СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ГЕРПЕС-СТАФИЛОКОККОВОЙ ЯЗВЫ РОГОВОЙ ОБОЛОЧКИ Российский патент 2002 года по МПК G09B23/28 A61F9/00 

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для научных исследований и отбора лекарственных средств.

Для экспериментального изучения герпетических поражений оболочек глаза вирус простого герпеса вводили в вену, стекловидное тело и мозг. Однако при введении вируса герпеса в мозг роговица не поражается, развивается только двусторонний передний увеит с некрозом сетчатки и кортикальной катарактой (Pieffer R. L. et at. //Invest. Ophthalmol. -1983. - Vol. 24. - 8. - Р. 1070-1078).

Известен также способ моделирования инфекционного поражения роговицы (Авторское свидетельство СССР 1784227, кл. А 61 F 9/00, 1992 г.), заключающийся во введении вируса простого герпеса в дозе не менее 10⁴-10⁵ в центр роговицы, а через 48-72 часа - культуру золотистого стафилококка в дозе 6,5-12,5 млн микробных тел в строму роговицы на расстоянии 1-4 мм от лимба. Эти условия опыта позволяли достигнуть максимальной частоты воспроизведения герпес-стафилококковой язвы роговой оболочки.

Однако этот способ имеет существенные недостатки: низкая частота (31%) воспроизведения язвы роговицы на фоне высокой частоты поражения сосудистого тракта (78%) и развития эндофтальмита (44%), не позволяющего использовать модель воспроизводимого заболевания для изучения его патогенеза и отбора наиболее эффективных лекарственных средств и их сочетаний.

Технический результат заключается в повышении частоты моделирования герпес-стафилококковой язвы роговой оболочки в эксперименте, снижении частоты поражения сосудистой оболочки глаза и развития эндофтальмита.

Технический результат достигается путем одновременного введения в переднюю камеру глаза экспериментального животного не менее 1000 ТЦД₅₀/0,1 мл вируса простого герпеса и 2 млн микробных тел золотистого стафилококка, исследования роговой оболочки на 3-5 сутки после инфицирования.

Способ осуществляется следующим образом.

В переднюю камеру таза экспериментального животного после местной анестезии вводят одновременно вирус простого герпеса не менее 1000 ТЦД₅₀/0,1 мл и 2 млн микробных тел золотистого стафилококка, после чего исследуют роговую оболочку на 3-5 сутки после инфицирования с помощью клинико-биомикроскопических и/или гистологических исследований.

Пример 1. В переднюю камеру правого глаза морской свинки вводят одновременно вирус простого герпеса (в дозе 1000 ТЦД₅₀/0,1 мл) и культуру золотистого стафилококка (доза 2 млн микробных тел). На 3-й день инфекции развивается глубокий стромальный кератит с изъязвлением роговицы. Клинические исследования выявляют обильное гнойное отделяемое из конъюнктивальной полости, блефароспазм, при использовании флуоресцеинового теста обнаруживают гнойную язву роговой оболочки размером до 2-3 мм в диаметре с участками гнойной инфильтрации вокруг. Воспалительный процесс протекает более тяжело по сравнению с моноинфекцией и оценивается в баллах как 4,6. Гистологические исследования выявляют диффузную инфильтрацию роговой оболочки полиморфно-ядерными лейкоцитами, расщепление пластин стромы этими инфильтратами, некроз эпителия, отторжение распавшихся участков и образование язвы. Развитие гнойного иридоциклита или эндофтальмита не наблюдают.

Пример 2. В переднюю камеру правого глаза морской свинки вводят одномоментно вирус простого герпеса (в дозе 5000 ТЦД₅₀/0,1 мл) и культуру золотистого стафилококка (доза 3 млн микробных тел). На 5 день инфекции развивается глубокий стромальный кератит с изъязвлением роговицы. Клинические исследования выявляют обильное гнойное отделяемое из конъюнктивальной полости, блефароспазм, при использовании флуоресцеинового теста обнаруживают гнойную язву роговой оболочки размером до 2-3 мм в диаметре с участками гнойной инфильтрации вокруг. Воспалительный процесс протекает более тяжело по сравнению с моноинфекцией и оценивается в баллах как 6,2. Гистологические исследования обнаруживают диффузную инфильтрацию роговой оболочки полиморфно-ядерными лейкоцитами, расщепление пластин стромы этими инфильтратами, некроз эпителия, отторжение распавшихся участков и образование язвы. Развитие гнойного иридоциклита или эндофтальмита не наблюдают.

Пример 3. В переднюю камеру глаза 30 морским свинкам вводят одномоментно вирус простого герпеса (доза 2000 ТЦД₅₀/0,1 мл) и культуру золотистого стафилококка (доза 3 млн микробных тел). Клинические исследования выявляют обильное гнойное отделяемое из конъюнктивальной полости, блефароспазм, при использовании флуоресцеинового теста обнаруживают язву роговицы. Морфологические исследования глаз экспериментальных животных на 3-5 сутки инфекции выявляют развитие глубокого стромального кератита, характеризующегося диффузной инфильтрацией роговой оболочки полиморфно-ядерными лейкоцитами с расщеплением пластин стромы этими инфильтратами, некрозом эпителия, отторжением распавшихся участков и образованием язв у 14 из них (47%). Гнойный иридоциклит или эндофтальмит, наблюдаемые у части животных (30%), характеризуется диффузной инфильтрацией радужной оболочки и цилиарного тела нейтрофильными лейкоцитами, отеком стромы, полнокровием сосудов, склеиванием пигментсодержащих клеток и появлением пигментных зерен в строме.

Пример 4. В переднюю камеру глаза морской свинки вводят одномоментно вирус простого герпеса (доза 500 ТЦД₅₀/0,1 мл) и культуру золотистого стафилококка (доза 1 млн микробных тел). Клинические исследования выявляют незначительное гнойное отделяемое из конъюнктивальной полости, при использовании флуоресцеинового теста не обнаруживают язву роговицы, имеется лишь небольшой серозный экссудат во влаге передней камеры. Морфологические исследования глаз экспериментальных животных на 3-5 сутки инфекции выявляют развитие слабовыраженного стромального кератита, характеризующегося незначительной инфильтрацией задних отделов роговой оболочки полиморфно-ядерными лейкоцитами. Развивающийся иридоциклит характеризуется инфильтрацией отдельных участков радужной оболочки и цилиарного тела нейтрофильными лейкоцитами, отеком стромы, полнокровием сосудов.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает повышение частоты образования герпес-стафилококковых язв в эксперименте до 47%, снижение частоты вовлечения сосудистого тракта и развития эндофтальмита до 30%, сокращение сроков эксперимента за счет одновременного заражения двумя возбудителями.

Изобретение может быть использовано в медицине, а именно в офтальмологии, для научных исследований и отбора лекарственных средств. В переднюю камеру глаза экспериментального животного одновременно вводят не менее 1000 ТЦД₅₀/0,1 мл вируса простого герпеса и 2 млн микробных тел золотистого стафилококка, после чего исследуют роговую оболочку на 3-5 сутки после инфицирования. Способ обеспечивает повышение частоты моделирования герпес-стафилококковой язвы до 47%, снижение частоты вовлечения сосудистого тракта развития эндофтальмита до 30%.

Способ моделирования герпес-стафилококковой язвы роговой оболочки, заключающийся в заражении роговой оболочки глаза вирусом простого герпеса и введении культуры стафилококка, отличающийся тем, что в переднюю камеру глаза одновременно вводят не менее 1000 ТЦД₅₀/0,1 мл вируса простого герпеса и 2 млн микробных тел золотистого стафилококка, после чего исследуют роговую оболочку на 3-5 сутки после инфицирования.