СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА БИОГЕННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ Российский патент 2019 года по МПК A61K35/12 A61K47/02 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к технологии получения тканевых препаратов, конкретнее биогенных лекарственных препаратов из отходов боенской продукции.

Известен способ получения биостимулятора «ПОМ» из плаценты коров, включающий охлаждение, гомогенизацию ткани плаценты, после чего размолотую ткань плаценты смешивают с мочевиной в соотношении 0,4-0,5:1, добавляют формалин при мольном соотношении мочевина: формалин 4:2 и осуществляют экстракцию путем нагревания полученной смеси до 100°С, после чего доводят рН смеси до 8,0-10,0, а температуру до 60-70°С, а затем добавляют дистиллированную воду и отстаивают. Полученный биостимулятор в виде суспензии фасуют в стерильных условиях (см. авторское свидетельство №1730762, МПК А61К 35/12).

Недостатком данного способа получения биостимулятора является то, что препарат содержит нежелательные для организма компоненты.

Известен способ получения средства с адаптогенной и противолучевой активностью из селезенки путем воздействия на нее водным экстрагирующим агентом при последующем отделении экстракта диализом и лиофилизацией. Воздействие водным экстрагентом дополняют одновременным воздействием низкочастотным ультразвуком 20-70 кГц, после чего осуществляют диализ водного экстрагента, то есть вывод (очистка) экстрагента из препарата путем использования мембран с величиной прохода для молекулярной массы 25000-50000. Весовое соотношение селезенки и экстрагента составляет селезенка: экстрагент 1:6-1:3. Использование ультразвука в процессе экстракции позволяет увеличить выход препарата (патент РФ №2152219 А61К 35/28).

Однако, данный способ характеризуется наличием использования экстрагента от которого необходимо избавиться по окончании экстракции в виду его вредного воздействия на организм. Кроме этого, способ предопределяет необходимость наличия технических средств (установки ультразвука, мембран), что удлиняет и усложняет процесс и затрудняет организацию производства биогенных лекарственных препаратов непосредственно на сельскохозяйственных предприятиях.

Известен способ получения биостимулятора гонадотропного действия, включающий измельчение селезенки, воздействие на нее экстрагирующим агентом (дихлорэтаном) в соотношении сырье: экстрагент 1:2, экстрагируют биологически активные вещества, после чего отделяют экстракт, удаляют из него дихлорэтан и фильтруют. Препарат (спленин) является водным экстрактом из фарша селезенки крупного рогатого скота (см. Промышленный регламент на «Спленин» (субстанция) №64-04-34-36, 1984, Киев. Дарница).

Недостатком данного способа является, высокая длительность процесса, использование экологически вредных растворителей (дихлорэтан, петролейный эфир) при низком выходе экстрактивных веществ.

Известен способ получения биогенных лекарственных стимуляторов (тканевых препаратов) по В.П. Филатову. Для приготовления экстракта берут паренхиматозные органы или другие ткани от только что убитых здоровых животных и помещают их в холодильник, где выдерживают их в течение 5-7 дней при температуре +2, +4°С. Затем органы (ткани) измельчают в стерильной мясорубке и разводят изотоническим раствором хлорида натрия из расчета сырье: раствор 1:2. Смесь кипятят 1-1,5 часов, настаивают при комнатной температуре 2-3 часа, фильтруют, фасуют во флаконы, стерилизуют в автоклаве в течение часа при температуре 120°С (И.Е. Мозгов Фармакология. - 8-е изд., доп.и перераб. - М.: Агропромиздат, 1985. С. 261-266 - прототип).

Недостатком способа следует считать наличие высокотемпературного режима (кипячение в течении 1-1,5 часов) в процессе экстракции, что ведет к коагуляции белков, сопровождающейся изменением важнейших свойств белка: потерей биологической активности (инактивация ферментов), способности к гидратации (при изменении конформации на поверхности белковой глобулы появляются гидрофобные группы, а гидрофильные оказываются блокированными в результате образования внутримолекулярных связей), повышенным агрегированием белковых молекул. Внешне агрегирование выражается по-разному: в малоконцентрированных белковых растворах - образование пены (хлопья на поверхности бульонов), в более концентрированных белковых растворах - образование сплошного геля при их одновременном уплотнении и отделении жидкости в окружающую среду (дегидратации). Это и обусловливает не высокую степень извлечения биологически активных веществ.

Задачей, на решение которой направлено изобретение является расширение арсенала средств (способов) производства биогенных лекарственных препаратов при упрощенной схеме производства доступной для применения в производственных условиях при более высокой эффективности лечения.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе производства биогенных лекарственных препаратов, включающем использование сырья из отходов боенской продукции, выдержку сырья в холодильнике в течение 5-7 дней при температуре +2, +4°С, измельчение сырья при последующем его смешивании с экстрагентом, экстракцию, фильтрацию, фасовку и стерилизацию в автоклаве в течение одного часа при температуре 120°С, согласно заявленному способу в качестве экстрагента используют активный раствор гипохлорита натрия в соотношении сырье: гипохлорит 1:2-1:3, а экстракцию проводят при температуре +2, +4°С в течение 18-24 часов. Активный раствор гипохлорита натрия используют в концентрации 300,0-600,0 мг/л.

Сущность изобретения заключается в использовании активного раствора гипохлорита натрия в качестве экстрагента в регламентированных разведениях 300,0-600,0 мг/л (см. Наставление по применению активного раствора гипохлорита натрия, протокол №2 от 23 апреля 1999, утвержденного ветфармсоветом Департамента ветеринарии Минсельхозпрода РФ). Раствор обладает щелочной реакцией, бактерицидным, антивирусным, противогрибковым, дезодорирующим, детоксифицирующим действием, последнее способствует нейтрализации токсических веществ путем непрямого окисления токсинов в тканях, что позволяет еще в процессе экстракции на стадии производства заявленного препарата добиться снижения обсемененности патогенной и сапрофитной микрофлоры и тем самым свести до минимума риск развития нежелательных последствий жизнедеятельности банальной микрофлоры. Следует отметить, что активные ионы хлора, находящиеся в растворе гипохлорита натрия, влияют на мембранные процессы, в частности они вызывают деструкцию мембран. Клеточная гибель, деградация межклеточных структур развивается не только в процессе жизнедеятельности, но и в культуре in vitro, то есть вне организма. Пассивная форма клеточной гибели (онкоз) деструкция коллагена и клеточных мембран приводит к образованию глютина - белка, растворимого в горячей воде. Вышеизложенное дает основание предположить, что данные процессы во время экстракции активным раствором гипохлорита натрия способствуют более полному выходу биологически активных веществ из биоматериала в раствор, и как следствие, более насыщенному раствору по содержанию сухого вещества значительно превышающему прототип. В процессе экстрагирования фарша, полученного из боенской продукции, активность гипохлорита натрия снижается в связи с его фармакологическими свойствами и окончательно разрушается при нагревании, поэтому после термической стерилизации он превращается в обычный физиологический раствор, никаких токсических продуктов при этом не образуется, поэтому нет никаких противопоказаний использования биогенного лекарственного препарата для внутримышечных введений животным. Полученный препарат относительно хорошо фильтруется через лавсан, осадок взвеси во флаконах в готовом виде составляет от 1/2 до 2/3 флакона, который перед применением легко превращается во взвесь.

Для разработки технических режимов заявленного способа были проведены опыты на разных видах сырья: определяющим параметром по эффективности способа было взято содержание сухого вещества в экстрактах, изготовленных по технологиям прототипа и заявленного способа при концентрации активного раствора гипохлорита натрия 370 мг/л. Результаты опытов представлены в таблице 1.

Опытным путем установлено, что гипохлорит натрия в регламентируемых концентрациях (300,0-600,0 мг/л) не оказывает существенного увеличения на выход сухого вещества в конечном продукте, а лишь улучшает показатели бактериологического контроля на стерильность.

Способ осуществляется следующим образом: Пример 1. Для приготовления биогенного лекарственного препарата в асептических условиях берут селезенку, печень, лимфоузлы в соотношениях 1:1:1 от убитых здоровых животных и помещают в холодильник, где выдерживают 7 дней при температуре +2, +4°С. Затем органы измельчают, на мясорубке и разводят активным раствором гипохлорита натрия (370,0 мг/л) в соотношении 1 кг биоматериала в 3 л гипохлорита натрия, тщательно перемешивают и помещают в бытовой холодильник на 24 часа при температуре +2, +4°С. По истечении указанного времени полученный экстракт в асептических условиях фильтруют через лавсан, фасуют в стерильные флаконы, стерилизуют в автоклаве в течение часа при температуре 120°С.

Пример 2. Способ осуществляется по примеру 1, но биоматериал был получен при подворном убое животных, где санитарное состояние помещений гораздо ниже чем при промышленном убое, а в качестве экстрагента использовали активный раствор гипохлорита натрия с концентрацией 510 мг/л.

Органические соединения тканевых препаратов после подкожного введения животным постепенно разрушаются с образованием новых раздражителей. Так как процесс распада из-за большего количества сухого вещества в предлагаемом препарате полученным новым способом выше, то и соответственно, стимулирующий и терапевтический эффект будет продолжительнее.

Производственные испытания тканевых препаратов, полученных новым способом проведены на сельскохозяйственных предприятиях Алтайского края в 2014-2017 годах. Контроль качества проводили согласно ГОСТ 31926-2013. (Средства лекарственные для ветеринарного применения. Метод определения безвредности).

Для проведения производственных испытаний были изготовлены опытные партии тканевых препаратов по методике В.Ф. Филатова и заявленным способом. Результаты некоторых из них представлены ниже.

В ООО «Смирненькое» Кулундинского района в период 2014-2016 гг. проведено клиническое испытание эффективности заявленного биогенного лекарственного препарата, в качестве экстрагента использовали активный раствор гипохлорита натрия в сравнении с прототипом, полученным по методике В.П. Филатова. Заявленный препарат применяли на 150 больных новотельных коровах и первотелках, контролем служили 120 коров аналогов с клиническими признаками эндометрита, которым вводили тканевой препарат, приготовленный по методу В.П. Филатова. Биогенные лекарственные препараты вводили с первого дня лечения двукратно с интервалом 7 дней по 10 мл подкожно, дробно в несколько точек в среднюю треть шеи на фоне общепринятой методики лечения, используемой в хозяйстве. У 93,3% коров, подвергшихся лечению с применением тканевого препарата полученного заявленным способом, отмечали исчезновение клинических признаков на 10-14 день лечения, у 6,7% животных отмечали хронизацию процесса, в дальнейшем с рецидивом болезни. В контрольной группе, соответственно, у 86,6%, с исчезновением клинических признаков на 12-15 день, у 13,3% рецидивы болезни. После лечения 65,0% животных опытной группы пришли в охоту и были плодотворно осеменены, в контрольной, соответственно 57,7%, у оставшихся животных регистрировали увеличение сервис-периода. Результаты проведения клинических испытаний заявленного способа получения биогенных лекарственных препаратов отражены в таблице 2.

Примечание: З - заявленный способ, П - прототип, * - Р≤0,01, ** Р≤0,001

Использование биогенных лекарственных препаратов, в общей схеме лечения телят с диарейным синдромом полученных усовершенствованным способом и по методу В.П. Филатова проводили с 2015- по 2017 гг. в ООО «Бурановское» Усть-Калманского и СПК «Путь к коммунизму» Завьяловского районов края. Сравниваемые тканевые препараты вводили с первого дня терапии подкожно в область средней трети шеи в дозе 2-4 мл телятам в возрасте от 2 до 45 дней, дополнительно к общей схеме лечения. Опытной группой служили 456 телят, которым вводили в общепринятую схему лечения заявленный препарат, приготовленный по усовершенствованному способу, контрольным 392 телятам по аналогичной схеме и дозировкам инъецировали тканевой препарат, приготовленный по методике В.П. Филатова. На лечение телят опытной группы требовалось 4-7дней, контрольной группы 5-9 дней. Сохранность телят в опытной группе составила 97,3% (Р≤0,01) в контрольной группе 94,1%. Результаты испытаний заявленного способа получения биогенных препаратов приведены в таблице 3.

Примечание: З - заявленный способ, П - прототип, * - Р≤0,01,

Таким образом, использование заявленного способа производства биогенных лекарственных препаратов позволяет производить лекарственный препарат в производственных условиях, при упрощенной схеме производства и более высокой эффективности при терапии животных.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к технологии получения тканевых препаратов. Способ производства биогенных лекарственных препаратов, включающий использование сырья из отходов боенской продукции, выдержку сырья в холодильнике в течение 5-7 дней при температуре +2, +4°C, измельчение сырья при последующем его смешивании с экстрагентом, экстракцию, фильтрацию, фасовку и стерилизацию в автоклаве в течение часа при температуре 120°C, отличающийся тем, что в качестве экстрагента используют активный раствор гипохлорита натрия в соотношении сырье : гипохлорит натрия 1:2-1:3, а экстракцию проводят при температуре +2, +4°C в течение 18-24 часов. Вышеописанный способ производства биогенных лекарственных препаратов позволяет получить лекарственный препарат в производственных условиях, при упрощенной схеме производства при более высокой эффективности при терапии животных. 3 табл., 2 пр.,1 з.п. ф-лы.

1. Способ производства биогенных лекарственных препаратов, включающий использование сырья из отходов боенской продукции, выдержку сырья в холодильнике в течение 5-7 дней при температуре +2, +4°C, измельчение сырья при последующем его смешивании с экстрагентом, экстракцию, фильтрацию, фасовку и стерилизацию в автоклаве в течение часа при температуре 120°C, отличающийся тем, что в качестве экстрагента используют активный раствор гипохлорита натрия в соотношении сырье : гипохлорит натрия 1:2-1:3, а экстракцию проводят при температуре +2, +4°C в течение 18-24 часов.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что активный раствор гипохлорита натрия используется в концентрации 300,0-600,0 мг/л.