СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПОВЫШЕННОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОРГАНИЗМА К TRICHOPHYTON RUBRUM Российский патент 1999 года по МПК G01N33/569 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и может быть использовано для диагностики повышенной чувствительности организма к Trichophyton rubrum.

В клинической практике очень важно определить чувствительность организма к Trichophyton rubrum. Для этого используют кожные пробы, которые позволяют выявить сенсибилизацию в 50% случаев при поверхностных микозах. Однако положительные кожные реакции на грибковый антиген иногда бывают и у здоровых лиц. Кроме того, кожные пробы могут сопровождаться общей реакцией: ознобом, гипертермией, головной болью, болью в суставах, крапивницей, одышкой, а иногда и шоком (Вершигора А.Е. Микробная аллергия. Киев, 1971, с.176-177). К тому же кожные пробы не отражают состояния популяции сенсибилизированных лейкоцитов, играющих важнейшую роль в иммунопатогенезе микоза. Для этого используют клеточные реакции. Среди них наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики сенсибилизации с помощью реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ). РТМЛ применяют для выявления факторов торможения, которые секретируются сенсибилизированными лимфоцитами наряду с другими лимфокинами после повторного контакта с антигеном или митогенной стимуляции (Иммунологические методы, Фримель, Москва, Медицина, 1987).

Эта реакция представляет собой классический метод полуколичественной оценки клеточной сенсибилизации, но позволяет дать только ориентировочную оценку уровня сенсибилизации, а также сопряжена с рядом трудностей: создание определенных условий для длительной инкубации клеток (pH, состав атмосферы, влажность), использование дорогостоящих препаратов (концентрат среды, антибиотики, сыворотка крупного рогатого скота и т.д.), а также требование соблюдения стерильности при проведении методики. Недостатками метода являются также длительность реакции (сутки) и отсутствие унификации методик, затрудняющее использование РТМЛ для оценки грибковой сенсибилизации.

Целью изобретения является повышение точности и упрощение способа.

Поставленная цель реализуется путем исследования адгезионных свойств сенсибилизированных лейкоцитов и определения показателя торможения адгезии (ТА) лейкоцитов, при значении ≤ -10% делают вывод с наличии гиперсенсибилизации.

Способ осуществляется следующим образом.

1. Выделяют лейкоцитарную взвесь общепринятым способом.

2. Оптимальное количество клеток инкубируют в стеклянных пробирках в опыте с антигеном Trichophyton rubrum, в контроле - с физиологическим раствором при 37^oC, 2 часа.

3. Подсчитывают количество неадгизированных клеток в опытной и контрольной пробирках.

4. Вычисляют показатель торможения адгезии (ТА):

При значении ≤ -10% делают вывод о наличии гиперчувствительности. Условия проведения реакции (время инкубации, соотношение клеток и антигена) были определены экспериментальным путем.

Таким образом, оптимальное количество лейкоцитов 1,0 • 10^-6 - 2,0 • 10⁶/мл, количество антигена в пробе 150-200 мкг.

Примеры использования способа
Пример 1. Больной Т. , 49 л., история болезни N 2937. Диагноз: распространенный микоз стоп, кистей, вибрационная болезнь I-II степени. ТА (-) 33,4% Выявлена сенсибилизация.

Пример 2. Больной Ф. , 71 год, история болезни N 2929. Диагноз: распространенный микоз, онихомикоз. ТА (-) 4,9%. Сенсибилизация не выявлена.

Пример 3. Больной В., 22 года, история болезни N 2758. Диагноз: Рецидивирующий хламидиоз, первичное бесплодие. Сенсибилизация не выявлена.

Способ использован при обследовании 180 человек (144 - с микозом, вызванным Trubrum, 36 - с другими заболеваниями). В группе больных микозом сенсибилизация выявлена у 60% обследованных, в контрольной группе (с другими заболеваниями) - у 10%. Полученные данные свидетельствуют о наличии специфической сенсибилизации у больных микозом по сравнению с контрольной группой.

Предложенный способ позволяет сократить время анализа по сравнению с прототипом до 2,5 часов. Он прост в применении, более информативен и точен, экономит дорогостоящие реактивы и препараты.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано в клинической практике для диагностики повышенной чувствительности организма к Trichophyton rubrum. Способ заключается в исследовании пробы крови больного. Выделенные из исследуемой пробы лейкоциты в количестве 1,0-2,0•10⁶/мл инкубируют с антигеном Trichophyton rubrum в дозе 150-200 мкг. Инкубирование осуществляют в течение 2 ч при 37^oС. Затем определяют показатель торможения адгезии лейкоцитов. При значении указанного показателя, менее или равном -10%, диагностируют повышенную чувствительность организма к Trichophyton rubrum. Способ позволяет сократить время анализа, прост, информативен и точен.

Способ диагностики повышенной чувствительности организма к Trichophyton rubrum путем исследования крови, отличающийся тем, что лейкоциты в количестве 1,0 - 2,0*10⁶/мл инкубируют с антигеном Trichophyton rubrum в дозе 150 - 200 мкг в течение 2 ч при 37^oC, после чего определяют показатель торможения адгезии и при значении ≤-10% судят о повышенной чувствительности организма к Trichophyton rubrum.