ШТАММ А/47/НАНЧАНГ/95/13 (НЗN2) ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ДЕТЕЙ Российский патент 1999 года по МПК C12N7/00 A61K39/145 C12N7/00 C12R1/91 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики эпидемического гриппа среди детей живой интраназальной гриппозной вакциной из штамма А/47/Нанчанг/95/13 (H3N2). Известный штамм А/47/Шангдонг/93/1 (H3N2) - прототип [1] - утратил антигенную активность и вследствие этого не сможет вызвать защитную реакцию во время эпидемии гриппа, вызванной штаммом вируса гриппа, аналогичным вирусу А/Нанчанг/933/95 (H3N2).

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакцинного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса А/Нанчанг/933/95 (H3N2).

Вакцинный штамм А/47/Нанчанг/95/13 (H3N2) получен методом генетической реассортации эпидемического вируса А/Нанчанг/933/95 (H3N2) с холодоадаптированным штаммом А/Ленинград/134/47/57 (H2N2) - донором аттенуации - с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к вирусу А/Лениград/134/47/57 (H2N2). Донор аттенуации - холодоадаптированный температурочувствительный штамм вируса гриппа А/Лениград/134/47/57 (H2N2), разрешенный для получения безвредных живых интерназальных вакцин для детей [2].

Методом рестрикционного анализа ДНК копий генов вакцинного и родительских штаммов установлено, что вакцинный штамм А/47/Нанчанг/95/13 (H3N2) унаследовал 6 генов, кодирующая внутренние белки (PB1, PB2, PA, NP, M, NS) от донора аттенуации А/Лениград/134/47/57 (H2N2) и 2 гена, кодирующие поверхностные белки - HA (гемагглютинин) и NA (нейраминидазу) - от эпидемического вируса А/Нанчанг/933/95 (H3N2). Гемагглютинин в РТГА идентичен вирусу А/Нанчанг/933/95 (H3N2), антисывороткой к которому полностью нейтрализуется. Штамм является температурочувсивтельным (разность в показателях инфекционной активности при 34^oC и 40^oC составляет 8,0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл) и холодоадаптированным (разность в показателях инфекционной активности при 34^oC и 25^oC - 3,0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл).

Таким образом, представленный вакциной штамм А/47/Нанчанг/95/13 (H3N2) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса А/Нанчанг/933/95 (H3N2), структурой генома, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, термочувствительностью и холодоадаптивностью, что коррелирует с аттенуацией для человека, характерной для донора аттенуации.

Морфология штамма - полиморфная, типичная для вируса гриппа.

Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 34^oC в течение 48 часов - 8,5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл.

Гемагглютинирующая активность - 1:512.

Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Штамм А/47/Нанчанг/95/13 (H3N2) реактогенен при интраназальном введении детям 3 - 14 лет.

Пример. Группу из 94 детей в возрасте 3 - 14 лет вакцинировали интраназально в объеме 0,5 мл рекомбинантным вакцинным штаммом А/47/Нанчанг/95/13 (H3N2) с инфекционной активностью 8,5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл. Группа детей того же возраста из 89 человек получило плацебо.

Сильные температурные реакции с повышением температуры свыше 38,5^oC не наблюдались. Средние реакции с кратковременным повышением температуры в диапазоне 37,6 - 38,5^oC наблюдалась в 1,8% случаях. Слабые температурные реакции (до 37,5^oC) - в 7,5% случаях. Показатель реактогенности (разница в проценте средних реакций у привитых вакциной и получивших плацебо) составило 0% (таблица 1).

Таким образом, вакцинный штамм А/47/Нанчанг/95/13 (H3N2) по показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявленным к вакцинным штаммам фармакопейной статьей ФС 42-298 ВС-89 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения детям 3 - 14 лет.

Литература
1. Штамм А/47/Шангдонг/93/1 (H3N2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для детей. Патент РФ N 2065498, 20.08.1996, БИ N 23.

2. Александров Г. И., Климов А.И. Живая вакцина против гриппа. - СПб.: Наука. -1994. -151 с.

Изобретение предназначено для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для детей, соответствующей по антигенным свойствам актуальному вирусу А/Нанчанг/933/95 (Н3N2). Вакцинный штамм А/47/Нанчанг/95/13 (Н3N2) - реассортант, полученный путем скрещивания эпидемического вируса А/Нанчанг/933/95 (Н3N2) с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом А/Ленинград/134/47/57 (Н2N2) - донором аттенуации. Штамм безвредный для детей. Его свойства дают возможность гарантированно получать реассортантные вакцинные штаммы из вновь появляющихся эпидемических вирусов. Штамм А/47/Нанчанг/95/13 (Н3N2) активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 34^oС. Характеризуется температурочувствительностью и холодоадаптированностью. Реассортант унаследовал от эпидемического вируса два гена, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу) и шесть генов, кодирующих негликозилированные белки от донора аттенуации. Штамм А/47/Нанчанг/95/13 (Н3N2) ареактогенен для детей при интраназальном введении. Вакцинный штамм А/47/Нанчанг/95/ 13 (Н3N2) по биологическим свойствам и показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам фармакопейной статьей ФС 42-298 ВС-89 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения для детей 3-14 лет. 1 табл.

Штамм вируса гриппа А/47/Нанчанг/95/13(Н3N2)ГИСК N 1002 (Государственный институт стандартизации и контроля им. Л.А. Тарасевича), используемый для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для детей.