ЦЕРЕБРОПРОТЕКТОР, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИГИПОКСИЧЕСКОЙ И АНТИРАДИКАЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической фармакологии, и может быть использовано для фармакологической коррекции нарушений энергетического обмена мозга.

Известны церебропротекторы синтетического происхождения: пирацетам, оксибутират натрия [1].

Большое число случаев непереносимости синтетических лекарственных препаратов, побочные эффекты при их применении, а иногда и возникновение лекарственной болезни из-за их токсичности, заставляют обращать внимание на возможность использования препаратов растительного происхождения, изыскивать новые церебропротекторы, обладающие малой токсичностью и равной активностью с базовым препаратом, а в некоторых случаях и превышающие эту активность.

В настоящее время в медицинской практике не известно использование церебропротектора природного происхождения, таким образом предлагаемое средство не имеет адекватных аналогов.

Задачей, решаемой данным изобретением, является расширение арсенала средств защиты головного мозга с повышенной специфической активностью, снижение побочных эффектов за счет устранения токсичности. Поставленная задача решается путем использования экстракта листа бадана толстолистного (ЭБ) в качестве церебропротектора, обладающего антигипоксической и антирадикальной активностью.

Бадан толстолистный (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch) - многолетнее травянистое растение семейства камнеломковых Saxifragaceae. Листья содержат ряд биологически активных веществ: флавоноиды (4-30 мг/г) бергенин, кверцетин, кемпферол, лейкоантоцианиды, большое количество катехинов, витамин С (от 45-60 до 260 мг%), дубильные вещества и другие органические соединения [2].

Экстракт бадана толстолистного из зеленых листьев исследован как психостимулирующее средство [3]. ЭБ в качестве церебропротектора в литературе не описан. Использование ЭБ в качестве церебропротектора, обладающего антигипоксической и антирадикальной активностью, стало возможным благодаря выявлению экспериментально нами его новых свойств, а именно способности предупреждать нарушение системы энергопродукции головного мозга при гипоксии за счет антигипоксической и антирадикальной активности.

Как показывают экспериментальные исследования, ЭБ в качестве церебропротектора обладает более выраженной антигипоксической и антирадикальной активностью по сравнению с эталонными препаратами - пирапетамом и ионолом, не обладает токсичностью и применение его в клинической практике в свете вышесказанного даст более высокий эффект.

Пример. Антигипоксическая активность ЭБ
Исследование проводили на белых беспородных крысах-самцах массой 180-220 грамм. Исследуемые препараты - эталонный антигипоксант пирацетам (400 мг/кг) [4] и экстракт бадана (300 мг/кг) вводили до гипоксии внутрижелудочно курсом (5 дней) в виде взвеси в дистиллированной воде. Гиперкапническую гипоксию (ГГ) моделировали путем помещения животного на 2 ч в герметично замкнутый сосуд объемом 5 л. По окончании гипоксического воздействия животных декапитировали под эфирным оглушением. После декапитации выделенный мозг гомогенизировали в охлажденной до 0^oC среде. Среда гомогенизации: 1,2•10^-1 М KCl, 2•10^-3 М K₂CO₃, 10^-2М Hepes-буфер, 2•10^-4 М ЭДТА (рН - 7,2). Состояние системы митохондриального окисления головного мозга крыс оценивали флуориметрически по уровню восстановленности ПН (УВПН) на спектрофлуориметре Hitachi М- 850 λ_ex = 355 нм и λ_em = 450 нм [5]) и выражали в условных единицах флуоресценции. В качестве субстратов окисления использовали янтарную кислоту (ЯК) 0,5 мМ, смесь малата с глутаматом (МГ) по 3 мМ, их комбинацию с ингибитором СДГ малонатом (М+МГ) 2 мМ, либо с ингибитором аминотрансфераз - аминооксиацетатом (АОА+МГ) 0,5 мМ. Среда инкубации: 1,2•10^-1 М KCl, 2•10^-3 М K₂CO₃, 10^-2 M Hepes-буфер, 2•10^-4 М ЭДТА, 2•10^-3 KH₂PO₄ (pH - 7.2). Изучали УВПН при окислении эндогенных субстратов (условно метаболическое состояние 2, принятое нами, как состояние 2 "покоя" (2п) с соответствующим обозначением УВПН, как F_2п). Исследовали изменение УВПН при последующем добавлении в среду инкубации 50 мкМ АДФ (переход из метаболического состояния 2п в активное фосфорилирующее и затем состояние - "отдыха" (2аф и 2о, соответственно), т. е. изучали переход F_2п---> F_2аф--->F_2о). Исследовали влияние субстрата окисления (переход из метаболического состояния 2о в 4п, т.е. F_2о---> F_4п), последующей добавки АДФ при утилизации экзогенных субстратов (метаболические состояния 4п, 3, 4о, т.е. F_4п---> F₃--->F_4о). Оценивали время перехода органелл из метаболического состояния 2п в 2о (Tr₂) и из 4п в 4о (Tr₃), скорости перехода из метаболического состояния 2аф в 2о и из 3 в 4о (V₂ и V₃, соответственно).

В таблице 1 представлены величины показателей, изменившихся при гипоксии, а так же продемонстрирована их нормализация исследуемыми препаратами. По существующим представлениям [6] выявленные изменения указывают на развитие низкоэнергетического сдвига в ткани мозга в ответ на гипоксию. Профилактическое введение ЭБ и пирацетама позволило предотвратить развитие низкоэнергетического сдвига. При этом ЭБ способствовал увеличению скорости перехода MX из одного метаболического состояния в другое как на эндогенных, так и экзогенных субстратах. Препарат сравнения пирацетам проявил защитное действие только при окислении экзогенных субстратов. Видно, что исследуемые препараты предотвращают нарушения энергетического метаболизма головного мозга при двухчасовой гипоксии.

Таким образом, судя по полученным данным, ЭБ наряду с пирацетамом обладает антигипоксической активностью, а по некоторым показателям превосходит по активности пирацетам.

Пример. Антирадикальная активность ЭБ
Антирадикальные свойства ЭБ оценивали экспресс-методом определения антирадикальной активности лекарственных веществ [7]. Этот метод основан на определении спектрофотометрически способности лекарственных веществ реагировать с дифенилпикрилгидразилом (ДФПГ) - стабильным радикалом. ДФПГ взаимодействует с соединениями, которые обладают подвижным атомом водорода, например тиолы, фенолы, амины, амиды, и др., изменяя свою окраску; он устойчив к действию кислорода воздуха. Реакции проводили в спиртовом растворе, исследуемые вещества присутствовали в эквимолярных количествах (0,25 10^-3 М). Спиртовый раствор ДФПГ и препарата смешивали и определяли оптическую плотность при 520 нм на спектрофотомере Hitachi 557 сразу после смешивания, затем через 10, 30 и 60 мин. В таблице 2 приведены данные сравнительной антирадикальной активности ЭБ, пирацетама и эталонного антиоксиданта - ионола. Антирадикальную активность расчитывали по изменению оптической плотности раствора ДФПГ при взаимодействии его с исследуемыми препаратами.

Судя по полученным данным (таблица 2), ЭБ обладает выраженной антирадикальной активностью, у пирацетама данная активность не обнаружена.

Пример. Острая токсичность ЭБ
Синтетические лекарственные препараты, как правило, характеризуются большей токсичностью и меньшим диапазоном терапевтического действия по сравнению с лекарствами растительного происхождения. В таблице 3 представлены полученные нами данные, свидетельствующие об отсутствии острой токсичности ЭБ в отличии от пирацетама.

Таким образом, экспериментальные исследования показали, что ЭБ в качестве церебропротектора обладает антигипоксическим и антирадикальным действием и следующими преимуществами в сравнении с другими эталонными синтетическими церебропротекторами:
- большей активностью,
- выраженной антирадикальной активностью,
- отсутствием токсичности.

Применение экстракта бадана в клинической практике в свете вышесказанного даст более высокий лечебный эффект.

Литература
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.:Медицина,1986, с. 120.

2. Лекарственные средства Сибири. Томск,1995, с. 33-36.

3. Автор, свид. АС 1797198 Б.И. Способ получения экстракта, обладающего психостимулирующими свойствами (бадан)
4. Рощина Л.Ф., Островская Р.У. Влияние пирацетама на устойчивость организма к гипоксии. // Фармакология и токсикол., 1981, N2, с. 210-213.

5. Kitai Т., Tanaka A., Tokuka A. et al. // Analytikal biochemistri. - 1992. - Vol. 206.-P. 131-136.

6. Кондрашова (ответственный редактор). Итоги координации исследований по теме: "Регуляция энергетического обмена и устойчивость организма". Пущино, 1975, с. 3.

7. Тараховский М.Л., Починок Т.В. Экспресс-метод определения антиокислительной активности лекарственных веществ // Химико-фарм. журн. - 1985. -N 5. -С. 565-569.

8. Н. Van Hoof., Nootropil: Basik scientific and clinical data. Medical Profession prepared Pharmaceutical Division, Brussel, 1980, P. 12.

Средство может быть использовано в медицине, а именно в клинической фармакологии для фармакологической коррекции нарушений энергетического обмена мозга. Экстракт листа бадана толстолистного используют в качестве церебропротектора, обладающего антигипоксической и антирадикальной активностью. Средство расширяет арсенал средств защиты головного мозга с повышенной специфической активностью, снижает побочные эффекты за счет устранения токсичности. 3 табл.

Применение экстракта листа бадана толстолистного в качестве церебропротектора, обладающего антигипоксической и антирадикальной активностью.