ШТАММ А/17/НАНЧАНГ/ 95/4 (НЗ N 2) ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ Российский патент 1999 года по МПК C12N7/00 A61K39/145 C12N7/00 C12R1/91 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики эпидемического гриппа среди взрослых живой интраназальной гриппозной вакциной из штамма A/17/Нанчанг/95/4 (НЗN2). Известный вакцинный штамм 17/Ф вируса гриппа A (HЗN2) - прототип [1] - утратил антигенную актуальность и вследствие этого не сможет вызвать защитную реакцию во время эпидемии гриппа, вызванной штаммом, аналогичным вирусу гриппа A/Нанчанг/933/95 (HЗN2).

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакцинного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса A/Нанчанг/933/95 (HЗN2).

Вакцинный штамм A/17/Нанчанг/95/4 (HЗN2) получен методом генетической реассортации эпидемического вируса A/Нанчанг/933/95 (HЗN2) с холодоадаптированным штаммом A/Ленинград/134/17/57 (H2N2) - донором аттенуации - с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к вирусу A/Ленинград/134/17/57 (H2N2). Донор аттенуации - холодоадаптированный температурочувствительный штамм вируса гриппа A/Ленинград/134/17/57 (H2N2), разрешенный для получения безвредных живых интраназальных вакцин для взрослых [2].

Методом рестрикционного анализа ДНК копий генов вакцинного и родительских штаммов установлено, что вакцинный штамм A/17/Нанчанг/95/4 (HЗN2) унаследовал 6 генов, кодирующих внутренние белки (PB1, PB2, PA, NP, M, NS) от донора аттенуации A/Ленинград/134/17/57 (H2N2), и 2 гена, кодирующих поверхностные белки - HA (гемагглютинин) и NA (нейраминидазу) - от эпидемического вируса A/Нанчанг/933/95 (HЗN2). Гемагглютинин в РТГА идентичен вирусу A/Нанчанг/933/95 (HЗN2), антисывороткой к которому полностью нейтрализуется. Штамм является температурочувствительным (разность в показателях инфекционной активности при 34^oC и 40^oC составляет 8.0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл) и холодоадаптированным (разность в показателях инфекционной активности при 34^oC и 25^oC - 3.0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл).

Таким образом, представленный вакцинный штамм A/17/Нанчанг/95/4 (HЗN2) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса A/Нанчанг/933/95 (HЗN2), структурой генома, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, температурочувствительностью и холодоадаптированностью, что коррелирует с аттенуацией для человека, характерной для донора аттенуации.

Морфология штамма - полиморфная, типичная для вируса гриппа.

ХАРАКТЕРИСТИКА ШТАММА
Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 34^oC в течение 48 часов - 8,5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл.

Гемагглютинирующая активность -1:256-1:512.

Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Данные из паспорта на вакцинный штамм A/17/Нанчанг/95/4 (HЗN2) приведены ниже:
1. Название штамма - A/17/Нанчанг/95/4 (HЗN2)
2. Серия - серия 1
3. Метод получения и характеристика родительских вирусов при представлении рекомбинантного штамма: рекомбинация
а). эпидемический вирус - A/Нанчанг/933/95 (HЗN2)
б). донор аттенуации - A/Ленинград/134/17/57 (H2N2)
4. Количество пассажей - 5 в процессе рекомбинации
5. Характеристика штамма до лиофилизации:
а). оптимальные условия репродукции - 34^oC, 48 часов;
б). гемагглютинирующая активность - 1:256;
в). инфекционная активность - 8.5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
г). чувствительность к ингибиторам - ингибиторочувствительный;
д). разность в показателях инфекционной активности при 34^oC и 40^oC - 8.0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
е). разность в показателях инфекционной активности при 34^oC и 25^oC - 3.0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл.

ж). структура генома рекомбинанта:
- гены от эпидемического вируса - HA, NA
- гены от донора аттенуации - PA, PB1, PB2, NP, M, NS
6. Характеристика штамма после лиофилизации:
а). дата лиофилизации - 08 июля 1996 года;
б). объем материала в ампуле - 1 мл;
в). количество доз в серии - 3;
г). инфекционная активность - 7.5 lg ЭИД₅₀/0.2 мл;
д). гемагглютинирующая активность -1:128.

7. Рекомендуемое разведение при вакцинации - 1:3.

8. Антигенная специфичность
а). гемагглютинина в РТГА - идентичен вирусу A/Нанчанг/933/95 (HЗN2), антисывороткой к которому полностью нейтрализуется;
б). нейраминидазы - идентична вирусу A/Нанчанг/933/95 (H3N2) по данным рестрикционного анализа ДНК копий генов.

9. Безвредность для мышей при подкожном введении - безвреден.

10. Бактериологический контроль лиофилизированного материала:
дата проведения - 1 июля 1996 года
результат - стерилен.

11. Контроль на отсутствие посторонних вирусов - посторонние вирусы отсутствуют.

Штамм A/17-Нанчанг/95/4 (H3N2) аректогенен и иммуногенен для взрослого контингента.

Пример. При вакцинации 92 взрослых лиц интраназально рекомбинантным вакцинным штаммом A/17/Нанчанг/95/4 (HЗN2) с инфекционной активностью 7,5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл в разведении 1:2 в объеме 0,5 мл сильных температурных реакций с повышением температуры свыше 38,5^oC не наблюдалось. Средние реакции с кратковременным повышением температуры в диапазоне 37,6-38,5^oC наблюдались в 2,2%. Слабых температурных реакций (до 37,5^oC) не было. Показатель реактогенности (разница в проценте средних реакций у привитых вакциной и получивших плацебо) составил 0%.

В группе из 77 лиц, получивших плацебо, средние температурные реакции отмечались в 6,5%, слабые реакции также наблюдались в 6,5% случаев (табл. 1).

Таким образом, вакцинный штамм A/17/Нанчанг/95/4 (HЗN2) по показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым фармакопейной статьей ФС 42-299 ВС-89 к вакцинным штаммам для живой гриппозной вакцины для интраназального применения для взрослых.

Источники информации.

1. Штамм 17/Ф вируса гриппа A (H3N2), используемый для получения живой интраназальной вакцины для взрослых людей. Авторское свидетельство N 1222276. Опубликовано 07.04.86, БИ N 13.

2. Александрова Г. И., Климов А.И. Живая вакцина против гриппа. -СПб.: Наука, 1994, с. 151.

Изобретение предназначено для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых людей и детей, соответствующей по антигенным свойствам актуальному вирусу А/Нанчанг/ 933/95 (Н3N2). Вакцинный штамм А/17/Нанчанг/95/4 (Н3N2) реассортант, полученный путем скрещивания эпидемического вируса А/Нанчанг/933/95 (Н3N2) с холодоадаптированным температуро-чувствительным вирусом А/Ленинград/134/17/57 (Н2N2) - донором аттенуации. Штамм безвреден для взрослых. Его свойства дают возможность гарантированно получать реассортантные вакцинные штаммы из вновь появляющихся эпидемических вирусов. Штамм А/17/Нанчанг/95/4 (Н3N2) активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 34^oС. Характеризуется температурочувствительностью и холодоадаптированностью. Реассортант унаследовал от эпидемического вируса два гена, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу) и шесть генов, кодирующих негликозилированные белки от донора аттенуации. Штамм А/17/Нанчанг/95/4 (Н3N2) ареактогенен для взрослых при интраназальном введении и удовлетворяет показателям иммуногенности. Вакцинный штамм А/17/Нанчанг/95/4 (Н3N2) по биологическим свойствам и показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам фармакопейной статьей ФС 42-299 ВС-89 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения для взрослых. 1 табл.

Штамм вируса гриппа А/17/Нанчанг/95/4 (НЗN2) ГИСК N 1001 (Государственный институт стандартизации и контроля им.Л.А.Тарасевича), используемый для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых.