиологическом растворе по 3•10⁶ клеток в объеме 0,2 мл. День прививки считали нулевым днем роста опухоли. Образцы вводили в дозах и режимах, указанных в таблицах 4 и 5.

Лечение животных начинали через 2-4 ч после прививки опухоли, контрольные животные получали физиологический раствор вместо испытуемых образцов экстрактов. Противоопухолевый эффект оценивали по торможению роста опухоли (ТРО), вычисленному по формуле
ТРО=[(V_контр-V_опыт/V_контр]• 100%
по средней продолжительности жизни (СПЖ), увеличению продолжительности жизни (УПЖ), вычисленному по формуле
УПЖ+[(СПЖ_опыт- СПЖ_контр)/СПЖ_контр]•100%.

Полученные данные обрабатывали по методу Фишера-Стьюдента с применением статистических программ. Различия считали достоверными при p <0,05.

Результаты воздействия растительных экстрактов представлены в таблице 4, из которой видно, что экстракты способны подавлять рост L1210 in vivo.

В табл. 5 представлены результаты влияния растительных экстрактов на лечебный эффект ДДП. Как видно из табл. 5, экстракты увеличивают терапевтический эффект цитостатика, приводя к возрастанию величины ТРО на 6,8-дни роста опухоли.

Как видно из табл. 2-5 и рисунка, препарат растительного происхождения оказывает самостоятельный противоопухолевый эффект, задерживая рост L-1210; не снижает лечебный эффект ДДП и уменьшает токсическое действие последнего. Таким образом, данный состав может быть перспективен для применения в клинической онкологии для включения в схему лечения онкологических больных.

Изобретение относится к средствам для лечения онкологических заболеваний в виде водных экстрактов растительного сырья и способам его получения. Средство содержит водные экстракты растения Calendula officinalis, Plantago lanceolata, Pentaphilloides fruticosa, Angelica sylvestris, полученные при следующем соотношении растений и воды, г: Calendula officinalis - 200 - 360 (свеж. ), Plantago lanceolata - 10 - 60 (сух.), Pentaphilloides fruticosa - 10 - 60 (сух.), Angelica sylvestris - 25 - 60 (сух), вода - 3000. Способ получения водных экстрактов указанных растений путем их вымачивания с последующим процеживанием и центрифугированием. Средство и способ позволяют упростить средство для лечения онкологических больных и способы их получения. 2 с.п. ф-лы. 1 ил., 5 табл.

1. Средство для лечения онкологических заболеваний в виде водного экстракта растительного сырья, отличающееся тем, что оно включает экстракты растений Calendula officinalis, Plantago lanceolata, Pentaphilloides fruticosa и Angelica sylvestris, полученные при следующем соотношении растений и воды, г:
Calendula officinalis свежее - 200 - 360
Plantado lanceolata сухое - 10 - 60
Pentaphilloides fruticosa сухое - 10 - 60
Angelica sylvestris сухое - 25 - 60
Вода - 3000
2. Способ приготовления средства для лечения онкологических заболеваний в виде водного экстракта растений, отличающийся тем, что вымачивают в воде растения Calenlula officinalis, Plantago lanceolata, Pentaphilloides fruticosa и Angelica sylvestris с последующим процеживанием и центрифугированием.