СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ СУХОЙ ВАКЦИНЫ ПРЕИМУЩЕСТВЕННО ПРОТИВ БОЛЕЗНИ НЬЮКАСЛА Российский патент 1998 года по МПК A61K39/17 

Изобретение относится к вакцинным препаратам в виде порошка, а более конкретно к способам получения порошкообразных ветеринарных препаратов, например вирусной вакцины против псевдочумы птиц.

Уровень техники
Известен способ получения порошкообразных ветеринарных препаратов, а именно против псевдочумы птиц (см. авт свид. СССР N 143200, A 61 K 39/17, 1960), согласно которому вируссодержащую суспензию с биологическим стабилизатором (обезжиренное молоко) подвергают высушиванию. Сухой препарат помещают в ампулы и запаивают их для последующего применения, где не предусмотрено предварительного измельчения биопрепарата.

Другим способом получения порошкообразного ветеринарного препарата (см. авт. свид. N 826584, A 61 K 39/17, 1979) является способ, в котором предусмотрено помимо обезжиренного молока введение в кэстраэмбриональную жидкость из штамма Ла-Сота антибиотиков (пенициллин и стрептомицин), придающих препарату сыпучесть. Достичь такого состояния порошка с помощью указанных добавок практически невозможно, тем более сохранить сыпучесть во времени из-за наличия процесса агрегации частиц.

Технология изготовления препаратов, получаемых вышеперечисленными способами, не предусматривает использование их в сухом состоянии.

Имеющиеся в настоящее время три вакцины из лентогенных штаммов (Ла-Сота, Бор-74, В-Прима) применяют, как правило, в жидком состоянии, что не позволяет осуществлять ими массовые прививки интраназально. Кроме того, при переводе в аэрозоль из жидкого состояния имеют место потери биологической активности.

Известен способ получения порошкообразных ветеринарных препаратов, согласно которому из исходного препарата получают гранулы, которые затем опудривают стабилизатором, используя для этих целей аэросил (см. авт. свид. 1437023, A 61 K 9/20, 1988).

Недостатком этого способа при механическом опудривании является неполное покрытие гранул частицами стабилизатора. Другим известным способом получения сухих препаратов является способ, по которому в диспергируемую смесь компонентов вводят в качестве стабилизатора 4,5 - 5,0% аэросила (авт. свид. N 1507392, A 61 K 9/14, 1989). Этому способу свойственен тот же недостаток, что и у вышеприведенного.

Во всех указанных способах получения сухих ветеринарных препаратов процесс агрегации замедлен на некоторое время за счет аэросила, но полностью не устранен. Связано это с тем, что диспергирование порошка в присутствии аэросила осуществляется механическим путем, при котором частицы аэросила не покрывают полностью поверхность частиц порошка.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ получения порошкообразных лекарственных препаратов, включающий диспергирование исходного продукта истиранием и введение в качестве физического стабилизатора аэросила (Езерский М.Л. Хим. фарм.Ж., 1970, N 7, с. 54-56).

Добавление аэросила позволяет сохранить сыпучесть препарата в течение двух недель и предотвратить химические изменения исходного продукта. К недостаткам способа следует отнести также то, что механическое истирание компонентов смеси в присутствии аэросила не обеспечивает образование сплошного слоя вокруг частицы исходного продукта, так как при механическом истирании контакт частиц аэросила с образующимися частицами ветеринарного препарата является точечным из-за статического состояния частиц. Отсутствие сплошного покрытия частиц приводит к снижению срока хранения.

Кроме того, при механическом диспергировании имеет место образование частиц, хотя их количество и незначительно, малых размеров, вследствие чего возрастает удельная свободная поверхность, а значит и свободная энергия, которая и является причиной агрегации.

Цель изобретения - повышение агрегативной устойчивости и универсальности при использовании ветпрепарата.

Поставленная цель достигается тем, что в высушенный исходный препарат на стадии диспергирования вводят стабилизатор, в качестве которого используют гидрофобный аэросил с удельной поверхностью 300-380 м²/г в количестве 1,5 - 2,0% от массы исходного продукта, а стереопротекцию проводят при диспергировании в процессе вибрации при 3500 - 5000 об/мин в течение 1-2 минут.

Аэросил представляет собой безводный порошок кремния диоксида с высокой удельной поверхностью, который получают химическим осаждением из газовой фазы путем сжигания паров SiCl₄ в смеси с H₂ и O₂ (см. Химическая энциклопедия. Под ред. Кнунянц, Из-во Сов. энциклопедия, М., 1990, с. 516-518).

Для ликвидации процесса агрегации частиц малых размеров на этапе их образования новой поверхности при диспергировании вибрацией, когда образующиеся частицы ветеринарного препарата, находясь во взвешенном динамическом состоянии вместе с частицами аэросила, позволили полностью покрыть частицы препарата и тем самым погасить поверхностную энергию, а значит не дать им возможность агрегатироваться в процессе их образования.

Полное покрытие частиц малых размеров при диспергировании вибрацией не дает возможность им агрегатироваться также и в процессе хранения препарата. Количество аэросила с удельной поверхностью 300-380 м²•г^-1 рассчитывают путем стериохимического соотношения поверхностей аэросила и препарата.

При расчете необходимо исходить из того, что контакт шарообразной частицы аэросила с частицей препарата составляет лишь четвертую часть поверхности частицы аэросила.

Пример. Если поверхность аэросила составляет 380 м²• г^-1, а поверхность препарата равна 1,6 м² • г^-1, тогда имеем: 95 м² - 1 г аэросила, 1,6 м² - Х г аэросила, Х = 0,016 г или 1,6%.

Следовательно, аэросила, удельная поверхность которого равна 380 м² • г^-1, для полного покрытия поверхности препарата необходимо брать 1,6%. В случае, если поверхность аэросила равна 300 м² • г^-1, то потребуется 2% аэросила. Поэтому в экспериментальных исследованиях количество аэросила составляло в пределах 1,5 - 2,0%. Стабилизирующая роль аэросила была оценена при изготовлении вирусного препарата из штамма Ла-Сота и его длительном хранении. Результаты исследований сведены в табл. 1.

Из данных табл. 1 следует, что введение в сухой ветпрепарат гидрофобного аэросила в количестве 1,5 - 2,0% существенно повышает агрегативную устойчивость препарата. Содержание частиц размером 1-25 мкм после диспергирования составляет 95,1% против 61,4% для препарата, который диспергировали без аэросила. На этапе хранения препарат с аэросилом в сравнении с препаратом без аэросила практически остается с неизменной физической структурой. Высокая дезагрегативная эффективность аэросила достигается тем, что в процессе диспергирования образующие частицы препарата, находясь в динамическом состоянии, полностью блокируются (осуществляется стереопротекция) частицами аэросила, что не дает возможности частицам препарата агрегировать, так как их поверхностная энергия значительно понижена.

По-видимому, при данной технологии имеет место образование физической капсулы, которая обеспечивает не только постоянство физической структуры препарата, но и его биологическую устойчивость, о чем свидетельствуют исследования по инактивации вирус-вакцины из штамма Ла-Сота (табл. 2,3).

Данные табл. 2, 3 показывают, что вакцинный препарат из штамма Ла-Сота, полученный по новой технологии, обладает высокой биологической стабильностью в процессе приготовления, хранения при температуре 4±2^oС и аэрозолировании. Хранение при более высокой температуре (37^oC) в течение 7 суток также не приводит к инактивации препарата.

Физическая и биологическая резистентность сухой вирусвакцины из штамма Ла-Сота дали основание провести комплексные исследования по оценке ее эффективности при иммунизации кур и цыплят в условиях лаборатории, а также в условиях промышленного птицеводства.

Результаты исследований, полученные в условиях лаборатории, представлены в табл. 4, 5. Из представленных в табл. 4, 5 данных следует, что сухая вирусвакцина из штамма "Ла-Сота" независимо от метода ее введения птицам обладает высокой антигенной активностью. Так, при интраназальном способе введения при дозе 6,0 lg ЭИД₅₀/гол напряженность иммунитета составляет 100% при титре антител в РТГА 7,0 log₂, при аэрозольном способе для 100% эффекта достаточно 1600 ЭИД₅₀/гол, при внутримышечном введении доза вакцины на одного цыпленка для достижения 100% иммунитета составляет 5,0 lg ЭИД₅₀ при титре антител в РТГА 6,0 log₂ (табл. 4). Аналогичные результаты (табл. 5) были получены при новом способе применения вакцины (совместно с кормом).

Подобные исследования были проведены на фермерских хозяйствах Австралии и Малайзии, где вакцина от болезни Ньюкасла вводилась цыплятам с пищевой гранулой. Эффективность вакцины при этом составляла от 55 до 65% (I.AINI, A. IBRAHIM. Reseurch in Veterinary V.49, N 2, 1990, p. 216-219).

Универсальность разработанной вакцины при ее использовании дала возможность присвоить сухой вирусвакцине против Ньюкаслской болезни из штамма Ла-Сота наименование "Унивак-НБ".

Исследования вакцины "Унивак-НБ" в условиях промышленного птицеводства также показали ее высокую эффективность. Об этом свидетельствует акт комиссионных испытаний вакцины на базе Ковровской птицефабрики Владимирской области в соответствии с утвержденной Главным ветеринарным управлением МСХ РФ программой и постановлением по применению препарата, а также объединенный протокол серийных испытаний опытных партий вакцины "Унивак-НБ", проведенных назначенной Департаментом ветеринарии комиссией на базах птицеводческих хозяйств Псковской области по программе, утвержденной ГУВ и временной НТД на вакцину (ТУ, Наставление по применению).

Изобретение относится к способу получения высокоэффективной сухой вирусвакцины из штамма Ла-Сота против болезни Ньюкасла для профилактической иммунизации кур и цыплят в благополучных и угрожаемых по ньюкаслской болезни хозяйствах промышленного и индивидуального (фермерские хозяйства) птицеводства. Способ изготовления сухой вакцины против болезни Ньюкасла включает высушивание с биологическим стабилизатором (лактоза) исходного продукта из аллантоисной жидкости с последующим диспергированием и стереопротекцией сухого препарата в присутствии физического стабилизатора. Это приводит к получению высокодисперсного агрегативно устойчивого биопрепарата с возможностью хранения в течение 18 месяцев при 4±2^oC. Биопрепарат обладает высокой термостойкостью при 37-40^oC в течение 7 дней. Преимущества разработанной вакцины в возможности ее группового перорального применения с кормом. Это позволяет птицехозяйствам механизировать такой способ применения. Кроме того, вакцина "Унивак-НБ" показала высокую эффективность при вакцинации птиц всеми способами. 5 табл.

Способ изготовления сухой вакцины против болезни Ньюкасла, включающий получение исходного продукта из аллантоисной жидкости куриных эмбрионов, зараженных вирусом штамма ЛаСота, и высушивание с биологическим стабилизатором, отличающийся тем, что дополнительно проводят диспергирование с введением физического стабилизатора и стереопротекцию сухого препарата, при этом в качестве физического стабилизатора используют гидрофобный аэросил с удельной поверхностью 300 - 380 м²•г^-1 в количестве 1,5 - 2,0% от массы исходного продукта, а стереопротекцию проводят при диспергировании в процессе вибрации при 3500 - 5000 об.мин^-1 в течение 1 - 2 мин.