СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ИЗОЛИРОВАННОГО НЕВРИТА ЗРИТЕЛЬНОГО НЕРВА Российский патент 2014 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболевания в экспериментальной офтальмологии.

При введении вируса простого герпеса в переднюю камеру глаза кролика развивается преимущественно экспериментальный герпетический кератоувеит (у 70-90% животных), редко ретинит, поражение зрительного нерва не наблюдалось (В.Б. Мальханов. Офтальмогерпес: клиника, диагностика, лечение, Уфа, 1994).

При введении вируса простого герпеса в переднюю камеру белых беспородных крыс, также наблюдали развитие герпетического кератоувеита без поражения зрительного нерва, и редко в сетчатой оболочке выявляли периваскулит, в преретинальной зоне - экссудат (там же).

Известен способ моделирования герпетической инфекции глаза при введении вируса простого герпеса в стекловидное тело беспородных белых мышей, однако в этом случае в 100% случаев поражались все оболочки глазного яблока, за исключением зрительного нерва (там же).

Известен способ моделирования экспериментального неврита зрительного нерва на кроликах, включающий введение в орбиту 1,0 мл 10% раствора метилового спирта на фоне аминазин-гексеналового наркоза. По мнению авторов, данная концентрация способна вызвать клинически видимое повреждение зрительного нерва без выраженного общетоксического действия [Н.Э. Темиров, Е.А. Нестеров, С.Н. Панченко (Ростов) Морфологическая характеристика экспериментального неврита зрительного нерва].

Наиболее близким аналогом изобретения является способ моделирования неврита зрительного нерва путем заражения кролика на роговицу вирусом простого герпеса типа I, при котором гистологические и вирусологические исследования позволили обнаружить поражение зрительного нерва при экспериментальном герпетическом кератите (Л.Н. Тарасова, Цитологические и гистологические исследования при герпетической болезни глаз // Автореф. дисс. … канд. мед. наук. - Ашхабад, 1968). Однако при таком способе в 100% случаев происходит поражение роговицы в виде древовидного кератита и значительно редко поражается зрительный нерв.

При моделировании герпетической инфекции глаза экспериментальных животных, чем меньше размер глазного яблока, тем чаще развивается травматическое повреждение оболочек глазного яблока. Более того, во всех экспериментальных исследованиях для введения вируса простого герпеса использовалась инсулиновая игла больших размеров (не менее 22G), которая травмировала оболочки глаза и вызывала неспецифическую воспалительную реакцию.

Кроме того, при моделировании герпетической инфекции глазного яблока вирус простого герпеса предварительно пассировали на первично-трипсинизированной культуре клеток фибробластов эмбриона человека, перевиваемой культуре клеток Vero или путем внутримозговых пассажей на мышах. Это приводило к высокой патогенности вируса и как следствие - поражению всех оболочек глазного яблока и 100% летальности экспериментальных животных.

Задачей предлагаемого изобретения является создание модели изолированного герпетического неврита зрительного нерва с высокой частотой его воспроизведения, наиболее приближенную к указанному заболеванию у человека, когда уменьшается вероятность травмирования оболочек глаза иглой и гибель животных от герпетического энцефалита.

Технический результат при использовании изобретения - повышение частоты и точности моделирования изолированного неврита зрительного нерва, предотвращение развития нежелательного сопутствующего заболевания и гибели экспериментальных животных.

Предлагаемый способ моделирования изолированного неврита зрительного нерва осуществляется следующим образом. Иглой 33 G кроликам породы шиншилла в стекловидное тело глаза через плоскую часть цилиарного тела вводят культуральную жидкость, содержащую вирус простого герпеса (ВПГ) типа 1 штамм L₂, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи в дозе 100000 ТЦЦ₅₀. Проводят гистологические исследования удаленного глазного яблока, начиная с 21-х суток после заражения, которые позволяют изучить течение данного заболевания.

Одиннадцати кроликам (22 глаза) породы шиншилла через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело обоих глаз иглой 33 G вводили по 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей 100000 ТЦЦ₅₀ ВПГ типа 1 штамм L₂, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, полученной по стандартной методике [Вирусология. Методы: Пер. с англ. / Под. ред. Б. Мейхи. - М.: Мир, 1988. - С.270-287.]. На 21 день произвели забой животных и проводили гистологические исследования удаленных глазных яблок. В толще зрительного нерва, вокруг сосудов, обнаружен обширный очаг деструкции нервной ткани с гистолизом, сосуды расширены, малокровны. Некротизированная ткань пропитана белковой жидкостью с примесью большого количества нейтрофильных лейкоцитов, эозинофилов, моноцитов и лимфоцитов. В ткани зрительного нерва, вокруг очага деструкции, определяется перицеллюлярный отек, сосуды полнокровные. В очаге деструкции нервной ткани видна выраженная воспалительная инфильтрация, представленная большим количество нейтрофильных лейкоцитов, эозинофилов, моноцитов, лимфоцитов. В строме замечен межуточный отек, сосуды растянуты, стенки их утолщены за счет плазматического пропитывания, вокруг них - скопление отечной жидкости, пропитанной нейтрофилами, моноцитами, эозинофилами. Мелкие сосуды полнокровные, часть из них с явлениями стаза, в стенках - явления плазматического пропитывания. В участках зрительного нерва, прилежащих к стекловидному телу, имеется очаг деструкции, вокруг которого определяется воспалительная инфильтрация, дистрофические процессы в нейроцитах, а также выраженный отек.

При этом морфологические исследования не выявили характерных для герпетической инфекции воспалительных изменений в других отделах глазного яблока, повреждения иглой хрусталика и сетчатки. Кролики не погибли от энцефалита.

Пример. Кролику №2 породы шиншилла массой 2,3 кг через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело обоих глаз иглой 33 G вводили 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей 100000 ТЦД₅₀ ВПГ типа 1 штамм L₂, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи. На 21 день произвели забой животного и провели гистологические исследования удаленных глазных яблок. В толще зрительного нерва, вокруг сосудов, обнаружен обширный очаг деструкции нервной ткани с гистолизом, сосуды расширены, малокровны. Некротизированная ткань пропитана белковой жидкостью с примесью большого количества нейтрофильных лейкоцитов, эозинофилов, моноцитов и лимфоцитов. В ткани зрительного нерва, вокруг очага деструкции, определяется перицеллюлярный отек, сосуды полнокровные. В очаге деструкции нервной ткани видна выраженная воспалительная инфильтрация, представленная большим количество нейтрофильных лейкоцитов, эозинофилов, моноцитов, лимфоцитов. В строме межуточный отек, сосуды растянуты, стенки их утолщены за счет плазматического пропитывания, вокруг них - скопление отечной жидкости, пропитанной нейтрофилами, моноцитами, эозинофилами. Мелкие сосуды полнокровные, часть из них с явлениями стаза, в стенках - явления плазматического пропитывания. Вокруг очага деструкции зрительного нерва определялась воспалительная инфильтрация, дистрофические процессы в нейроцитах, а также выраженный отек.

Таким образом, предлагаемый способ моделирования изолированного герпетического неврита зрительного нерва позволяет создать модель, наиболее приближенную к данному заболеванию у человека. Кроме того, отсутствует гибель экспериментальных животных от энцефалита и травматическое повреждение оболочек глазного яблока и хрусталика, вовлечение в воспалительный процесс других отделов глаза.

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболеваний глаз. Для этого через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей вирус простого герпеса (ВПГ) типа I штамм L₂, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 100000 ТЦД₅₀. При этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока на 21 сутки после заражения. Способ обеспечивает повышение частоты и точности воспроизведения изолированного неврита зрительного нерва. 1 пр.

Способ моделирования изолированного герпетического неврита зрительного нерва, характеризующийся тем, что через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей вирус простого герпеса (ВПГ) типа I штамм L₂ , адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 100000 ТЦД₅₀, при этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока на 21 сутки после заражения.