СПОСОБ ОЦЕНКИ АДРЕНОРЕАКТИВНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ БЕРЕМЕННЫХ ЖЕНЩИН ПО ИЗМЕНЕНИЮ СКОРОСТИ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ КАПИЛЛЯРНОЙ КРОВИ НА ФОНЕ БЛОКАДЫ ИХ βАДРЕНОРЕЦЕПТОРОВ ОБЗИДАНОМ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно к клиническим методам исследования, и может быть использовано для оценки β-адренореактивности эритроцитов у женщин с физиологическим и осложненным течением беременности и родового акта.

β-Адренорецепторный ингибирующий механизм играет важную роль в регуляции сократительной деятельности матки (Дуда И. В. 1989, Циркин В.И. и соавт. 1986, 1997). Считается, что β-адренореактивность матки при беременности возрастает, а перед родами снижается, что способствует нормальному течению беременности и родового акта (Дуда И. В. 1989, Циркин В.И. и соавт. 1997). Нарушение функционирования этого механизма может стать причиной слабости родовой деятельности (Братухина С.В. и соавт. 1996), а избыточное его влияние, вероятно, может быть причиной гестоза (Колобова Е.В. и соавт. 1997). В связи с этим возникает потребность в определении β-адренореактивности миометрия у беременных женщин и рожениц. Прямой метод оценки β-адренореактивности миометрия достаточно сложен. По нашему мнению для этой цели можно использовать эритроциты. Известно, что эритроциты содержат β-адренорецепторы (Манухин Б. Н. и соавт. 1993, Соминский B.Н. и соавт. 1980, 1989), активация которых сопровождается повышением внутриклеточной концентрации цАМФ (Розен В.Б. 1994), что вызывает ряд эффектов - рост агрегации и осмотической резистентности эритроцитов, изменение их деформируемости, гликолиза (Соминский В. Н. и соавт. 1981, 1989). Чувствительность эритроцитов к агонистам β-адренорецепторов может изменяться в процессе адаптации, при стрессе, при сердечно-сосудистой патологии и психических заболеваниях (Манухин Б.Н. и соавт. 1993, Соминский В.Н. и соавт. 1989), что отражает функциональное состояние симпато-адреналовой системы.

В качестве аналогов можно рассмотреть следующие методы:
1. Метод оценки адренореактивности, основанный на определении концентрации β-адренорецепторов в эритроцитах.

Для получения количественных характеристик адренорецепторов эритроцитов применяются методы связывания рецепторов с меченными лигандами, в частности, для идентификации связывающих мест в мембранах эритроцитов можно использовать 3H-(-)-алпренолол (Lefkowitz R. J., 1979) или 3H-пропранолол (Б. Н. Манухин и соавт., 1993).

Однако данный метод является технически сложным и недоступен для широкой клинической практики.

2. Метод оценки адренореактивности эритроцитов, основанный на определении их осмотической резистентности на фоне адренергических средств (В. Н. Соминский, К. В. Окунь, Н. А. Севастьянова, 1980, 1981).

Согласно данным этих авторов β-адреномиметические средства (адреналин, алупент) при воздействии на эритроциты человека in vitro за счет активации β-адренорецепторов снижают осмотическую резистентность, β-адреноблокатор пропранолол блокирует эффекты адреналина и инвертирует действие алупента, одновременно оказывая выраженное собственное влияние на осмотическую резистентность эритроцитов, повышая ее.

С помощью данного метода показано, что при инфаркте миокарда адренореактивность эритроцитов возрастает, об этом свидетельствует тот факт, что повышение осмотической резистентности эритроцитов под влиянием пропранолола у больных инфарктом миокарда было более существенным, чем у здоровых. Также наблюдается рост адренореактивности эритроцитов у животных при искусственном снижении содержания норадреналина в тканях, об этом свидетельствует повышение сродства β-адренорецепторов эритроцитов к пропранололу (В. Н. Соминский, Л. В. Бердышева, Р. К. Блума и др., 1989).

Однако, способ имеет следующие недостатки:
- сложности клинической оценки гемолиза;
- необходимость специального оборудования (ФЭК-56М, термостат, ротационный встряхиватель);
- отсутствие нормативных значений.

В качестве прототипа предлагается рассмотреть предложенный нами ранее способ оценки адренореактивности эритроцитов венозной крови беременных женщин по изменению скорости оседания эритроцитов на фоне блокады их β-адренорецепторов (определение β-адренозависимой СОЭ) (Колобова Е. В., Дворянский С. А. , Циркин В. И. Материалы научной конференции: Актуальные вопросы трансфузионной и клинической медицины. Киров, 1997. - С. 209-211).

Данный способ основан на определении изменения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) венозной крови, определяемой по Панченкову Т.П., под влиянием β-адреноблокатора пропранолола (обзидана), используемого в концентрациях 1 • 10^-5, 1 • 10^-6,..., 1 • 10^-13 г/мл и добавляемого in vitro в исследуемую цитратную венозную кровь, при условии, что исходная СОЭ выше 10 мм/час (беременность, воспалительные заболевания). Добавление в кровь пропранолола (обзидана) приводит к блокаде β-адренорецепторов эритроцитов, тем самым к уменьшению их агрегации, лежащей в основе механизма СОЭ, и, следовательно, к снижению СОЭ, а степень снижения зависит, главным образом, от концентрации β-адренорецепторов в эритроцитах, и в меньшей степени, от концентрации агонистов и сенсибилизатора β-адренорецепторов, содержащихся в крови. При нормальной β-адренореактивности эритроцитов, составляющей 60-80% от контрольной СОЭ, адренореактивность эритроцитов оценивается как умеренная (нормальная), при β-адренозависимой СОЭ, более 80% - как сниженная, а менее 60% - как повышенная.

С помощью данного метода впервые показано, что β-адренореактивность эритроцитов у женщин зависит от характера течения беременности и родового акта. А именно, при неосложненном течении беременности β-адренореактивность эритроцитов умеренная, при гестозах - повышена, при угрозе преждевременных родов - снижена, перед родами снижается и физиологические роды протекают на фоне низкой β-адренореактивности, при слабости родовой деятельности - она сохраняется такой же высокой как у беременных женщин, что указывает на сохранение при слабости родовой деятельности высокой β-адренореактивности миометрия.

Таким образом, данный способ позволяет судить о β-адренореактивности организма.

Однако, способ имеет следующие недостатки:
- необходимость венепункции с целью получения венозной крови для исследования, т.е. метод является инвазивным;
- необходимость приготовления большого количества (9) разведений обзидана для определения β-адренозависимой СОЭ, т.е. метод является довольно трудоемким.

Целью предлагаемого способа является упрощение оценки β-адренореактивности эритроцитов, повышение доступности и возможности широкого использования в клинической практике с целью диагностики акушерской патологии.

Поставленная цель достигается применением известного метода определения скорости оседания эритроцитов по Панченкову Т. П. с добавлением к цитрату натрия, используемого для определения скорости оседания эритроцитов исследуемой капиллярной крови беременных женщин, β-адреноблокатора обзидана, при условии, что исходная СОЭ выше 10 мм/час (беременность, воспалительные заболевания).

Описание способа.

Необходимое оборудование и реактивы:
1. Аппарат Панченкова, состоящий из штатива и капилляров;
2. Профильтрованный 5% раствор цитрата натрия;
3. Обзидан (ампулярный раствор 0,005 г - 5 мл).

Постановка пробы:
Способ предусматривает раздельное изучение скорости оседания эритроцитов капиллярной крови в присутствии β-адреноблокатора обзидана, используемого в концентрации 1 • 10^-9 г/мл и СОЭ, определяемой с помощью стандартной методики Панченкова Т.П. (без добавления обзидана, т.е. контрольную СОЭ).

Для исследования используется капиллярная кровь. Готовится раствор цитрата натрия, содержащий обзидан в концентрации 1 • 10^-9 г/мл.

Определение контрольной СОЭ (унифицированный микрометод Панченкова Т. П. , 1972).

Перед использованием химически чистый капилляр промывают цитратом натрия и заполняют его цитратом на 1/4 (до метки 0,75). Этим же капилляром набирают кровь из мякоти пальца до метки 0 (полный капилляр) и переносят в пробирку с цитратом, усиленно выдувая всю кровь. При этом получают соотношение крови и цитрата 4:1. Перемешивают содержимое пробирки и смесь крови с цитратом набирают в капилляр до метки 0 (0,1 мл), ставят вертикально в штатив и замечают время.

Для определения β-адренозависимой СОЭ вместо обычного цитрата используют цитрат натрия, содержащий β-адреноблокатор обзидан в концентрации 1 • 10^-9 г/мл. Капилляром также набирают цитрат до метки 0,75, затем кровь из пальца до метки 0 и перемешивают с цитратом, содержащим обзидан, полученную смесь набирают в капилляр до отметки 0 (0,1 мл), ставят строго вертикально в штатив и замечают время постановки.

Оценка β-адренозависимой СОЭ:
Регистрация скорости оседания эритроцитов в обоих капиллярах производится через 1 час обычным способом (по высоте отстоявшегося столбика плазмы в мм над осевшими эритроцитами). Фиксируется значение β-адренозависимой СОЭ в мм/час и выражается в % к контрольной СОЭ.

Нами проведено изучение β-адренозависимой скорости оседания эритроцитов капиллярной крови у 518 беременных женщин со сроками гестации 28-40 недель. У 124 женщин беременность протекала без осложнений, у 237 осложнилась гестозом, у 99 - угрозой преждевременных родов, у 58 - протекала на фоне анемии. В качестве адренергических средств для определения β-адренозависимой скорости оседания эритроцитов капиллярной крови мы использовали адреналин 1 •10^-6 г/мл и обзидан в концентрациях 1 • 10^-5, 1 • 10^-6, 1 • 10^-7, 1 • 10^-8, 1 • 10^-9, 1 • 10^-10 г/мл. На основании проведенных нами исследований установлено, что оптимальной для оценки β-адренореактивности эритроцитов капиллярной крови концентрацией является концентрация обзидана 1 • 10^-9 г/мл, при β- адренозависимой СОЭ капиллярной крови в присутствии обзидана 1•10^-9 г/мл, составляющей 85-95% от контрольной СОЭ, β-адренореактивность эритроцитов считается умеренной (нормальной), при β-адренозависимой СОЭ более 95% - сниженной, а менее 85% - повышенной.

Полученные нами результаты при определении β-адренозависимой СОЭ капиллярной крови коррелируют с данными, полученными при изучении β-адренозависимой СОЭ венозной крови и дают основание считать, что капиллярная кровь также, как и венозная кровь, может отражать β-адренореактивность эритроцитов, а оптимальной концентрацией обзидана для этих целей является 10^-9 г/мл.

Следующие примеры иллюстрируют возможности способа:
Пример 1. К. 25 лет.

Диагноз: Беременность 37 недель.

Отягощенный акушерский анамнез.

Контрольная СОЭ - 32 мм/час (100%), β-адренозависимая СОЭ в присутствии обзидана 1 • 10^-9 г/мл - 29 мм/час, т.е. 90,6% от контрольной СОЭ.

Заключение: β-адренореактивность эритроцитов нормальная.

Пример 2. М. 27 лет.

Диагноз: Беременность 35 недель. Гестоз легкой степени.

Контрольная СОЭ - 40 мм/час, β-адренозависимая СОЭ в присутствии обзидана 1 • 10^-9 г/мл - 33 мм/час, т.е. 82,5% от контрольной СОЭ.

3аключение: β-адренореактивность эритроцитов повышена.

Пример 3. Н. 20 лет.

Диагноз: Беременность 30 недель.

Угроза преждевременных родов
Контрольная СОЭ - 30 мм/час, β-адренозависимая СОЭ в присутствии обзидана 1 • 10^-9 г/мл - 29 мм/час, т.е. 96,7% от контрольной СОЭ.

Заключение: β-адренореактивность эритроцитов снижена.

Предлагаемый способ позволяет оценить β-адренореактивность эритроцитов беременных женщин при различной акушерской патологии.

Преимуществами данного способа являются простота выполнения, наглядность и объективность. Способ не требует специального оборудования и реактивов, что делает его доступным для применения в широкой клинической практике. Достоинством предлагаемого способа является быстрота получения результатов (в течение 1 часа), что позволяет, в частности, использовать данный метод для определения тактики ведения родов.

Оценка β-адренореактивности эритроцитов капиллярной крови, доступная для любой клинической лаборатории, имеет большое практическое значение. В частности, она способствует ранней диагностике гестозов, угрозы преждевременных родов, выбору их патогенетического лечения и контролю его эффективности, позволяет определить степень готовности организма к родам, необходимость проведения медикаментозной подготовки к индукции родов, контролировать эффективность и сроки ее проведения, прогнозировать течение родового акта и формировать группу риска по развитию слабости родовой деятельности. В целом, прелагаемый способ позволит снизить материальные затраты на медицинское обслуживание беременных женщин и рожениц.

Способ оценки адренореактивности эритроцитов основан на определении изменения скорости оседания эритроцитов капиллярной крови, определяемой по Панченкову Т. П. , под влиянием β-адреноблокатора обзидана (пропранолола), используемого в концентрации 1 х 10^-9 г/мл и добавляемого в 5% раствор цитрата натрия, применяемый для определения СОЭ, при условии, что исходная СОЭ выше 10 мм/ч. При нормальной адренореактивности эритроцитов добавление обзидана приводит к снижению СОЭ. При β-адренозависимой СОЭ, составляющей 85 - 95% от контрольной СОЭ, адренореактивность эритроцитов оценивается как умеренная (нормальная), при β-адренозависимой СОЭ более 95% - как сниженная, а менее 85% - как повышенная. Способ обеспечивает раннюю диагностику гестоза, угрозу преждевременных родов, выбор их патогенетического лечения и контроль его эффективности, позволяет определить степень готовности организма к родам, необходимость проведения медикаментозной подготовки к индукции родов, контролировать эффективность и сроки ее проведения, прогнозировать течение родового акта и формировать группу риска по развитию слабости родовой деятельности.

Способ оценки адренореактивности эритроцитов беременных женщин, включающий определение изменения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) крови, определяемой по Панченкову Т. П. , под влиянием β-адреноблокатора обзидана (пропранолола), добавляемого in vitro в исследуемую цитратную кровь (при условии, что исходная СОЭ выше 10 мм/ч), отличающийся тем, что используют капиллярную кровь и β-адренозависимую скорость оседания эритроцитов определяют в присутствии одной концентрации обзидана - 10^-9 г/мл и при β-адренозависимой СОЭ, составляющей 85 - 95% от контрольной СОЭ, адренореактивность эритроцитов оценивают как умеренную (нормальную), при β-адренозависимой СОЭ более 95% как сниженную, а менее 85% как повышенную.