СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОТРАВЛЕНИЯ НАРКОТИКАМИ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, в частности клинической биохимии, и может быть использовано для лабораторной диагностики отравления наркотиками.

Известные способы лабораторной диагностики отравлений наркотическими веществами представлены двумя основными группами:
1) группа хроматографических методов, включая хромато-масс- спектральный [Baselt,R.C.// Analytic Procedures for terapeutic Drug Monitoring and Emerrgency Tocxicology, 2^nd ed. Davis, CA, Biomedical Publication, 1987; Budd, R. D., Leung.W.J.// Clin. Tocxicol.-1980-16-p.55-59; Francom, P., Andrenyak, D. , Lim H.-K., et al.//J. Anal. Toxicol.-1991.- 15-p.25-29], применяемых для идентификации в биологических средах (кровь, моча и т.д.) самого наркотического вещества и/или его метаболитов;
2) группа иммунологических методов (радио-иммунологический и иммуноферментный анализы), используемых для определения "отсекающей" концентрации наркотика и выявления антител к наркотическим веществам [Н.Б. Гамалея, Э.Н. Елагина, М. Н. Левина и др. // Вопр. Наркол. - 1991. - N3.-С. 10-13; Clarc, E. G. C. : Clarс's Isolation and Identification of Drugs in Pharmaceuticals, Body Fluids and Post-Mortem Material. London, The Pharmaceutical Press, 1986].

Перечисленные выше известные способы очень специфичны, точны и достаточно чувствительны.

К недостаткам известных способов можно отнести прежде всего высокую стоимость проведения анализов, обусловленную использованием дорогостоящих оборудования и реактивов. Кроме того подобные исследования проводятся высококвалифицированным, специально обученным персоналом. Процесс проведения диагностики требует для обеих указанных выше групп способов наличия стандартных образцов наркотических веществ и (при информации о путях метаболизма) стандартов их метаболитов. Последнее обстоятельство исключает возможность диагностики отравления неизвестными, вновь появившимися на рынке препаратами наркотического ряда. Помимо прочего приведенные выше способы диагностики требуют забора венозной крови, что создает определенный риск заражения инфекционными заболеваниями (синдром приобретенного иммунодефицита, гепатиты) как лаборантского персонала, так и сотрудников, проводящих аналитические исследования.

Целью настоящего изобретения является повышение эффективности, универсальности, экономичности и безопасности лабораторной диагностики отравления наркотиками.

Заявляемый способ базируется на открытии факта индукционного влияния веществ наркотического ряда на деятельность цитохром P₄₅₀-зависимую систему монооксигеназ печени, обеспечивающую ее детоксицирующую функцию, приводящее к ускоренному выведению из организма некоторых эндогенных веществ. Характерно, что наличие заболеваний печени в значительной мере подавляет активность этой группы ферментов, следствием чего является существенное снижение скорости метаболизма как ксенобиотиков, так и некоторых эндогенных соединений.

Поставленная цель достигается за счет оценки функционального состояния печени по данным динамики концентрации антипирина в слюне (антипириновая проба), применяемого для диагностики заболеваний печени [Vesell E.S.//Clin. Pharm. -Therap. -1979-v.26-3- p. 275-286.]. B соответствии с применяемой методикой в образцах слюны, собранных через 3, 6, 9, 12 и 24 часа после приема антипирина в стандартной дозе центрифугируют, отбирают аликвоту супернатанта, подщелачивают, экстрагируют хлороформом и определяют концентрацию антипирина в каждой пробе слюны при помощи различных хроматографических методов (Sotaniemi Е. А. , Pelkonen R.O., Punkka Н.// Eur. J. Clin. Pharmcol.-1989-17-р.267-274); либо используют спектрофотометрический метод, основанный на определении антипирина в виде 4-нитрозоантипирина, образующегося после обработки супернатанта слюны нитритом натрия и серной кислотой (Brodie B.B, Axelrod J. , Sberman R., Levy В.// The J. Of Biol. Chem.-1949- v.179-1-p. 25-29). После этого рассчитывают период полувыведения и клиренс антипирина.

B настоящее время неизвестно применение антипириновой пробы для диагностики наркотических отравлений.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом: обследуемый выпивает натощак раствор антипирина в дозе 10 мг/кг веса примерно в 100 мл воды, 1 час после приема препарата воздерживается от приема пищи и через 24 часа сдает слюну. После центрифугирования 20 - 30 мкл супернатанта слюны наносится непосредственно на пластину для тонкослойной хроматографии с закрепленным слоем силикагеля, рядом наносятся стандарты растворов антипирина различной концентрации (внутренняя калибровка). После высушивания пластина развивается в системе растворителей хлороформ: спирт в соотношении 80 : 20; пятна антипирина окрашиваются парами йода. Концентрация антипирина в образце определяется при помощи денситометра, а при отсутствии последнего методом планиметрии. Концентрация антипирина в слюне здорового человека должна находиться в диапазоне 2,5 - 3-х мкг/мл, при злоупотреблении наркотиками содержание антипирина в слюне испытуемого будет ниже 2 мкг/мл.

Необходимо отметить при этом, что поражение печени и злоупотребление алкоголем вызывает обратный эффект, то есть существенное повышение концентрации антипирина в слюне через 24 часа от начала приема препарата по сравнению с показателями для здоровых людей; уровень концентрации может доходить до значений 6 - 8 мкг/мл и выше.

Тестирование наркомании проводилось у 84 пациентов, находящихся в периодах интоксикации, абстиненции, ремиссии.

Примеры конкретного осуществления способа.

Пример 1. Больной Д., 1970 г.р. Диагноз: хронический вирусный гепатит B и C с умеренной активностью. При биохимическом исследовании крови выявлено повышение активности ферментов клеточного цитолиза: аланиновой аминотрансферазы (АлАТ) - в 2,5 выше нормы (2,5 N, где N здесь и далее - нормальное значение показателя), аспарагиновой аминотрансферазы (АсАТ) - 2 N. При иммунологическом исследовании обнаружено повышение уровня основных классов иммуноглобулинов, а также наличие anti-HBs и anti-HCV.

Слюна больного обследована заявляемым способом.

Обследуемый натощак принял раствор антипирина в дозе 10 мг/кг и через 24 часа собрал слюну. Образец слюны подвергали центрифугированию в течение 15 мин. Затем на пластину для тонкослойной хроматографии с закрепленным слоем силикагеля наносили по 20 мкл супернатанта слюны и стандартных растворов антипирина. После высушивания пластину развивали в системе растворителей: хлороформ: спирт в соотношении 80 : 20. Пятна антипирина окрашивали в парах иода, концентрацию антипирина в образце слюны определяли с помощью денситометрирования и рассчитывали по методу внутренней калибровки.

Концентрация антипирина в слюне больного через 24 от начала исследования составила 1 мкг/мл (N: 2,5-3 мкг/мл), что свидетельствовало о существенном индукционном влиянии на детоксицирующую функцию печени, позволяющем сделать вывод о наличии отравления наркотиками.

Пример 2. Больной Г. , 1974 г.р. Диагноз: хронический гепатит неясной этиологии с малой активностью. Показатели биохимического и иммунологического исследований крови - в норме. Маркеры HBV и HCV не обнаружены. Данные ультразвукового исследования свидетельствовали о наличии хронического диффузного заболевания печени, а морфологическая картина биоптата - об умеренно выраженном портальном фиброзе.

Слюна больного была исследована заявляемым способом.

Концентрация антипирина в слюне испытуемого через 24 часа от начала приема составила 1,5 мкг/мл (N: 2,5-3 мкг/мл), что свидетельствовало о наличии отравления наркотическими веществами.

Пример 3. Больной М., 1960 г.р. Диагноз: хронический гепатит C, активный. Сахарный диабет II степени, мочекаменная болезнь. При биохимическом исследовании крови выявлено существенное повышение активности ферментов цитолиза: АлАТ - 11 N, АсАТ - 4 N.

Слюна больного исследовалась заявляемым способом.

Концентрация антипирина в слюне больного через 24 часа от начала исследования составила 4,3 мкг/мл (N: 2,5 - 3 мкг/мл), что позволило сделать вывод об отсутствии наркотического отравления.

Пример 4. Больной В. , 1962 г.р. Диагноз: цирроз печени алкогольной этиологии, активный. Показатели биохимического исследования крови существенно изменены, уровень Ig A повышен в 3 раза.

Анализ слюны больного заявляемым способом через 24 часа после приема антипирина показал, что его концентрация составляет 9,1 мкг/мл (N: 2,5 - 3 мкг/мл).

Вывод: злоупотребление алкоголем подтверждено.

Использование предлагаемого способа диагностики наркомании позволяет выявлять лиц, злоупотребляющих наркотическими веществами, в том числе и неизвестной природы, уже на ранних стадиях заболевания. Простота, дешевизна и безопасность способа дает возможность рекомендовать его для широкого применения в практике наркологических учреждений, призывных пунктов и воинских подразделений, а также в группах риска.

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике. Сущность изобретения состоит в том, что исследуют слюну пациента после введения per os раствора антипирина в дозе 10 мг/кг веса, собранную через 24 ч от начала проведения анализа, и при уровне концентрации антипирина в исследуемой пробе меньше 2 мкг/мл диагностируют отравление наркотиками. Способ позволяет проводить диагностику отравления на ранних стадиях заболевания. Простота, дешевизна и безопасность способа позволяет рекомендовать его для применения в практике наркологических учреждений, призывных пунктов, воинских подразделений, а также в группах риска с целью соматической реабилитации больных наркоманией. Технический результат изобретения заключается в повышении безопасности и экономичности лабораторной диагностики отравлений наркотическими веществами.

Способ диагностики отравления наркотиками путем исследования биологической пробы, отличающийся тем, что исследуют слюну пациента после введения per os раствора антипирина в дозе 10 мг/кг веса, исследование проводят через 24 ч после введения антипирина и при уровне его, меньшем 2 мкг/мл, диагностируют отравление наркотиками.