ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SP. ПРОДУЦЕНТ БИОЦИДА ТРОПИЧЕСКИХ МИКРОМИЦЕТОВ - ДЕСТРУКТОРОВ ТЕХНИЧЕСКИХ МАСЕЛ Российский патент 1999 года по МПК C12N1/20 A01N63/00 C12N1/20 C12R1/07 

Изобретение относится к микробиологии и касается получения нового штамма бактерии-антагониста тропических штаммов микроскопических грибов Вьетнама и может быть использовано для подавления роста микромицетов на изделиях, экспонируемых во Вьетнам и прилежащие к нему районы.

Известен штамм бактерий Bacillus sp. для получения биоцида микромицетов (1). Недостатком этого штамма является его способность подавлять рост микромицетов-деструкторов смазочных материалов и сплавов, обитаемых в умеренном климате и тропическом климате Республики Куба, но не Вьетнама.

Штамм бактерий Bacillus sp.(2) относится к антагонистам микромицетов-деструкторов технических смазочных масел, развивающихся также в умеренных широтах и районах Республики Куба.

Целью изобретения является получение штамма бактерии-продуцента биоцида тропических микромицетов, разрушающих технические смазочные материалы в тропическом климате Республики Вьетнам.

Предлагаемый штамм бактерий Bacillus sp. B-1779Д отличается тем, что подавляет рост тропических микромицетов Вьетнама из четырех родов Aspergillus, Penicillium, Acremonium, Curvularia - деструкторов различных смазочных материалов, что делает возможным применение продуктов метаболизма предлагаемого штамма в технике в составе биоцидов для сохранения смазочных материалов, направляемых с целью их использования во Вьетнам.

Штамм бактерий Bacillus sp. B - 1779Д выделен из состава НГ-203Б, проходившего натурные испытания в течение 16 месяцев на морской станции в тропическом климате Республики Куба.

Штамм бактерий депонирован Всероссийской коллекцией микроорганизмов ИБФМ РАН.

Культурально-морфологические особенности штамма.

Бактериальный штамм через 24 часа роста на агаре Хоттингера образует колонии диаметром 1-3 мм сероватого цвета, плоские, круглые с выпуклым центром и каемчатым краем. С возрастом формируется сетка морщин. Колонии легко снимаются с агара.

Штамм образует споры, расположенные в клетке терминально и экстерминально. Диаметр спор несколько больше диаметра клетки. Клетки представляют собой палочковидные структуры, полиморфные, часто в цепочках, крупные: от 0,8-1 мкм шириной и от 2,5 до 5 мкм длиной. Клетки грамположительные, подвижные.

При росте на бульоне Хоттингера штамм образует пленку складчатой формы, муть и осадок. На полужидкой среде Хоттингера (0,7% агар-агара) наблюдается равномерный рост по уколу, в верхней части по поверхности среды образует пленку складчатой формы, муть и осадок.

На твердой среде БСА (МПБ + сусло-агар в соотношении 1:1) штамм образует колонии складчатой формы, более морщинистые в центре. Край колоний неровный, имеет прозрачную окантовку.

Физиолого-биохимические признаки.

Температурный оптимум роста - 37^oC, минимум - 20^oC, максимум - 50^oC. Температурные пределы роста были установлены на агаризованной среде Хоттингера (1,5% агар-агара). Пределы pH для роста 5-9.

Штамм образует кислоту на средах с глюкозой, арабинозой, маннитом, ксилозой, рамнозой, сорбитом. Штамм образует ацетоин и восстанавливает нитраты. Штамм обладает каталазной, уреазной активностью, дает слабый рост на среде с цитратом, лецитиназной активностью не обладает, фенилаланин не дезаминирует, тирозин не расщепляет. Штамм гидролизует казеин, растет на среде Сабуро, а также на среде с азидом натрия (0,02%) и с лизоцимом (0,001%), пептонизирует молоко. Растет в присутствии 10% NaCl. Хорошо потребляет углеводороды технических смазочных материалов различных марок. В анаэробных условиях штамм не растет. Индол образует, гидролизует крахмал и желатин.

Чувствителен к антибиотикам: неомицину, линкомицину, стрептомицину, канамицину, левомицетину и пенициллину. Высокочувствителен к олеандомицину и эритромицину. Малочувствителен к ристомицину и ампициллину.

Способ определения активности штамма.

Использован метод прямого антагонизма, при котором индикаторные культуры микроскопических грибов засевали одновременно с культурой штамма продуцента (перпендикулярными штрихами к штриху бактерии-продуцента) на чашки Петри, содержащие питательную среду БСА. Через 5-7 дней инкубации в термостате при температуре 30^oC учитывали результаты опыта. Критерии оценки результатов - величина зоны торможения роста микромицетов предлагаемым штаммом бактерии (в мм).

Пример 1. Бактерии Bacillus sp.B-1779Д засевают одновременно с микромицетами-деструкторами технических смазок по способу определения активности штамма (смотри табл. 1).

Пример 2. Бактерии Bacillus sp.B-1779Д засевают так же, как описано в примере 1 с микромицетами-деструкторами технических масел (табл.2).

Пример 3. Бактерии Bacillus sp.B-1779Д засевают по примеру 1 с микромицетами-деструкторами технических смазочных материалов, защищенных биоцидными присадками (табл.3).

Как показано на примерах, предлагаемый штамм бактерий Bacillus sp. ВКМВ-1779Д обладает широким спектром антифунгальной активности, выявленной на 15 штаммах микроскопических грибов Вьетнама, принадлежащих к четырех родам.

По чувствительности к штамму-продуценту индикаторные культуры можно расположить следующим образом:
- высокочувствительные штаммы (зона задержки роста 60-30 мм) - 8 (Penicillium chrysogenum, Penicillium rubrum 1 W, Aspergillus ochraceus 2W, Penicillium verrucosum 1W, Aspergillus tamarii, Aspergillus caespitosus 1W, Aspergillus ochraceus 1W, Aspergillus fumigatus);
- умеренно чувствительные штаммы (зона задержки роста - от 20 до 29 мм)
- 4 (Acremonium roseolum, Penicillium rubrum 2W, Penicillium verrucosum 2W, Aspergillus caespitosus 2W);
малочувствительные штаммы (зона задержки роста до 20 мм) - 3 (Aspergillus flavus, Penicillium rubrum 3W, Curvularia eragrostidis).

На основании приведенных данных можно рекомендовать штамм бактерии Bacillus sp. ВКМВ-1779Д для использования его в качестве перспективного продуцента антифунгального вещества с целью создания биоцидов, повышающих биостойкость различных смазочных материалов в условиях тропического климата Республики Вьетнам.

Штамм хорошо сохраняется в лиофильно высушенном состоянии в обезжиренном молоке, а также в пробирках на агаре Хоттингера.

Испытание культуры на токсичность по методике Госфармакопеи X не выявило токсигенных и патогенных свойств штамма бактерии.

Ввиду отсутствия вредных свойств для человека бактериальный предлагаемый штамм представляет интерес в плане использования его метаболитов в различных областях народного хозяйства в условиях тропического климата Республики Вьетнам.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Патент N 1814659, кл. A 01 N 63/00, 1991.

2. Патент Российской Федерации N 2031936, кл. C 12 N 1/00, 1991.

Изобретение относится к микробиологии и касается получения нового штамма бактерий-антагониста микроскопических грибов Вьетнама. Описываемый штамм является продуцентом биоцида тропических микромицетов Республики Вьетнам. Депонирован как Bacillus sp. ВКМВ-1779Д. Культура не обладает патогенностью, нетоксична. Ее метаболиты могут быть использованы в качестве средств защиты материалов от воздействия тропических микроскопических грибов Республики Вьетнам. Изобретение является экологически перспективным. 3 табл.

Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМВ-1779 Д - продуцент биоцида тропических микромицетов - деструкторов технических смазочных масел.