СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА СВОБОДНОГО ГЕПАРИНА В КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 1999 года по МПК G01N33/49 

Описание патента на изобретение RU2127433C1

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к скотоводству, ветеринарии, и предназначено для определения количества свободного гепарина в крови крупного рогатого скота.

В определении гепарина известно несколько способов. Метод [1] /Sigg. c, 1952 В.П.Балуда, З.С.Баркаган и другие. Лабораторные методы исследования системы гемостаза. - Томск, 1960, с. 129-131/ основан на исследовании влияние определенных количеств гепарина на время рекальцификации цитратной или оксалатной плазмы. Тест отражает состояние общей коагуляционной активности крови - содержание в последней плазменного кофактора гепарина (актитромбин 111), выявляется наиболее значительный сдвиг в сторону гиперкоагуляции.

Данная методика не дает возможности определить количество свободного гепарина в крови.

Известен метод Сирмаи Э. /1958/ [2] / Коблов Л.Ф. Методы и приборы для исследования гемостаза - М.: Медицина, 1975, с. 35-36/. Он позволяет определить количество свободного гепарина в крови человека (таб. N1) и является ближайшим аналогом.

Данная методика не позволяет определить свободный гепарин в крови крупного рогатого скота и его изменения.

Целью настоящего изобретения является разработка способа определения количества свободного гепарина в крови крупного рогатого скота. Указанная цель достигается путем добавления в пробирки 0,1%-ного раствора толуидинового синего в увеличивающейся концентрации, изотонического раствора хлорида натрия и гепаринизированной венозной крови, термостатирования пробирок, визуального определения пробирки со свернувшейся кровью и определение количества свободного гепарина по формуле, отличающейся тем, что добавляют 0,1%-ный раствор толуидинового синего в разных разведениях в количестве от 0,01 мл до 0,12 мл, который доводят изотоническим раствором хлорида натрия до 0,5 мл, а определение ведут во формуле
СГкр = 2 • X • 0,14 - 1,95
где CГкр - количество свободного гепарина в крови, мкг/мл;
X - количество 0,1%-ного толуидинового синего в пробирке, мкг;
2; 0,14 и 1,95 - постоянные коэффициенты.

Пример выполнения способа.

Уменьшение количества раствора толуидинового синего, в среднем 1,9 раза, в разных разведениях связан с тем, что в пробирках с большим его содержанием проба крови свертывалась. Это говорит о меньшем содержании свободного гепарина в крови крупного рогатого скота по сравнению с кровью человека и невозможности использовать ряд разведений по Сирмаи Э. В результате наших экспериментальных исследований установлено, что оптимальным является ряд разведений, представленный в табл. N2. Дальнейшее уменьшение количества 0,1%-ного раствора толуидинового синего нецелесообразно, так как такое малое содержание не встречалось при исследованиях.

Увеличение количества 0,1%-ного раствора толуидинового синего более 0,12 мл также нецелесообразно, так как с таким содержанием не было ни одного животного. Во всех исследованиях 340 пробах крови содержание свободного гепарина находилось в пределах середины нашего ряда разведений.

Предлагаемая Сирмаи Э. доведение общего объема раствора до 0,8 мл не давала возможности определять количество свободного гепарина в крови крупного рогатого скота. Поэтому нами экспериментально установлено, что оптимальным является доведение общего объема до 1,0 мл и с этим связано увеличение количества изотонического раствора натрия хлорида в пробирках.

При определении количества свободного гепарина в крови крупного рогатого скота применяли ряд разведений 0,1%-ного раствора толуидинового синего в возрастающей концентрации: 0,01 - 0,03 - 0,05 - 0,06 - 0,07 - 0,09 - 0,10 - 0,12 мл и изотонического раствора натрия хлорида до 0,5.

В каждую пробирку дополнительно вносили по 0,5 мл венозной гепаринизированной крови обследуемого животного, содержащей 0,25 МЕ или 1,25 мкг гепарина в 1 мл. Содержимое пробирок перемешивали и ставили на 60 минут в термостат при 37oC. После чего визуально определяли пробирку со свернувшейся кровью.

Количество гепарина в 1 мл крови в мкг определяли по формуле
СГкр = 2 • X • 0,14 - 1,95
где СГкр - содержание свободного гепарина в крови, мкг/мл;
X - количество толуидинового синего в пробирке, мкг;
2; 0,14 и 1,95 - постоянные коэффициенты.

Приводим все возможные варианты расчетов с использованием нашей формулы:
а) При свертывании крови во всех восьми пробирках
СГкр = 2 • 10 • 0,14 - 1,95 = 20 • 0,14 - 1,95 = 0,85 мкг/мл,
б) При свертывании крови в семи пробирках, кроме первой,
СГкр = 2 • 30 • 0,14 - 1,95 = 0,45 мкг/мл,
в) При свертывании крови в шести пробирках, кроме первой и второй,
СГкр = 2 • 50 • 0,14 - 1,95 = 12,05 мкг/мл,
г) При свертывании крови в пяти пробирках, кроме первых трех,
СГкр = 2 • 60 • 0,14 - 1,95 = 14,55 мкг/мл,
д) При свертывании крови в четырех пробирках, кроме первых четырех,
СГкр = 2 • 70 • 0,14 - 1,95 = 17,65 мкг/мл,
е) При свертывании крови в трех пробирках, кроме первых пяти,
СГкр = 2 • 90 • 0,14 - 1,95 = 23,25 мкг/мл,
ж) При свертывании крови в двух пробирках, кроме первых шести,
СГкр = 2 • 100 • 0,14 - 1,95 = 20,05 мкг/мл,
з) При свертывании крови только в последней (восьмой) пробирке
СГкр = 2 • 120 • 0,14 - 1,95 = 31,05 мкг/мл.

Похожие патенты RU2127433C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ТВЕРДОФАЗНОЙ ЭКСТРАКЦИИ КРАСИТЕЛЯ ТОЛУИДИНОВОГО СИНЕГО 2015
  • Гавриленко Мария Михайловна
  • Гавриленко Михаил Алексеевич
  • Газиева Елизавета Александровна
RU2605965C1
Способ определения дозы гепарина для профилактики тромбогеморрагических осложнений,обусловленных эмболией околоплодными водами 1982
  • Бышевский Анатолий Шулимович
  • Кожевников Владислав Николаевич
  • Соколовский Сергей Ростиславович
SU1103148A1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ ПО РЕАКЦИИ ВОССТАНОВЛЕНИЯ НИТРОСИНЕГО ТЕТРАЗОЛИЯ 2009
  • Пацула Юрий Иванович
  • Власенко Василий Сергеевич
RU2415423C2
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕТИКУЛОЦИТОВ В ИНКУБИРОВАННОЙ КРОВИ ПТИЦ 2002
  • Скоркина М.Ю.
  • Липунова Е.А.
RU2227280C2
ПОЛУЧЕНИЕ СЫВОРОТКИ 2011
  • Мэси, Пол
  • Де Джерси, Джон
  • Лавин, Мартин
  • Филлипс, Джули
  • Даймески, Гоук
RU2643957C2
СРЕДСТВО ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ СУБКЛИНИЧЕСКОГО МАСТИТА У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА 2003
  • Бурков П.В.
  • Сунагатуллин Ф.А.
RU2262699C2
Способ диагностики ювенильного ревматоидного артрита 1989
  • Юрьев Владимир Владимирович
  • Назаров Петр Григорьевич
  • Кондакова Нина Ивановна
  • Пуринь Владимир Иванович
SU1725132A1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСФЕР-ФАКТОРА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА 2004
  • Щеглов Владимир Михайлович
  • Молоканов Владимир Алексеевич
  • Ляпунов Сергей Анатольевич
  • Табулович Елена Борисовна
RU2270021C2
Способ определения гепарина в крови 1986
  • Габитов Салават Зарифович
  • Салихов Ильдар Газымович
  • Лушникова Лидия Александровна
  • Улумбекова Гузель Эрнестовна
  • Юнусов Рустем Валентинович
SU1429025A1
ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ MUS MUSCULUS L., ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ГЛИКОПРОТЕИНОВОМУ АНТИГЕНУ 70 КДА МОНОНУКЛЕАРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА 1992
  • Попов Борис Валентинович
  • Смирнова Наталья Николаевна
  • Павлович Татьяна Юрьевна
  • Куценко Надежда Николаевна
  • Сердюк Григорий Николаевич
RU2018531C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 127 433 C1

Реферат патента 1999 года СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА СВОБОДНОГО ГЕПАРИНА В КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Изобретение относится к ветеринарии. Количество свободного гепарина. в крови крупного рогатого скота определяют способом, при котором в пробирки добавляют 0,1%-ный раствор толуидинового синего в увеличивающейся концентрации в разных разведениях в количестве 0,01 - 0,12 мл. Полученный раствор доводят изотоническим раствором хлорида натрия до 0,5 мл и добавляют в пробирки гепаринизированную венозную кровь. Пробирки термостатируют. Визуально определяют пробирку со свернувшейся кровью и рассчитывают количество свободного гепарина. по формуле СГкр = 2X • 0,14 -1,85, где СГкр - количество свободного гепарина в крови мкг/мл; Х - количество 0,1%-ного толуидинового синего в пробирке мкг, 2; 0,14 и 1,95 - постоянные коэффициенты. 2 табл.

Формула изобретения RU 2 127 433 C1

Способ определения количества свободного гепарина в крови крупного рогатого скота путем добавления в пробирки 0,1%-ного раствора толуидинового синего в увеличивающейся концентрации, изотонического раствора хлорида натрия и гепаринизированной венозной крови, термостатирования пробирок, визуального определения пробирки со свернувшейся кровью и определения количества свободного гепарина по формуле, отличающийся тем, что добавляют 0,1%-ный раствор толуидинового синего в разных разведениях в количестве 0,01 - 0,12 мл, который доводят изотоническим раствором хлорида натрия до 0,5 мл, а определение ведут по формуле
СГкр = 2 • Х • 0,14 - 1,95,
где СГкр - количество свободного гепарина в крови, мкг/мл;
Х - количество 0,1%-ного толуидинового синего в пробирке, мкг;
2; 0,14 и 1,95 - постоянные коэффициенты.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1999 года RU2127433C1

Коблов Л.Ф
Методы и приборы для исследования в гемостаза
- М.: Медицина, 1975, с
Скоропечатный станок для печатания со стеклянных пластинок 1922
  • Дикушин В.И.
  • Левенц М.А.
SU35A1

RU 2 127 433 C1

Авторы

Ермолаев В.А.

Даты

1999-03-10Публикация

1995-06-07Подача