Штамм бактерий BacILLUS Sp. для получения биоцида микромицетов Советский патент 1993 года по МПК C12N1/20 A01N63/00 

w

Ј

Использование: микробиологическая промышленность, получение биоцидов мик- ромицетов и касается нового штамма для получения биоцидов. Сущность изобретения: штамм бактерий Bacillus sp. выделен из консервационного масла К-17, защищающего алюминиевый сплав. Депонирован в В КМ под номером В-1792Д. Штамм продуцирует биоцид против грибов рода Aspergllfus, Penlcillum, PMalophora, Alternara, Fusarium и др. 2 табл.

Изобретение относится к микробиологии, касается получения нового штамма бактерии-антагониста микроскопических грибов и может быть использовано в различных областях, где есть необходимость подавления жизнедеятельности мйкромице- тов: в -технике, в сельском хозяйстве, в медицине.

Целью изобретения является получение штамма бактерии-продуцента биоцида против микромйцетов, разрушающих смазочные материалы.

Предлагаемый штамм бактерий Bacillus sp. В-1792Д отличается тем, что подавляет рост микромйцетов из 11 родов: Afternarla, AspergHlus. Penlclllium, Phialophora, UJocladlum, Scopulariopsls, Khuskia, Lasiodipiodia, Fusarium, Drechslera, Tritlrachlum-деструкторов различных смазочных материалов и сплавов, возбудителя болезней злаков Drechelera rostrata, что делает возможным использование продуктов

метаболизма предлагаемого штамма в технике в составе биоцидов для сохранения смазочных материалов, а также в сельском хозяйстве для обработки злаков.

Штамм бактерии Bacillus sp. В-1792Д выделен из консервационного масла К-17, защищавшего алюминиевый сплав АМц-8 в ходе натурных испытаний в течение 16 мес на сельской станции в тропическом климате Республики Куба.

Штамм бактерий Baclltus sp. В-1792Д депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов ИБФМ АН СССР.

Штамм бактерий Bacillus sp. В-1792Д имеет следующие характеристики,

Морфологические признаки.

Клетки паяочковидные, почти прямые, с загнутыми концами, 0,7-0,8x2-4 мкм, подвижные. Реакция по Грэму положительная. Образуют термоустойчивые эндоспоры, овальные, в клетке расположены центрально Спорангий не расширен.

ОЭ

Ј

&

ю

со

Культуральные признаки,

Через 18чпри37°С на агаре Хоттингера штамм образует желтоватые колонии диаметром 1-3 мм, плоские с неровным краем, более светлым, чем центральная часть, с возрастом формируется сетка морщин.

На жидких средах растет с образованием складчатой пленки, слабой мути и небольшого осадка.

Физиолого-биохимические признаки.

Пределы температур для роста 20- 50°М, оптимум 37°С. Пределы рН для роста 5,5-9,5, оптимум 7,0. Аэроб. Границы роста определены на агаре Хоттингера. Для спо- рообразования необходимо введение в сре- ду дрожжевого экстракта. Азот утилизирует s виде мочевины, нитратов. Штамм образует каталазу и оксидазу. Реакция Фогес-Про- скауэра положительная. Ферментирует с образованием кислоты углеводы: глюкозу, маннит, ксилозу, арабинозу. Не утилизирует лактозу, сахарозу, дульцит, салицин, рамно- зу, мальтозу, сорбит, трегалозу, галактозу, целлобиозу. Образует индол. Восстанавливает нитраты. Активно гидролизует жела- тин, казеин, крахмал, мочевину. Не расщепляет тирозин, эскулин. Аргининде- гидролазной и лецитиназной активностью не обладает. Фенилаланин не дезаминиру- ет.

Чувствителен к антибиотикам: олеандо- мицину, эритромицину, ристомицину, ампи- циллину, неомицину, пенициллину, линкомицину, стрептомицину, канамицину,

левомицетину.

Растет на средах в присутствии лизоци- ма (0,001%), азида натрия (0,02%), хлорида натрия (2-10%), а также на простой синтетической среде М-9 и на среде Сабуро.

Испытание культуры на токсичность: по методике Госфармакопеи X не выявлено токсигенных или патогенных свойств микроба.

Хранение штамма. Сохраняется в лио- фильно высушенном состоянии в обезжи- ренном молоке, а также в пробирках на агаре Хоттингера.

Способ определения активности штамма. Использован метод прямого антагониз- ма, при котором индикаторные культуры микроскопических грибов засевали одновременно с культурой штамма продуцента (перпендикулярными штрихами к штриху бактерии-продуцента) на чашки Петри, со- держащие питательную среду БСА (сусло- агар и МПА в соотношении 1:1). Через 5-7 дней инкубации в термостате при температуре 30°С учитывали результаты опыта. Критерий оценки результатов - величина зоны

0

5 0 5 0

5

0

5

0 5

торможения роста микромицетов предлагаемым штаммом бактерий (в мм).

П р и м е р 1. Бактерии Bacillus sp. В-1792Д засевают одновременно с микро- мицетами-деструкторами смазочных материалов по способу определения активности штамма (см. табл. 1),

П р и м е р 2. Бактерии Bacillus sp. В-1792Д засевают так же, как описано в примере 1, с микромицетом Drechelera rostrata-возбудителем злаковой гнили. Через 5-7 дней культивирования зона задержки роста гриба составила 60 мм.

П р и м е р 3. Бактерии Bacillus sp. B- 1792Д засевают так же, как в примере 1, с микромицетами-деструкторами различных сплавов. Результаты отражены в табл. 2.

Таким образом, как показано на примерах, предлагаемый непатогенный штамм бактерий Bacillus sp, ВКМВ-1792Д обладает широким спектром антифунгальной активности, выявленной на 11 штаммах микроскопических грибов, принадлежащих к 10 родам.

Всего было испытано 20 штаммов грибов из 11 родов. В остальных случаях, не приведенных в примерах, штамм бактерий Bacillus sp. ВКМВ-1792Д также подавлял рост микромицетов. По чувствительности к штамму-продуценту индикаторные культуры можно расположить следующим образом: - высокочувствительные штаммы (зона задержки роста 30 мм) - .12 (Aspergillus terreus Thorn 6L, Penicillium cyaneum (Bain, and Sart.) Blourge 18L, Penicillium stotoniferum Thorn 20L, Penicillium freguentane Westling 19L, Phialophora lagerbergil (Melln a, Nannf.) Conant 24L, Phialophora faetiglata (Lagerb. a. Melln) Conant 23Ц Ulocladtum botrytis Preuse 27L, Scopularlopsls brevicaulls (Sacc.) Bainier 26L, Khuskla cryzae YK, Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griff, et Maubl BKMF- 3189D, Fusarlum sambuclnum Fuck BKMF- 3186D, Drechslera rostrata (Drechsler) Richardson et Fraser BKMF-3188D).;

- умеренночувствит льные штаммы (зона задержки роста 20-30 мм) - 6 (Aspergillus niger van Tieghem BKMF-3080D. Aspergillus flavus (Link) Fr. BKMF-3190D, Alternaria alternate (Fr.) Kelseler 2L, Penicillium chrysogenum ThomBKMF-3067D, Fusarlum solanl (Mart.) App. etWr. var. argillaceum (Fr.) Bilal 11L, Trltlrachlum roseum v. Beyma BKMF-3187D);

- малочувствительные штаммы (зона задержки роста 10-20 мм) - 2 (Aspergillus Ostus (Bain.) Thorn et Church 7L, Fusarium solanl (Mart.) App. etWr. BKMF-3185D).

На основании приведенных данных можно рекомендовать штамм бактерий Bacillus sp. ВКМВ-1792Д для использования его в качестве перспективного продуцента антифунгального вещества с целью создания биоцидов, повышающих биостойкость различных смазочных материалов и сплавов. Ввиду отсутствия токсигенных и

Подавление бактерией Bacillus sp, В-1792Д роста микроскопических грибов-деструкторов смазочных материалов

Индикаторная культура

Pinicillium cyaneum (Bain, and Sart.)

Biourge 18L Phlalophora lagerbergli (Melin a.

Nannf.) Conaht 24L

Ulocladium botrytls Preuss 27L

Scopulariopsis brevicaulis (Sacc.)

Bainier ВШР-3065Д

Aspergillus terreus 6L

Подавление бактерией Bacillius sp, ВШВ-1792Д роста микроскопических грибов-деструкторов сплавов.

Индикаторный штамм микроми- цетов

Характеристика индикаторного штамма

rftirachium rozeum v, Beyma BKMF-3187D

Fusarium sambucinum Fuck BKMF-3186D

Деструктор алюминиевых

медь-марганец

содержащих оплавов

Деструктор стальных

сплавов, покрытых

консервационными

смазочными материалами,

защищенными противомикробными присадками

патогенных свойств штамм представляет интерес в плане использования его метаболитов в растениеводстве, ветеринарии и медицине.

Формула изобретения Штамм бактерий Bacllfus sp. ВКМ В- 1792Д для получения биоцида микромице- тов.

10

Таблица 1

Характеристика индика- тора

Величина зоны торможе- ния роста, мм

Деструктор смазки

AMC-3 Деструктор смазок

Деструктор смазок Деструктор технических

масел

Деструктор

консервационных

смазочных материалов

Т а б л и ц а 2

Зона торможения роста индикаторного штамма

25

50

Khuskia oryzae YK

V

sperglllus flavus (Link) Fr. BKMF-3190D

Laslodlplodla theobromae at.) Griff, et Maubl BKMF3189D

Drechslera rostrata

(Drechsler) Richardson et

Ftaser BKMF-3188D

Деструктор алюминиевых

сплавов

Деструктор стальных,

оксидных алюминиевых и

магниевых сплавов, а также

возбудитель аспергиллезов у

животных

Деструктор сплавов, покрытых консервационными смазочными материалами Деструктор алюминиевых сплавов, покрытых консервационными . смазочными материалами

Продолжение табл.2.

30

25

35

60