ШТАММ А/47/ ШАНГДОНГ/93/I(H3N2) ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ДЕТЕЙ Российский патент 1996 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики эпидемического гриппа среди детей 3 14 лет живой интраназальной гриппозной вакциной из штамма А/47/Шангдонг/93/1 (Н₃N₂). Известный штамм А/47/Пекин/92/3 прототип утратил антигенную актуальность и вследствие этого не может вызывать защитную реакцию во время эпидемии гриппа А (Н₃N₂.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакцинного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса А/Шангдонг/9/93 (Н₃N₂.

Вакцинный штамм /A/47/Шангдонг/93/1 (H₃N₂) получен методом генетической реассортации эпидемического вируса А/Шангдонг/9/93 (H₃N₂) с холодоадаптированным штаммом А/Ленинград/134/47 (Н₂N₂) донором аттенуации, с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к вирусу А/Ленинград/134/47/57 (H₂N₂).

Методом сравнения электрофоретической подвижности геномных фрагментов родительских и реассортантного вакцинного вирусов в полиакриламидном геле установлено, что вакцинный штамм А/47/Шангдонг/93/1 (Н₃N₂) унаследовал 6 генов, кодирующих внутренние белки РВ1, РВ2, РА, NP, M, NS, от донора аттенуации и 2 гена, кодирующих поверхностные белки НА (гемагглютинин) и NA (нейраминидазу) от эпидемического вируса. Методом рестрикционного анализа ДНК копий генов вакцинного штамма установлено наличие мутаций в генах, кодирующих негликозилированные белки, унаследованных от донора аттенуации А/Ленинград/134/47.

Вакцинный штамм А/47/Шангдонг/93/1 (Н₃N₂) является температурочувствительным (разность титров при 32^o и 40^oС 7,0 lg ЭИД 50/0,2 мл) и холодоадаптированным (разность титров при 32^o и 25^oС 3,5 lg ЭИД 50/0,2 мл).

Таким образом, представленный вакцинный штамм А/47/Шангдонг/93/1 (H₃N₂) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса А/Шангдонг/9/93 (H₃N₂), структурой генома, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, температурочувствительностью и холодоадаптированностью, что коррелирует с аттенуацией для человека, характерной для донора аттенуации.

Морфология штамма полиморфная, типичная для вируса гриппа.

Характеристика штамма
Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 32^oС в течение 48 часов 7,0 lg ЭИД 50/0,2 мл.

Геммаглютинирующая активность 1:256 1:512.

Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Штамм ареактогенен при интраназальном введении детям 3 14 лет.

Пример. Группу из 56 детей в возрасте 3 14 лет вакцинировали интраназально в объеме 0,5 мл реассортантным штаммом /47/Шангдонг/93/ (H₃N₂ с инфекционной активностью 7,0 lg ЭИД 50/0,2 мл. Группа детей того же возраста из 14 человек получила плацебо (таблица).

Средние реакции с кратковременным повышением температуры свыше 37,6^oС не наблюдались. Показатель реактогенности составил 0% Слабые температурные реакции до 37,5^oС в 1 случае.

В группе детей, получивших плацебо, средние и слабые температурные реакции не отмечались.

Таким образом вакцинный штамм А/47/Шангдонг/93/1 (H₃N₂) по показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам фармакопейной статьей ФС 42-298 ВС-89 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения детям 3 14 лет. ТТТ1

Использование: вирусология. Сущность изобретения: получение вакцинного штамма для живой гриппозной интраназальной вакцины для детей, соответствующего по антигенным свойствам актуальному вирусу А /Шангдонг/9/93 (Н₃N₂). Вакцинный штамм А/47/Шангдонг/93/1 - реассортант, полученный путем скрещивания эпидемического вируса А/Шангдонг/9/93 (Н₃N₂) с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом А/Ленинград/134/47/57 (Н₂N₂) - донором аттенуации, безвредным для взрослых и детей, свойства которого дают возможность гарантированно получать реассортантные вакцинные штаммы из вновь появляющихся эпидемических вирусов. Штамм депонирован в Государственном институте стандартизации и контроля им. Л.А. Тарасевича под N131. Штамм А/47/Шангдонг/93/1 активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 32 - 34^oС, характеризуется температурочувствительностью и холодоадаптированностью. Реассортант унаследовал от эпидемического вируса два гена, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу) от эпидемического вируса и шесть мутантных генов, кодирующих негликозилированные белки от донора аттенуации. Штамм А/47/Шангдонг/93/1 (Н₃N₂) ареактогенен для детей 3 - 15 лет при интраназальном введении. Таким образом, вакцинный штамм А/47/Шангдонг/93/1 по биологическим свойствам и показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам фармакопейной статьей ФС 42-298 ВС-89 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения детям 3 - 14 лет. 1 табл.

Штамм А47 /Шангдонг/93/1 (Н3 N 2) N 131 (Государственный институт стандартизации и контроля им. Л.А.Тарасевича) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для детей.