СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЧАСТОЙ ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА С МИНИМАЛЬНОЙ МОЗГОВОЙ ДИСФУНКЦИЕЙ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/53 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и позволяет прогнозировать частую заболеваемость ОРЗ у детей раннего возраста (с 1 до 3 лет) с минимальной мозговой дисфункцией.

Актуальность разработки заявляемого способа определяется высокой распространенностью в настоящее время у детей перинатальной патологии ЦНС и таких ее последствий после 1-го года жизни как минимальная мозговая дисфункция (ММД) по разным авторам составляющая от 10 до 25% [3, 6, 10, 11]. В структуре заболеваний у детей указанного возраста ведущее место занимают острые респираторные заболевания вирусной этиологии, составляющие до 70% всех острых заболеваний [5]. Установлено, что заболеваемость ОРЗ у детей с ММД в 1,5 раза выше, чем у детей без этого синдрома [9, 10].

Известен способ прогнозирования частой инфекционной заболеваемости у детей путем определения IgA и IgG в слюне методом радиальной иммунодиффузии и выявления там же активности лизоцима. При измерении отношения содержания IgG к IgA больше 0,6 и снижение лизоцимной активности ниже 40,0% прогнозируют частые инфекционные заболевания [1].

Недостатки способа:
1) метод определения содержания IgA и IgG субъективен, так как основан на визуальной оценке диаметра кольца преципитации;
2) в методе используются показатели снижения лизоцимной активности слюны, относящиеся к неспецифическим факторам местной защиты, состояние которой зависит от многих факторов;
3) частая заболеваемость прогнозируется у детей без указания возраста и без учета какой-либо патологии ЦНС;
4) не указывается точность прогноза частой заболеваемости у детей.

Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ прогнозирования частой заболеваемости у детей до 1-го года путем определения в пуповинной крови относительного содержания лимфоцитов и нейтрофилов с рецепторами к эритроцитам барана (Е-РОЛ и Е-РОН) и к С3 компоненту комплемента (ЕАС-РОЛ и ЕАС-РОН) методом розеткообразования [2].

Для прогнозирования авторами предлагаются следующие интервалы показателей:
Е-РОЛ ≤ 45% - Е АС-РОН ≤ 20%
Е-РОН ≤ 25% - Е АС-РОЛ ≤ 24%
Е-РОН ≤ 25% - Е АС-РОН ≤ 20%
При попадании индивидуальных значений, указанных показателей в один интервал, точность прогноза составляет 82,2%; при попадании в два интервала - 89,3%; при попадании в три интервала - 96,6%.

Недостатки способа:
1) при выполнении методики розеткообразования используются нестандартизованные реактивы: эритроциты барана, антисыворотка кролика и эритроциты быка;
2) известны возрастные изменения иммунного статуса детей [7, 12], которые не позволяют использовать критерии, предложенные в способе-прототипе, для прогнозирования частой заболеваемости у детей раннего возраста с ММД;
3) оценка результатов метода розеткообразования осуществляется визуально при световом микроскопировании, что не исключает субъективный компонент.

Указанные недостатки могут быть устранены в предлагаемом способе.

Цель заявляемого способа - прогноз частой заболеваемости у детей раннего возраста (с 1 года до 3 лет) с минимальной мозговой дисфункцией.

Указанная цель достигается путем определения держания CD72+лимфоцитов в периферической венозной крови детей с ММД после 1 года до 3 лет, и при повышении уровня CD72+клеток более 20,31% прогнозируются частые ОРЗ с точностью 78,5%. Прогноз действителен до 3-летнего возраста.

Новизна способа:
Возможность прогнозирования частых ОРЗ по определению содержания CD72+лимфоцитов у детей 1-3 лет с ММД установлено впервые.

Ранее молекулы CD72 использовались в качестве маркеров для определения содержания зрелых B-лимфоцитов, которые относятся к наиболее важным клеточным элементам иммунной системы, предназначенным для реализации гуморального иммунитета. Недостаток B-клеток ведет к тяжелым иммунодефицитным состояниям [8, 13] . Ранее [4] установлено, что у детей со сниженными показателями B-звена иммунитета на первом году жизни, чаще сохраняются остаточные явления энцефалопатии в один год и отмечается более высокая заболеваемость ОРВИ.

Существенные признаки способа
Установлен нормативный параметр содержания CD72+клеток в периферической крови у детей после 1 года до 3 лет с ММД, равный 20,31%, и при изменении содержания CD72+клеток выше этого значения прогнозируется частая заболеваемость ОРЗ у детей.

Способ осуществляется следующим образом
1 мл крови из локтевой вены ребенка забирают в пробирку, содержащую 25 единиц гепарина, добавляют 1 мл среды 199 и подслаивают 1 мл фиколл-верографина с градиентом плотности 1,078. Клеточную фракцию лимфоцитов получают стандартным методом скоростного центрифугирования при 1500 об/мин в течение 10 минут.

Обработку клеток моноклональными антителами осуществляют стандартным методом, рекомендованным НПЦ МедБиоСпектр, широко использующимся в иммунологической и аллергологической службе [13]: 400000-500000 клеток, выделенных в градиенте плотности фиколл-верографина, инкубируют в пробирке с 20 мкл моноклональных антител CD72+меченных FITC в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего клетки отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора, центрифугируя при 1500 об/мин в течение 2 минут. Супернатант тщательно удаляют, а клеточный осадок суспендируют в 500 мкл физиологического раствора. Измерения процента CD72+клеток осуществляют методом проточной цитофлюорометрии или с применением люминисцентного микроскопа. Оценка результатов производится количественно, в %.

Для объективизации способа прогнозирования параллельно с его применением проводилось клиническое наблюдение и обследование детей, что подтвердило прогноз. Способ может быть использован в условиях детских поликлиник, диагностических центров, стационаров.

Существо способа поясняется следующими примерами:
Пример 1
Ребенок А 1 г. 7 мес. родился от второй беременности, протекавшей на фоне хронического пиелонефрита у матери, роды своевременные. Оценка по шкале Апгар при рождении 7 баллов. С рождения до 1 года наблюдался у невропатолога с диагнозом: перинатальная энцефалопатия, гипертензионно-гидроцефальный синдром. В возрасте 2-х лет поставлен диагноз ММД, гиперактивная форма, при иммунологическом обследовании в анализе крови содержание CD72+клеток составило 26,4%. Прогнозировалась частая заболеваемость. В течение 2-го года жизни переболел ОРЗ 5 раз, на 3-м году жизни - ОРВИ - 5 раз и коревой краснухой. Прогноз подтвердился.

Пример 2
Ребенок Б 1 г. 3 мес. родился от первой беременности, протекавшей с осложнениями: гестоз первой половины беременности, угроза прерывания беременности, ОРЗ в 27 и 34 нед. Родился в срок, оценка по шкале Апгар 8 баллов. С рождения до 1 года наблюдался невропатологом с диагнозом: перинатальная энцефалопатия, синдром внутричерепной гипертензии. После 1 года диагностирована минимальная мозговая дисфункция, гиперактивная форма. В анализе крови показатели CD72+клеток составили 30,5%. Прогнозирована частая заболеваемость. При последующем наблюдении на втором году жизни болел 6 раз ОРЗ, на 3-ем году болел 5 раз. Прогноз подтвердился.

Пример 3
Ребенок В 1 г. 11 мес. родился от 2 беременности, протекавшей с осложнениями: в первой половине - анемия, во 2-ой половине - патология плаценты. В родах слабость потуг. У ребенка диагноз при рождении: постгипоксическая энцефалопатия, гипертензионный синдром. В 1 г. 11 мес. диагностирована ММД, гиперактивная форма. В анализе крови содержание CD72+клеток - 13,9%. Частые ОРЗ не прогнозировались. В последующем на 2-м и 3-ем году жизни болел ОРВИ по 1 разу. Прогноз подтвердился.

Заявляемым способом обследовано 28 детей, результаты исследований сведены в таблицу N 1.

Преимущества способа
1) При однократном обследовании прогноз распространяется до 3-летнего возраста.

2) Возможность прогнозировать частую заболеваемость у детей раннего возраста с минимальной мозговой дисфункцией, с точностью 78,5%.

3) Заявляемый способ требует меньших затрат времени (1 час 40 мин.)
Источники информации
1. А. с. N 1332229. Способ прогнозирования частых инфекционных заболеваний у детей/ Дорофейчук Е.П., Салина И.В. и др.// ОБ "Открытия. Изобретения" - 1987. N 31. - С. 170.

2. А.с. N 1777081. Способ прогнозирования частой заболеваемости у детей 1-го года жизни/Копилова Е.Б., Сотникова Н.Ю., Шиляев Р.Р.//ОБ "Открытия. Изобретения". - 1992. - N 43. - С. 121.

3. Астапов В.М. Введение в дефектологию с основами нейро- и патопсихологии. - М., 1994. - 214 с.

4. Беликова М. Э. Становление иммунного статуса на первом году жизни у детей с перинатальными повреждениями ЦНС: Автореф. дисс. канд. мед. наук. - Иваново, 1996.

5. Гребешева И.И. Организация медицинской помощи детям в дошкольных учреждениях. - М., 1984, - С. 165.

6. Журба Л.Т., Мастюкова Е.М.//Минимальная мозговая дисфункция у детей/ Обзорная информация ВНИИМИ. - М., 1978.

7. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике. - М. , 1990. - 223 с.

8. Мазурин А. В. , Воронцов И.М. Пропедевтика детских болезней. - М., 1978. - 237 с.

9. Мамедова М.М., Насирова Ф.Н., Кулиева Д.А., Ибрагимова С.А. Иммунологические исследования у детей с перинатальным поражением ЦНС в возрастном аспекте//Вопросы неврологии: Темат. сб.научн.тр. - Баку, 1988. - С. 89-92.

10. Тржесоглава З. //Легкая дисфункция мозга в детском возрасте. - М., 1986. - 256 с.

11. Трошин В. М., Радаев А.М., Халецкая О.В., Радаева Г.М. Клинические варианты минимальной мозговой дисфункции у детей дошкольного возраста//Педиатрия. - 1994. - N 2. - С. 72-75.

12. Усов И. Н. Здоровый ребенок//Справочник педиатра. - Минск. - 1994, 445 с.

13. Федосеева В.Н., Порядин Г.В., Ковальчук Л.В., Чередеев А.Н., Коган В.Ю. Руководство по иммунологическим и аллергологическим методам гигиенических исследований. - М., 1993. - 320 с.

Способ может быть использован в медицине, а именно в педиатрии. Из локтевой вены ребенка забирают в пробирку 1 мл крови, стандартным методом получают клеточную фракцию лимфоцитов и определяют содержание СД72 + лимфоцитов. При повышении их более 20,31% прогнозируют частые острые респираторные заболевания в возрасте ребенка до трех лет. Способ более экономичен, позволяет прогнозировать и проводить раннюю профилактику частых ОРЗ у детей раннего возраста, а также снизить их заболеваемость. Заявляемый способ требует меньших затрат времени. 1 табл.

Способ прогнозирования частой заболеваемости у детей раннего возраста по исследованию периферической крови, отличающийся тем, что у детей после 1 года с минимальной мозговой дисфункцией определяют содержание СД72 + лимфоцитов и при повышении их более 20,31% прогнозируют частые острые респираторные заболевания до 3 лет.