СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ НООТРОПНЫМ И АДАПТОГЕННЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/14 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к профилактической фармакологии, и касается средств, улучшающих умственную и физическую работоспособность, как здоровых, так и больных людей.

Известны ноотропные средства различного химического строения и механизма действия: 1) производные пирролидона; 2) производные пиридоксина; 3) производные ГАМК; 4) цереброваскулярные средства; 5) производные диэтиламиноэтанола; 6) нейропептиды и их аналоги; 7) антиоксиданты; 8) разные вещества с компонентом ноотропного действия [1].

Известны адаптогенные средства синтетического, растительного и животного происхождения [2].

Наиболее близким по активности средством, а именно, обладающим двойной активностью - ноотропной и адаптогенной, является родиола розовая (прототип) [1-3].

Однако в настоящее время вопрос расширения арсенала адаптогенных и, особенно, ноотропных средств является чрезвычайно актуальным, формируя заказ на разработку и воспроизводство лекарственных средств, применяемых в психиатрии, наркологии, профилактической медицине, стимулирующих процессы памяти, обучения, повышающих физическую и умственную работоспособность.

Задачей, решаемой данным изобретением, является расширение арсенала средств, обладающих ноотропной и адаптогенной активностью пролонгированного действия и отличающихся более высокой фармакологической активностью.

Поставленная задача решается путем разработки средства, обладающего одновременно адаптогенным и ноотропным действием, содержащего высушенную недефибринированную кровь марала, изюбра или пятнистого оленя, аскорбиновую кислоту и при необходимости фармацевтически приемлемый наполнитель при следующем соотношении компонентов в %: высушенная недефибринированная кровь марала, изюбра или пятнистого оленя 0,5 - 99,5 и аскорбиновая кислота 0,5 - до 99,5.

Новым в предлагаемом изобретении является то, что в качестве ноотропного и адаптогенного средства используют высушенную недефибринированную кровь марала, изюбра или пятнистого оленя и аскорбиновую кислоту при следующем соотношении компонентов в %: высушенная недефибринированная кровь марала, изюбра или пятнистого оленя 0,5 - 99,5 и аскорбиновая кислота 0,5 - 99,5.

Авторами не найдено в проанализированной ими литературе данной совокупности существенных признаков: использование в качестве ноотропного и адаптогенного средства высушенной недефибринированной крови марала, изюбра или пятнистого оленя и аскорбиновой кислоты при вышеуказанном соотношении компонентов.

Сравнение заявляемого средства с известными показывает, что впервые предложено использование высушенной недефибринированной крови марала, изюбра или пятнистого оленя и аскорбиновой кислоты при следующем соотношении компонентов в %: высушенная недефибринированная кровь марала, изюбра или пятнистого оленя 0,5 - 99,5 и аскорбиновая кислота 0,5 - 99,5, в качестве ноотропного и адаптогенного средства одновременно.

Таким образом, заявленное изобретение соответствует критериям изобретения "Новизна" и "Изобретательский уровень", так как оно явным образом не следует для специалиста из уровня техники. Предлагаемое решение соответствует критерию изобретения "Промышленно применимо", так как оно с успехом может использоваться в практическом здравоохранении.

Заявляемое средство, получали путем смешивания высушенной крови марала (cervus elaphus sibiricus), изюбра (cervus elaphus xantophigus) или пятнистого оленя (nippon hortulorum, pseudoxis hortulorum) с аскорбиновой кислотой при следующих соотношениях компонентов в %:
Высушеная недефибринированная кровь марала, изюбра или пятнистого оленя - 0,5 - 99,5
Аскорбиновая кислота - 0,5 - 99,5
Предлагаемое средство было изучено в эксперименте на животных. Для подтверждения положительного эффекта нового средства было проведено сравнение с прототипом - родиолой розовой, пирацетамом (эталонным препаратом по ноотропной активности) и только с одной высушенной недефибринированной кровью марала, изюбра или пятнистого оленя, получаемой в соответствии с ТУ 9358-001-04801122-97, без аскорбиновой кислоты.

Было исследовано влияние заявляемого средства и препаратов сравнения на развитие стрессорной реакции [4], адаптацию к физическим нагрузкам в условиях плавательной пробы [5], на воспроизведение условного рефлекса пассивного избегания при амнезии, вызванной гипоксической травмой [6], и развитие постгипоксической энцефалопатии [7].

Эксперименты были выполнены на 886 беспородных мышах самцах и самках. Исследования проводились в два этапа. На первом этапе заявляемое средство изучалось на примере смеси высушенной недефибринированной крови только марала в средних значениях соотношения компонентов (50% высушенной недефибринированной крови марала и 50% аскорбиновой кислоты) в сравнении с эталонным препаратом, прототипом и одной недефибринированной кровью марала без аскорбиновой кислоты. На втором этапе были выполнены сравнительные исследования биологической активности крайних и средних значений соотношений высушенной недефибринированной крови всех трех перечисленных видов оленей и аскорбиновой кислоты.

Исследуемые вещества вводили 7 раз (там где это не оговорено особо) по 1 разу в день в желудок в виде раствора или взвеси в дистиллированной воде в течение 6 дней и 7-й раз за 1 ч до тестирования или до стрессового или гипоксического воздействия: пирацетам (эталонный препарат по ноотропной активности) - в дозе 400 мг/кг, экстракт родиолы - в дозе 2,0 мл/кг, высушенную кровь марала, изюбра или пятнистого оленя - в дозе 50 мг/кг и смесь высушенной недефибринированной крови марала изюбра или пятнистого оленя с аскорбиновой кислотой 100 мг/кг. В экспериментах с обучаемостью и памятью в условиях амнезии, вызванной гипоксической травмой и постгипоксической энцефалопатией исходная численность групп составляла 16 особей. В экспериментах по исследованию физической работоспособности и стрессорной реакции численность групп была по 10 животных.

На первом этапе заявляемое средство на примере крови марала при среднем значении соотношения компонентов изучалось по всем перечисленным выше методикам.

Иммобилизационный стресс создавался подвешиванием животных за шейную складку на 22 ч. По истечение времени животных снимали и через 15 мин после снятия у них изучали ориентировочно-исследовательское поведение, регистрировали эмоциональную реакцию по методу Brady & Nauta [10], определяли количество лейкоцитов в периферической крови, после чего животных забивали и определяли вес селезенки, тимуса, подсчитывали количество язв на слизистой оболочке желудка и рассчитывали весовые коэффициенты органов в пересчете на 20 г массы тела. Затем по методу Ю.И.Добрякова [4] определяли степень выраженности стресса в баллах. При оценке поведенческих показателей использовалась бальная шкала, аналогичная той, что принята в методе Добрякова, разработанная нами. При увеличении двигательной активности за каждые 20% отклонения от соответствующего показателя интактного контроля начислялся 1 балл, если показатель увеличивался более чем на 100%, то начислялось 6 баллов. При продолжительном варианте стресса, когда отмечалось снижение поведенческой активности, за каждые 16,7% снижения активности присваивался 1 балл [7].

Ориентировочно-исследовательское поведение изучалось в условиях методики "открытое поле". Экспериментальная установка "Открытое поле" представляла из себя камеру размером 40 х 40 х 20 см с квадратным полом и стенками белого цвета [8, 9]. Ее пол, разделенный на 16 квадратов, имел в каждом круглое отверстие диаметром 3 см. Сверху камера освещалась электрической лампой накаливания мощностью 100 В, расположенной на высоте 1 м от пола. Мышь помещалась в один из ее углов и в течение 2 мин регистрировали количество перемещений с квадрата на квадрат (горизонтальная активность), количество вставаний на задние лапки (вертикальная активность), количество обследований отверстий (норковый рефлекс), количество умываний (груминг) и количество актов дефекации по количеству фекальных шариков (болюсов), вычислялся коэффициент асимметрии поведения в виде отношения количества горизонтальных перемещений к общей двигательной активности, выраженного в процентах.

Эмоциональная реакция исследовалась по методу Brady & Nauta [10], в нашей модификации для мышей [7], при котором полуколичественным способом оценивалась реакция на 4 вида воздействий - захват в клетке, где животное постоянно живет, захват в руку после помещения животного на плоскую поверхность, реакцию на приближение пинцета, реакцию на толчок пинцетом, при этом дополнительно оценивались дефекация с мочеиспусканием, писк и мышечное напряжение (всего 7 реакций). Каждая реакция оценивалась по 4 бальной системе, после чего все баллы суммировались, давая общую оценку эмоциональной реакции.

Влияние на физическую работоспособность изучалось в условиях методики принудительного плавания [5] . Плавание проводилось с утяжеляющим грузом, равным по весу 10% от массы тела конкретной мыши при температуре воды 28^o. Животные плавали до полного утомления (пока не начинали тонуть). После первого плавания им давали отдохнуть в течение 1 ч, затем плавание повторяли. Таким образом мыши плавали в течение 5 дней. На 6-й день производилась "сшибка" адаптации, что достигалось повышением температуры воды до 40^oC. О работоспособности судили по продолжительности плавания в минутах, разница времени между первым и вторым плаванием характеризовала эффективность процесса восстановления после максимальной физической нагрузки, увеличение продолжительности плавания день ото дня характеризовало процесс адаптации к физическим нагрузкам. Снижение показателя на 6-й день после повышения температуры воды свидетельствовало о нарушении процесса адаптации в связи с изменившимися условиями эксперимента. Препараты вводили, начиная за 3 дня, перед первым плаванием и на всем протяжении тестирования, т.е. 9 суток. Об эффекте препаратов судили по различиям с контрольными группами.

Влияние гипоксической травмы на выработку и сохранность условного рефлекса проводилось на модели гипоксии гермобъема [6]. Для исследования было использовано два варианта методики.

В первом варианте целью работы было изучить влияние гипоксической травмы на процесс консолидации условнорефлекторного навыка (условного рефлекса пассивного избегания - УРПИ) при ее нарушении, вызванном гипоксией. При этом применялся короткий вариант гипоксического воздействия с использованием гермокамеры объемом 250 мл, выработка УРПИ осуществлялась непосредственно перед помещением в гермокамеру, а проверка рефлекса - через 24 ч после выработки.

Во втором варианте исследовалось течение постгипоксической энцефалопатии в отдаленные периоды после гипоксической травмы, проявления которой оценивали по гибели животных и нарушению воспроизведения УРПИ, выработанного ранее (спустя 1 ч после гипоксического воздействия). Использовалась гермокамера объемом 500 мл. Через 1 ч после извлечения из гермокамеры, в которой животные находились до появления предсмертного судорожного припадка или первых агональных вдохов, у мышей вырабатывался УРПИ [8]. Проверка воспроизведения рефлекса осуществлялась через 24 ч, 1, 2 и 3 недели после выработки. О качестве рефлекса судили по доле животных с наличием рефлекса. Методика условного рефлекса пассивного избегания основана на подавлении врожденного рефлекса предпочтения темного пространства, имеющегося у грызунов. Экспериментальная установка представляла из себя камеру, состоящую из двух отсеков: большого - освещенного и малого - темного. Животное помещалось в светлый отсек и вскоре (через 10-20 секунд), в силу врожденного рефлекса предпочтения темного пространства, переходило в малый отсек, после чего дверка, соединяющая оба отсека, перекрывалась и на пол темного отсека, состоящего из параллельных чередующихся электродов, подавали электрический ток импульсами продолжительностью 50 Mс, частотой 5 Гц и амплитудой 50 мА. Через 10 с дверку открывали и животные могло выскочить в светлый отсек с обычным полом. В результате описанной процедуры у животных вырабатывался условный рефлекс избегания темного пространства. При проверке воспроизводимости рефлекса животных помещали в светлый отсек в угол противоположный от входа в темный отсек и наблюдали в течение 3 мин. Регистрировали время первого захода в темный отсек (латентное время захода), суммарное время пребывания в темном отсеке. Выработанным, рефлекс считался, если в течение всех 3 мин наблюдения животное ни разу не посетило темный отсек или латентное время захода превышало 150 с. Животные, которые после помещения в светлый отсек сохраняли неподвижность, при подсчете результатов не учитывались. Полученные экспериментальные данные обрабатывались статистически с использованием параметрического критерия Фишера и непараметрического критерия Вилкоксона [11].

Результаты проведенных исследований представлены в табл. 1-5. Из приведенных данных следует, что высушенная недефибринированная кровь марала в смеси с аскорбиновой кислотой более эффективно предотвращает последствия острого стрессорного воздействия. При этом заявляемая смесь не только лучше защищает внутренние органы, но и предохраняет поведенческую активность, от депрессивного воздействия стресса. Сочетание высушенной недефибринированной крови марала с аскорбиновой кислотой оказало более выраженное стимулирующее воздействие на работоспособность. При этом оно в большей степени предотвратило падение работоспособности при ее снижении в результате изменения условий плавания. При нарушении условнорефлекторной деятельности, вызванном гипоксическим воздействием, смесь высушенной недефибринированной крови марала с аскорбиновой кислотой оказала действие превышающее эффект одной высушенной недефибринированной крови марала и экстракта родиолы и равное пирацетаму, однако по влиянию на воспроизведение условного рефлекса и выжываемость животных в условиях экспериментальной энцефалопатии смесь высушенной недефибринированной крови марала и аскорбиновой кислоты оказала более выраженное действие по сравнению с остальными тремя препаратами сравнения, при этом ее действие было более универсально - она улучшала состояние животных при всех трех режимах применения, в то время как остальные препараты были преимущественно активны при применении в какие-то определенные сроки.

На втором этапе, для подтверждения активности предлагаемого средства при различном соотношении компонентов, а также при использовании вместо крови марала крови изюбра или пятнистого оленя, было проведено сравнительное исследование биологической активности композиций с широким диапазоном соотношений компонентов: высушенной недифибринированной крови марала, изюбра и пятнистого оленя и аскорбиновой кислоты. Были проанализированы их ноотропные и адлаптогенные свойства при следующих соотношениях компонентов (аскорбиновой кислоты и крови разных видов оленей).

Пример N 1 - смесь высушенной недефибринированной крови марала - 50% и аскорбиновой кислоты 50%.

Пример N 2 - смесь высушенной недефибринированной крови марала - 0,5% и аскорбиновой кислоты - 99,5%.

Пример N 3 - смесь высушенной недефибринированной крови марала - 99,5% и аскорбиновой кислоты - 0,5%.

Пример N 4 - смесь высушенной недефибринированной крови изюбра - 50% и аскорбиновой кислоты 50%.

Пример N 5 - смесь высушенной недефибринированной крови изюбра - 0,5% и аскорбиновой кислоты - 99,5%.

Пример N 6 - смесь высушенной недефибринированной крови изюбра - 99,5% и аскорбиновой кислоты - 0,5%.

Пример N 7 - смесь высушенной недефибринированной крови пятнистого оленя - 50% и аскорбиновой кислоты - 50%
Пример N 8 - смесь высушенной недефибринированной крови пятнистого оленя - 0,5% и аскорбиновой кислоты - 99,5%.

Пример N 9 - смесь высушенной недефибринированной крови пятнистого оленя - 99,5% и аскорбиновой кислоты - 0,5%.

Данные примеры взяты на пограничные и средние значения соотношения ингредиентов в заявляемом средстве, полученном на основе крови марала, изюбра и пятнистого оленя.

В дальнейшем при представлении экспериментального материала в таблицах указанные сочетания обозначены: пример N 1 как "Композиция N1", пример N 2 - "Композиция N2" и т.д.

Сравнение биологической активности смесей высушенной недефибринированной крови марала, изюбра или пятнистого оленя с аскорбиновой кислотой в соответствии с примерами 1-9 определялась в условиях методик острого иммобилизационного стресса и воспроизведения УРПИ при его нарушении в результате гипоксической травмы. Результаты этих экспериментов представлены в табл. 6-8. Представленные данные свидетельствуют о том, что заявляемая композиция веществ сохраняет свои свойства в широком диапазоне сочетаний и при использовании крови как марала, так и изюбра и пятнистого оленя.

Таким образом, препарат, представляющий из себя смесь высушенной недефибринированной крови марала, изюбра или пятнистого оленя и аскорбиновой кислоты, в предлагаемом соотношении компонентов, обладает более выраженными адаптогенными и ноотропными свойствами по сравнению с высушенной недефибринированной кровью марала, изюбра и пятнистого оленя, пирацетамом и экстрактом родиолы.

Цитируемая литература
1. Воронина Т.А. Экспериментальная психофармакология ноотропов. // В кн. "Фармакология ноотропов (экспериментальное и клиническое изучение)".- М., 1989.- С. 8-20.

2. Ковалев Г.В. Ноотропные средства.- Волгоград: Ниж.-Волж. Кн. Изд-во, 1990.- 368 С.

3. Саратиков А.С., Краснов Е.А. Родиола розовая - ценное лекарственное растение: Золотой корень.- Томск: Изд-во Том. ун-та, 1987.- 254 С.

4. Добряков Ю. И. Скриниговый метод оценки антистрессорного действия препаратов. // Стресс и адаптация: Тез. Всесоюз. Симпоз.- Кишинев: Штиинца, 1978.- С. 172.

5. Бобков Ю.Г., Виноградов В.М., Катков В.Ф. Фармакологическая коррекция утомления.- М.: Медицина, 1984.- 207 С.

6. Методические рекомендации по скринигу и доклиническому испытанию антигипоксических средств./ Ю.Г.Бобков А.С., Лосев и др. М., 1989.- 20 С.

7. Суслов Н.И. Патогенетическое обоснование психофармакологических эффектов препаратов природного происхождения (экспериментальное исследование). Дисс....докт мед. наук.-Томск, 1995.-406 С.

8. Буреш Я, Бурешова О., Хьюстон Дж. П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. /Пер. с англ. Под ред проф. А.С.Батуева).- М. : Высшая школа, 1991. - 398 С.

9. Walsh R.N., Cummins R.A. The open-field test: a critical review. // Psychol. Bull.- 1976, V.83.- P. 482-504.

10. Brady J.V., Nauta W.J.H Subcortical mechanisms in emotional behavioral affective changes following septal forebrain lesions in albino rat. // J. comparative and phisiol. psychol.- 1953.- V. 46.- N 3.-P. 339-341.

11. Зайцев Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной ботанике.- М.:Наука, 1984.- 425 С.

Изобретение относится к медицине, конкретно к профилактической фармакологии, и касается средств, улучшающих умственную и физическую работоспособность, как здоровых, так и больных людей. Разработано средство, обладающего одновременно адаптогенным и ноотропным действием, содержащее высушенную недефибринированную кровь марала, изюбра или пятнистого оленя, аскорбиновую кислоту и дополнительно фармацевтически приемлемый наполнитель при следующем соотношении компонентов в %: высушенная недефибринированная кровь марала, изюбра или пятнистого оленя 0,5 - 99,5 и аскорбиновая кислота 0,5-до 99,5. Технический результат: расширение арсенала средств, обладающих ноотропной и адаптогенной активностью пролонгированного действия и отличающихся более высокой фармакологической активностью. 1 з.п. ф-лы, 8 табл.

1. Средство, обладающее ноотропным и адаптогезным действием, из природного сырья, отличающееся тем, что оно содержит высушенную недефибринированную кровь марала, изюбра или пятнистого оленя и аскорбиновую кислоту при следующем соотношении компонентов, %:
Высушенная недефибринированная кровь марала, изюбра или пятнистого оленя - 0,5-99,5
Аскорбиновая кислота - 0,5 - 99,5
2. Средство по п. 1, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит фармацевтически приемлемый наполнитель.