СПОСОБ И НАБОР ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ ЖЕНСКОЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ С ПРИМЕНЕНИЕМ 9-ОКСОАКРИДИН-10-УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ, И/ИЛИ ЕЕ СОЛИ, И/ИЛИ ЕЕ СЛОЖНОГО ЭФИРА Российский патент 2009 года по МПК A61K31/473 A61K31/4196 A61P35/00 

Изобретение предназначено для использования в медицине и относится к средствам лечения и профилактики рецидива злокачественных опухолей женской репродуктивной системы.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Рак органов женской репродуктивной системы (молочной железы, яичников, эндометрия) является одной из самых крупных проблем в онкологии. Заболеваемость этими новообразованиями в среднем по России составляет 78 на 100 тыс. женщин (30% от общей заболеваемости женщин злокачественными опухолями). В настоящее время практически у 70% больных диагноз рака органов женской репродуктивной системы впервые устанавливается в III-IV стадиях, когда лечение оказывается неэффективным. И, как следствие, от этих опухолей ежегодно только в РФ умирают 442 из 100 тыс. женщин.

Лечение опухолей органов женской репродуктивной системы является одной из проблем современной онкологии.

Несмотря на то, что злокачественные опухоли молочной железы, матки и яичников имеют эстрогеновые рецепторы, через которые передается эстрогенный сигнал, последний (рак яичников) в клинике не поддается в какой-либо заметной степени лечению антиэстрогенами и прогестинами (Но. S.-M., Estrogen, Progesteron and Epithelial Ovarian Cancer, 2003, Reproductive Biology and Endocrinology, 2003, vol.1, p.73).

При этом, по крайней мере, для рака молочной железы, считается, что исчезновение или уменьшение рецепторов эстрогенов приводит к уходу опухоли из-под лечебного контроля и дальнейшему ее прогрессированию.

Не так давно было показано, что эстрогены осуществляют свое стимулирующее рост воздействие не только через активацию эстроген-зависимых генов, но и внегеномными механизмами, в частности, через регуляцию активации протеинкиназ (Urn, K.T., et al., Nongenomic estrogen signaling in estrogen receptor negative breast cancer cell: a role for the angiotensin II receptor AT1, Breast Cancer Research, 2006, vol.8, p R33 (doi: 10.1186/bcr1509).

Одними из средств терапевтического воздействия на эти опухоли являются вещества, ингибирующие фермент ароматазу. Этот фермент отвечает за процесс конверсии андростендиона и тестостерона в эстрогены (эстрон и эстрадиол) в некоторых периферических и опухолевых тканях, т.е. за процесс внегонадного синтеза эстрогенов, Эстрогены же оказывают стимулирующее (митотическое) действие на клетки злокачественных опухолей репродуктивной системы. Ароматаза (точнее, специфический энзимный комплекс цитохрома Р-450, называемый ароматазой) является ключевым ферментом биосинтеза эстрогенов. Ароматаза присутствует в яичниках женщин в пременопаузе, в плаценте беременных женщин, в жировой ткани женщин в постменопаузе, в тканях злокачественных опухолей женской репродуктивной системы: молочной железы, матки, яичников. Ароматаза связана с эндоплазматическим ретикуломом и состоит из двух основных белков. Один белок является цитохромом Р-450 (Р450_аром). Он конвертирует C₁₉ - стероиды (андрогены) в C₁₈ - стероиды (эстрогены), содержащие фенольное кольцо А. Второй белок является НАДФ - зависимой цитохром Р-450 редуктазой, которая переносит восстановленные энергетические эквиваленты к цитохрому Р-450_аром.

Снижение активности ароматазы приводит к уменьшению синтеза эстрогенов и, как следствие, снижению эстрогенного (стимулирующего) воздействия на клетки опухоли. Это обусловливает значительную терапевтическую эффективность веществ, ингибирующих ароматазу (Таблица А).

Таблица А Ингибиторы ароматазы, используемые в клинической практике   Стероидные Нестероидные Первое поколение Форместан (4-гидроксиандростендион) Аминоглютетимид Второе поколение Экземестан Роглетимид     Фадрозол Третье поколение   Ворозол     Летрозол     Анастрозол

По механизму действия ингибиторы ароматазы (ИА) делятся на конкурентные, вызывающие временную блокаду фермента, и "суицидные", необратимо связывающиеся с активными участками ароматазы. Необратимые ингибиторы имеют исключительно стероидную природу (они являются химическими структурными аналогами андростендиона) и необратимо связываются с ферментом, полностью нарушая его активность как биокатализатора. Их также называют инактиваторами ароматазы. После прекращения воздействия таким ингибитором требуется определенное время для того, чтобы фермент синтезировался в тканях вновь. Конкурентные ИА могут по химической структуре как стероидными, так и нестероидными. Нестероидные ингибиторы относятся к пиперидионам (аминоглютетимид, роглетимид), имидазолам (лиарозол, фадрозол), триазолам (анастрозол, летрозол, ворозол) и др. нестероидным соединениям. Они обратимо взаимодействуют с цитохромной Р-450-частью ферментной системы. Нестероидные ингибиторы ароматазы могут обладать как селективным (действуют только на фермент ароматазу), так и неселективным действием (угнетают синтез других гормонов, в частности глюко- и минералокортикоидов). Из стероидных ИА известны, например, пломестан, форместан, экземестан.

СТЕРОИДНЫЕ ИНГИБИТОРЫ АРОМАТАЗЫ

Стероидные ингибиторы ароматазы

Из нестероидных ИА известны, например, аминоглютетимид, фадрозол, анастрозол, летрозол, ворозол.

НЕСТЕРОИДНЫЕ ИНГИБИТОРЫ АРОМАТАЗЫ

Нестероидные ингибиторы ароматазы

Указанные ИА связываются с каталитической частью фермента.

Так, например, анастрозол (2,2'-[5-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-1,3-фенилен]бис(2-метилпропионитрил) является конкурентным ингибитором ароматазы и вызывает только временную блокаду данного фермента.

Другой нестероидный ингибитор ароматазы летрозол ((4,4'-[(1Н-1,2,4-триазол-1-ил)-метилен]бис-бензонитрил)), в системе in vitro по способности ингибировать ароматазу в 200 раз активнее аминоглютетимида и в 19 раз более активен, чем аримидекс.

Ворозол, точнее, (+)-ворозол, или (+)-6-((4-хлорофенил)-1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-1-метил-1Н-бензотриазол, является (+)-энантиомером ингибитора ароматазы R76713.

Экземестан (6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-дион), например, является структурным аналогом андростендиона и по механизму действия является стероидным инактиватором ароматазы "суицидного" типа, поскольку, связываясь с активным участком фермента, необратимо инактивирует его.

Применение ингибиторов ароматазы (в отличие от прогестинов и антиэстрогенов) целесообразно только у женщин с выключенной функцией яичников, поскольку снижение эстрогенов, происходящих из периферических тканей, будет автоматически вызывать компенсаторное увеличение гонадного (яичникового) синтеза эстрогенов.

В то же время все эти классы препаратов (антиэстрогены и прогестины) широко применяются в качестве адъювантного лечения, а также в случаях распространенного рака молочной железы и тела матки, не подлежащего радикальному хирургическому лечению. Как антиэстрогены, так и прогестины не оказывают влияния на внутриопухолевую продукцию эстрогенов, которую эффективно подавляют ингибиторы ароматазы. В настоящее время антиэстрогены и ингибиторы ароматазы назначаются как в качестве адъювантной терапии операбельного рака молочной железы, так и в качестве терапии неоперабельных распространенных опухолей только пациентам с эстроген-рецептор-позитивным статусом опухоли, поскольку полагается, что чувствительность к гормональному воздействию прямо связана с наличием рецепторов эстрогенов в опухоли.

У больных злокачественной опухолью эндометрия введение ингибитора ароматазы летрозола приводило к определенному терапевтическому эффекту. При этом клинический эффект (уменьшение объема опухоли) никак не коррелировал с изначальным уровнем рецепторов и их динамикой в процессе лечения (Berstein, L, et al., Neoadjuvant therapy of endometrial cancer with aromatase inhibitor letrozole: endocrine and clinical effect. European Journal of Obstetric & Ginecology and Reproductive Biology, 2002, vol. 105, pp.161-165).

Также известны неудачные попытки лечения рецидивирующего или распространенного рака эндометрия с помощью ингибитора ароматазы (летрозола): всего 9.4% ответа на терапию, несмотря на то, что у 86% пациенток опухоли были эстроген-рецептор-позитивны, и у 86% процентов прогестинрецептор-позитивны (Ма, В.В., The activity of letrozole in patient endometrial cancer and correlation with biological markers - a study of the National Cancer Institute of Canada Ckinical Trial Group, International Journal of Gynecology Cancer, 2004, vol. 14, pp.650-658). При этом, как известно, прогестины достаточно эффективны у таких больных. Напротив, попытки лечения стромальной саркомы матки ингибиторами ароматазы, такими, как амидоглютетимид (Spano, J.P., Long-term survival of patients given hormonal therapy for metastatic endometrial stromal sarcoma, Medical Oncology, 2003, vol.20, pp.87-93), или летрозол (Leunen, M. et al., Low grade endometrial stromal sarcoma treated with the aromatase inhibitor letrosole, Gynecologic Oncololgy, 2004, vol. 95, pp.769-771), имели значительный успех.

Также, для ингибиторов ароматазы показано, что развитие резистентности эстрогензависимой опухоли к одному ингибитору ароматазы не приводит автоматически к резистентности к другому ингибитору (Carlson R.W., Sequencing of endocrine therapies in breast cancer - integration of recent data, Breast Cancer Research and Treatment, 2002, vol. 75, Supplement 1, pp.S27-32). Хорошо известно, что назначение ингибиторов ароматазы эффективно, если опухоль не отвечает на антиэстрогены или прогестины.

В тканевой культуре (in vitro) рака яичника, рака эндометрия и рака молочной железы человека показано, что ингибиторы ароматазы способны уменьшать пролиферативную активность клеток вне зависимости от рецепторного статуса и/или активности ароматазы в опухолевой ткани (Sasano, H. et.al., Effect of aromatase inhibitors on the pathobiology of human breast, endometrial and ovarian carcinoma, Endocrine-related cancer, 1999, vol.6, p.197-204).

В клинике при лечении распространенных опухолей яичника не было выявлено связи между ответом на терапию ингибитором ароматазы (летрозолом) и рецепторными особенностями опухоли (Papadimitriou, C.A. et al., Hormonal therapy with letrozole for relapsed epithelial ovarian cancer. Long-term results of a phase II study. Oncology, 2004; vol.66, pp.112-117).

Также было показано, что предварительные инкубации эстроген-позитивных клеток с ингибитором ароматазы форместаном увеличивает чувствительность опухолевых клеток к антитело-зависимому клеточному ответу, что приводит к их ускоренному цитолизу (Braun D.P. et al, Aromatase inhibitors increase the sensitivity of human tumor cells to monocyte-mediated, antibody-dependent cellular cytotoxicity, The American Journal of Surgery, 2005, vol.190, pp.570-571).

Таким образом, молекулярные механизмы, обеспечивающие чувствительность злокачественной опухоли к антиэстрогенам и прогестинам, с одной стороны, и ингибиторам ароматазы, с другой, совершенно различны.

Как известно, фактор NF-kB относится к числу специфических цитоплазменных белков, активирующихся в эукариотических клетках (в том числе, и малигнизированных) в ответ на неблагоприятные воздействия, в частности, химиопрепараты и радиацию. При этом неактивная форма этого белка находится в комплексе со своим ингибитором. При активации (фосфорилировании специфическими киназами) комплекс распадается и белок NF-kB транслоцируется в ядро, запуская работу генов-мишеней. Активация этих генов ассоциирована с пролиферацией, ангиогенезом, суппрессией апоптоза, что является ключевым звеном в развитии устойчивости опухолевых клеток к химиотерапии. Вещества, ингибирующие активность фактора NF-kB, могут оказывать свое ингибирующее действие на любой ступени активации этого фактора: связывать фактор NF-kB; ингибировать транслокацию фактора NF-kB в ядро; ингибировать регуляцию фактора NF-kB транскрипции YY1; ингибировать промоцию апоптоза, ингибировать экспрессию генов, зависимых от фактора NF-kB; ингибировать образование комплекса NF-kB с другими факторами, регулирующими активность NF-kB. Поиск синтетических ингибиторов NF-kB, в том числе среди известных науке веществ ведется широким фронтом. Так, например, способностью ингибировать NF-kB обладает дигидроксиметилэпоксихиномицин (DHMEQ) (структурный аналог антибиотика эпоксихиномицина-С и его производных (заявка WO 2006/060819)), куркумин и его производные (заявка WO 03/090681), а также другие соединения.

9-оксоакридин-10-уксусная кислота представляет собой вещество, имеющее структурную формулу

По другой номенклатуре она также может быть названа как 10-(карбоксиметил)-9(10H)акридон, в базе CAS имеет номер 38609-97-1, международное непатентованное название - криданимод (cridanimod).

Следует указать, что под аббревиатурой СМА в контексте данной заявки, если отдельно не указано иного, или это не следует из контекста, понимается как сама 9-оксоакридин-10-уксусная кислота, так и ее фармацевтически приемлемые соли и ее сложные эфиры.

Производные 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты были предложены в 1971 году сотрудниками компании Хоффман Ла Рош Инк в качестве мощных противовирусных средств (патент США №3,681,360).

В настоящее время препараты на основе 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты и ее фармацевтически приемлемых солей предлагаются для лечения и профилактики широкого круга заболеваний. В частности, известны такие ее свойства как иммуномодулирующие, интерфероногенные, антибактериальные, антипромоторные и радиопротективные.

Хотя известно, что 9-оксоакридин-10-уксусная кислота не обладает какой-либо значительной собственной цитостатической активностью, в опытах на животных установлено, что торможение роста опухоли с помощью обычной для таких случаев гормонотерапии в присутствии 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты и/или ее солей и соединений является более эффективным, чем в ее отсутствие.

Таким образом, остается актуальной задача повышения эффективности лечения опухолей женской репродуктивной системы.

Задачей настоящего изобретения является разработка нового эффективного способа лечения опухолей органов женской репродуктивной системы, то есть опухолей, происходящих из эстроген-зависимых тканей.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение основано на неожиданном установлении того факта, что СМА, ее соли и/или ее сложные эфиры, резко увеличивают способность ингибиторов ароматазы угнетать активность фермента ароматазы, с одной стороны, а с другой стороны СМА, ее соли и/или ее сложные эфиры, способны угнетать активность фактора NF-kB, активация которого, как известно, не только защищает опухолевую клетку от неблагоприятных воздействий, но приводит, кроме прочего, к активации того же фермента ароматазы. Кроме того, неожиданно оказалось, что совместное воздействие СМА, и/или ее солей и/или ее сложных эфиров, с одной стороны, и ингибиторов ароматазы, с другой стороны, на злокачественные опухоли женской репродуктивной системы приводит подавлению пролиферации опухолевых клеток даже в том случае, когда внутриопухолевый синтез эстрогенных стероидов с участием ароматазы незначителен, отсутствует или не оказывает влияния на рост опухоли. При раздельном применении данных классов веществ (СМА отдельно, ИА отдельно) такого эффекта не наблюдалось.

Кроме того, как было выявлено авторами в процессе работы над изобретением, указанный эффект СМА продолжается длительное время даже после того, как прекращена экспозиция СМА, то есть наблюдается эффект «сенситизации» опухоли к последующему воздействию ИА.

За счет этих вновь выявленных свойств СМА, как было установлено в процессе работы над изобретением, СМА резко усиливает способность ингибиторов ароматазы снижать пролиферативную активность опухолей человека, происходящих из эстроген-зависимых тканей, в частности злокачественных опухолей органов женской репродуктивной системы.

Таким образом, авторами данного изобретения обнаружено новое свойство 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты, которое открывает новую область для применения 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты, ее фармацевтически приемлемых солей и/или ее сложных эфиров. А именно, при лечении злокачественных опухолей, происходящих из эстроген-зависимых тканей с помощью ингибиторов ароматазы, 9-оксоакридин-10-уксусная кислота и ее фармацевтически приемлемые соли и ее сложные эфиры позволяют резко усилить противоопухолевый эффект ингибиторов ароматазы.

Также неожиданно обнаружено, что если 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту, и/или ее фармацевтически приемлемые соли, и/или ее сложные эфиры вводят до начала гормональной терапии, то это позволяет осуществить сенситизацию опухоли к последующему воздействию ингибиторов ароматазы, причем этот эффект сохраняется и после прекращения введения 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты или ее производного.

Известно, что 9-оксоакридин-10-уксусная кислота обладает интерферон-индуцирующими свойствами. Однако авторами данного изобретения установлено, что в отношении торможения роста опухоли 9-оксоакридин-10-уксусная кислота продолжает проявлять дозо-зависимый эффект в дозировках, превышающих максимальную интерферон-индуцирующую дозу. Под максимальной интерферон-индуцирующей дозой в данном случае понимается порог дозы 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты, при превышении которого дальнейшего увеличения уровня тканевых и сывороточных интерферонов не происходит. Более того, в тех ситуациях, когда система выброса интерферонов уже истощена (это происходит при повторных введениях любого индуктора интерферонов, в том числе СМА), 9-оксоакридин-10-уксусная кислота, ее фармацевтически приемлемые соли и/или ее сложные эфиры продолжают оказывать дозо-зависимое влияние на торможение роста опухоли в комбинации с ингибитором ароматазы, резко усиливая его эффективность.

Термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к солям, которые сохраняют вышеописанные свойства 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты, и которые не являются биологически или каким-либо иным образом неприемлемыми. Фармацевтически приемлемые соли могут быть получены воздействием неорганических или органических оснований на ту или иную неорганическую или органическую (к коим относится 9-оксоакридин-10-уксусная кислота)кислоту.

Соли с неорганическими основаниями включают в себя, например, соли натрия, калия, лития, аммония, кальция и магния.

Соли с органическими основаниями без ограничения включают: соли первичных, вторичных, третичных и четвертичных аминов, такие как амины, замещенные одним, двумя или тремя заместителями такими, как: алкил, алкенил, циклоалкил, циклоалкенил, арил, гетероарил или гетероциклил, которые в свою очередь могут быть замещенными; смешанные ди- и три-амины, где по меньшей мере один из заместителей на амине отличается от других заместителей и выбран из группы, включающей в себя алкил, замещенный алкил, алкенил, замещенный алкенил, циклоалкил, замещенный циклоалкил, циклоалкенил, замещенный циклоалкенил, арил, гетероарил, гетероциклил и т.п. Сюда также включают амины, у которых два или три заместителя вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил или гетероарил.

Конкретные примеры подходящих аминов включают, в частности, изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, три(изопропил)амин, три(н-пропил)амин, этаноламин, 2-диметиламиноэтанол, трометамин, лизин, аргинин, гистидин, кофеин, прокаин, холин, бетаин, этилендиамин, глюкозамин, N-алкилглюкамин, теобромин, пурины, пиперазин, пиперидин, морфолин, N-этилпиперидин и тому подобное.

Примером соли 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты со щелочным металлом является натриевая соль:

Примером соли с аминосоединением является соль с 1-дезокси-1-(метиламино)-О-глюцитолом (меглюмином):

Другими примерами солей с различными сложными четвертичными аммониевыми основаниями являются соли с амино-замещенными углеводами, например с 2-дезокси-2-амино(или 2-алкиламино)-D-глюкозой, где R представляет собой Н или низший алкил:

с 1-дезокси-1-метиламино-D-глюкозой:

а также соли с различными сложными эфирами углеводов и алифатических аминоспиртов, например

где R₁, R₂ представляют собой независимо алкил, арил, гетерил.

Примерами подходящих катионов также являются, в частности катионы: 3-O-(N,N-диметиламино-н-пропил)-1,2:5,6-ди-O-изопропилиден-α,D-глюкофуранозы:

а также катионы:

1-дезокси-1-(этиламино)-D-глюцитола (то есть эглюмина),

1-дезокси-1-(пропиламино)-D-глюцитола,

1-дезокси-1-(бутиламино)-D-глюцитола,

1-дезокси-1-(метиламино)-L-глюцитола,

1-дезокси-1-(этиламино)-L-глюцитола,

1-дезокси-1-(пропиламино)-L-глюцитола и

1-дезокси-1-(бутиламино)-L-глюцитола.

Под сложными эфирами 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты подразумевают соединения, образованные в результате замещения атома водорода в ОН-группе кислоты органической группой R.

Примерам подходящих сложных эфиров являются сложные эфиры 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты с низшими алкилами (а именно с (C₁-С₁₂)алкилами, в частности этиловый, пропиловый, изопропиловый, бутиловый и амиловый эфиры), а также с холином и другими липофильными спиртами.

После быстрого проникновения через биологические мембраны эти соединения далее легко гидролизуются "in vivo" до свободной 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты.

Применяемые согласно настоящему изобретению фармацевтические соли 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты можно использовать в разовой дозе от 0.5 до 100 мг/кг веса тела (в пересчете на остаток 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты), предпочтительно от 4 до 20 мг/кг веса тела. При этом суточная доза может варьировать от 2 до 1000 мг/кг, предпочтительно от 2 до 200 мг/кг. Конкретная доза препарата может быть рассчитана специалистом на основе описания изобретения и приведенных примеров.

Подразумевается, что используемые количества 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли или ее сложного эфира и ингибитора ароматазы являются синергетически эффективными.

Под «эстроген-зависимыми тканями» в контексте данной заявки подразумеваются ткани, рост которых, в том числе за счет пролиферации и/или гипертрофии клеток, стимулируется целиком или в основном эстрогенами. К таким тканям, в частности, относятся ткани органов женской репродуктивной системы:

ткани молочной железы, ткани матки, ткани яичников. Соответственно, к злокачественным опухолям, происходящим из этих тканей, в контексте данной заявки относятся: рак молочной железы, злокачественные опухоли эндометрия (как эпителиальные, так и стромальные), рак яичника.

Новые обнаруженные свойства СМА позволили предложить способ лечения злокачественных опухолей органов женской репродуктивной системы путем одновременного или последовательного воздействия на опухоль СМА и ИА, что приводит к резкому усилению эффективности противоопухолевого лечения в клинике.

Вновь выявленные свойства СМА, ее солей и/или ее сложных эфиров, неизвестные авторам из доступных источников информации, позволили предложить их использование в комбинации с ингибиторами ароматазы при лечении опухолей органов женской репродуктивной системы. Авторам не известны из доступных источников информации какие-либо попытки совместного или последовательного применения ингибиторов ароматазы и препаратов СМА в клинике для лечения новообразований органов женской репродуктивной системы, в том числе и в адъювантом или в неоадъювантном режимах.

В процессе работы над изобретением авторами было выявлено, что 9-оксоакридин-10-уксусная кислота и ее фармацевтически приемлемые соли и/или ее сложные эфиры не только способны усиливать эффект ингибиторов ароматазы. Также неожиданно оказалось, что 9-оксоакридин-10-уксусная кислота и/или ее фармацевтически приемлемые соли и/или ее сложные эфиры в комбинации с ингибиторами ароматазы способны значительно усиливать эффект противоопухолевого действия известных химиотерапевтических агентов разных классов, применяемых при лечении злокачественных опухолей органов женской репродуктивной системы.

Если на различных этапах такого комбинированного лечения (СМА+ИА) дополнительно начинали проводить химиотерапию или химиотерапию применяли после такой комбинации, то она оказывала гораздо более сильное ингибирующее воздействие на рост опухоли. Такое потенцирование противоопухолевого эффекта наблюдали, в том числе, и при терапии гормонорефрактерного (гормонорезистентного) варианта злокачественной опухоли.

Такой сенситизирующий эффект при совместной экспозиции ингибиторов ароматазы и 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты или ее производных в отношении цитостатических химиопрепаратов не достигался при экспозиции опухолевых клеток к 9-оксоакридин-10-уксусной кислоте или ингибиторам ароматазы в отдельности. Интересно, что эффект «сенситизации» сохранялся и после прекращения совместного действия 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты (или ее фармацевтически приемлемых солей или ее сложных эфиров) и гормональных препаратов.

Соответственно, в одном своем аспекте настоящее изобретение предлагает способ лечения злокачественных опухолей органов женской репродуктивной системы, происходящих из эстроген-зависимых тканей, при котором нуждающейся в этом пациентке вводят эффективное количество соединения, выбранного из группы, включающей в себя 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту и/или ее фармацевтически приемлемую соль и/или ее сложный эфир, и осуществляют воздействие, направленное на снижение активности фермента ароматазы, в частности, путем введения ингибитора (ингибиторов) ароматазы.

Еще в одном своем аспекте настоящее изобретение предлагает способ профилактики рецидива злокачественных опухолей органов женской репродуктивной системы, происходящих из эстроген-зависимых тканей, при котором нуждающейся в этом пациентке вводят эффективное количество соединения, выбранного из группы, включающей в себя 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту и/или ее фармацевтически приемлемую соль и/или ее сложный эфир, и осуществляют воздействие, направленное на снижение активности фермента ароматазы, в частности, путем введения ингибитора (ингибиторов) ароматазы.

При этом снижение риска развития рецидива (то есть профилактика возникновения повторной опухоли) осуществляется согласно изобретению в отношении опухоли, регресс или элиминация которой из организма достигнуты любым путем, например в результате хирургического вмешательства или в результате химиотерапии, гормонотерапии, радиотерапии, биотерапии или с помощью любого сочетания указанных видов лечения.

Один из предпочтительных вариантов реализации настоящего изобретения представляет собой способ лечения и/или профилактики злокачественных опухолей женской репродуктивной системы и/или их рецидивов посредством введения 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты и/или ее фармацевтически приемлемой соли и/или ее сложного эфира, отличающийся тем, что 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту и/или ее соль и/или ее сложный эфир вводят в комбинации с ингибитором ароматазы.

В другом своем аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ усиления чувствительности злокачественных опухолей, происходящих из эстроген-зависимых тканей, к ингибитору (ингибиторам) ароматазы, при котором вводят эффективное количество соединения, выбранного из группы, включающей в себя 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту и/или ее фармацевтически приемлемую соль и/или ее сложный эфир.

Термин "лечить" или "лечение" в данном описании определен как применение или введение (назначение) состава субъекту (например, пациенту или человеку с риском возникновения патологии, например, страдающему злокачественной опухолью или имеющему риск ее возникновения). В целом, лечение обеспечивают субъекту, имеющему патологию (например, злокачественную опухоль, как описано в данной заявке), симптом патологии, повышенный риск развития патологии, или предрасположенность к патологии, с целью вылечить, исцелить, облегчить, уменьшить, изменить, исправить, повысить качество, чтобы улучшить течение или повлиять на патологию, признаки патологии или предрасположенность к патологии. Лечение может включать назначение или применение одного агента в комбинации со вторым агентом. Термин "в комбинации" в этом контексте означает, что различные агенты (а именно СМА и ИА) применяют одновременно, или последовательно. Если агенты применяют последовательно, в момент начала применения второго агента, в области воздействия в эффективных концентрациях предпочтительно обнаруживается первый из двух агентов или его фармакодинамическое действие (фармакологический эффект) еще сохраняется к моменту применения второго агента.

Согласно данному изобретению предпочтительные соли 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты выбраны из группы, включающей в себя натриевую, меглюминовую, эглюминовую соли и соль с 3-O-(N,N-диметиламино-н-пропил)-1,2:5,6-ди-O-изопропилиден-α,D-глюкофуранозой.

Согласно данному изобретению предпочтительные сложные эфиры 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты выбраны из группы, включающей в себя этиловый, пропиловый, бутиловый, изопропиловый, амиловый эфиры.

Согласно данному изобретению предпочтительно, 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту и/или ее соли или ее сложные эфиры вводят каждый день или через день в течение от 30 дней до 180 дней в суточной дозе от 4 до 300 мг/кг веса включительно (считая на остаток 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты).

При реализации настоящего изобретения может применяться как стероидный, так и нестероидный ингибитор ароматазы.

Предпочтительно, ингибитор ароматазы выбран из группы, включающей в себя: форместан, экземестан, аминоглютетимид, фадрозол, анастрозол, летрозол, ворозол.

Еще в одном способе реализации настоящего изобретения в организм больного дополнительно вводят одно или несколько химиотерапевтических средств. При этом, как оказалось, эффективность такого комбинированного воздействия (ИА, СМА, химиотерапевтическое средство (или средства)) не зависит от рецепторного статуса опухоли и/или активности ароматазы в ткани опухоли.

В качестве таких химиотерапевтических средств согласно настоящему изобретению можно применять, например, алкилирующие агенты, циклофосфамид, хлорамбуцил, цисплатин, карбоплатин, бусульфан, мелфалан, стрептозоцин, триэтиленмеламин, митомицин С, дакарбазин, прокарбазин, и тому подобные; антиметаболиты, например, метотрексат, этопозид, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин, 5-фторурацил, капацетабин, флюдарабин, и тому подобные; противоопухолевые антибиотики, например, актиномицин Д, доксорубицин, эпирубицин, даунорубицин, блеомицин, митрамицин и тому подобные; алкалоиды барвинка, такие как винкристин и винбластин; таксаны (таксоиды), например, паклитаксел и доцетаксел и их производные; глюкокортикоиды, например, преднизон; нитрозомочевина и ее производные, например, ломустин, кармустин, и им подобные; противоопухолевые ферменты, например аспарагиназа и ее пегилированные формы или ее формы, конъюгированные с другими небелковыми полимерами; ингибиторы топоизомеразы, например, топотекан и иринотекан, и им подобные; ингибиторы полимеризации тубулина микротрубочек, например, винорельбин.

Предпочтительными химиотерапевтическими средствами согласно изобретению являются средства, выбранные из группы, включающей: алкилирующие агенты, антиметаболиты; агенты, нарушающие сборку микротрубочек; противоопухолевые антибиотики, включая антрациклиновые антибиотики; препараты платины; ингибиторы топоизомеразы, глюкокортикоиды.

Также, в способе согласно настоящему изобретению дополнительно к совместному или последовательному введению СМА и ИА можно вводить:

- антагонисты эстрогенных рецепторов, то есть антиэстрогенов, например тамоксифен и торемифен;

- агонисты прогестиновых рецепторов, то есть прогестинов, например медроксипрогестерона ацетат, мегестрола ацетат, гидроксипрогестерона капронат:

- антагонисты ЛГРГ (антагонисты релизинг-гормона лютеинизирующего гормона, например, такие как гозерелин, бузерелин), которые можно применять для лечения злокачественных опухолей органов женской репродуктивной системы,

- терапевтические антитела против рецепторов факторов роста, например препараты трастузумаб, который представляет собой моноклональные антитела против HER2/neu рецепторов эпидермального ростового фактора человека,

или комбинацию средств указанных классов.

В качестве вариантов реализации способа лечения согласно настоящему изобретению 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту, ее соль /или ее сложный эфир:

- вводят курсом перед назначением ИА,

- либо одновременно с введением ИА,

- либо начинают введение 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту и/или ее соли, и/или ее сложного эфира до начала введения ИА и продолжают во время курса введения ИА.

Еще в одном своем аспекте настоящее изобретение относится к применению 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты и/или ее соли, и/или ее сложного эфира для получения лекарственного препарата для лечения злокачественных опухолей женской репродуктивной системы в комбинации с введением ингибитора ароматазы.

Наряду с применением 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты и/или ее соли, и/или ее сложного эфира для получения такого лекарственного препарата в качестве других компонентов можно применять различные наполнители, вспомогательные вещества, в том числе солюбилизаторы, например аминосахара (или аминоспирты) и их сложные эфиры, циклодекстраны, например гидроксипропил-β-циклодекстрин, эмульгаторы, например, твины; загустители; светофильтры; например метиленовый синий; комплексообразователи; стабилизаторы, например трилон Б; пролонгаторы, например микроцеллюлоза или поливинилпирролидон; корригенты, например сорбит; красители; консерванты, а также буферные системы на основе неорганических и органических веществ, обеспечивающие поддержание определенного рН. Такой препарат может быть приготовлен в виде раствора для парентерального введения, или таблеток, или таблеток, покрытых кишечно-растворимым покрытием, или порошка или гранулята, в капсулах или пакетах, или в виде суппозиториев, или в виде аэрозоля или раствора для ингаляций, или в виде пролонгированной формы с замедленным высвобождением активного вещества, например в виде пролонгированной формы для перорального введения или полостного введения на основе твердой или полутвердой полимерной матрицы.

Согласно настоящему изобретению предпочтительные соли 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты для получения лекарственного препарата для лечения злокачественных опухолей женской репродуктивной системы в комбинации с введением ингибитора ароматазы выбирают из группы, включающей натриевую, меглюминовую, эглюминовую и соль с 3-O-(N,N-диметиламино-н-пропил)-1,2:5,6-ди-O-изопропилиден-α,D-глюкофуранозой.

Далее согласно изобретению предлагается набор для лечения злокачественных опухолей женской репродуктивной системы, включающий 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту, и/или ее соль, и/или ее сложный эфир в терапевтически эффективном количестве и ингибитор ароматазы.

Далее согласно изобретению как вариант вышеуказанного набора для лечения предлагается набор, в котором соль 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты выбрана из группы, включающей натриевую, меглюминовую, эглюминовую и соль с 3-O-(N,N-диметиламино-н-пропил)-1,2:5,6-ди-O-изопропилиден-α,D-глюкофуранозой.

В заявляемом наборе ингибитор ароматазы представляет собой стероидный ингибитор ароматазы нестероидный ингибитор ароматазы. Предпочтительным в наборе является ингибитор ароматазы, относящийся к группе, включающей: форместан, экземестан, аминоглютетимид, фадрозол, анастрозол, летрозол, ворозол.

Единичные дозированные формы в наборах могут быть представлены таблетками, капсулами или суспензиями для перорального приема; ампулами или шприц-тюбиками, содержащими стерильный раствор для инъекций; свечами для ректального или интравагинального введения; порошками для приготовления суспензий или растворов.

В общем, все средства по изобретению альтернативно могут включать в себя, состоять или по существу состоять из любых подходящих компонентов, раскрытых в данном описании, и такие средства, в том числе комбинация по изобретению могут дополнительно или альтернативно быть приготовлены так, что из них исключен какой-либо компонент, материал, ингредиент или объект, который был использован в препарате, известном из уровня техники, или который не является необходимым для достижения технического результата данного изобретения.

То же самое относится и к способам по изобретению, которые альтернативно могут включать в себя, состоять или по существу состоять из любых подходящих стадий, раскрытых в данном описании, и такие способы по изобретению могут дополнительно или альтернативно исключать какую-либо стадию или объект, который использован в способе, известном из уровня техники, или который не является необходимым для достижения технического результата данного изобретения.

Далее, изобретение иллюстрируется следующими примерами, не ограничивающими данное изобретение.

Материалы и методы

В проведенных экспериментах и клинических исследованиях использовались, в том числе коммерческие препараты солей СМА, представленные на рынке, например натриевая соль СМА (препарат Неовир, Фармсинтез, Россия), меглюминовая соль СМА (препарат Циклоферон, НТФФ Полисан, Россия, а также коммерчески доступная СМА (Sigma, США, кат №17927, каталог 2005 года), препарат соли СМА с 3-O-(N,N-диметиламино-н-пропил)-1,2:5,6-ди-O-изопропилиден-α,D-глюкофуранозой (здесь и далее обозначаемая как «N-пропилглюкаминовая соль СМА») (препарат Анандин, Медитэр, Россия).

Сложные эфиры и некоторые другие соли СМА были синтезированы известными, сравнительно простыми методами (см., например: Inglot A.D. et al., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1985, vol.33, pp.275-285; патент РФ №2135474; патент РФ №2036198; патент РФ №2033413). В отдельных случаях, например, для введения per rectum в клинике были приготовлены свечи, содержащие СМА и/или ее фармацевтически приемлемую соль, и/или ее сложный эфир. Такие свечи были приготовлены на основе широко применяемых для этих целей суппозиторных масс, таких как, в частности, Витепсол (Witepsol W 35, Е 75), так, как это проиллюстрировано примерами.

В экспериментах in vitro использовались также коммерчески доступные химически чистые ингибиторы ароматазы: форместан (4-гидроксиандрост-4-ене-3,17-дион); аминоглютетимид (3-(4-аминофенил)-3-этил-2,6-пиперидиндион); фадрозол (4-(5,6,7,8-тетрагидроимидазол[1,5-α]пиридин-5-ил)бензонитрил монгидрохлорид; летрозол (4-[(4-цианорфенил)-(1,2,4-триазол-1-ил)метил]бензонитрил); анастрозол (α,α,α',α'-тетраметил-5-(1Н-1,2,4-триазол-1-илметил)-м-бензендиацетонитрил); экземестан (10,13-диметил-6-метилиден-7,8,9,10,11,12,13,14,15,16-декагидроциклопентан[α]-

фенантриен-3,17-дион) (производители: Sigma-Aldrich, США; Шаанкси Дафенг Сайнтифик Индастриал энд Трэйдинг Ко, Китай) и другие.

При лечении пациенток, страдающих злокачественными опухолями женской репродуктивной системы, использовались коммерчески доступные ингибиторы ароматазы различной химической структуры и различных поколений данного класса лекарств, например аминоглютетимид (Мамомит, фирма Плива, Хорватия), анастрозол (Аримидекс, Астразенека Фармацевтикал ЛП, США), летрозол (Фемара, Новартис, Швейцария), экземестан (Аромазин, Фармация, Италия) и другие.

С целью изучения влияния различных ингибиторов ароматазы разных классов совместно с СМА, ее солями и ее сложными эфирами на опухоли человека использовался способ оценки ответа опухоли на лекарство в гистокультуре.

Для этого исследовали экспланты, выделенные из различных опухолей человека, происходящих из эстроген-зависимых тканей: из злокачественных опухолей молочной железы, из злокачественных эпителиальных опухолей эндометрия, из злокачественных стромальных опухолей эндометрия. Экспланты, полученные при оперативных вмешательствах, подготавливали и затем инкубировали в среде, содержащей те или иные агенты (соли СМА, ингибиторы ароматазы и их комбинации). В приведенных ниже примерах, иллюстрирующих изобретение, ИА вводили в среду инкубации в концентрации, равной или кратной IC₅₀ соответствующего ИА. Показатель IC₅₀ широко используется в фармакологии для характеристики ингибирующей активности ИА в отношении фермента ароматазы (см., например, Goss, P., Gween, K.M.E.H., Current perspectives on aromatase inhibitors in breast cancer, Journal of Clinical Oncology, 1994, vol.12, pp.2460-2470). IC₅₀ представляет собой такую концентрацию ИА, которая in vitro подавляет активность ароматазы человека на 50% в определенной модельной системе, содержащей источник ароматазы и субстрат (андрогенный стероид).

В одних случаях опухолевая ткань подвергалась одновременному воздействию СМА и ингибитора ароматазы. В других опытах ткани опухоли сначала подвергали воздействию СМА, а затем прекращали воздействие СМА и вносили в среду культивирования ИА. В отдельных опытах на опухолевую ткань сначала воздействовали с помощью СМА, а затем прибавляли ИА. Эффект воздействия на ткани опухоли человека определяли: по изменению пролиферации опухолевой ткани (ее оценивали по скорости включения радиоактивной метки во вновь синтезируемую ДНК); по изменению активности фактора NF-kB. Выживаемость клеток опухоли человека в гистокультуре при раздельном и совместном воздействии СМА, ИА, и химиопрепаратов различных классов оценивали по количеству образующегося формазана (под воздействием гидрогеназ выживших клеток) при инкубации клеток с 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромидом (МТТ-тест) (см., например, Hoffman, R.M. The clinical benefit of the histoculture drug response assay. Japanese Journal of Cancer Chemotherapy, 2000, vol.27, Supplement 11, pp.321-322).

Для оценки клинической эффективности предлагаемого способа лечения с согласия пациентов применялись различные ИА, используемые в клинике с одновременным и/или последовательным применением препаратов солей СМА и сложных эфиров СМА. Клинический эффект оценивался по критериям эффективности лечения Всемирной Организации Здравоохранения, а также по динамике опухолевых маркеров в сыворотке крови пациентов.

ПРИМЕР 1. Определение IC₅₀ для ингибиторов ароматазы различных химических классов.

Перед началом всех экспериментов на эксплантах опухолей для каждого ИА определялась IC₅₀ классическим методом (Thompson, E.A and Siiteri, P.К., The involvement of human placental microsomal cytochrome P-450 in aromatization, Journal Biological Chemistry, 1974, vol.249, pp.5373-5378). В качестве источника ароматазы человека использовали человеческие плацентарные микросомы (Ryan, K.J., Biological aromatization of steroids., Journal Biological Chemistry, 1959, vol. 234, pp.268-272). В качестве субстрата для ароматазы использовали [1β³H]Δ4-андростендион (1 мКи, 100 нМ), (Институт молекулярной генетики РАН). Каждый опыт повторяли трижды. Результаты представлены в Таблице 1.

Таблица 1 Полученные значения IC₅₀ для различных ингибиторов ароматазы Ингибитор ароматазы (МНН) Класс Химическая структура Основной механизм ингибирования Код IC₅₀ (среднее, нМ) Экземестан СИ Структурный аналог андростендиона Конкурентный ЕХМ 5 Форместан СИ Структурный аналог андростендиона Активируемое энзимом необратимое ингибирование FMS 30 Аминоглютетимид НСИ Производное пиперидиона Конкурентный AMG 1800 Анастрозол НСИ Производное триазола Конкурентный ANL 15 Ворозол НСИ Производное триазола Конкурентный VRL 1,2 Фадрозол НСИ Производное имидазола Конкурентный FAD 6 Летрозол НСИ Производное триазола Конкурентный LET 10 Примечание: СИ - стероидный ИА; НСИ - нестероидный ИА.

ПРИМЕР 2. Система гистокультуры злокачественной опухоли ткани для изучения влияния ингибиторов ароматазы, в том числе в комбинации с СМА, ее фармацевтическими солями и ее сложными эфирами, на пролиферацию клеток и на активность фактора NF-kB в злокачественных опухолях женской репродуктивной системы человека.

Образцы ткани злокачественных опухолей женской репродуктивной системы человека, полученные во время оперативного вмешательства, разрезали на кусочки размером 1-1.5 мм. Кусочки помещали на поверхность пористой желатиновой губки и инкубировали в минимальной среде Игла с добавлением до 5% эмбриональной телячьей сыворотки. Тканевую культуру поддерживали в течение 10 дней температуре 37°С в атмосфере 5% СO₂. При этом часть кусочков одной и той опухоли от одной и той же больной инкубировали в присутствии 10^-6 М тестостерона (субстрата для ароматазы), а другую часть кусочков культивировали без добавления тестостерона.

При этом в тканевую культуру в отдельных случаях одновременно с тестостероном вносили:

- различные ингибиторы ароматазы;

- СМА, ее различные соли и ее сложные эфиры;

- комбинацию ингибитора ароматазы, с одной стороны, и СМА и/или ее солей, и/или ее сложных эфиров, с другой.

Кусочки опухолевой ткани инкубировали в течение 10 дней. Для оценки скорости пролиферации кусочки ткани переносили на новую коллагеновую губку и инкубировали в свежей среде в присутствии [³H]-тимидина (5 мкКи/мл) в течение 72 часов. По истечении этого времени кусочки ткани взвешивали, обрабатывали ферментами для разделения клеток и выделяли ДНК. Для этого ткань помещали в раствор коллагеназы 0.1 мг/мл и инкубировали в течение ночи при 37°С, а затем 0,1 мг/мл протеиназы К и инкубировали при 37°С в течение 3 часов. Выделение ДНК проводилось по рутинной методике в лизирующем буфере, содержащем 5 М гуанидинизотиоцианата, с последующей эктракцией смесью фенол/хлороформ и осаждением 96% этанолом в присутствии 3 М ацетата натрия. Выделенную ДНК растворяли 50 мкл ТЕ-буфера (0.01 М Трис-НСl 0.001 М ЭДТА рН 7.8). Количество ДНК определялось спектрофотометрически (оптическая плотность (Optical Density (OD)) при 260 нм). Радиоактивность в ДНК включенной радиоактивной метки ([³Н]-тимидина) измерялась на сцинцилляционном счетчике.

Мерой противоопухолевого воздействия примененных агентов (или их комбинаций) являлось снижение удельной радиоактивности ДНК ткани.

При этом все изучаемые экспланты опухолей были разделены на две категории:

Категория А: Экспланты, удельная радиоактивность ДНК которых повышалась в присутствии тестостерона. Это свидетельствовало о том, что ароматаза достаточна активна в этой опухоли и превращает тестостерон в эстрадиол, который стимулирует рост опухолевой ткани. В этом случае ингибиторы ароматазы ингибируя эту конверсию должны подавлять пролиферацию клеток опухоли. В этом случае за начальный уровень удельной радиоактивности ДНК (=пролиферации) принимался уровень удельной радиоактивности ДНК в присутствии одного лишь тестостерона. Определялось отношение (R).

Значение R меньше единицы свидетельствовало об уменьшении эстроген-индуцированной пролиферации. Значение R, равное единице, свидетельствовало об отсутствии изменений эстроген-индуцированной пролиферации под воздействием исследуемых агентов и их комбинаций.

Категория В: Экспланты, удельная радиоактивность ДНК которых не изменялась в присутствии тестостерона. Это свидетельствовало о том, что ароматазный путь внутриопухолевого синтеза эстрогенов не имеет значения для роста данной опухоли у данного больного. В таком случае возможный антипролиферативный (противоопухолевый) эффект ингибиторов ароматазы, в том числе в комбинации с СМА, обусловливается другими механизмами. В этом случае за начальный уровень удельной радиоактивности ДНК (то есть уровень пролиферации) принимался уровень удельной радиоактивности ДНК вне каких-либо воздействий. Определялось отношение (R).

Значение R меньше единицы свидетельствовало об уменьшении пролиферации. Значение R, равное единице, свидетельствовало об отсутствии изменений пролиферации под воздействием исследуемых агентов и их комбинаций.

Активность фактора NF-kB до и после инкубации определяли с помощью набора StressXpress NF-kB, р50 ELISA Kit (фирма StressGen, каталожный №EKS-445) на люминисцентном спектрофотометре. Изменения активного фактора NF-kB выражали в процентах к контролю, то есть уровню конституциональной (вне всяких воздействий) активности фактора NF-kB в клетках опухоли.

ПРИМЕР 3. Способность СМА, ее солей и ее сложных эфиров усиливать антипролиферативный эффект ингибиторов ароматазы на злокачественные опухоли молочной железы.

Способность СМА, ее солей и ее сложных эфиров усиливать антипролиферативный эффект ингибиторов ароматазы на злокачественные опухоли молочной железы исследовалась на эксплантах опухолей от 5 пациенток, страдающих раком молочной железы:

Исследования в отношении влияния на пролиферацию опухолей проводились способом, описанным в Примере 2.

Результаты представлены в таблице 2 (для эксплантов Категории А) и таблице 3 (для эксплантов Категории В)

Таблица 2 Изменение пролиферативной активности ткани рака молочной железы человека, предварительно стимулированной внесением тестостерона в среду инкубации (Категория А) под действием СМА в комбинации с ИА   Код экспланта ткани рака молочной железы человека (Категория А)   ВС1 А ВС2 А ВС3 А ИА ЕХМ AMG VRL VCL FMS FAD ANL VCL ЕХМ FAD LET VCL Концентрация ИА (IС₅₀×1), нМ 5 1800 1,2   30 6 15 - 5 6 10 -   R VCL 0,74 0,65 0,44 1,0 0,84 0,44 0,52 1,0 0,21 0,64 0,32 1,0 СМА, ее соль или ее сложный эфир (10^-9 М)                         СМА 0,35 0,24 0,18 1,0 0,30 0,10 0,30 1,0 0,12 0,41 0,18 1,0 NaCMA 0,39 0,26 0,21 1,0 0,27 0,12 0,33 1,0 0,12 0,38 0,20 1,0 МеgСМА 0,32 0,23 0,22 1,0 0,29 0,15 0,32 1,0 0,09 0,40 0,21 1,0 ЕgСМА 0,29 0,19 0,20 1,0 0,26 0,14 0,36 1,0 0,11 0,37 0,21 1,0 Propyl CMA 0,36 0,25 0,17 1,0 0,27 0,15 0,34 1,0 0,15 0,36 0,22 1,0 EthylEt СМА 0,38 0,28 0,19 1,0 0,28 0,13 0,31 1,0 0,14 0,38 0,23 1,0 PropylEt СМА 0,40 0,24 0,22 1,0 0,32 0,11 0,29 1,0 0,12 0,41 0,19 1,0 Примечание: экземестан (ЕХМ); аминоглютетимид (AMG); ворозол (VRL); форместан (FMS); фадрозол (FAD); летрозол (LET), анастрозол (ANL); VCL - растворитель (носитель); 9-оксоакридин-10-уксусная кислота (СМА); натриевая соль СМА (NaCMA), меглюминовая соль СМА (МеgСМА); эглюминовая (т.е. N-этилглюкаминовая) соль СМА (ЕgСМА); N-пропилглюкаминовая соль СМА (PropylCMA); этиловый эфир СМА (EthylEt СМА); пропиловый эфир СМА (PropylEt СМА)

Из данных, представленных в таблице видно, что СМА, ее соли и ее сложные эфиры резко усиливают способность ингибиторов ароматазы снижать активность ароматазы, предотвращая конверсию андрогена в эстроген, и тем самым уменьшать стимулированную гормоном пролиферацию в ткани рака молочной железы человека. Указанные свойства СМА проявляются независимо от химической природы ИА и его механизма действия. При этом сами по себе СМА, ее соли и ее сложные эфиры не обладают ингибирующей активностью в отношении ароматазы: при воздействии одним лишь СМА (или ее солью или ее сложным эфиром) не происходит отмены (или снижения) эффекта стимуляции пролиферации опухоли, вызванной эстрогеном, образованным в ткани под воздействием ароматазы.

Таблица 3 Изменение пролиферативной активности ткани рака молочной железы человека, изначально не изменившейся в присутствии тестостерона в среде инкубации (Категория В) под действием СМА в комбинации с ИА   Код эксплантов ткани рака молочной железы человека (Категория В).   ВС3, категория В ВС4, категория В ИА ЕХМ AMG VRL VCL FMS FAD ANL VCL Концентрация ИА (IС₅₀×2), нМ 10 3600 2,4 - 60 12 30 -   R VCL 0,91 0,81 0,64 1,0 0,79 0,75 0,78 1,0 СМА, ее соль или ее сложный эфир (10^-9 М)                 СМА 0,44 0,49 0,20 1,0 0,34 0,54 0,55 1,0 NaCMA 0,47 0,50 0,21 1,0 0,35 0,49 0,50 1,0 МеgСМА 0,44 0,53 0,27 1,0 0,39 0,51 0,52 1,0 ЕgСМА 0,48 0,48 0,22 1,0 0,36 0,52 0,56 1,0 PropylCMA 0,45 0,47 0,23 1,0 0,38 0,54 0,54 1,0 EthylEt СМА 0,47 0,51 0,15 1,0 0,38 0,54 0,30 1,0 PropylEt СМА 0,43 0,51 0,13 1,0 0,34 0,50 0,36 1,0 Примечание: экземестан (ЕХМ); аминоглютетимид (AMG); ворозол (VRL); форместан (FMS); фадрозол (FAD); летрозол (LET), анастрозол (ANL); VCL - растворитель (носитель); 9-оксоакридин-10-уксусная кислота (СМА); натриевая соль СМА (NaCMA), меглюминовая соль СМА (МеgСМА); эглюминовая (т.е. N-этилглюкаминовая) соль СМА (ЕgСМА); N-пропилглюкаминовая соль СМА (PropylCMA); этиловый эфир СМА (EthylEt СМА); пропиловый эфир СМА (PropylEt СМА)

Из данных, представленных в таблице видно, что СМА, ее соли и ее сложные эфиры резко усиливают способность ингибиторов ароматазы снижать активность пролиферации в ткани рака молочной железы человека. Этот эффект имеет место, даже если активность ароматазы низка (или клетки слабо реагируют или не реагируют на образованный в результате ароматизации из тестостерона эстроген).

Указанные свойства СМА проявляются независимо от химической природы ИА и его механизма действия. При этом сами по себе СМА, ее соли и ее сложные эфиры не обладают ингибирующей активностью в отношении пролиферации ткани. При воздействии одним лишь СМА (или ее солью или ее сложным эфиром) не происходит отмены (или снижения) эффекта стимуляции пролиферации опухоли, вызванной эстрогеном, образованным в ткани под воздействием ароматазы. Следует отметить факт более мощного синергидного влияния более липофильных соединений СМА (то есть сложных эфиров СМА) и нестероидных ингибиторов группы триазола на снижение пролиферативной активности опухолевой ткани.

ПРИМЕР 4. Способность СМА, ее солей и ее сложных эфиров усиливать антипролиферативный эффект ингибиторов ароматазы на злокачественные опухоли матки.

Способность СМА, ее солей и ее сложных эфиров усиливать антипролиферативный эффект ингибиторов ароматазы на злокачественные опухоли матки исследовалась на эксплантах опухолей от 3 пациенток, страдающих раком матки.

Исследования в отношении влияния на пролиферацию опухолей проводились по методике, описанной в Примере 2.

Результаты представлены в Таблице 4.

Таблица 4 Изменение пролиферативной активности (ПА) ткани рака молочной железы человека, изначально не изменившейся в присутствии тестостерона в среде инкубации (Категория Б) под действием СМА в комбинации с ИА   Код экспланта ткани рака матки:   ПА которого увеличилась при внесении тестостерона в среду инкубации (Категория А) ПА которого изначально не изменилась в присутствии тестостерона в среде инкубации (Категория В)   CU1, категория А CU2, категория А CU3, категория В ИА ЕХМ AMG VRL VCL FMS FAD ANL VCL ЕХМ FAD LET VCL Концентрация ИА (IС₅₀×1), нМ 5 1800 1,2 - 30 6 15 - 5 6 10 -   R VCL 0,82 0,55 0,63 1,0 0,44 0,42 0,46 1,0 0,73 0,66 0,54 1,0 СМА, ее соль или ее сложный эфир (10^-9 М)                         СМА 0,35 0,28 0,21 1,0 0,21 0,18 0,30 1,0 0,12 0,22 0,42 1,0 NaCMA 0,29 0,24 0,19 1,0 0,17 0,22 0,31 1,0 0,12 0,22 0,42 1,0 МеgСМА 0,29 0,32 0,18 1,0 0,22 0,21 0,32 1,0 0,09 0,21 0,40 1,0 ЕgСМА 0,34 0,33 0,17 1,0 0,18 0,22 0,29 1,0 0,11 0,25 0,39 1,0 PropylCMA 0,37 0,32 0,22 1,0 0,21 0,19 0,32 1,0 0,15 0,27 0,38 1,0 EthylEt СМА 0,38 0,33 0,23 1,0 0,22 0,20 0,28 1,0 0,14 0,29 0,40 1,0 PropylEt СМА 0,38 0,37 0,25 1,0 0,18 0,22 0,31 1,0 0,12 0,24 0,38 1,0 Примечание: экземестан (ЕХМ); аминоглютетимид (AMG); ворозол (VRL); форместан (FMS); фадрозол (FAD); летрозол (LET); анастрозол (ANL); VCL - растворитель (носитель); 9-оксоакридин-10-уксусная кислота (СМА); натриевая соль СМА (NaCMA); меглюминовая соль СМА (МеgСМА); эглюминовая соль СМА (ЕgСМА); N-пропилглюкаминовая соль СМА (PropylCMA); этиловый эфир СМА (EthylEt СМА); пропиловый эфир СМА (PropylEt СМА).

Из данных, представленных в таблице, видно, что СМА, ее соли и ее сложные эфиры резко усиливают способность ингибиторов ароматазы ингибировать рост ткани рака матки человека. Это свойство СМА проявляется, даже если активность ароматазы низка (или клетки слабо реагируют или не реагируют на эстроген, образующийся в результате ароматизации тестостерона).

Указанные свойства СМА проявляются независимо от химической природы ИА и его механизма действия. При этом сами по себе СМА, ее соли и ее сложные эфиры не обладают ингибирующей активностью в отношении пролиферации ткани опухоли матки. При воздействии одним лишь СМА (или ее солью или ее сложным эфиром) не происходит отмены (или снижения) эффекта стимуляции пролиферации опухоли, вызванной эстрогеном, образованным в процессе ароматизации.

ПРИМЕР 5. Способность СМА, ее солей и ее сложных эфиров снижать активность фактора NF-kB в присутствии ингибиторов ароматазы в тканях злокачественных опухолей женской репродуктивной системы человека.

Эксперименты проводили, как это описано в Примере 2. Изменения активного фактора NF-kB выражали в процентах к контролю, то есть к уровню конституциональной (вне всяких воздействий) активности NF-kB в клетках опухоли. Результаты экспериментов представлены в Таблице 5.

Таблица 5 Способность СМА, ее солей и ее сложных эфиров снижать активность фактора NF-kB в присутствии ингибиторов ароматазы в тканях злокачественных опухолей женской репродуктивной системы человека   Эксплант рака молочной железы Эксплант рака матки Эксплант рака яичников ИА FMS AMG LET VCL ЕХМ FAD ANL VCL ЕХМ FAD VRL VCL Концентрация ИА (IC₅₀×0,5), нМ 15 900 5 - 2,5 3 7,5 - 2,5 3 0,6 - VCL 97 99 98 100 100 100 99 100 100 100 100 100 СМА, ее соль или ее сложный эфир (10^-12 М):                         СМА 54 29 45 100 35 19 30 100 61 70 45 100 NaCMA 55 24 46 100 29 20 31 100 50 69 55 100 МеgСМА 52 26 46 100 29 22 32 100 55 72 50 100 EthylEt СМА 56 27 42 100 28 22 28 100 54 65 52 100 Примечание: экземестан (ЕХМ); аминоглютетимид (AMG); ворозол (VRL); форместан (FMS); фадрозол (FAD); летрозол (LET); анастрозол (ANL); VCL - растворитель (носитель); 9-оксоакридин-10-уксусная кислота (СМА); натриевая соль СМА (NaCMA); меглюминовая соль СМА (МеgСМА); этиловый эфир СМА (EthylEt СМА).

Из представленных в таблице данных видно, что СМА, ее соли и ее сложные эфиры резко усиливают (потенцируют) способность ИА снижать активность фактора NF-kB в клетках рака женской репродуктивной системы человека. Сами по себе СМА и ее производные не оказывали влияния на этот показатель, однако совместное воздействие (ИА+СМА) вызвало значительное снижение уровня активного фактора NF-kB.

ПРИМЕР 6. Способность СМА, ее солей и ее сложных эфиров усиливать чувствительность ткани злокачественных опухолей женской репродуктивной системы человека к последующему противоопухолевому воздействию ингибитора ароматазы.

Использовали экспланты рака молочной железы (ВСа), рака яичника (CaOV) и стромальной злокачественной опухоли матки (SCU).

Эксперименты проводили, так как описано в Примере 2. Первые 5 дней в среду инкубации вносилась СМА, ее соль или ее сложный эфир (или носитель - контроль). Затем СМА при смене среды культивирования заменяли на тот или иной ингибитор ИА и культивирование с ИА продолжали последующие 5 дней.

За начальный уровень удельной радиоактивности ДНК (то есть уровень синтеза новой ДНК, отражающей интенсивность пролиферации) принимался уровень удельной радиоактивности ДНК вне каких-либо воздействий. Определялось отношение R:

Отношение R меньше единицы свидетельствовало об уменьшении пролиферации. Отношение R, равное единице, свидетельствовало об отсутствии изменений пролиферации под воздействием исследуемых агентов и их комбинаций.

Результаты экспериментов представлены в Таблице 6.

Таблица 6 Способность СМА, ее солей и ее сложных эфиров усиливать чувствительность ткани злокачественных опухолей женской репродуктивной системы человека к последующему противоопухолевому воздействию ИА СМА, ее соль или ее сложный эфир
(10^-6 М) ВСа CaOV SCU ИА FMS AMG LET VCL EXM FAD ANL VCL EXM FAD VRL VCL Концентрация ИА (IC₅₀×1), нМ 30 1800 10 - 5 6 15 - 5 6 1,2 -   R VCL 0,64 0,77 0,43 1,0 0,67 0,48 0,76 1,0 0,22 0,34 0,35 1,0 СМА, ее соль или ее сложный эфир
(10^-12 М):                         СМА 0,45 0,42 0,22 1,0 0,52 0,22 0,30 1,0 0,14 0,17 0,10 1,0 NaCMA 0,44 0,39 0,25 1,0 0,49 0,22 0,31 1,0 0,14 0,28 0,09 1,0 МеgСМА 0,39 0,44 0,26 1,0 0,48 0,23 0,32 1,0 0,09 0,21 0,10 1,0 ЕgСМА 0,38 0,36 0,27 1,0 0,51 0,22 0,29 1,0 0,11 0,25 0,17 1,0 PropylCMA 0,42 0,33 0,28 1,0 0,53 0,27 0,32 1,0 0,15 0,26 0,14 1,0 EthylEt СМА 0,42 0,32 0,28 1,0 0,52 0,24 0,28 1,0 0,14 0,23 0,15 1,0 PropylEt СМА 0,34 0,38 0,29 1,0 0,43 0,27 0,31 1,0 0,13 0,24 0,12 1,0 Примечание: экземестан (ЕХМ); аминоглютетимид (AMG); ворозол (VRL); форместан (FMS); фадрозол (FAD); летрозол (LET); анастрозол (ANL); VCL - растворитель (носитель); 9-оксоакридин-10-уксусная кислота (СМА); натриевая соль СМА (NaCMA); меглюминовая соль СМА (МеgСМА); эглюминовая соль СМА (ЕgСМА); N-пропилглюкаминовая соль СМА (PropylCMA); этиловый эфир СМА (EthylEt СМА); пропиловый эфир СМА (PropylEt СМА)

Из данных, представленных в таблице, видно, что СМА, ее соли и ее сложные эфиры резко увеличивают чувствительность тканей злокачественных опухолей женской репродуктивной системы человека к последующему противоопухолевому воздействию ингибитора ароматазы. Видно также, что степень такой «сенситизации» варьируется в зависимости от химической природы и механизма действия ИА.

ПРИМЕР 7. Способность СМА, ее солей и ее сложных эфиров потенцировать в комбинации с ИА противоопухолевый эффект химиотерапевтических агентов разных классов при лечении злокачественных опухолей женской репродуктивной системы.

Для оценки способности СМА, ее солей и ее сложных эфиров в комбинации с ИА потенцировать действие химиотерапевтических агентов разных классов на злокачественные опухоли женской репродуктивной системы, также использовали метод гистокультуры, подобный описанному в Примере 2. Исследовали экспланты (полученные во время оперативного вмешательства) злокачественной стромальной опухоли матки (код пациентки САК), рака яичника (код пациентки АРР), рака молочной железы (код пациентки АТТ). Однако оценивали не пролиферативную активность, а выживаемость клеток. В среду культивации не добавляли гормонов. Для культивирования эксплантов опухолей использовали среду RPMI 1640 с добавлением 20% эмбриональной телячьей сыворотки. Образцы ткани инкубировали в течение 7 дней при температуре 37°С в атмосфере 5% СO₂. Инкубация гистокультуры проводилась на поверхности желатиновой губки, погруженной в среду в лунках 24-луночного планшета. Воздействие каждого химиотерапевтического агента (ХТА) оценивали по его IC₅₀ в отношении каждой опухоли отдельной пациентки. IC₅₀ определяется как концентрация ХТА, которая приводит к уменьшению количества жизнеспособных опухолевых клеток на 50%. Для определения IC₅₀ (обозначенного в данной заявке как СhеmIC₅₀) каждого из ХТА было использовано по 5 концентраций с шагом «2х». То есть каждая последующая концентрация ХТА в серии концентраций в среде культивирования была в два раза больше предыдущей. Для каждой концентрации ХТА использовали не менее трех лунок (одна точка). В этом эксперименте в среду культивации части образцов дополнительно вносили ИА в концентрации 1/10 от IC₅₀ соответствующего ИА (см. Таблицу 1), и/или СМА в концентрации 10^-12 М. Таким образом, можно было сравнить ChemIC₅₀ для каждого ХТА (в отношении каждой опухоли) в присутствии или в отсутствии СМА и/или того или иного ИА.

Контролем служили образцы, соответственно, инкубируемые без ИА, без СМА и/или ХТА.

После окончания 7 дневной инкубации количество выживших клеток оценили с использованием МТТ-теста. Для этого в каждую лунку с клетками добавляли раствор 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида (МТТ) (Sigma) и продолжали инкубацию еще в течение 6 часов при температуре 37°С в атмосфере 5% СO₂. После этого образцы тканей перенесли в новые лунки. В каждую лунку добавили 100% диметилсульфоксид (ДМСО) для растворения кристаллов образовавшегося формазана. Оптическая плотность (OD) раствора образованного формазана для каждой лунки была измерена при длине волны 540 нм. Сырой вес каждого инкубированного кусочка ткани был измерен для вычисления удельного поглощения, то есть OD на 1 г ткани. Степень ингибирования (IR, %) для каждой концентрации ХТА определяли по формуле:

Определяли среднюю IR для каждой концентрации ХТА (три лунки). Строили график зависимости «доза-ответ» (средняя IR против концентрации ХТА). По построенному графику зависимости определяли концентрацию ХТА, вызывающую 50% ингибирование опухоли (обозначена как ChemIC₅₀).

Результаты экспериментов представлены в Таблице 7 (для опухоли матки), Таблице 8 (для опухоли яичника), Таблице 9 (для опухоли молочной железы).

В таблицах применены следующие обозначения: ЕХМ - экземестан; AMG - аминоглютетимид; VRL - ворозол; FMS - форместан; FAD - фадрозол; LET - летрозол; ANL - анастрозол; VCL - растворитель (носитель); СМА - 9-оксоакридин-10-уксусная кислота; NaCMA - натриевая соль СМА, МеgСМА - меглюминовая соль СМА; ЕgСМА - эглюминовая соль СМА; PropylCMA - N-пропилглюкаминовая соль СМА (т.е. соль с 3-O-(N,N-диметиламино-н-пропил)-1,2:5,6-ди-O-изопропилиден-α,D-глюкофуранозой); EthylEt СМА - этиловый эфир СМА; PropyIEt СМА - пропиловый эфир СМА.

Таблица 7 Влияние комбинации СМА с ИА на чувствительность злокачественной опухоли матки человека к химиотерапевтическим агентам разных классов Препарат Цисплатин Паклитаксел Эпирубицин 5-фторурацил Класс соединений Платиноиды Таксаны Антрациклиновые антибиотики Антиметаболиты ИА ЕХМ ANL FAD VCL FMS VRL LET VCL FMS AMG FAD VCL ЕХМ ANL VRL VCL Концентрация ИА (IС₅₀*×1/10), нМ 0,5 1,5 0,6 - 3 0,12 1 - 3 180 0,6 - 0,5 1,5 0,12 -   ChemIC₅₀, мкг/мл ChemIC₅₀, мкг/мл ChemIC₅₀, мкг/мл ChemIC₅₀, мкг/мл VCL 21 22 21 21 98 112 106 98 34 36 35 34 182 184 188 186 СМА, ее соль или ее сложный эфир (10^-12 М):                                 СМА 14 12 15 22 32 42 65 96 22 11 11 32 121 97 58 180 NaCMA 13 11 11 21 36 22 64 110 23 12 11 32 116 99 50 182 ЕgСМА 16 11 17 23 37 46 58 101 27 11 12 34 115 102 66 179 EthylEtCMA 17 10 16 22 32 35 52 97 20 10 12 35 114 89 72 185 *См. Таблицу 1

Таблица 8 Влияние комбинации СМА с ИА на чувствительность злокачественной опухоли яичника человека кхимиотерапевтическим агентам разных классов Препарат Карбоплатин Паклитаксел Циклофосфамид Топотекан Класс соединений Платиноиды Таксаны Алкилирующие агенты Ингибиторы топоизомеразы ИА ЕХМ ANL FAD VCL FMS VRL LET VCL FMS AMG FAD VCL ЕХМ ANL VRL VCL Концентрация ИА (IС₅₀*×1/10), нМ 0,5 1,5 0,6 - 3 0,12 1 - 3 180 0,6 - 0,5 1,5 0,12 -   ChemIC₅₀, мкг/мл ChemIC₅₀, мкг/мл СhеmIC₅₀, мкг/мл ChemIC₅₀, мкг/мл VCL 36 36 34 34 173 172 176 169 5,5 5,6 6,1 6,2 245 250 238 247 СМА, ее соль или ее сложный эфир (10^-12 М):                                 СМА 14 29 18 32 67 110 83 170 1,4 2,6 2,3 6,3 85 39 120 239 NaCMA 14 28 17 33 69 121 88 175 1,6 2,1 2,2 5,4 87 36 126 246 МеgСМА 12 25 15 35 68 114 89 181 1,6 2,4 3,1 5,2 89 48 121 247 PropylEtCMA 11 27 16 36 69 125 95 182 1,7 2,5 2,3 6,3 99 42 145 250 *См. Таблицу 1

Таблица 9 Влияние комбинации СМА с ИА на чувствительность злокачественной опухоли молочной железы человека к химиотерапевтическим агентам разных классов ХТА Цисплатин Доксорубицин 5- фторурацил Доцетаксел Класс ХТА Платиноиды Антрациклиновые антибиотики Антиметаболиты Таксаны ИА ЕХМ ANL FAD VCL FMS VRL LET VCL FMS AMG FAD VCL ЕХМ ANL VRL VCL Концентрация ИА (IС₅₀*×1/10), нМ 0,5 1,5 0,6 - 3 0,12 1 - 3 180 0,6 - 0,5 1,5 0,12 -   ChemIC₅₀, мкг/мл ChemIC₅₀, мкг/мл ChemIC₅₀, мкг/мл СhеmIC₅₀, мкг/мл VCL 55 54 53 54 16 17 14 15 294 285 278 296 125 125 124 126 СМА, ее соль или ее сложный эфир (10^-12 М):                               126 СМА 20 32 12 52 8 9 11 17 114 154 187 299 57 23 77 122 NaCMA 21 34 14 57 6 8 10 16 126 167 184 277 53 27 73 123 PropylCMA 23 35 15 53 7 10 12 14 137 189 196 284 59 24 73 124 EthylEtCMA 26 30 16 55 8 7 11 17 122 143 185 266 52 23 79 125 *См. Таблицу 1

Данные, представленные в таблицах №№7, 8, 9, показывают, что добавление в среду культивирования комбинации СМА и ИА приводит к значительному усилению чувствительности злокачественной опухоли матки человека к противоопухолевому действию ХТА различных классов. При этом в тех случаях, где потенцирующий эффект СМА или ИА по отдельности не проявляется, комбинация СМА и ИА, напротив, показывает выраженный потенцирующий эффект в отношении противоопухолевого действия ХТА.

Указанный эффект наблюдали и для других исследованных авторами ХТА, в том числе других противоопухолевых агентов: например, других алкилирующих агентов, в том числе хлорамбуцила, мелфалана, дакарбазина; например, других антиметаболитов, в частности, метотрексата, этопозида, цитарабина, капацетабина; например, других противоопухолевых антибиотиков, в частности, актиномицина Д, даунорубицина, митомицина С, блеомицина; например, алкалоидов барвинка, в частности винкристина; например, глюкокортикоидов, в частности, преднизона; например, препаратов нитрозомочевины, в частности, ломустина; например, противоопухолевых ферментов, в частности, аспарагиназы; например, других ингибиторов топоизомеразы, в частности, иринотекана; других препаратов, нарушающих сборку тубулина микротрубочек, например винорельбина.

Таким образом, СМА, ее соли и ее сложные эфиры в комбинации с ИА способны потенцировать противоопухолевый эффект химиотерапевтических агентов разных классов в отношении злокачественных опухолей женской репродуктивной системы, а именно, в отношении злокачественных опухолей матки, яичников и молочной железы.

При этом:

- по отдельности СМА и ИА не вызывают наблюдаемый эффект;

- наблюдаемый эффект проявляется для ИА различных по механизму действия и химическому классу ИА;

- наблюдаемый эффект проявляется как для СМА и ее органических и неорганических солей СМА, так и для различных сложных эфиров СМА;

- наблюдаемый эффект проявляется в отношении ХТА различных по химическому строению и механизму действия.

ПРИМЕР 8. Приготовление лекарственного средства для ректального или интравагинального введения

250 г мелкокристаллической 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты смешивали при нагревании до 60°С с основой для свечей, состоящей из Витепсола W 35 (Condea Chemie GmbH, Германия), и эмульгатора твина-80 (Serva, Германия), гомогенизировали смесь в мешалке, получая суппозиторную массу общим весом 1.5 кг и формовали 970 суппозиториев, каждая массой 1.5 г следующего состава: 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты - 0.250 г; твина-80 - 0,45 г; витепсола W 35 - 1.2 г. Выход составлял 97%.

ПРИМЕР 9. Вариант лечения рака женской репродуктивной системы (в частности, распространенного рака молочной железы), при котором введение ингибитора ароматазы и СМА осуществляют одновременно

Женщина, 56 лет, страдающая распространенным раком молочной железы (T₁ N₁ Мо) получала тамоксифен в течение 8 месяцев. К тамоксифену развилась устойчивость, и опухоль возобновила рост. С согласия больной ей был назначен ИА экземестан 25 мг/сут в сочетании с натриевой солью СМА (4 мг/кг веса тела однократно в сутки в пересчете на СМА) ежедневно внутримышечно. Препараты вводились на протяжении 180 суток. На 2 месяце от начала лечения отмечена стабилизация опухолевого процесса по критериям ВОЗ. Стабилизация сохранялась на протяжении всего курса лечения. Лечение предлагаемым способом хорошо переносилось: основными побочными эффектами были ощущения приливов и тошнота, характерные для приема экземестана. Побочных эффектов, связанных с применением натриевой соли СМА, не выявлено. Таким образом, заявляемый способ высокоэффективен и безопасен при лечении рака женской репродуктивной системы (в частности, распространенного рака молочной железы) в варианте, когда производные СМА и ИА назначают одновременно.

ПРИМЕР 10. Вариант лечения рака женской репродуктивной системы (в частности, распространенного рака яичника), при котором последовательно примененяют СМА и ИА

У женщины, 65 лет, в малом тазу возник рецидив рака яичника через 3 года после успешно проведенного оперативного лечения. В связи с сопутствующими заболеваниями и распространенностью процесса оперативное лечение не было показано. С согласия больной ей было назначено лечение заявленным способом. Для этого в течение 30 дней ежедневно вводилась меглюминовая соль СМА (препарат Циклоферон, Россия) внутривенно 2 раза в день (по 500 мг (14 мг/кг веса тела) в пересчете на свободную СМА). После этого, препарат был отменен, и с 31 дня курса лечения больная стала получать ингибитор ароматазы летрозол перорально в дозе 2,5 мг/день. Оценивался объективный ответ на терапию по критериям UICC (International Union Against Cancer Conference), а также по изменению сывороточного уровня опухолевого маркера СА125. Ответ на терапию оценивался каждые 4 недели. У пациентки на восьмой от начала неделе лечения зафиксирован частичный ответ на лечение, уровень СА125 снизился на 50%. Этот эффект сохранялся последующие 30 месяцев лечения.

Таким образом, заявленный способ высокоэффективен при лечении рака женской репродуктивной системы (в частности, рака яичника), в варианте, при котором 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту или ее соль вводят до введения ингибитора ароматазы.

ПРИМЕР 11. Вариант лечения рака женской репродуктивной системы (в частности, рака матки), при котором 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту или ее соли или ее сложный эфир начинают вводить до начала введения ингибитора ароматазы и продолжают вводить одновременно с введением ингибитора ароматазы

Женщина, 68 лет, страдающая распространенным раком молочной железы Т2 N1 М1. Назначенные прогестины (медроксипрогестерона ацетат) не привели к какому-либо торможению роста опухоли. С согласия больной ей была назначена эглюминовая соль СМА (300 мг/кг веса тела однократно в сутки в пересчете на остаток СМА), растворенном в 5% растворе глюкозы внутривенно капельно ежедневно. Введение соли СМА проводили на протяжении 3 недель. Со 2 недели больной был назначен анастрозол по 1 мг/день перорально, а с 6 недели этиловый эфир СМА в виде свечей ректально 2 раза в день по 300 мг. На 3 месяце от начала лечения отмечена полная ремиссия по критериям ВОЗ. Ремиссия сохранялась на протяжении всего курса лечения. Лечение предлагаемым способом хорошо переносилось. Побочных эффектов, связанных с применением СМА не выявлено. Таким образом, заявленный способ высокоэффективен и безопасен при лечении рака женской репродуктивной системы (в частности, рака матки) в варианте, при котором 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту и/или ее соль или ее сложный эфир начинают вводить до начала введения ингибитора ароматазы и продолжают вводить одновременно с введением ингибитора ароматазы.

ПРИМЕР 12. Вариант лечения рака женской репродуктивной системы, при котором к комбинации с 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты или ее соли с ингибитором ароматазы дополнительно вводят химиотерапевтические агенты

У женщины, 67 лет, диагностирован рак (аденокарцинома) молочной железы (Т₂ N₁ M₁). С согласия больной ей был назначен ИА 2,5 мг 1 раз в сутки ежедневно в сочетании с эглюминовой солью СМА (1200 мг в пересчете на остаток СМА перорально 1 раз в два дня однократно в виде таблеток, покрытых кишечно-растворимой оболочкой). Одновременно дополнительно пациентка получила три «классических» курса схемы полихимиотерапии СМФ (циклофосфамид, метотрексат, 5-фторурацил) в 1-ый, 2-ой, и 3-ий месяц лечения. Между курсами полихимиотерапии прием соли СМА и ИА не прекращался. На 3 месяце от начала лечения выявлена частичная регрессия опухолевого процесса по критериям ВОЗ. Побочных эффектов, связанных с применением натриевой соли СМА, не выявлено. Таким образом, вариант заявляемого способа, при котором к комбинации с 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты или ее соли с ингибитором ароматазы дополнительно вводят химиотерапевтические агенты, высокоэффективен и безопасен при лечении рака женской репродуктивной системы.

ПРИМЕР 13. Профилактика рецидива рака женской репродуктивной системы

Пациентке, 63 лет, страдающей раком молочной железы (T₂ N₁ M₀), была выполнена мастэктомия с последующим назначением анастрозола (1 мг/день), совместно с пероральным приемом меглюминовой соли СМА (в виде желатиновых капсул по 0,250 мг, в пересчете на свободную СМА) 1 раз в день. В течение 5 лет (120 месяцев) наблюдения) возобновления роста рака в оперированной молочной железе или возникновения рака в контралатеральной молочной железы не зарегистрировано.

Таким образом, заявленный способ профилактики рецидива злокачественной опухоли женской репродуктивной системы, в частности рака молочной железы, является высокоэффективным.

ПРИМЕР 14. Набор для лечения злокачественных опухолей женской репродуктивной системы, содержащий соль СМА и ингибитор ароматазы

А) Таблетки натриевой соли СМА (250 мг) готовят следующим образом. Смешивают 125 г натриевой соли СМА с 83 г сухого полиглюкина, 1 г поливинилпирролидона и 272 г хлористого натрия. Таблетки гранулируют, опыляют гранулят тальком и таблетируют в таблет-прессе. Получают 970 таблеток (выход 97%). Таблетки затем покрывают кишечнорастворимым покрытием на основе полиметакрилата, высушивают и помещают в блистер из полиэтилентерефталата по 10 таблеток и покрывают его алюминиевой фольгой.

В) Таблетки ингибитора ароматазы готовят следующим

образом. Приготавливают таблетки следующего состава

Анастрозол (USP24), мг 1.00 Тальк, мг 8.80 Поливинилпирролидон, мг 5.00 Высокодисперсный оксид кремния, мг 6.80 Модифицированный крахмал, мг 42.70 Микрокристаллическая целлюлоза Avicel PH 102, мг 76.70 Микрокристаллическая целлюлоза Avicel PH 101, мг 40.00

Для этого 100 мг ингибитора ароматазы анастрозола (USP 24) и 0.38 г высокодисперсного оксида кремния просеивают через сита и предварительно смешивают в течение 10 минут. 7.67 г микрокристаллической целлюлозы Avicel РН102, 0,50 г поливинилпирролидона, 4,27 г модифицированного крахмала, 2.00 г микрокристаллической целлюлозы Avicel PH101 и 0.38 г талька просеиваются через сито и прибавляются к полученному премиксу. Все компоненты перемешиваются в течение 20 минут. Смесь уплотняется в уплотнителе при давлении 50 кН. Уплотненная смесь эвакуируется из уплотнителя посредством вибрационного сита. Затем к смеси прибавляется еще 2.00 г микрокристаллической целлюлозы Avicel PH101 и 0.50 г талька и смесь перемешивается еще 20 минут. Затем смесь таблетируют в таблет-прессе при давлении пресса 4 кН. Получают 980 таблеток (выход 98%), содержащих от 0.98 до 1.02 мг анастрозола каждая. Таблетки помещают в блистер из полиэтилентерефталата по 10 таблеток и покрывают его алюминиевой фольгой. С) Получение набора для лечения злокачественных опухолей женской репродуктивной системы, натриевой соли СМА и ингибитор ароматазы анастрозол. Два блистера полученных таблеток натриевой соли СМА и два блистера полученных таблеток ингибитора ароматазы помещают в потребительскую упаковку (картонную коробку) вместе с инструкцией по применению.

ПРИМЕР 15. Набор для лечения злокачественных опухолей женской репродуктивной системы, содержащий соль СМА и ингибитор ароматазы

А) Получение таблеток, содержащих соль СМА в качестве действующего вещества. Смешивают 278 г эглюминовой соли СМА (150 мг в пересчете на СМА) и 32.6 г эглюмина и гранулируют в грануляторе, прибавляя раствор метилцеллюлозы. После просеивания гранулят опудривают стеаратом магния и таблетируют полученную массу, получая 970 ядер таблеток. Полученные ядра таблеток покрывают с помощью эмульсии, содержащей 13% (мас.) сополимера метакрилата и этакрилата и 7% (мас.) 1,2-пропиленгликоля. Масса покрытия составляет 0.015-0.020 г на каждое ядро. В результате получают таблетки, каждая из которых содержит 280 мг эглюминовой соли СМА, 0.03 г эглюмина и 0.004 г метилцеллюлозы и стеарата магния (суммарно) и 0.015-0.020 г кишечнорастворимого покрытия. Таблетки помещают в блистер из полиэтилентерефталата по 50 таблеток. Блистер покрывают алюминиевой фольгой.

В) Получение таблеток, содержащих ингибитор ароматазы экземестан в качестве действующего вещества. Приготавливают таблетки следующего состава:

Экземестан (USP) мг 25.00 Тальк, мг 19.80 Поливинилпирролидон, мг 5.00 Высокодисперсный оксид кремния, мг 6.80 Модифицированный крахмал, мг 42.70 Микрокристаллическая целлюлоза Avicel PH 102, мг 45.70 Микрокристаллическая целлюлоза Avicel PH 101, мг 36.00

Для этого 2.50 г ингибитора ароматазы экземестана (USP 26) и 0.68 г высокодисперсного оксида кремния просеивают через сита и предварительно смешивают в течение 10 минут. 4.57 г микрокристаллической целлюлозы Avicel РН102, 0.50 г поливинилпирролидона, 4.27 г модифицированного крахмала, 1.60 г микрокристаллической целлюлозы Avicel PH101 и 0.38 г талька просеиваются через сито и прибавляются к полученному премиксу. Все компоненты перемешиваются в течение 20 минут. Смесь уплотняется в уплотнителе при давлении 60 кН. Уплотненная смесь эвакуируется из уплотнителя посредством вибрационного сита. Затем к смеси прибавляется еще 2.00 г микрокристаллической целлюлозы Avicel PH101 и 1.60 г талька и смесь перемешивается еще в течение 20 минут. Затем смесь таблетируют в таблет-прессе при давлении пресса 5 кН.

Содержание активного вещества (экземестана) в таблетке составляет от 22.5 до 27.5 мг (в среднем 25 мг). Таблетки помещают в блистер из полиэтилентерефталата по 50 таблеток. Блистер покрывают его алюминиевой фольгой.

С) Получение набора для лечения злокачественных опухолей женской репродуктивной системы, содержащего эглюминовую соль СМА и ингибитор ароматазы. Два блистера полученных таблеток эглюминовой соли СМА и два блистера полученных таблеток ингибитора ароматазы экземестана помещают в картонную потребительскую упаковку вместе с инструкцией по применению.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для лечения и профилактики рецидива злокачественных опухолей женской репродуктивной системы. Способы по изобретению включают введение 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты (СМА), и/или ее фармацевтически приемлемой соли, и/или ее сложного эфира в комбинации с ингибитором ароматазы. Также изобретение касается применения СМА для получения лекарственного препарата и набора для использования в указанных способах. Изобретение обеспечивает лечение и профилактику рецидивов злокачественных опухолей женской репродуктивной системы опухолей за счет потенцирования эффекта ингибиторов ароматазы и химиотерапевтических агентов под действием СМА. 3 н. и 16 з.п. ф-лы, 9 табл.

1. Способ лечения злокачественных опухолей женской репродуктивной системы и/или профилактики их рецидива, включающий введение 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты и/или ее фармацевтически приемлемой соли, и/или ее сложного эфира, отличающийся тем, что 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту, и/или ее соль, и/или ее сложный эфир вводят в комбинации с ингибитором ароматазы.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что злокачественные опухоли женской репродуктивной системы выбраны из группы, включающей: рак молочной железы, рак тела матки, рак яичников.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что соль 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты выбрана из группы, включающей в себя натриевую, меглюминовую, эглюминовую и соль с 3-O-(N,N-диметиламино-н-пропил)-1,2:5,6-ди-O-изопропилиден-α,D-глюкофуранозой.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что сложный эфир 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты выбран из группы, включающей в себя этиловый, пропиловый, бутиловый, изопропиловый, амиловый эфиры.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что ингибитор ароматазы представляет собой стероидный ингибитор ароматазы.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что ингибитор ароматазы представляет собой нестероидный ингибитор ароматазы.

7. Способ по п.5, отличающийся тем, что стероидный ингибитор ароматазы выбран из группы, включающей: форместан, экземестан.

8. Способ по п.6, отличающийся тем, что нестероидный ингибитор ароматазы выбран из группы, включающей: аминоглютетимид, фадрозол, анастрозол, летрозол, ворозол.

9. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно вводят одно или несколько химиотерапевтических средств.

10. Способ по п.1, отличающийся тем, что 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту, и/или ее соль, и/или ее сложный эфир вводят перед введением ингибитора ароматазы.

11. Способ по п.1, отличающийся тем, что 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту, и/или ее соль, и/или ее сложный эфир вводят одновременно с введением ингибитора ароматазы.

12. Способ по п.1, отличающийся тем, что введение 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты, и/или ее соли, и/или ее сложного эфира начинают перед введением ингибитора ароматазы и продолжают вводить одновременно с введением ингибитора ароматазы.

13. Способ по п.1, отличающийся тем, что 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту, и/или ее соль, и/или ее сложный эфир вводят каждый день или через день в течение от 1 месяца до 120 месяцев в суточной дозе от 4 до 300 мг/кг веса в пересчете на остаток 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты.

14. Способ по п.9, отличающийся тем, что химиотерапевтическое средство выбрано из группы, включающей: алкилирующие агенты, антиметаболиты; агенты, нарушающие сборку микротрубочек; противоопухолевые антибиотики, включая антрациклиновые антибиотики; препараты платины; ингибиторы топоизомеразы; глюкокортикоиды.

15. Применение 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты, и/или ее соли, и/или ее сложного эфира для получения лекарственного препарата для лечения злокачественных опухолей женской репродуктивной системы в комбинации с введением ингибитора ароматазы.

16. Применение по п.15, отличающееся тем, что соль 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты выбрана из группы, включающей натриевую, меглюминовую, эглюминовую и соль с 3-O-(N,N-диметиламино-н-пропил)-1,2:5,6-ди-O-изопропилиден-α,D-глюкофуранозой.

17. Набор для лечения злокачественных опухолей женской репродуктивной системы, включающий 9-оксоакридин-10-уксусную кислоту, и/или ее соль, и/или ее сложный эфир в терапевтически эффективном количестве и ингибитор ароматазы.

18. Набор по п.17, отличающийся тем, что соль 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты выбрана из группы, включающей натриевую, меглюминовую, эглюминовую и соль с 3-O-(N,N-диметиламино-н-пропил)-1,2:5,6-ди-O-изопропилиден-α,D-глюкофуранозой.

19. Набор по п.17, отличающийся тем, что ингибитор ароматазы представляет собой стероидный ингибитор ароматазы, нестероидный ингибитор ароматазы, например ингибитор ароматазы выбран из группы, включающей: форместан, экземестан, аминоглютетимид, фадрозол, анастрозол, летрозол, ворозол.