ШТАММ А/47/ПЕКИН/92/3 (Н3N2) ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ДЕТЕЙ Российский патент 1997 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики эпидемического гриппа среди детей живой интраназальной гриппозной вакциной из штамма A/47/Пекин/92/3 (H3N2). Известный штамм утратил антигенную актуальность и вследствие этого не может вызывать защитную реакцию во время эпидемии гриппа A(H3N2).

Задачей, на решение которой направлено изобретение, является получение вакцинного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса A/Пекин/32/92 (H3N2).

Вакцинный штамм A/47/Пекин/92/3 (H3N2) получен методом генетической реасортации эпидемического вируса A/Пекин/32/92(Н3N2) с холодоадаптированным штаммом A/Ленинград/134/47 (H2N2) донором аттенуации, с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к вирусу A/Ленинград/134/47/57 (H2N2).

Методом РНК:РНК гибридизации с последующим электрофорезом в полиакриламидном геле установлено, что вакцинный штамм A/47/Пекин/92/3(H3N2) унаследовал 6 генов, кодирующих внутренние белки PB1, PB2, RA, NP, M, NS от донора аттенуации, и 2 гена, кодирующих поверхностные белки HA (гемагглютинин) и NA (нейраминидазу) от эпидемического вируса. Штамм является температурочувствительным (разность титров при 32^oС и 40^oC 6,0 lg ЭИД 50/0,2 мл) и холодоадаптивированным (разность титров при 32^oС и 25^oC 3,5 lg ЭИД 50/0,2 мл).

Таким образом, представленный вакцинный штамм A/47/Пекин/92/3 (H3N2) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакционному штамму: антигенной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса A/Пекин/32/92(H3N2), структурой генома, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, температурочувствительностью и холодоадаптированностью, что коррелирует с аттенуацией для человека, характерной для донора аттенуации.

Морфология штамма полиморфная типичная для вируса гриппа.

Характеристика штамма.

Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 32^oC в течение 48 ч 8,0 lg ЭИД 50/0,2 мл.

Гемагглютинирующая активность 1:256.

Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Штамм ареактогенен при интраназальном введении детям 3 14 лет.

Пример. Группу из 118 детей в возрасте 3 14 лет вакцинировали интраназально в объеме 0,5 мл рекомбинантным штаммом A/47/Пекин/92/3 (H3N2) с инфекционной активностью 7,0 lg ЭИД 50/0,2 мл. Группа детей того же возраста из 115 человек получала плацебо.

Средние реакции с кратковременным повышением температуры свыше 37,6^oC не наблюдались. Показатель реактогенности составил 0% Слабые температурные реакции до 37,5^oC в 6 случаях.

В группе детей, получивших плацебо, средние температурные реакции также не отмечались, а слабые наблюдались в 2 случаях после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Штамм ареактогенен при интраназальном введении детям 3 14 лет.

Пример. Группу из 118 детей в возрасте 3 14 лет вакцинировали интраназально в объеме 0,5 мл рекомбинантным штаммом A/47/Пекин/92/3 (H3N2) с инфекционной активностью 7,0 lg ЭИД 50/0,2 мл. Группа детей того же возраста из 115 человек получила плацебо.

Средние реакции с кратковременным повышением температуры свыше 37,6^oC не наблюдались. Показатель реактогенности составил 0% Слабые температуры реакции до 37,5^oC в 6 случаях.

В группе детей, получивших плацебо, средние температурные реакции также не отмечались, а слабые наблюдались в 2 случаях (см. таблицу).

Таким образом, вакцинный штамм A/47/Пекин/92/3 (H3N2) по показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам фармакопейной статьей С 42 298 ВС-89 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения детям 3 14 лет.

Литература
RU, патент N 1838404, кл. C 12 N 7/00, 1991.

Использование: медицинская вирусология. Сущность изобретения: получен вакцинный штамм для живой гриппозной интраназальной вакцины для детей, соответствующий по антигенным свойствам актуальному вирусу A/Пектин/32/92 (H2N2). Вакцинный штамм A/47/Пектин/92/3 - реассортант, полученный путем скрещивания эпидемического вируса A/Пектин/32/92 (H3N2) с холодадаптированным температурочувствительным вирусом A/Ленинград/134/47/57 (H2N2) - донором аттенуации, безвредным для взрослых и детей, свойства которого дают возможность гарантированно получать рессортантные вакцинные штаммы из вновь появляющихся эпидемических вирусов. Штамм депонирован в ГИСК им. Л.А. Тарасевича под N 104. Штамм A/47/Пекин/92/3 активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 32 - 34^oC, характеризуется температурочувствительностью и холодоадаптированностью. Реассортант унаследовал от эпидемического вируса два гена, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу) от эпидемического вируса, и шесть генов, кодирующих негликозилированные белки от донора аттенуации. Штамм A/47/Пекин/92/3 (H3N2) ареактогенен для детей 3 - 15 лет при интраназальном введении. Таким образом, вакцинный штамм A/47/Пекин/92/3 по биологическим свойствам и показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам фармакопейной статьей ФС 42-298 ВС-89 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения детям 3 - 14 лет. 1 табл.

Штамм А/47/Пекин/92/3 (H3N2) ГИСК N 104 для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для детей.