ПРОИЗВОДНЫЕ 2-МЕРКАПТОБЕНЗИМИДАЗОЛА, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОИШЕМИЧЕСКОЙ, АНТИАРИТМИЧЕСКОЙ И ПРОТИВОФИБРИЛЛЯТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1999 года по МПК C07D235/28 A61K31/415 

Изобретение относится к новым химическим соединениям, а именно производным 2-меркаптобензимидазола общей формулы

где n = 2, 3; R - атом водорода, аралкилы; R₁ - диалкиламино, остаток моноциклического насыщенного амина, который может содержать дополнительный гетероатом; R₂ и R₃ - одинаковые или различные и означают атомы водорода, низшие алкилы, алкокси в различных положениях и их фармацевтически приемлемые соли, которые обладают противоишемической, антиаритмической и противофибрилляторной активностью и могут найти применение в медицине для лечения ишемической болезни сердца.

В литературе описано получение большого числа S- и N,S-замещенных 2-меркаптобензимидазолов, обладающих разнообразной, в том числе и сердечно-сосудистой активностью. Так, среди соединений этого ряда найдены вещества в кардиотоническим [1 - 4], сосудорасширяющим, антигипертензивным [4], антиатеросклеротическим и антиагрегационным действием [5, 6].

Среди синтезированных нами ранее S-диалкиламиноалкилтиобензимидазолов были выявлены соединения, проявляющие противоишемическую, антигипоксическую и антиаритмическую активность. Одно из наиболее активных - 2[2-(диэтиламино)этилтио] бензимидазол стало предметом заявки на выдачу патента Российской Федерации N 4951704/04 [7] . Это соединение является наиболее близким аналогом заявляемых веществ как по химической структуре, так и по фармакологическому действию.

В соответствии с тем, что заявляемые соединения относятся к специфическим брадикардическим средствам, защищают миокард от ишемического повреждения и проявляют антиаритмическую и противофибрилляторную активность, в качестве прототипов по фармакологическому действию были выбраны известные в медицинской практике препараты верипамил, пропранолол, новокаинамид, хинидин, лидокаин и боннекор [8].

Заявляемые соединения и их соли синтезированы по типовым методикам путем алкилирования замещенных 2-меркаптобензимидазолов соответствующими алкилирующими агентами в водно-спиртовом растворе в присутствии гидроокиси натрия с последующей обработкой образующихся маслообразных или кристаллических оснований в растворе абсолютного спирта или эфира спиртовым или эфирным раствором хлористого водорода.

где n, R, R₁, R₂, R₃ имеют вышеуказанные значения; m = 2, 3.

Контроль за ходом реакции и чистотой полученных продуктов проводился с помощью тонкослойной хроматографии на силуфоле или окиси алюминия в различных системах растворителей, проявление в парах йода или УФ-светом.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. 2-[2-Диэтиламино)этилтио]-5-метоксибензимидазол (I) и его дигидрохлорид. К раствору 3,6 г (0,02 моль) 5- метокси-2-меркаптобензимидазола и 1,8 г (0,044 моль) гидроокиси натрия в 10 мл воды и 40 мл спирта прибавляют 4,4 г (0,022 моль) гидрохлорида 2-(диэтиламино)этилхлорида. Реакционную смесь кипятят в течение 3 часов до исчезновения исходного тиона (контроль по ТСХ на силуфоле, растворитель хлороформ-метанол, 9:1), концентрируют до одной трети объема, разбавляют водой и экстрагируют этилацетатом. Экстракт промывают 2н. раствором гидроокиси натрия и водой, сушат сульфатом магния, осушитель отфильтровывают фильтрат упаривают в вакууме. Получают маслообразное основание I, которое растворяют в 25 мл абсолютного спирта, обрабатывают спиртовым раствором хлористого водорода и оставляют в холодильнике. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают небольшим количеством абсолютного спирта и сушат на воздухе. Получают 4,4 г (63%) дигидрохлорида основания I, т.пл. 209 - 210^oC (с разл.; из спирта с углем).

Найдено, %: C 47,7; H 6,4; Cl 20,3; N 12,2; S 8,5.

C₁₄H₂₁N₃OS • 2HCl.

Вычислено, %: C 47,7; H 6,6; Cl 20,1; N 11,9; S 9,1.

Пример 2. 2-[2-(Диметиламино)этилтио] -5-этоксибензимидазол (II) и его дигидрохлорид. Синтезированы аналогично предыдущему. Из 1,94 г (0,01 моль) 5-этокси-2-меркаптобензимидазола и 1,73 г (0,012 моль) гидрохлорида 2-(диметиламино)этилхлорида в 5 мл воды и 20 мл спирта в присутствии 0,9 г (0,022 моль) гидроокиси натрия получают 1,9 г (71,7%) соединения II, т.пл. 95-97^oC (с разл. ; из водного спирта). Из 1,4 г (0,005 моль) основания II получают 1,3 г (77%) дигидрохлорида, т.пл. 223-237^oC (c разл.; из смеси абсолютного спирта с этилацетатом).

Найдено, %: C 46,4; H 6,2; Cl 20,7; N 12,2; S 9,6.

C₁₃H₁₉N₃OS • 2HCl.

Вычислено, %: C 46,2; H 6,3; Cl 21,0; N 12,4; S 9,5.

Пример 3. 2-[2-(Диэтиламино)этилтио] -5-этоксибензимидазол (III) и его дигидрохлорид. Синтезированы аналогично предыдущему. Из 3,9 г (0,02 моль) 5-этокси-2-меркаптобензимидазола и 4,4 (0,022 моль) гидрохлорида 2-(диэтиламино)этилхлорида в присутствии 1,8 г (0,044 моль) гидроокиси натрия получают 5 г (85%) маслообразного основания III. Из 2,5 г (0,009 моль) основания III получают 2 г (85%) дигидрохлорида, т. пл. 159-171^oC (с разл.; из смеси абсолютного спирта с эфиром).

Найдено, %: C 49,9; H 6,8; Cl 18,6; N 10,6; S 8,0.

C₁₅H₂₃N₃OS • 2HCl • H₂O.

Вычислено, %: C 46,9; H 7,1; Cl 18,5; N 10,9; S 8,3.

Пример 4. 2-[2-(Пирролидино)этилтио]-5-этоксибензимидазол (IV) и его дигидрохлорид синтезированы аналогично предыдущему. Из 1,94 г (0,01 моль) 5-этокси-2-меркаптобензимидазола и 2,04 г (0,012 моль) гидрохлорида 2-(пирролидино)этилхлорида в присутствии 0,9 г (0,022 моль) гидроокиси натрия получают маслообразное основание IV, из которого получают 2,7 г (72,4%) дигидрохлорида, т.пл 127-130^oC (с разл.; из смеси абсолютного спирта с эфиром).

Найдено, %: C 48,6; H 6,8; Cl 19,0; N 10,9; S 8,7.

C₁₅H₂₁N₃OS • 2HCl • 0,5H₂O.

Вычислено, %: C 48,3; H 6,5; Cl 19,0; N 11,3; S 8,6.

Пример 5. 2-[2-(Пиперидино)этилтио]-5-этоксибензимидазол (V) и его дигидрохлорид синтезированы аналогично предыдущему. Из 1,94 г (0,01 моль) 5-этокси-2-меркаптобензимидазола и 2,21 г (0,012 моль) гидрохлорида 2-(пиперидино)этилхлорида в присутствии 0,9 г (0,022 моль) гидроокиси натрия получают маслообразное основание V, из которого получают 2,1 г (57%) дигидрохлорида, т. пл 187-190^oC (с разл.; из смеси абсолютного спирта с этилацетатом).

Найдено, %: C 49,6; H 6,7; Cl 18,5; N 10,8; S 6,0.

C₁₆H₂₃N₃OS • 2HCl • 0,5H₂O.

Вычислено, %: C 49,6; H 6,8; Cl 18,3; N 10,9; S 6,2.

Пример 6. 2-[3-(Диметиламино)пропилтио]-5,6-диметилбензимидазол (VI) и его дигидрохлорид синтезированы аналогично предыдущему. Из 2,67 г (0,015 моль) 5,6-диметил-2-меркаптобензимидазола и 2,78 г (0,019 моль) гидрохлорида 3-(диметиламино)пропилхлорида в присутствии 1,32 г (0,033 моль) гидроокиси натрия получают 3,1 г (73%) основания VI, т.пл. 95-98^oC (из водного спирта). Найдено, %: C 59,8; H 8,2; N 14,7. C₁₄H₂₁N₃S • H₂O. Вычислено,%: C 59,8; H 8,2; N 14,9. Из 2,81 г (0,01 моль) основания VI получают 2,81 г (83,6%) дигидрохлорида, т.пл. 206 - 208^oC (с разл.; из смеси абсолютного спирта с гексаном).

Найдено, %: C 49,7; H 6,9; Cl 20,8; N 12,5; S 9,3.

C₁₄H₂₁N₃S • 2HCl.

Вычислено, %: C 50,0; H 6,9; Cl 21,1; N 12,50; S 9,5.

Пример 7. 2-[3-(N-Метилпиперазино)пропилтио] -5,6-диметилбензимидазол (VII) и его тригидрохлорид синтезированы аналогично предыдущему. Из 1,8 г (0,01 моль) 5,6-диметил-2-меркаптобензимидазола и 3,74 г (0,015 моль) дигидрохлорида 3-(4-метилпиперазино)пропилхлорида в присутствии 1,32 г (0,033 моль) гидроокиси натрия получают 2,5 г (79%) основания VII, т. пл. 116 - 118^oC (с разл. ; из смеси хлороформа с гексаном). Из 1,6 г (0,005 моль) основания VII получают 1,65 г (78%) тригидрохлорида, т.пл. 228-231^oC (с возг.; из спирта).

Найдено, %: C 45,8; H 6,9; Cl 23,8; N 12,9.

C₁₇H₂₆N₄S • 3HCl • H₂O.

Вычислено, %: C 45,9; H 7,0; Cl 23,9; N 12,6.

Пример 8. 1-Бензил-2-[2-(диметиламино)этилтио]бензимидазол (VIII) и его дигидрохлорид. К суспензии 4,8 г (0,02 моль) 1-бензил-2-меркатобензимидазола в 10 мл воды и 40 мл спирта прибавляют 1,8 г (0,044 моль) гидроокиси натрия и нагревают при 70^oC до растворения осадка. К полученному раствору при перемешивании и 70^o прибавляют по каплям раствор 3,16 г (0,022 моль) гидрохлорида 2-(диметиламино)этилхлорида в 10 мл спирта. Реакционную смесь перемешивают при 70^oC до окончания реакции. Охлаждают, осадок отфильтровывают и промывают спиртом. Фильтрат упаривают и получают основание VIII, которое растворяют в абсолютном спирте, раствор обрабатывают эфирным раствором хлористого водорода. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают абсолютным эфиром. Получают 5 г (62,5%) дигидрохлорида, т.пл. 190 - 191^oC (из спирта).

Найдено, %: C 55,0; H 5,9; Cl 17,6; N 10,8; S 8,8.

C₁₈H₂₁N₃S • 2HCl • 0,5H₂O.

Вычислено, %: C 54,9; H 6,1; Cl 18,0; N 10,7; S 8,9.

Пример 9. 1-Бензил-2-[2-диэтиламино)этилтио] бензимидазол (IX) и его дигидрохлорид синтезированы аналогично предыдущему. Из 4,8 г (0,02 моль) 1 бензил-2-меркаптобензимидазола и 3,8 г (0,022 моль) гидрохлорида 2-(диэтиламино)этилхлорида в присутствии 1,8 г (0,044 моль) гидроокиси натрия получают маслообразное основание IX, из которого получают 7 г (83,3%) дигидрохлорида, т.пл. 136-137^oC (из смеси абсолютного спирта с эфиром).

Найдено, %: C 56,5; H 6,7; Cl 16,8; N 10,0; S 7,9.

C₂₀H₂₅N₃S • 2HCl • 0,5H₂O.

Вычислено, %: C 57,0; H 6,7; Cl 16,8; N 10,0; S 7,6.

Пример 10. 1-(β- Фенилэтил)-2-[2-диэтиламино)этилтио]бензимидазол (X) и его дигидрохлорид синтезированы аналогично предыдущему. Из 2,54 г (0,01 моль) 1-(β- фенилэтил)-2-меркаптобензимидазола и 1,73 г (0,012 моль) гидрохлорида 2-(диметиламино)этилхлорида в присутствии 1 г (0,025 моль) гидроокиси натрия получают 1,7 г (47%) дигидрохлорида основания X, т.пл. 160-161^oC (из смеси абсолютного спирта с эфиром).

Найдено, %: C 56,3; H 6,0; Cl 17,6; N 10,3; S 7,9.

C₁₉H₂₃N₃S • 2HCl • 0,5H₂O.

Вычислено, %: C 56,0; H 6,4; Cl 17,4; N 10,3; S 7,9.

Раствор дигидрохлорида в воде нейтрализуют раствором бикарбоната натрия, экстрагируют эфиром, экстракт сушат сульфатом магния, осушитель отфильтровывают, фильтрат упаривают. Получают соединение X, т.пл. 38-39^oC (из петролейного эфира).

Найдено, %: C 70,1; H 7,1; N 12,9; S 9,8.

C₁₉H₂₃N₃S.

Вычислено, %: C 70,1; H 7,1; N 12,9; S 9,9.

Пример 11. 1-(β- Фенилэтил)-2-[2-диэтиламино)этилтио]бензимидазол (XI) и его дигидрохлорид синтезированы аналогично предыдущему. Из 2,54 г (0,01 моль) 1-(β- фенилэтил)-2-меркаптобензимидазола и 2,1 г (0,012 моль) гидрохлорида 2-(диэтиламино)этилхлорида в присутствии 1 г (0,025 моль) гидроокиси натрия получают 2,2 г (62%) основания XI, т.пл. 54 - 55^oC (из петролейного эфира).

Найдено, %: C 71,4; H 7,7; N 11,7.

C₂₁H₂₇N₃S.

Вычислено, %: C 71,3; H 7,7; N 11,9.

Дигидрохлорид, т. пл. 129 - 130^oC (из смеси абсолютного спирта с этилацетатом).

Найдено, %: C 59,1; H 6,8; Cl 16,3; N 10,0; S 7,3.

C₂₁H₂₇N₃S • 2HCl.

Вычислено, %: C 59,1; H 6,9; Cl 16,6; N 9,9; S 7,5.

Пример 12. 1-(β- Фенилэтил)-2-[2-морфолино)этилтио]бензимидазол (XII) и его дигидрохлорид синтезированы аналогично предыдущему. Из 2,54 г (0,01 моль) 1-(β- фенилэтил)-2-меркаптобензимидазола и 2,04 г (0,011 моль) 2-(морфолино)этилхлорида в присутствии 1 г (0,025 моль) гидроокиси натрия получают 3 г (70%) дигидрохлорида основания XII, т.пл. 179 - 180^oC (из смеси абсолютного спирта с этилацетатом).

Найдено, %: C 57,1; H 5,8; Cl 15,8; N 9,8; S 7,8.

C₂₁H₂₅N₃OS • 2HCl.

Вычислено, %: C 57,3; H 6,2; Cl 16,1; N 9,5; S 7,3.

Соединение XII (получено из гидрохлорида), т.пл. 66 - 67^oC (из гексана).

Найдено, %: C 68,5; H 7,0; N 11,5; S 8,9.

C₂₁H₂₅N₃OS.

Вычислено, %: C 68,6; H 6,9; N 11,4; S 8,7.

Фармакологические свойства заявляемых соединений.

Фармакологическое изучение солей заявляемых соединений I-XII проводили на различных моделях ишемии и нарушений ритма сердца в сравнении с эталонными препаратами - дигидрохлоридом 2-[2-(диэтиламино)этилтио]-5,6- диметилбензимидазола (XIII), верапамилом, пропранолом, новокаинамидом, хинидином, лидокаином, боннекором.

1. Противоишемическая активность.

Влияние соединений на гемодинамику и деятельность интактного сердца изучали в экспериментах на анестезированных кошках. Опыты проводили в условиях открытой грудной клетки. О деятельности сердца судили по фазовой кривой скорости кровотока в восходящей части дуги аорты. Изучаемые соединения вводили внутривенно в физиологическом растворе. Полученные данные обрабатывали статистически, для выявления значимости различий использовали t-ритерий Стьюдента.

Опыты показали, что соединения II (1,0 мг/кг), III (0,5 и 1,0 мг/кг) и X (1,0 и 2,0 мг/кг), введенные внутривенно, вызывают выраженную брадикардию, продолжающуюся в течение 30 мин после введения. При этом уменьшалось и двойное произведение, являющееся косвенным показателем потребности сердца в кислороде. Следует отметить, что именно уменьшение потребности сердца в кислороде является одним из основных признаков антиангинальных препаратов [9] . Брадикардия, вызываемая исследуемыми соединениями сопровождалось увеличением систолического выброса. Другие показатели гемодинамики практически не изменялись (табл. 1 - 3). Прототип - соединение XIII [7] также вызывало значительную и длительную брадикардию. Однако под его влиянием в течение 2 - 3 минут после введения значительно снижалось системное артериальное давление, уменьшилось среднее ускорение кровотока в аорте, что свидетельствует об угнетении сократительной функции сердца (табл. 4). Второй препарат сравнения верапамил, вызывая брадикардию, значительно и длительно угнетал сократительную функцию сердца (табл. 5). Напротив, соединения II, III и X не только не угнетали сократимость миокарда, а даже ее несколько увеличивали (проявлялась тенденция к увеличению этого показателя).

Соединения I, IV, VII и XI в дозах 0,5 - 2,0 мг/кг вызывают небольшую и кратковременную брадикардию и практически не влияют на другие показатели гемодинамики и деятельности сердца.

Вещества V, VI, VIII, IX и XII практически не влияют на показатели гемодинамики и деятельности сердца.

На основании полученных результатов для дальнейшего углубленного изучения были отобраны соединения II, III и X.

Для выявления защитного действия изучаемых соединений на ишемизированный миокард необходимо было провести эксперименты на модели острой коронарной недостаточности. С этой целью были проведены опыты на анестезированных нембуталом (40 мг/кг, внутривенно) кошках массой 2,5 - 4,0 кг. Эксперименты проводили в условиях открытой грудной клетки. У животных с помощью прибора "мингограф-81" регистрировали эпикардиальную электрограмму в 3 - 4 отведениях. Об интенсивности обратимого ишемического повреждения судили по величине среднего подъема сегмента ST во время 5-минутных окклюзий передней нисходящей ветви левой коронарной артерии с 15-минутными реперфузиями между ними. Адекватность данной модели была проверена нами ранее на примере пропранолола, нитроглицерина и верапамила, которые показали значительное противоишемическое действие [10].

Результаты экспериментов обрабатывали статистически. Для выявления значимости изменений использовали непараметрический метод Вилкоксона для сопряженных вариантов.

Было проведено 2 серии экспериментов по 6 - 7 животных в каждой. Опыты показали, что соединения II и III в дозе 1,0 мг/кг внутривенно значительно уменьшают среднюю величину подъема сегмента ST на множественных отведениях эпикардиальной электрограммы во время 5-минутной окклюзии венечной артерии. При этом, если соединение II было эффективно только во время окклюзии, проводимой сразу после его введения, то вещество III обладало противоишемическим действием в течение 40 минут после введения (табл. 6, 7). Прототип XIII обладает подобным действием на данной модели, однако он действует только при постоянном капельном введении. При введении болюсом его действие было кратковременным (фиг. 1). Верапамил также улучшает функциональное состояние очага ишемии на данной модели, однако он значительно угнетает сократительную функцию сердца [10].

Таким образом, соединения II и III обладают определенным противоишемическим действием, которое, по-видимому, связано с уменьшением потребности сердца в кислороде за счет брадикардии. Преимущество перед прототипами (вещество XIII и верапамил) заключается в том, что выявленные соединения вызывают брадикардию, не угнетают (даже кратковременно) сократительную функцию сердца, а соединение III по сравнению со II действует более длительно на модели недостаточности коронарного кровообращения.

Представленные данные позволяют высказать предположение о том, что соединения II и III относятся к новой группе антиангинальных средств - селективным брадикардическим агентам типа фалипамила (структурный аналог верапамила). Однако это предложение нуждалось в дальнейшем подтверждении, для чего было проведено расширенное доклиническое изучение соединения III, как наиболее активного.

Для изучения влияния соединения на сократительную и насосную функции ишемизированного сердца проводили эксперименты на анестезированных нембуталом (40 мг/кг, внутривенно) кошках массой 3,0 - 4,5 кг. В условиях открытой грудной клетки у животных создавали окклюзию передней нисходящей ветви левой коронарной артерии длительностью 20 или 40 минут, которая сменялась 30 или 60-минутной реперфузией соответственно. С помощью электромагнитного измерителя потока крови MFV-1200 фирмы "Nihon Kohden" регистрировали фазовую кривую скорости кровотока в восходящей части дуги аорты. Рассчитывали показатели гемодинамики и деятельности сердца. Подсчитывали количество случаев возникновения аритмий. В экспериментах с 40-минутной ишемией сразу после 60-й минуты реперфузии сердца вырезали, останавливали холодным гиперкалиевым раствором, разделяли условно-интактную и ишемизированную зоны миокарда левого желудочка и замораживали их в жидком азоте. В зонах миокарда определяли содержание АТФ гексокиназным методом. Всего было проведено 4 серии экспериментов (2 контрольные и 2 основные) по 12 кошек в каждой. Полученные результаты обрабатывали статистически. Значимость различий определяли с помощью t-критерия Стьюдента и метода точной вероятности Фишера.

Опыты показали, что в условиях 20-минутной окклюзии и последующей 30-минутной реперфузии коронарной артерии соединение III (1,0 мг/кг болюсом сразу после окклюзии + 50 мкг/кг/мин в течение 30 мин, внутривенно) в значительной мере предупреждает угнетение сократительной функции сердца, вызываемое ишемическим повреждением. При этом действие вещества III продолжалось в течение всего эксперимента, в то время как эффект прототипа XIII продолжался в течение окклюзии и первых 10 минут реперфузии. Изучаемое соединение III в значительной мере предотвращало уменьшение систолического выброса, вместе с тем, сердечный выброс поддерживался в значительно меньшей степени, что связано, по-видимому, со значительной брадикардией, вызываемой этими соединениями (фиг. 2, 3).

В контрольной серии опытов у животных во время окклюзии и реперфузии часто возникали аритмии различной тяжести. Соединение III не уменьшало количества аритмий, возникающих в этих условиях.

При более тяжелой ишемии (40-минутная окклюзия и 60-минутная реперфузия коронарной артерии) соединение III также в значительной мере предупреждает угнетение сократительной функции сердца, вызываемое ишемическим повреждением миокарда. Соединение III в значительной мере предотвращало уменьшение систолического выброса, при этом оно практически не влияло на изменения сердечного выброса (фиг. 4). Соединение III в этих условиях так же, как и при более легкой ишемии, не уменьшало количества аритмий, возникающих в ответ на окклюзию и реперфузию венечного сосуда.

После 40 минут окклюзии и 60 минут реперфузии коронарной артерии в ишемизированном миокарде по сравнению с условно-интактной тканью было резко снижено содержание АТФ (-46,4 ± 5,6%). Соединение III в этих условиях увеличивало содержание АТФ в миокарде ишемизированной зоны, незначительно уменьшая его в условно-интактных областях, в то время как прототип не влиял на этот показатель (фиг. 5).

Таким образом, соединение III в условиях ишемии различной длительности и последующей реперфузии венечного сосуда в определенной мере предупреждает угнетение насосной и сократительной функции сердца. Вещество в отличие от прототипа увеличивает содержание АТФ в ишемизированном миокарде.

Хорошо известно, что классические препараты брадикардического типа действия - алинидин и фалипамил обладают значительным антиаритмическим эффектом. В связи с этим представлялось интересным излучить действие соединений III и X на различных моделях нарушения сердечного ритма.

2. Антиаритмическая активность.

Антиаритмические свойства заявляемых соединений изучали на адреналиновой модели у бодрствующих кроликов, хлоридкальциевой и аконитиновой моделях у бодрствующих крыс, модели фибрилляции желудочков у наркотизированных крыс и модели по Harris у бодрствующих собак.

Адреналиновая аритмия. Аритмогенный эффект катехоламинов связывают с увеличением под их влиянием проводимости медленных "кальциевых" каналов и возникновением экотопической пейсмекерной активности в предсердиях и желудочках. Нарушения сердечного ритма, если не заканчиваются фибрилляцией желудочков, длятся обычно 6 - 7 мин.

Кролику массой 2,5 - 3,0 кг в краевую вену уха вводили адреналина гидрохлорид в виде 0,1% раствора в дозе 120 - 150 мкг/кг, вызывавший в течение 6 - 7 мин нарушения ритма сердца двух типов. В одних случаях, если применялись очень высокие дозы адреналина (150 - 160 мкг/кг), сразу же после введения вещества возникала политопная экстрасистолия, сменяющаяся обычно желудочковой тахикардией или фибрилляцией желудочков. В других случаях желудочковая экстрасистолия возникала на фоне резкой брадикардии с атриовентрикулярной блокадой различных степеней, которая через 2 - 3 мин переходила в политопную экстрасистолию и желудочковую тахикардию. Брадикардия в этом случае носит рефлекторный характер в ответ на резкое повышение под влиянием адреналина артериального давления.

Через 30 минут после определения аритмогенной дозы адреналина вводили внутривенно исследуемое соединение в 3 мл дистиллированной воды и записывали ЭКГ во II стандартном отведении. Через 2 мин после введения изучаемого соединения повторно вводили адреналин в аритмогенной дозе. Антиаритмическую эффективность заявляемого соединения определяли по его способности предотвращать гибель кроликов от летальной фибрилляции желудочков и полностью предупреждать возникновение аритмий. Как видно из табл. 8, соединения III и X оказывают выраженный антиаритмический эффект, почти не уступая на этой модели верапамилу и пропранололу, антиаритмикам 4 и 2 классов, соответственно, и значительно превосходя антиаритмики 1 класса (хинидин и лидокаин).

Хлоридкальциевая аритмия у крыс. Аритмии, вызванные высокими дозами (250 - 300 мг/кг) хлорида кальция, являются одними из наиболее тяжелых и мало поддающихся воздействию антиаритмических средств. Механизм, посредством которого хлорид кальция оказывает аритмогенное действие, включает как прямой эффект на мембрану миокардиальных клеток, так и опосредованный через активацию биоэлектрической активности в симпатических нервах сердца. В наших экспериментах мы использовали нелинейных бодрствующих крыс массой 180 - 200 г, которым в хвостовую вену вводили 250 - 300 мг/кг хлорида кальция в виде 10% раствора. В большинстве случаев фибрилляция желудочков возникает на 1 - 2 минуте после введения, у остальных животных - сразу же после введения возникает резкая синусовая брадикардия с желудочковыми экстрасистолами на фоне артиовентрикулярной блокады, которые переходят в короткий залп желудочковой тахикардии, также завершающейся фибрилляцией желудочков. Заявляемые соединения III и X, введенные за 2 мин до введения хлорида кальция, предотвращают гибель животных от летальный фибрилляции желудочков. Как следует из табл. 8, средние эффективные дозы соединений III и X составляют 1,0 и 2,03 мг/кг соответственно, что свидетельствует об их значительной антиаритмической активности. На этой модели соединение III в 50 и 7,5 раз активнее новокаинамида и лидокаина соответственно.

Аконитиновая аритмия. Аконитиновую аритмию вызывали у бодрствующих крыс массой 180 - 200 г, вводя в хвостовую вену раствор аконитина-сульфата в дозе 40 - 50 мкг/кг. При этом возникали нарушения ритма смешанного предсердно-желудочкового характера, представляющие собой обычно политопную экстрасистолию. Исследуемые вещества вводили внутривенно за 1 - 3 минуты до введения аконитина. ED₅₀ рассчитывали по методу Литчфилда.

Опыты показали, что на аконитиновой модели соединение III также проявляло высокую активность, его ED₅₀ составило 1,2 мг/кг, а LD₅₀ при внутривенном введении - 31,5 мг/кг, антиаритмический индекс (LD₅₀/ED₅₀) - 26,2 (табл. 8). По активности это вещество превосходит известные антиаритмики 1 класса - хинидин и лидокаин в 4,4 и 6,5 раз соответственно и широта его терапевтического действия больше, чем у вышеупомянутых эталонных препаратов.

Изучение противофибрилляторных свойств соединений III и X в опытах на крысах. Эксперименты проводили на наркотизированных этаминал-натрием (60 мг/кг, внутрибрюшинно) крысах самцах массой 180 - 240 г в условиях вскрытой грудной клетки и искусственного дыхания. У животных с помощью специального приспособления вызывали окклюзию левой коронарной артерии в 1 - 2 мм от ее начала. Через 7 минут производили реперфузию. Именно в этот период по данным ряда исследователей [11] возникает наибольшее количество (70 - 100%) фибрилляций желудочков. ЭКГ во II стандартном отведении регистрировали с помощью прибора "Мингограф-81". Подсчитывали количество случаев фибрилляций желудочков во время окклюзии и реперфузии, аритмий опасных для жизни (фибрилляции + параксизмальные желудочковые тахикардии), общее количество аритмий. В качестве препарата сравнения использовали известный антиаритмик боннекор [12]. Вещества вводили внутривенно в следующих дозах: боннекор - 1 мг/кг; соединение III - 2 мг/кг; соединение X - 1 мг/кг. В контрольной серии опытов внутривенно вводили эквивалентный объем физиологического раствора (1 мг/кг). Всего было проведено 4 серии экспериментов на 80 крысах. Результаты подвергали статистической обработке. Проводили балльное шкалирование выборок: отсутствие аритмий - 0 баллов; экстрасистолия - 1 балл; параксизмальная желудочковая тахикардия - 2 балла; фибрилляция желудочков, возникшая во время реперфузии - 3 балла; фибрилляция, возникшая во время окклюзии венечного сосуда - 4 балла. Значимость изменений определяли с помощью метода точной вероятности Фишера и метода Вилкоксона для несвязанных выборок.

Как показали [11], 7-минутная окклюзия и последующая реперфузия коронарной артерии у наркотизированных крыс вызывает фибрилляции желудочков в 68 - 100% случаев. Такие препараты, как дефибротид и простациклин, уменьшали количество фибрилляций. На данной модели нарушений ритма сердца мы изучили противофибрилляторное действие производных 2-меркаптобензимидазола. В качестве препарата сравнения был использован боннекор (1 мг/кг), который по данным, полученным в нашей лаборатории, обладает значительным противофибрилляторным действием [12].

Опыты показали, что в контрольной серии фибрилляции желудочков возникали в 15 случаях из 24 (62,5%), а опасные для жизни аритмии (фибрилляции + параксизмальные желудочковые тахикардии) в 22 случаях (91,7%). В этих случаях эталонный препарат боннекор значительно уменьшал количество фибрилляций желудочков и опасных для жизни аритмий. При этом уменьшалось как общее количество аритмий, так и их тяжесть, оцениваемая с помощью балльного шкалирования.

Соединение III в дозе 2 мг/кг так же, как и боннекор, значительно уменьшало количество фибрилляцией желудочков и опасных для жизни аритмий. При этом снижалась и тяжесть аритмий (табл. 9). Вещество X в дозе 1 мг/кг проявляло заметную тенденцию к снижению количества фибрилляций желудочков, значительно уменьшало число опасных для жизни аритмий и их тяжесть (табл. 9).

Таким образом, изучаемые вещества обладают противофибрилляторными свойствами. Следует отметить, что классический препарат брадикардического типа действия алинидин также обладает противофибрилляторной активностью [13].

Аритмия у бодрствующих собак по Harris. Эксперименты проводили на беспородных собаках обоего пола массой 9 - 14 кг. Животным в условиях наркоза (нембутал 40 мг/кг, внутривенно) и искусственного дыхания производили двухстепенную перевязку передней нисходящей ветви левой коронарной артерии. Через 24 часа у собак в свободном поведении регистрировали стойкие нарушения ритма сердца на ЭКГ. Соединения III и X вводили внутривенно в водном растворе в дозах 2,0 мг/кг. Результаты экспериментов обрабатывали статистически с использованием t-критерия Стьюдента.

Опыты показали, что соединение III постепенно вызывает значительную брадикардию. Антиаритмическое действие вещества отмечено у всех животных, несмотря на высокий исходный уровень эктопической активности. Длительность эффекта достигала 50 минут, прототип XIII действовал значительно меньшее время (табл. 10, 11). Следует отметить, что у 2 собак из 5 на фоне действия вещества III наблюдалось умеренно выраженное состояние возбуждения, именно с этим, по-видимому, связано отсутствие значительной брадикардии сразу после введения препарата.

Соединения X независимо от уровня исходной эктопической активности сердца также вызывало значительную брадикардию. Обладало вещество и антиаритмической активностью (табл. 12, фиг. 6). При этом в опытах с высоким уровнем эктопии (N1 и N4) антиаритмический эффект был выражен слабо и продолжался 10 - 15 минут. В опыте с умеренной эктопической активностью (N 3) под влиянием соединения наблюдалось полное подавление аритмии, а тенденция к восстановлению отмечалась на 30 - 40 минуте. В опыте N2 антиаритмический эффект был выражен незначительно и кратковременно. Важно отметить, что даже в тех опытах, в которых антиаритмический эффект расценивался как слабый или незначительный (при расчете процента эктопических сокращений) вещество X оказывало благоприятное действие. Оно выражалось в том, что устранялись параксизмы желудочковой тахикардии и экстрасистолии и возникал ритм более стабильный. Соединение X хорошо переносится животными и, возможно, обладает некоторым седативным действием.

Таким образом, соединения III и X оказывают выраженное антиаритмическое действие и не вызывают заметных побочных явлений у бодрствующих собак с желудочковыми нарушениями сердечного ритма.

Итак, среди производных 2-меркаптобензимидазола найдены вещества, вызывающие значительную брадикардию и практически не влияющие на другие показатели гемодинамики и деятельности сердца, что позволяет их отнести к группе специфических брадикардических средств. Эти соединения обладают заметным противоишемическим и антиаритмическим действием.

Литература
1. Hikaru Ozawa, Hara Yoichi//Yakugaku Zasshi. 1968, v.88, 6, p.747-754 [C.A., 1968, 69, 66886z].

2. Брукштус А.Б., Гарлене В.Н., Сирвидите А.Р.-Р., Даукшас В.К.//Хим.-фарм.ж., 1992, N11-12, с. 50-53.

3. Брукштус А.Б., Гарлене В.Н., Сирвидите А.Р.-Р., Даукшас В.К.//Хим.-фарм.ж., 1994, N6, с. 24-26.

4. Bru-Magniez N. , Gungor T., Lacrampe J. et al. //Eur.Pat.Appl. Ep 385850 (1990) [C.A., 1991, 114, 81830t].

5. Harsanyi K., Maderspach A., Javor A. et al. //UK Pat.Appl. GB 2173191 A (1986).

6. Anderson D.J. //US Pat. 4873346 (1989) [C.A., 1990, 112, 178982r].

7. Савельев В. Л. , Можаева Т. Я., Чичканов Г.Г. и соавт. //Заявка N 4951704/04 (1991) с решением о выдаче патента РФ от 26.10.1993.

8. Машковский М.Д. Лекарственные средства. -М.: Медицина, 1993.

9. Каверина Н.В., Розонов Ю.Б., Чичканов Г.Г. Современные аспекты фармакологии антиангинальных средств. -М.: Медицина, 1980, с. 240.

10. Цорин И.Б. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. -М., 1985, 148 c.

11. Krzeminski T., Grzyb J., Kurcok A., Brus R. //Pol. Pharmacol. 1992, v.44, Suppl., p.169-170.

12. Григорьева Е.К., Горбунова В.В. В сб.: "Новый антиаритмический препарат боннекор (фармакология и клиническое применение)". -М., 1993, с.64-67.

13. Uprichard A.C.G., Chi L., Lynch J.J. et al. //J. Cardiov. Pharmacol. 1989, v.14, N 3, p. 475-482.

Изобретение относится к новым химическим соединениям - производным 2-меркаптобензимидазола общей формулы I, приведенной в тексте описания, где n = 2, 3; R - атом водорода, бензил, β-фенилэтил, R₁ - диалкиламино, остаток моноциклического насыщенного амина, который может содержать дополнительный гетероатом - кислород; R₂ и R₃ - одинаковые или различные и означают атомы водорода, низшие алкилы, алкокси в положении 5 или 6 бензольного кольца, бензимидазола, или их фармацевтически приемлемым солям, обладающим противоишемической и антиаритмической активностью. Вышеуказанные соединения проявляют выраженное противоишемическое, антиаритмическое и антифибрилляторное действие и имеют определенные преимущества перед препаратами сравнения. Они могут найти применение в медицине для лечения больных с различными заболеваниями сердечно-сосудистой системы. 6 ил., 12 табл.

Производные 2-меркаптобензиамидазола общей формулы:

где n - 2,3,
R - атом водорода, бензил, β- фенилэтил;
R₁-диалкиламино, остаток моноциклического насыщенного амина, который может содержать в качестве дополнительного гетероатома кислород;
R₂ и R₃ - одинаковые или различные и означают атом водорода, низший алкил или алкокси в положениях 5 или 6 бензольного кольца, бензимидазола,
или их фармацевтически приемлемые соли, обладающие противоишемической, антиаритмической и противофибрилляторной активностью.