ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SP. - АНТОГОНИСТ МИКРОМИЦЕТОВ - ДЕСТРУКТОРОВ ТЕХНИЧЕСКИХ СМАЗОЧНЫХ МАСЕЛ Российский патент 1995 года по МПК C12N1/00 

Изобретение относится к микробиологии и касается получения нового штамма бактерий-антагониста микроскопических грибов-деструкторов технических смазочных материалов, которое может быть использовано в тех областях, где есть необходимость подавления жизнедеятельности мицеллиальных грибов-деструкторов углеводородокисляющих материалов (смазок, масел, смазочных тонкопленочных покрытий): в технике, нефтяной промышленности, производстве технических смазочных материалов.

Среди известных штаммов-продуцентов из рода Bacillus имеется большое количество антагонистов-микромицетов, патогенных для растений, животных и человека [1-4] . Однако микроскопические грибы-сапрофиты тоже наносят значительный ущерб, например, в технике, вызывая порчу смазочных материалов, защищающих металлические поверхности от коррозии.

Целью изобретения является получение штамма бактерий-продуцента биоцида против микромицетов, разрушающих смазочные материалы.

Предлагаемый штамм бактерий Bacillus sp. BKМВ-1788Д продуцирует вещество, отличающееся высокой ингибиторной активностью в отношении микромицетов-деструкторов смазочных материалов из родов Penicillium, Fusarium, Aspergillus, Phialophora, что делает возможным использованием метаболитов предлагаемого штамма в технике для создания биоцида, препятствующего развитию микромицетов в маслах и смазках. Кроме того штамм-продуцент Bacillus sp. ВКМВ-1788Д подавляет рост микроскопических грибов возбудителей аспергиллезов и грибов-деструкторов алюминиевых сплавов родов Fusarium, Khuskia, Lasiodiplodia.

Новый штамм бактерии Bacillus-sp. BKМВ-1788Д выделен из консервационного масла К-17, вынесенного на алюминиевый сплав АМц-8, проходившего натурные испытания на сельской станции в тропическом климате Республики Куба в течение 16 месяцев. Для выделения штамма использованы среды МПА и БСА (сусло-агар и МПА в соотношении 1:1).

Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМВ-1788Д депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов ИБФМ АН СССР.

Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМВ-1788Д имеет следующие характеристики.

Морфологические признаки. Клетки представляют собой прямые палочки размером 0,8-0,9 x 2-5 мкм, подвижные с латеральными жгутиками. Реакция по Граму положительная. Образуют терморезистентные эндоспоры цилиндрической формы с центральным расположением в клетке, расширения спорангия нет.

Культуральные признаки. Через 18 ч роста при 37^oC на агаре Хоттингера штамм образует колонии диаметром 2-3 мм, сероватые, центральная часть почти прозрачная, край неровный, кружевной. При росте на бульоне Хоттингера образует слабую муть, пленку, незначительный осадок. Растет на синтетической среде М-9.

Физиолого-биохимические признаки. Растет в пределах температур 20-50^oC, оптимум 37^oC. Пределы рН для роста 5,5-9,0. Оптимум рН 7,0. Аэроб. Штамм каталазо- и оксидазоположительный. Образует ацетоин. Расщепляет с образованием кислоты глюкозу, маннит, арабинозу, ксилозу, сорбит. Не ферментирует лактозу, сахарозу, дульцит, салицин, рамнозу, мальтозу, трегалозу, галактозу, целлобиозу.

Расщепляет желатин, казеин. Гидролизует крахмал, мочевину. Не расщепляет эскулин, тирозин. Растет на бульоне Хоттингера, содержащем 0,001% лизоцима, 0,02% азида натрия, 2-10% NaCl. Потребляет цитрат. Редуцирует нитраты до нитритов. Индол образует. Аргининдегидролазной и лецитиназной активностью не обладает. Фенилаланин не дезаминирует. Высокочувствителен к антибиотикам: олеандомицину, эритромицину, ампициллину, неомицину и пенициллину. Чувствителен к ристомицину, линкомицину, стрептомицину, канамицину и левомицетину.

При испытании по тесту токсичности с использованием белых беспородных мышей в соответствии с Госфармакопеей Х штамм не токсичен, а также не патогенен.

Хранение штамма. В лиофильно высушенном состоянии в обезжиренном молоке, а также в пробирках на косяках твердых питательных сред (агаре Хоттингера и БСА-МПБ + cусло-агар в соотношении 1:1). Кроме того в обводненном масле МС-8РК или МК-8 с минеральной средой состава, %: NaNO₃ 0,2-0,3; MgSO₄ 0,35-0,6; KH₂PO₄ 0,07-0,15; KCl 0,15-0,25, вода водопроводная остальное, с вышеуказанными маслами в соотношении масло:минеральная среда 2:5.

Способ определения активности штамма. Использован метод прямого антагонизма, при котором индикаторные культуры микроскопических грибов засевали одновременно с культурой штамма продуцента (перпендикулярными штрихами к штриху бактерии-продуцента) на чашки Петри, содержащие питательную среду БСА (сусло-агар + MПA в соотношении 1:1). Через 5-7 дней инкубации в термостате при 30^oC учитывали результаты опыта. Критерий оценки результатов - величина зоны торможения роста микромицетов предлагаемым штаммом бактерий (мм).

П р и м е р 1. Бактерии Bacillus sp. ВКМВ-1788Д засевают одновременно с микромицетами-деструкторами технических смазочных материалов по способу определения активности штамма (табл.1).

П р и м е р 2. Бактерии Bacillus sp. ВKМВ-1788Д засевают, как в примере 1 с микромицетами-возбудителями аспергиллезов. Через 5-7 дней культивирования зона задержки роста грибов составляла 20,40,57 мм (табл.2).

П р и м е р 3. Бактерии Bacillus sp. ВКМВ-1788Д засевают, как в примере 1, с микромицетами-деструкторами алюминиевых сплавов. Результаты отражены в табл.3.

Приведенные примеры демонстрируют, что предлагаемый непатогенный штамм бактерий Bacillus sp. ВКМВ-1788Д наиболее агрессивен по отношению к грибам-деструкторам технических смазочных материалов из родов Penicillium и Phialophora. Зона подавления роста индикаторных штаммов (50-65 мм) свидетельствует о высокой физиологической активности вещества, продуцируемого указанными штаммами.

В отношении микромицетов-возбудителей аспергиллезов (Aspergillus flavus, A. terreus, A. niger) предлагаемый штамм обнаружил активность от высокой (40 и 57 мм - зона ингибирования в отношении Aspergillus terreus и Aspergillus niger) до умеренной (20 мм в отношении Aspergillus flavus).

Умеренную активность (зона подавления роста от 20 до 25 мм) штамм-продуцент проявляет также относительно деструкторов алюминиевых сплавов (Fusarium solani, Khuskia oryzae, Lasiodiplodia theobromae).

На основании приведенных результатов исследований штамм бактерий Bacillus sp. ВКМВ-1788Д можно рекомендовать как штамм-продуцент для получения биоцидного препарата, пригодного для защиты технических смазочных материалов от деструктивного действия микромицетов.

Отсутствие токсигенных и патогенных свойств у этого штамма, а также наличие у синтезируемой им субстанции антиаспергиллезной активности создают возможную перспективу для использования этого биологически активного вещества в медицине, ветеринарии, растениеводстве.

Использование: подавление роста микромицетов-деструкторов технических смазочных материалов, разработка составов веществ для повышения биостойкости технических смазочных материалов к действию мицелиальных грибов-деструкторов масел и смазок. Предлагаемый штамм Bacillus sp. ВКМ В - 1788Д выделен из консервационного масла, защищающего алюминиевый сплав в тропическом климате. Штамм не обладает патогенными и токсигенными свойствами. 3 табл.

ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SP - АНТОГОНИСТ МИКРОМИЦЕТОВ - ДЕСТРУКТОРОВ ТЕХНИЧЕСКИХ СМАЗОЧНЫХ МАСЕЛ.

Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-1788 Д - антагонист микромицетов-деструкторов технических смазочных материалов.