Изобретение относится к области медицины и касается получения лекарственных средств из отходов животного сырья.
Известен способ получения биологически активных веществ из отходов животного сырья, при котором из помолотой ткани селезенки и воды образуют пюре, из него через различные стадии осаждения и экстракции получают свободный от белков водный раствор, из которого затем выделяют диализом терапевтические вещества [1].
Недостатком способа является неэффективный метод экстракции биологически активных веществ и за счет этого невысокая степень извлечения.
Известен способ получения гонадотропного средства [2], близкий по исходному сырью и технической сути. Однако гонадопропное действие полученного нами препарата не исследовалось.
Наиболее близким по назначению является препарат спленин, выпускаемый фирмой "Дарница", г. Киев [3-5]. Технология его получения имеет много общего с предлагаемым техническим решением, что позволяет выбрать за прототип изобретения.
Согласно этому способу селезенку измельчают, воздействуют на нее экстрагирующим агентом (дихлорэтаном) в соотношении 1:2 (одна часть фарша и две части экстрагента), экстрагируют биологически активные вещества, после чего отделяют экстракт, удаляют из него дихлорэтан и фильтруют. Препарат (спленин) получают в виде водного экстракта, причем из 552 кг фарша селезенки крупного рогатого скота получают 3,6±0,1 кг водного экстракта спленина, что в пересчете на исходное сырье составляет 0,04%.
Недостатками этого способа являются:
- низкий выход экстрактивных веществ, обладающих биологической активностью;
- большая длительность процесса экстракции;
- применение экологически вредных растворителей (дихлорэтан, петролейный эфир).
Получаемый по способу-прототипу фармакопейный препарат спленин обладает антитоксической [6], противолучевой [8] и радиопротекторной [9] активностью. Спленин используется по медицинскому назначению при лечении токсикозов беременности. В Государственной фармакопеи спленин отнесен к биогенным стимуляторам [6]. Спленин оказывает иммуномоделирующее действие [6,7]. В настоящее время спленин применяется при ионизирующей терапии рака молочной железы.
Задачей изобретения является создание способа получения средства, обладающего адаптогенной и противолучевой активностью, с увеличенным выходом продукта, с сокращенной длительностью его получения.
В соответствии с поставленной задачей предлагаемый способ включает измельчение селезенки, воздействие на нее водным экстрагирующим агентом, причем указанное воздействие дополняют одновременным воздействием низкочастотного ультразвукового излучения, отделение экстракта осуществляют центрифугированием, а затем проводят диализ и лиофилизацию.
Отличие от прототипа состоит в том, что экстракт получают путем воздействия водным экстрагентом при одновременном воздействии ультразвуковым излучением, а отделение экстракта осуществляют центрифугированием.
В предпочтительном осуществлении способа весовое соотношение селезенки и воды выбирают из интервала 1/6 - 1/3, что обеспечивает наибольший выход конечного продукта и наименьшую длительность процесса экстракции при прочих равных условиях. Выбор весового соотношения, большего 1/3, приводит к уменьшению удельного выхода продукта. При весовом отношении селезенки к экстрагенту, меньшем 1/6, увеличивается исходный объем, длительность процесса удаления экстрагента возрастает, а, следовательно, экспрессность способа в целом уменьшается.
Повышению концентрации конечного продукта способствует также осуществление диализа водного экстракта с применением мембран с величиной прохода для молекулярной массы до 5000.
Предпочтительно частоту указанного низкочастотного ультразвука выбрать из интервала 18-70 кГц. В этом интервале частот при прочих одинаковых условиях осуществляется наиболее полная и быстрая экстракция при прочих равных условиях. За пределами указанного интервала частот эффективность ультразвукового воздействия снижается, что приводит к неприемлемому снижению выхода продукта или к увеличению длительности экстракции.
Интенсивность ультразвуковых колебаний целесообразно выбрать из интервала 0,1-2,3 Вт/см2, в пределах которого эффективность экстракции максимальна. При интенсивности, меньшей 0,1 Вт/см2, эффективность экстракции резко снижается. Увеличение интенсивности воздействия выше 2,3 Вт/см2 сопровождается медленным снижением эффективности на фоне увеличения энергозатрат.
Ниже приводится пример предпочтительного воплощения предлагаемого способа получения средства, обладающего адаптогенной и противолучевой активностью из селезенки.
Свежую или свежезамороженную селезенку очищают от жировой пленки и измельчают, например, с помощью мясорубки. К полученной массе добавляют пять весовых частей воды, полученную смесь помещают в ультразвуковую ванну. Затем смесь подвергают воздействию непрерывным ультразвуковым излучением с частотой 18 кГц и интенсивностью 2,0 Вт/см2. Через 45 минут содержимое ультразвуковой ванны помещают в центрифугу, где отделяют экстракт от мезги исходного сырья. Далее продукт центрифугирования пропускают через полупроницаемую целлулоидную мембрану с величиной прохода для молекулярной массы 25000-50000. Фильтрат, проверенный на отсутствие пирогенных веществ, лиофилизуют. Полученный сухой порошок с выходом биологически активных веществ порядка 5,4% от веса исходного сырья можно использовать для получения лекарственной формы. Продукт в виде порошка удобен для хранения и транспортировки.
Примеры осуществления предлагаемого способа с различными режимами и условиями сведены в табл. 1.
Приведенные примеры реализации способа осуществлены при одинаковой длительности экстракции (45 мин), сочетающейся с воздействием ультразвуком. Исключение составляет пример 7, по которому период экстракции был удлинен до 70 мин. Как видно из приведенных примеров, в пределах оптимального диапазона изменения весовых соотношений селезенки к экстрагенту (1/6 - 1/3), а также частот излучения (18-70 кГц) и интенсивностей излучения (0,1 - 2,3 Вт/см2) предлагаемый способ обеспечивает превышающий 5% выход сухого продукта от веса исходного сырья. За пределами указанных интервалов выход продукта относительно исходного сырья становится меньше 5%, хотя и в этом случае превышает выход по способу-прототипу на порядок и более. Использование заявленного изобретения позволит:
- увеличить выход целевого продукта;
- повысить ресурсосбережение;
- улучшить экологическую обстановку при получении продукта.
В табл. 2 - 4 приведены экспериментальные данные по изучению рентгеновского облучения, которые подтверждают противолучевое действие экстракта, полученного по предлагаемому нами способу.
В течение последних десятилетий интенсивно изучаются биологически активные вещества, синтезируемые клетками различных органов и регулирующие многие функции организма и, прежде всего, пролиферацию и дифференцировку клеток. При исследовании веществ, стимулирующих пролиферацию лимфоидных клеток, было показано, что они направленно изменяют метаболизм клеток критических органов и способствуют восстановлению организма после лучевого повреждения.
В наших экспериментах полученный по предлагаемому способу экстракт селезенки (ЭС) вводился белым беспородным мышам, самцам половозрелого возраста ежедневно внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг в течение 14 суток. Для оценки действия экстракта использовали общепринятые в радиобиологических исследованиях методы:
- определение массы тимуса и селезенки, характеризующей состояние лимфоидной системы;
- определение частоты микроядер в эритроцитах, характеризующих мутагенное и канцерогенное воздействие;
- определение активности 5*-нуклеотидазы-(мембранно-связанного фермента), изменение которой в сыворотке крови характерно для повреждений плазматической мембраны клеток.
Вследствие интерфазной гибели лимфоидных клеток после облучения животных уже в дозе 0,25 Гр происходит падение массы лимфоидных органов. Экстракт селезенки, вводимый мышам после рентгеновского облучения в дозе 0,5 Гр, способствовал сохранению массы тимуса и селезенки (табл. 2). Так, на 14 сутки масса тимуса у мышей, получавших препарат, в 3,5 раза превышала массу тимуса контрольных облученных животных, которым в аналогичных условиях вводился физиологический раствор.
При радиационном поражении быстро обновляющихся радиочувствительных клеток наблюдается патология митоза, связанная с повреждением хромосом и формированием микроядер. Микроядерный тест считается достаточно информативным при выявлении как радиационных повреждений, так и при выявлении мутагенного и канцерогенного действия. В наших экспериментах введение ЭС не влияло на частоту микроядер в эритроцитах у необлученных животных, т.е. экстракт не является мутагеном или канцерогеном. После облучения частота микроядер была увеличена по сравнению с нормой, а ЭС снижал ее во все сроки наблюдений (табл. 3).
В литературе имеются данные о том, что после облучения возрастает активность 5*-нуклеотидазы, маркерного фермента плазматической мембраны клеток. Увеличение активности сывороточной 5*-нуклеотидазы происходит вследствие разрушения мембран лимфоидных клеток и выхода фермента в кровь. Нами достоверно показано, что ЭС снижает активность 5*-нуклеотидазы, увеличенную после облучения мышей (табл. 4). Мы полагаем, что противолучевое действие препарата связано со стабилизацией плазматических мембран лимфоидных клеток, поврежденных рентгеновским облучением.
Адаптогенные свойства были изучены на модели острого стресса по Ю.И.Добрякову (1978). Полученные результаты сравнены с аналогом "спленин" (табл. 5) и свидетельствуют о достоверном снижении среднего числа изъязвлений на слизистой желудка.
Источники информации:
1. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г., Сидоров Н.Д., Константинов В.Л., Чайка О.В., Товарова Н.В. Авт.св. СССР N 1228776, опубл. 30.04.86, БИ N6, 1986.
2. Андраш Баляш, Михай Шайго, Лайош Кишфалуди и др. Патент Венгрии N 162447, кл. Y 01 N 13/00, 1967.
3. Промышленный регламент на "Спленин" (субстанция) N 64-04-34-36, 1984, Киев, "Дарница".
4. Фармакопейная статья 42-1255-90. Спленин, МЗ СССР, Фармкомитет, 10.07.91.
5. Государственная фармакопея СССР. МЗ СССР, 11, Изделие, - М.: Медицина, 1990.
6. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1986, т.2, с. 157.
7. Ежегодник "В аптеках", N 27, 1998, Киев.
8. Противолучевые средства. Справочник. Под ред. Л.А.Тиунова и др. М.-Л. , 1964, с. 158.
9. Балицкий К.П., Векслер И.Г. Реактивность организма и химиотерапия опухолей. - Киев, Наукова думка, 1975, с. 151-152.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИТОКСИЧЕСКОЙ И ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ | 1995 |
|
RU2142808C1 |
СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА БИОГЕННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ | 2018 |
|
RU2682641C1 |
Способ получения средства, обладающего противоязвенной и адаптогенной активностью | 1990 |
|
SU1805968A3 |
СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА БИОГЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ | 2019 |
|
RU2698707C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВОЛУЧЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ | 1992 |
|
RU2092174C1 |
СРЕДСТВО "ЭКДИСТЕРОН-80", ОБЛАДАЮЩЕЕ КАРДИОПРОТЕКТОРНОЙ, АДАПТОГЕННОЙ, АНТИГИПОКСИЧЕСКОЙ, ГАСТРОПРОТЕКТОРНОЙ, ТЕРМОПРОТЕКТОРНОЙ, АНАБОЛИЧЕСКОЙ И АКТОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И СПОСОБ ЕГО ПРОИЗВОДСТВА | 2006 |
|
RU2321420C1 |
Способ получения бетулина | 2017 |
|
RU2640587C1 |
Способ получения сапонинсодержащего экстракта | 2018 |
|
RU2678840C1 |
СПОСОБ ЭКСТРАКЦИИ ПЕКТИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ | 2007 |
|
RU2339395C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ САПОНИНСОДЕРЖАЩИХ ЭКСТРАКТОВ (ВАРИАНТ) | 2012 |
|
RU2510278C1 |
Изобретение относится к области медицины и касается получения лекарственных средств из отходов животного сырья. Способ включает измельчение селезенки, воздействие на нее водным экстрагирующим агентом, причем указанное воздействие дополняют одновременным воздействием низкочастотного ультразвукового излучения, отделение экстракта осуществляют центрифугированием, затем проводят диализ и лиофилизацию. Весовое соотношение селезенки и воды может составлять 1:6 - 1:3, массы 25000-50000. Частоту ультразвука выбирают из интервала 20 - 70 кГц, а его интенсивность составляет 0,1 - 2,3 Вт/см2. Технический результат: способ обеспечивает увеличенный выход продукта при одновременном сокращении времени его получения. 4 з.п.ф-лы, 5 табл.
Промышленный регламент на "Спленин" (субстанция) | |||
Нефтяной конвертер | 1922 |
|
SU64A1 |
- Киев, Дарница, 1984 | |||
РАДИОПРОТЕКТОР | 1986 |
|
RU2007182C1 |
SU 1136350 A, 07.08.85 | |||
Способ получения стимулятора из селезенки млекопитающих | 1983 |
|
SU1158201A1 |
Огнетушитель | 0 |
|
SU91A1 |
Машковский М.Д | |||
Лекарственные средства | |||
- Вильнюс, 1994, II, c.139. |
Авторы
Даты
1999-12-10—Публикация
1995-06-14—Подача