ВАКЦИНА ПРОТИВ НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ Российский патент 2009 года по МПК A61K39/17 A61P31/12 

Предлагаемое изобретение относится к области биотехнологии вирусных ветеринарных препаратов, в частности к вакцине против ньюкаслской болезни птицы «ОРОВАК-НБ-2», предназначенной для пероральной иммунизации при проведении ветеринарных мероприятий по борьбе с указанным заболеванием.

Известна вакцина против ньюкаслской болезни, содержащая вирусный материал из штамма «Ла-Сота», сахарозу, пептон ферментативный, казеин, аэросил AM-1-300 и смолу КБ-4П-2 при определенном соотношении компонентов [1].

Недостатком данной вакцины являются низкая эффективность при пероральной иммунизации птицы, а использование ее для аэрозольного применения является экологически небезопасным для обслуживающего персонала из-за высокой концентрации аэросила (9% по массе).

Известна также вакцина против ньюкаслской болезни «Оровак-НБ», содержащая вирусный материал из штамма «Ла-Сота» - экстраэмбриональную жидкость куриных эмбрионов, сахарозу, пептон ферментативный, казеин, аэросил AM-1-300 и смолу КБ-4П-2 при определенном соотношении компонентов [2].

Данная вакцина недостаточна активна при пероральной иммунизации, так как для получения надлежащего эффекта требуется значительный расход биопрепарата, что сказывается на себестоимости проводимых мероприятий при ньюкаслской болезни.

Целью изобретения является повышение иммуногенной активности вакцины и ее эффективности.

Указанная цель достигается тем, что вакцина в качестве вирусного материала из штамма «Ла-Сота» содержит суспензию из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными эмбрионами, инфицированных культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 день их инкубации и дополнительно α-токоферол при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными  эмбрионами, инфицированных культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 день их инкубации10,73-12,47Сахароза4,16-4,60Пептон ферментативный2,50-3,06Казеин0,83-1,53α-токоферол0,04-0,08Аэросил АМ-1-3001.00-2,00Смола КБ-4П-2Остальное

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Для получения вакцины против ньюкаслской болезни «Оровак-НБ-2» используют оплодотворенные куриные яйца. На 9-10 день инкубации их инфицируют заражающей дозой культуры вакцинного штамма «Ла-Сота» и продолжают инкубирование в течение 3 дней. На 12-13 день развития эмбриона целые куриные яйца в необходимом количестве помещают в колбу аппарата РТ-1 для их измельчения вместе со скорлупой.

Измельчение осуществляют при 4000-8000 об/мин в течение 1,5-2 мин.

К 14-15 л полученной суспензии вирусного материала добавляют 5-6 кг сахарозы, 3-4 кг пептона ферментативного, 1-2 кг казеина и 0,05-0,10 кг α-токоферола с последующим их смешиванием в том же режиме.

Суспензию вирусного материала со стабилизирующими веществами помещают в шаровой барабан, в котором осуществляют его смешивание и обезвоживание, в соотношении 1:4, с ионнообменной смолой КБ-4П-2 с нанесенным на поверхность ее частиц гидрофобного аэросила AM-1-300, взятого по массе в количестве 1,25-2,50%.

Смешение указанных компонентов и получение сухого биопрепарата осуществляют в режиме работы скорости вращения шарового барабана на обкаточном станке, равной 60-90 об/мин, в течение 5-7 мин.

Готовят 3 состава предложенной вакцины. Компонентный состав вариантов вакцины «Оровак-НБ-2» приведен в таблице 1.

Вакцину расфасовывают по 100-200 г в стерильные флаконы или двойные полиэтиленовые пакеты. Флаконы укупоривают стерильными резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками, а пакеты герметично запаивают. Срок годности вакцины 12 месяцев при условии хранения в темном и сухом помещении, при температуре 6±2°С.

Готовая вакцина «Оровак-НБ-2» представляет собой сыпучий порошок серого цвета. Биологическая активность препарата 8-8,6 lg ЭИД₅₀/г^-1, массовая доля влаги в пределах 10-14%. В 1,0 г биопрепарата содержится 14-18 доз.

Пример 2.

Изучают биологическую активность 3 составов вакцины «Оровак-НБ-2», приготовленной по примеру 1 и хранившихся в течение 3, 6 и 12 месяцев при температуре 6±2°С и минус 10±2°С.

Биологическую активность определяют титрованием на 9-10-дневных куриных эмбрионах и выражают в lg ЭИД₅₀/г^-1. Специфичность ответа РЭК определяют постановкой реакции гемагглютинации.

Результаты по изучению биологической активности вакцины «Оровак-НБ-2» в зависимости от условий хранения, представлены в таблице 2.

Из данных таблицы 2 следует, что биологическая активность вакцины сохраняется на исходном уровне в течение 12 мес при температуре хранения минус 10±2°С, а температура 6±2°С способствует незначительному ее снижению на 0,15-0,25 lg ЭИД₅₀/г^-1.

Пример 3.

Оценку иммуногенности 2 состава вакцины «Оровак-НБ-2», приготовленной по примеру 1, с исходной биологической активностью 8,0 lg ЭИД₅₀/г^-1 проводят на 40 цыплятах бройлерах 12-14-дневного возраста. Готовят последовательно десятикратные разведения вакцины.

Дозу вакцины скармливают в течение 2 суток, один раз в день (утром из расчета 5 г корма на 1 гол.). Эффективность иммунизации устанавливают через 7, 14 и 21 день по титрам антител, выявляемым в РТГА и по результатам контрольного заражения привитых цыплят культурой вирулентного штамма «Т-53» вируса НБ в дозе 3,0 lg ЛД₅₀/см³.

Результаты по иммунизации цыплят бройлеров вакциной «Оровак-НБ-2» в дозе 6-7 lg ЭИД₅₀/г^-1/гол обеспечивают надежную защиту цыплят от контрольного заражения.

Далее по методу Рида-Менча рассчитывают наиболее приемлемую для применения, обеспечивающую защиту не менее 90% поголовья от контрольного заражения дозу, которая в данном случае составляет 6,8·10^6,0 ЭИД₅₀/г^-1 (6,83 lg) или 71 мг/гол.

Пример 4.

Исследуют безвредность 1 состава вакцины «Оровак-НБ-2», приготовленной по примеру 1.

Вакцину скармливают цыплятам 20-270-дневного возраста (по 30 голов в каждой возрастной группе), в оттитрованной 10-кратной дозе (7,83 lg ЭИД₅₀/г^-1 или 710 мг на одного цыпленка). Цыплят предварительно выдерживают на голодной диете в течение 8 часов. Вакцину скармливают 2 дня подряд в утреннее кормление. Наблюдение за птицей ведут в течение 10 суток, проводят выборочное взвешивание цыплят по 5 голов в каждой группе. Все подопытные цыплята остались живыми.

Устанавливают отсутствие признаков токсикоза и остаточной вирулентности вакцины. Клиническое состояние подопытных цыплят не отличалось от контрольных-интактных. Отмечают увеличение живой массы у подопытных цыплят на 1-2% по сравнению с контролем.

Пример 5.

Проводят изучение иммуногенных свойств 3 состава вакцины «Оровак-НБ-2», приготовленной по примеру 1, а также двух образцов этой вакцины, хранившихся в течение 3 и 12 месяцев при температуре 6±2°С.

Испытание 3 образцов вакцины проводят аналогично, как описано в примере 3 на группах цыплят бройлеров 12-14-дневного возраста (по 100 голов в каждой группе). Всех цыплят прививают испытуемыми образцами вакцины в одной дозе 6,8·10^6,0 ЭИД₅₀/г^-1.

Результаты представлены в таблице 3.

Результаты таблицы говорят, что все испытанные образцы предложенной вакцины высокоиммуногенны: иммунный ответ цыплят на введение вакцины «Оровак-НБ-2» достигает максимума через 2-3 недели после прививки (уровень антител на 21 сутки колеблется в пределах 5,1-5,8 log₂), а используемая иммунизирующая доза вакцины обеспечивает во всех группах защиту 100% поголовья цыплят от контрольного заражения культурой вирулентного штамма «Т-53».

Вакцина «Оровак-НБ-2» из штамма «Ла-Сота», изготовленная по технологии методом контактного обезвоживания для перорального применения, безвредна для птицы, не вызывает поствакцинальных реакций, задержку начала яйцекладки и динамику нарастания продуктивности кур; высокоиммуногенна (защита от вируса НБ на 80-100%) и экологически безопасна для обслуживающего персонала.

Использование в качестве вируссодержащего материала суспензии из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными эмбрионами, инфицированными культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 их инкубации, позволяет увеличить объем производства вакцины, обеспечить птицу дополнительной белково-минеральной подкормкой, повысить продуктивность птицы и тем самым снизить экономические затраты на безотходное производство вакцины и на ветеринарные мероприятия по профилактике ньюкаслской болезни птицы за счет снижения прививной дозы.

Таблица 1 КомпонентыСодержание компонентов, мас.%Состав 1Состав 2Состав 3Суспензия из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными эмбрионами, инфицированных культурой штамма "Ла-Сота" на 9-10 день их инкубации10,7311,56512,47Сахароза4,604,3874,16Пептон ферментативный3,062,7922,50Казеин1,531,1960,83α-токоферол0,080,060,04Аэросил АМ-1-3001,001,52,0Смола КБ-4П-2ОстальноеОстальноеОстальное

Таблица 2Вакцина «Оровак-НБ-2»Биологическая активность составов, Ig ЭИД₅₀/г^-1После приготовленияХранение при температуре (°С) в течение, мес36126±2Минус 10±26±2Минус 10±26±2Минус 10±2Состав 18,68,458,68,358,68,358,6Состав 28,07,98,07,858,07,88,0Состав 38,58,458,68,328,58,358,5

Таблица 3Разведение вакциныДоза вакцины, lgСредний геометрический титр антител (log2)Результаты контрольного заражения7 сут14 сут21 сутПало (гол.)Выжило (гол.)Защитный эффект (%)10^-170,4780510010^-260,444,8148010^-3501,82324010^-4401,21,8324010^-5300,20,250010^-6200050010^-71000500

Таблица 4Срок хранения вакцины, месСредний геометрический титр антител (log2)Результаты контрольного заражения7 сут14 сут21 сутПало (гол.)Выжило (гол.)Защитный эффект (%)Свежеприготовленная2,54,85,8010010032,54,45,60100100122,04,15,10100100

Источники информации

1. SU 1785098 A, 10.08.1995.

2. RU 2159129 C, 31.03.1999.

Изобретение относится к области биотехнологии. Вакцина содержит вирусный материал из штамма «Ла-Сота», сахарозу, пептон ферментативный, казеин, аэросил AM-1-300 и смолу КБ-4П-2. При этом в качестве вирусного материала из штамма «Ла-Сота» вакцина содержит суспензию из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными эмбрионами, инфицированными культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 день их инкубации. Также вакцина дополнительно содержит α-токоферол при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными эмбрионами, инфицированными культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 день их инкубации - 10,73 - 12,47, сахароза - 4,16 - 4,60, пептон ферментативный - 2,50 - 3,06, казеин - 0,83 - 1,53, α-токоферол - 0,04 -0,08, аэросил AM-1-300 - 1,00 - 2,00, смола КБ-4П-2 - остальное. Вакцина обладает высокой иммуногенностью, безвредна для птицы и экологически безопасна для обслуживающего персонала. 4 табл.

Вакцина против ньюкаслской болезни, содержащая вирусный материал из штамма «Ла-Сота», сахарозу, пептон ферментативный, казеин, аэросил АМ-1-300 и смолу КБ-4П-2, отличающаяся тем, что она в качестве вирусного материала из штамма «Ла-Сота» содержит суспензию из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными эмбрионами, инфицированными культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 день их инкубации, и дополнительно α-токоферол при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия из целых куриных яиц с развитыми 12-13-дневными эмбрионами, инфицированными культурой штамма «Ла-Сота» на 9-10 день  их инкубации10,73-12,47Сахароза4,16-4,60Пептон ферментативный2,50-3,06Казеин0,83-1,53α-токоферол0,04-0,08Аэросил АМ-1-3001,00-2,00Смола КБ-4П-2Остальное