СРЕДСТВО, ИНДУЦИРУЮЩЕЕ ЭСТРОГЕНОВЫЕ И ПРОГЕСТИНОВЫЕ РЕЦЕПТОРЫ Российский патент 1999 года по МПК A61K31/47 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, конкретно к препаратам, вызывающим повышение образования в клетках-мишенях уровня рецепторов прогестерона и эстрогенов при лечении опухолей матки, молочной железы млекопитающих, преодолении и предупреждении развития гормонорезистентности указанных опухолей.

Известно, что эффективность гормонотерапии зависит, в частности, от чувствительности ткани к гормональным воздействиям. Эта чувствительность связана с уровнем рецепторов гормонов в тканях-мишенях, в частности, при лечении таких опухолей, как рак молочной железы и рак тела матки [Л1]. Особую роль в гормоночувствительности опухолей эндометрия и молочной железы играют рецепторы прогестерона. Показано, что уровень рецепторов прогестерона положительно коррелирует с прогнозом течения опухолевого процесса в этих органах и с чувствительностью указанных опухолей к гормонотерапии [Л2]. Эффективность терапии рака эндометрия прогестиновыми препаратами существенно увеличивалась, если до применения прогестинов в опухоли тем или иным способом увеличивали содержание рецепторов прогестерона [Л3, 4].

Известно также, что чаще всего для индукции (стимуляции) синтеза в тканях рецепторов стероидных гормонов, в частности рецепторов прогестерона, применяют индукторы рецепторов половых гормонов. Эти индукторы можно разделить на 3 группы:
1. Эстрогены, например 17 -α- этинилэстрадиол (17 -α- этинилэстра-1,3,5, (10)-триен -3,17β- диол, 19-нор -17α- прегна-1,3,5,(10)-триен-20-ин-3,17-диол). Связываясь, как классический эстроген со своим эстрогеновым рецептором, они вызывают при малых дозах компенсаторное усиление синтеза рецепторов эстрогенов клеткой (т.к. число свободных рецепторов уменьшается) и рецепторов прогестерона (один из известных эффектов эстрогенов) [Л5, 6].

2. Антиэстрогены [Л7] , например, тамоксифен [р-диэтиламино-2-этокси)фенил]-1-транс-дифенил-1,2-бутен] блокирует эстрогенные рецепторы за счет связи с ними, вызывает компенсаторное усиление синтеза рецепторов эстрогенов. Как и многие антагонисты гормонов, он обладает частичным агонистическим (в данном случае эстрогеновым) действием и вызывает увеличение содержания прогестероновых рецепторов [Л 7, 8].

3. Интерфероны [Л9] , например, рекомбинантный α -интерферон вызывают увеличение содержания рецепторов стероидов через систему интерферон-индуцируемых белков.

Перечисленные вещества обладают способностью индуцировать рецепторы стероидных гормонов, будучи примененными в составе той или иной лекарственной формы.

Однако, учитывая, что проблема стимуляции синтеза рецепторов стероидных гормонов в тканях - мишенях возникает главным образом при гормонотерапии опухоли, препараты, используемые с этой целью, не должны иметь противопоказаний для применения у онкологических больных. Перечисленные же средства, индуцирующие рецепторы, имеют ряд недостатков, затрудняющих их использование, обусловленные тем, что все они в той или иной степени являются стимуляторами клеточной пролиферации [Л2, 3].

Недостатком препаратов первой группы соединений с эстрогенной активностью, которые применяются для регуляции менструального цикла, профилактики остеопороза и лечения климактерического невроза в менопаузе, а также для лечения рака молочной железы в глубокой менопаузе и рака предстательной железы, является их стимулирующий пролиферацию эффект, а также повышение свертываемости крови и сопровождающие это нарушение тромбоэмболические осложнения [Л10, 11].

Недостатком антиэстрогенных препаратов и, в частности, тамоксифена, применяемого широко для лечения рака молочной железы в менопаузе, является то, что он обладает слабым эстрогенным действием, вследствие которого вызывает при длительном применении маточные кровотечения, а также развитие опухолей эндотермия [Л10, 12].

Интерфероны и, в частности интерферон -α, применяемый для лечения лейкозов, меланомы и саркомы Капоши, у которого была обнаружена способность стимулировать продукцию рецепторов эстрадиола и прогестерона в культуре клеток и в опухолях молочной железы, обладает большим числом побочных эффектов (что делает невозможным его применение при сердечной, почечной и печеночной недостаточности), а также вызывает лейконейтропению и тромбопению [Л13].

Задачей изобретения является создание индуктора рецепторов прогестерона и эстрадиола в гормонзависимых тканях с меньшими побочными эффектами при сравнимой или большей способности к указанной индукции.

Эта задача решается тем, что в качестве средства, индуцирующего рецепторы прогестерона и эстрадиола в клетках гормонзависимых органов, используются сложные эфиры и соли 10-метилкарбоксилат-9-акридона, известные как противовирусные и иммуномодулирующие средства [Л14, 15].

Выбор основан на результатах исследования, проведенных авторами настоящего изобретения, обнаружившими новые биологические свойства сложных эфиров и солей 10-метиленкарбоксилат-9-акридона, а именно, способность стимулировать в эстрогензависимых клетках-мишениях синтез рецепторов эстрадиола и прогестерона.

Именно это свойство сложных эфиров и солей 10-метиленкарбоксилат-9-акридона, неизвестное авторам из доступных источников информации, позволило решить поставленную задачу.

Лекарственная форма на основе указанных производных 10-метиленкарбоксилат-9-акридона включает в себя соль или сложный эфир 10-метиленкарбоксилат-9-акридона и стабилизирующие добавки, смешанные с апирогенной водой или другими фармацевтически приемлемыми носителями.

Сущность изобретения поясняется двумя примерами получения заявляемого лекарственного средства и таблицами с результатами сравнительных испытаний, где дано:
в таблице 1 индукция рецепторов эстрогенов и прогестинов в матке кастрированных крыс заявляемым лекарственным средством в сравнении с тамоксифеном, рекомбинантным альфа- интерфероном и этинилэстрадиолом, а в таблице 2 - сравнение токсичности, осложнений и побочных эффектов заявляемого лекарственного средства в сравнении с тамоксифеном, рекомбинантным α-интерфероном и этинилэстрадиолом.

Заявленное лекарственное средство получают, например, следующим образом.

Пример 1. 4 г натрия цитрата растворяют в 900 мл апирогенной воды, после чего растворяют 100 мг натриевой соли 10-метиленкарбоксилат-9-акридона. К полученному раствору при помешивании добавляют 10%-ную соляную кислоту до установления кислотности до pH 7,5. Раствор фильтруют через мембранный фильтр "Миллипор" с размером пор 0,22 микрометра. Далее полученный раствор доводят до 1000 мл водой для инъекций. Полученный раствор разливают по флаконам с последующей герметизацией и стерилизацией. Данная парентеральная лекарственная форма может содержать в качестве добавки, стабилизирующих pH, замещенные фенолы, соли слабых оснований и сильных кислот, карбоновые кислоты.

Пример 2. 500 миллиграмм липидов (дипальмитоилфосфатидилхолин, фосфатидилсерин в молярном отношении 10 : 0,1) и 100 миллиграмм лаурилового эфира 10-метиленкарбоксилат-9-акридона растворяли в 500 миллилитрах хлороформа при 22^oC и помещали в толстостенную круглодонную колбу объемом 4 литра. Колбу помещали на роторный испаритель и удаляли растворитель при 65^oC. На стенках колбы образовывалась тонкая полупрозрачная пленка с зеленоватым оттенком. Колбу помещали в сушильный шкаф, оборудованный азотной ловушкой, и досушивали в вакууме в течение 1 часа. В колбу вносили 10 миллилитров дважды дистиллированной деионизированной воды и после продувки колбы гелием регидрировали пленку путем интенсивного встряхивания при 65^oC в течение 1 часа. Образовывалось 10 миллилитров густого геля с зеленоватым оттенком. Гель разводили 90 миллилитрами фосфатного буфера (pH 7,4 22^oC) и встряхивали в течение 30 минут при 22^oC. Образовывалось 100 миллилитров суспензии, которую обрабатывали ультразвуком при 44 кГц 30 раз по 30 секунд с минутными интервалами. Обработанную ультразвуком суспензию дважды последовательно пропускали под давлением азота через поликарбонатные мембраны с диаметром пор сначала 500, а далее 100 нанометров. Образовалась опалесцирующая суспензия с зеленоватым оттенком, представляющая собой водную взвесь маленьких однослойных липосом размером 80 - 130 нанометров, содержащих 500 миллиграмм липидов и 100 миллиграмм лаурилового эфира N-метиленкарбокси-9-акридона. Взвесь в присутствии стабилизатора (трехалоза) замораживалась в жидком азоте, после чего подвергалась лиофильному высушиванию в течение 24 часов. Образовавшийся порошок подвергался микрокапсулированию в кислотоустойчивое покрытие. Микрокапсулы, содержащие 500 мг липидов и 100 мг лаурилового эфира N-метиленкарбокси-9-акридона, прессовались в таблетки, содержащие по 20 мг производного акридона и 100 мг липида.

В табл. 1 и 2 приведены результаты сравнительных испытаний заявленного лекарственного средства и других средств, индуцирующих рецепторы прогестинов и эстрогенов.

Из табл. 1 видно, что заявляемое средство обладает способностью индуцировать рецепторы прогестерона в степени, сопоставимой со способностью к этому известных индукторов рецепторов, а в отношении рецепторов эстрогенов видно, что он не занимает места связывания рецепторов эстрогенов в отличие от тамоксифена и этинилэстрадиола, и следовательно, обладает иным механизмом действия, чем указанные средства.

Табл. 2 показывает, что заявляемое средство лучше известных средств в отношении безопасности и отсутствия побочных эффектов.

Таким образом, приведенные выше материалы позволяют утверждать, что заявляемое лекарственное средство в качестве индуктора рецепторов прогестинов и эстрогенов является новым. Из опубликованных источников информации заявителем не известно ни одного случая его применения в этом качестве. Заявляемое средство промышленно применимо, что подтверждено примером его изготовления и сравнительными испытаниями, показавшими, что оно имеет способность к индукции рецепторов прогестинов и эстрогенов не меньшую, чем известные средства - индукторы указанных рецепторов при существенном снижении побочных эффектов и осложнений, что особенно важно при лечении опухолевых заболеваний.

Заявляемое применение является неочевидным. Механизм действия заявляемого лекарственного средства принципиально отличается от механизма действия других известных индукторов, что видно из величин степени индукции рецепторов эстрогенов (см. табл. 1), поскольку само заявляемое средство не связывается с рецепторами (в отличие от первых двух) и обладает кардинально более высокой степенью индукции рецепторов эстрогенов, чем интерфероны, которые в отличие от всех упомянутых средств являются белками и неспособны специфически связываться с рецепторами стероидов. Механизмы указанного феномена в настоящий момент исследуются авторами.

Из вышеизложенного следует, что заявленное применение ново, неочевидно и промышленно применимо, т.е. соответствует всем требованиям, предъявляемым к изобретению.

Литература
1. Бассалык Л.С. и соавт. Рецепторы стероидных гормонов в опухолях человека // - М.: Медицина, 1987. - С. 223.

2. Взаимодействие гормонов с рецепторами./Под ред. Дж. Леви. - М.: Мир, стр. 257-291.

3. Дильман В.М. Эндокринологическая онкология. Изд. 2-е. - Л.: Медицина, 1983. - С. 408.

4. Gambrell R.D. The role of hormones in the etiology of breast and endometrial cancer. Acta Obstet. Gyn. Scand. Suppl. 1979, 88, p. 73-81.

5. Horwitz K.B., McGuire W.L. Esrogen control of progesterone receptors in human breast cancer. J. Biol. Chem., 1978, 253, p. 2223.

6. Leavitt W.W., Chen T.J., Allen T.C. Regulation of progesterone receptor formation by estrogen action. Ann. N.Y. Acad. Sci., 1977, 210, p. 286.

7. Bonte J. Hormonal dependence of endometrial adenocarcinoma and its hormonal sensitivity to progestagens and antiestrogens //Hormonts and Cancer/ Eds. S. Jacobelli, et al. /N.Y.: Raven Press. 1980.

8. Jacobelli S. Effect of tamoxifen on steroid hormone receptors and creatine kinase activity in human endometrial carcinoma. Eur. J. Cancer Clin. Oncol., 1986, 22, p. 105-110.

9. Sica G. , Iacopino F., Lama G., Amadori D., Baroni M., Lo Sardo F., Malacarne P., Marchetti P., Pellegrini A., Zaniboni A. Steroid receptor enhancement by natural interferon-beta in advanced breast cancer. Europ. J. Cancer., 1993, 29A, p. 329-333.

10. Greenwald P. , Caputo T.A., Wolfang P.E. Endometrial cancer after menopausal use of estrogens. Obstet. and Gynec., 1977, 50: 239-243.

11. Geola F.L., Frumar A.M., Hataryn I.V. Biological effects of various doses of conjugated equine estrogens in postmenopausal women. J. Clin. Endocr. Met., 1980, 51: 620-625.

12. Hardell L. Tamoxifen as risk factor for carcinoma of corpus uteri. Lancet 1988, 8610, p. 563.

13. Роферон-A, интерферон альфа-2a в онкологии и вирусологии, информация по состоянию на март 1993 г. - Проспект фирмы Хоффман Ля Рош АГ, Базель, Швейцария.

14. Kramer M.I., Cleeland R., Grunberg R. Antimicrob. Agent Chemother., 1976, 78, p. 284-286.

15. Иммуномодулирующее лекарственное средство. - Международная заявка на изобретение, WO 96/07423 PCT/RU 95/00079, заявл. 27.04.95, опубл. 14.03.96.9

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, конкретно к препаратам, вызывающим повышение в клетках-мишенях уровня рецепторов прогестерона и эстрогенов при лечении опухолей матки, молочной железы млекопитающих, преодолении и предупреждении развития гормонорезистентности указанных опухолей. В качестве такого препарата предложены сложные эфиры и соли 10-метиленкарбоксилат-9-акридона. Предложенное средство обладает меньшими побочными эффектами, чем у известных индукторов при сравнимой или большей способности к указанной индукции. 2 табл.

Применение сложных эфиров и солей 10-метиленкарбоксилат-9-акридона в качестве индукторов прогестиновых и эстрогеновых рецепторов в клетках гормонозависимых тканей.