Способ определения сенсибилизации организма бактериальными аллергенами Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины и может найти применение в диагностике бактериальной сенсибилизации при острых и хронических заболеваниях.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Сенсибилизацию латекса бактериальными антигенами производят накануне проведения последования. Для этого к 1 мл взвеси частиц латекса в дистиллированной воде в концентрации 10 добавляют 1 мл исследуемого бактериального антигена (бактериальные антигены получены из Казанского института эпидемиологии и микробиологии). Смесь латекса и бактериальных аллергенов инкубируют в морозильном отделении холодильника в течение 18 ч. Затем смесь центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин, надоса- дочную жидкость снимают, а к осадку добавляют физиологический раствор до 1 мл, (концентрация частиц латекса, нагруженных бактериальным антигеном, должна также составлять 10 ).

Для исследования хемилюминесценции сенсибилизированных лейкоцитов у больного из пальца берут кровь в ге- паринизированные капилляры, вмещающие 0,1 мл крови (число капилляров зависит от количества исследуемых бактериальных антигенов из расчета 1 капилляр крови на 3 пробы). Герметически запаянные капилляры центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин. При этом на границе плазма-эритроциты образуется слой лейковзвеси, который

ел

СлЭ

ю оо j ел

осторожно отрезают. Лейковзвесь растворяют в среде Хенкса без фенолового Красного из расчета 1 капилляр крови на 1,5 мл среды.

Смесь лейковзвеси и раствора Хенк- са разливают по 0,5 мл во флаконы для измерения хемилюминесценции, добавляют в контрольную пробу 0,1 мл суспензии латекса без антигена, в Опытные пробы - 0,1 мл латекса, нагруженного бактериальными антигенами. | пробы добавляют также 0,1 мл 2,8 мМ раствора люминола, инкубируют в термостате в течение 30 мин и проводят Замер хемилюминесценции в режиме сче- а фотонов.

Сопоставляют показатели хемилюми- есценции в опытных и контрольной про бе и при повышении свечения в опытной 1}робе диагностируют наличие специфи- Цеской сенсибилизации к бактериаль- 1{юму антигену, находящемуся в данной Йробе.

Пример 1. Больной В., 14 лет, йоступил в детское отделение ДБ № 1 t. Киева с диагнозом бронхиальная астма, инфекционно-аллергическая форма, средне-тяжелое течение, фаза обо- Строения.

Из анамнеза известно, что до 7 лет часто болел ОРЗ (6 и более раз в год). 6 10 лет перенес тяжелую форму гриппа, осложнившегося бронхопневмонией, Вслед за которой появились приступы удушья. До 12 лет приступы повторялись относительно редко. В дальнейшем приступы удушья возобновлялись При острых респираторных заболеваниях.

При поступлении состояние больного средней тяжести: одышка смешанного Карактера, частота дыхания 28 в минуту, бледность кожных покровов. При фискальном исследовании - коробочный оттенок звука, дыхание ослаблено, большое количество свистящих хрипов на выходе. Границы сердца в норме, тоны приглушены, частота сердечных сокращений 84 в минуту. На рентгенограмме - усиление и деформация брон- хососудистого рисунка с признаками пневмосклероза, сердце правильной кон фигурации. Общий анализ крови и мочи без патологии.

Определение кожной чувствительности к бактериальным аллергенам не проводилось в связи с выраженным обострением заболевания.

0

5

0

5

0

5

0

5

0

5

Обследование ребенка проводят согласно предлагаемому способу. Для этого у больного из пальца в первый же день заболевания, одновременно со взятием общего анализа крови, проводят забор крови в гепаринизированные капилляры (для исследования взято 2 капилляра крови на 6 проб). Герметически запаянные капилляры центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин, слой лейковзвеси, образованный на границе плазма - эритроцит, осторожно отрезают и растворяют в 3,0 мл среды Хенкса.

Смесь лейковзвеси и раствора Хенкса разливают до 0,5 мл во флаконы для измерения хемилюминесценции и добавляют в 1-й флакон (контрольный) - О,1 мл латекса без антигена, другие флаконы - по 0,1 мл раствора латекса, предварительно нагруженного (как описано) следующими бактериальными антигенами: во 2-й флакон - золотистым стафилококком, в 3-й флакон - гемолитическим стрептококком, в 4-й - нейс- серией катарралис, в 5-й - протеем, в 6-й - синегнойной палочкой.

После внесения латекса во все пробы добавляют 0,1 мл 2,8 мМ раствора люминола, пробы инкубируют в термостате в течение 30 мин и проводят замер хемилюминесценции в режиме счета фотонов с помощью ФЭУ-39а.

Получены следующие результаты исследования : хемилюминесценция пробы № 1 (контрольной) 35400 имп/с, пробы № 2 58723 имп/с, № 3 32844 имп/с, № 4 34200 имп/с, № 5 37552 имп/с, № 6 32675 имп/с.

Следовательно, хемилюминесцентное свечение лейковзвеси в пробе № 2 (содержащей латекс, нагруженный антигеном золотистого стафилоккока ) выше, чем в пробе, содержащей латекс без антигенов, в то время как внесение в пробы латекса, нагруженного другими бактериальными антигенами, существенно не изменяло значений хемилюминес- центного свечения. На основании полученных данных диагностировано наличие сенсибилизации к золотистому стафилококку.

На основании установленного диагноза в схему лечения больного включены антибиотики, обладающие противо- стафилококковым действием, в плане реабилитационных мероприятий учтена необходимость специфической иммунизэ

51532875

ции в отношении золотистого стафилококка.

С помощью предлагаемого способа проведено обследование 158 больных с

инфекционно-воспалительными и инфек- ционно-аллергическими заболеваниями органов дыхания, мочевыделительной системы, желудочно-кишечного тракта (холециститы, колиты, дисбактериоз кишечника), ЛОР-органов (гаймориты, синуситы, тонзиллиты), связанных с бактериальной сенсибилизацией. Точность диагностики у обследованной группы больных составила 96,8% (153 больных), в то же время по прототипу было выявлен правильный диагноз только у 26 больных.

0

5

Полученные результаты использованы для оптимизации лечения и сокращению сроков пребывания в стационаре. Формула изобретения

Способ определения сенсибилизации организма бактериальными аллергенами, включающий забор крови, выделение лейкоцитов, инкубацию их с аллергеном, адсорбированным на носителе, и определение сенсибилизации осуществляют по увеличению показателей реакции по сравнению с контролем без аллергена, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве носителя аллергена используют латекс и после инкубации с ним лейкоцитов определяют хе- милюминесценцию.

Изобретение относится к области медицины и может найти применение в диагностике бактериальной сенсибилизации при острых и хронических заболеваниях. Цель изобретения - повышение точности способа. Сенсибилизируют частицы латекса антигеном. У больного берут кровь, выделяют лейкоциты. Затем к ним добавляют латекс, сенсибилизированный антигеном или несенсибилизированный, и в обе пробы вносят люминол. Пробы инкубируют и проводят замер уровня хемилюминисценции. При повышении уровня свечения в опытной пробе в сравнении с контролем там, где вносят несенсибилизированный латекс, диагносцируют сенсибилизацию организма к исследуемому антигену. В сравнение с прототипом точность увеличивается на 80%.