АГЕНТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ САЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ЕГО ОСНОВЕ Российский патент 1999 года по МПК A61K31/59 

Изобретениеотноситсяксоединению1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферолу, которое может быть охарактеризовано формулой:

и которое используется в качестве агента для лечения заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит.

Изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим соединение формулы I, и применению этого соединения для получения лекарственных препаратов для лечения вышеуказанных заболеваний.

1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол может быть получен по реакционной схеме, приведенной в конце описания.

По этой реакционной схеме соединение формулы 1 преобразуют в соединение формулы 3 путем взаимодействия с соответствующим соединением формулы:

Реакцию проводят при -60^oC - 90^oC, предпочтительно -75^oC, в полярном апротонном органическом растворителе, таком, как сухой эфир или более предпочтительно сухой тетрагидрофуран, в присутствии сильного основания, такого, как алкиллитий, подобный бутиллитию. Соединение формулы 2 известно (J. Org. Chem. 1990, 55, 243) или может быть получено в соответствии с известными способами.

Защитные группы соединения формулы 3 удаляют с помощью соли фтора, такой, как тетрабутиламмоний фторид, в полярном органическом растворителе, таком, как эфир или более предпочтительно тетрагидрофуран, с получением соответствующего соединения формулы I.

1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол используется в качестве агента для лечения заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит.

При лечении заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит, пациенту, нуждающемуся в таком лечении, 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол может быть назначен наружно. Более конкретно, при лечении заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит, 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол может быть назначен наружно человеку в дозах, которые находятся в пределах от 0,01 до 100 мкг на грамм состава для наружного применения в день.

При лечении заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит, пациенту, нуждающемуся в таком лечении, 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол может быть назначен орально. Более конкретно, при лечении заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит, 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол может быть назначен орально в дозах, которые находятся в пределах от 0,01 до 10 мкг в день.

Полезная активность 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферола в качестве агента для лечения заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит, может быть показана в следующих исследованиях, известных специалистам.

Методы
1. In vitro
Жировые клетки выделяют из сальной железы взрослого человека согласно J. Invest. Dermatol. 96: 341-348 (1991) и культивируют на слое, задерживающем рост ЗТЗ фибробластов мышей.

Клетки культивируют в среде Искова (Iscove), содержащей 10% сыворотки зародыша теленка и 4 мкг/мл дексаметазона.

Клетки помещают в среду без 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин- холекальциферола. Через 24-48 часов после начала посева культуры помещают в свежую среду, содержащую соединение по изобретению. Каждые 48 часов культуры помещают в свежую среду, содержащую соединение по изобретению. В день харвестирования культуры промывают 0,03%-ной ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) в ЗФР (забуференный фосфатом физиологический раствор) для удаления только ЗТЗ фибропластов. Оставшиеся колонии себоцитов инкубируют в 0,05%-ном трипсине/0,03%-ной ЭДТА для получения однородной клеточной суспензии себоцитов. Клетки разбавляют, интенсивно перемешивают для сохранения однородной клеточной суспензии и подсчитывают на гемоцитометре.

С исследуемыми соединениями работают следующим образом. Растворы штаммов приготавливают в виде 10^-2 М растворов в дегазированном этаноле и хранят при -20^oC в темноте. Растворы никогда не используют после хранения более чем в течение одного месяца. При экспериментальном применении растворов, которые являются аликвотными, их оттаивают один раз и используют путем разбавления непосредственно в полной среде до подходящей концентрации 10^-6, 10^-7, 10^-8 и 10^-9 М. Исследуемые соединения:
(1) 1,25-дигидроксихолекальциферол; и
(2) 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол.

Результаты
Соединения исследованы на ингибирование пролиферации жировых клеток in vitro при следующих концентрациях: 10^-6, 10^-7, 10^-8 и 10^-9 М. 1,25-дигидроксихолекальциферол является агентом, уменьшающим размер сальных желез на ушах самцов сирийский хомяков.

Результаты сведены в таблицу 1 в виде количества соединения, необходимого для ингибирования пролиферации жировых клеток на 50% по сравнению с контролем (ED₅₀). Контролем являются культуры, подвергнутые только разбавлению.

Результаты показывают, что соединение по изобретению ингибирует пролиферацию человеческих себоцитов in vitro. Поэтому соединение по изобретению является полезным в качестве агента для лечения воспаления сальной железы.

2. Модель in vivo на ухе хомяка
а. Метод локального изучения
Соединение оценивают на местную противоугревую активность в отношении сальной железы на модели сальной железы уха хомяка. Для этих исследований соединение растворяют в ацетоне. Пятьдесят (50) мкл содержащего препарат раствора наносят ежедневно (5 дней в неделю) на заднюю часть правого уха хомяка. Контрольные хомяки получают 50 мкл ацетона. Животных забивают через 4 недели. Уши отделяют и проводят гистологическую оценку. Вентральную поверхность отделяют от остатка уха. В 5 мм от верхней части уха берут пункцию размером 2 мм и окрашивают в течение ночи 0,1%-ным судановым черным В (Sudan Black В), растворенным в 100%-ном пропиленгликоле. После обесцвечивания определяют площадь сальных желез на поперечных срезах с помощью визуального анализа с использованием системы визуального анализа Donsato Image Analysis System. Данные выражены в процентном изменении относительно контрольных животных для 80-120 сальных желез на дозу. Результаты сведены в таблицу 2.

б. Оральное исследование
Целью исследования является оценка действия соединения по изобретению на сальные железы уха хомяка после орального введения соединения. 200 мкл соединения по изобретению, растворенное в Твине 20/воде/этаноле (50/40/100), вводят ежедневно (5 дней в неделю) посредством желудочного зонда самцам золотых сирийских хомяков. Животных забивают через 4 недели и уши подвергают гистологической оценке. Одно ухо фиксируют 10%-ным забуферированным формалином, подвергают заливке парафином, рассекают и окрашивают гематоксилином и эозином. Площадь сальных желез измеряют на гистологически приготовленных поперечных срезах уха с помощью визуального анализа с использованием системы Leitz TAS Plus. Данные, полученные при этом исследовании, представлены ниже. Данные приведены в средних площадях 48 сальных желез на дозу.

Вышеприведенные данные показывают, что соединение по изобретению является полезным в качестве агента для лечения заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит.

Оральные дозированные формы, содержащие 1 α -фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол, могут быть в составе капсул, таблеток и т.п. с фармацевтически приемлемым материалом носителя.

Примерами фармацевтически приемлемых материалов носителя, которые могут входить в состав капсул и т.п., являются следующие: связующее, такое, как трагакантовая камедь, смола акации, кукурузный крахмал или желатин; наполнитель, такой, как дикальцийфосфат; разрыхлитель, такой, как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, альгиновая кислота и тому подобное; смазывающий агент для таблетирования, такой, как стеарат магния; подслащивающий агент, такой, как сахароза, лактоза или сахарин; корригент, такой, как мята, масло грушанки или вишни. Могут быть представлены различные другие материалы в качестве покрытия или для другой модификации физической формы или дозированной единицы. Например, таблетки могут быть покрыты шеллаком, сахаром или и тем, и другим. Сироп или эликсир может содержать активное соединение, сахарозу в качестве подслащивающего агента, метил- и пропилпарабены в качестве консервантов, краску и корригент, такой, как вишневый или апельсиновый корригент.

Дозированные формы для наружного применения, содержащие 1 α - фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол, включают мази или кремы на основе составов, содержащих жировые, способные всасываться, водорастворимые и эмульсионного типа основы, такие, как петролатум, ланолин, полиэтиленгликоли и т.п.

Лосьоны являются жидкими составами и варьируются от простых растворов до водных или гидроспиртовых составов, содержащих тонко измельченные вещества. Лосьоны могут содержать суспендирующие или диспергирующие агенты, например, производные целлюлозы, такие, как этилцеллюлоза, метилцеллюлоза и т.п.; желатин или смолы, которые содержат активный ингредиент в растворителе, таком, как вода, спирт, глицерин и т.п.

Гели являются полутвердыми составами, полученными желатинированием раствора или суспензии активного ингредиента в растворе носителя. Растворы, которые могут быть водными или безводными, желатинируют с использованием желатинирующего агента, такого, как карбоксиполиметилен, и нейтрализуют до надлежащей гелевой консистенции с использованием щелочей, таких, как гидроксид натрия, и аминов, таких, как полиэтиленкокоамин.

Термин "наружный", используемый в описании, обозначает использование активного ингредиента в составе с пригодным фармацевтическим носителем и применяется на участке воспаления для усиления местного действия. Таким образом, композиции для наружного применения включают такие фармацевтические формы, в которых соединение применяется наружно при прямом контакте с кожей. Дозированные формы для наружного применения включают гели, кремы, лосьоны, мази, пудры, аэрозоли и другие обычные формы для медицинского применения на коже, полученные смешением соединения формулы I с известным фармацевтическим материалом носителя для наружного применения. В дополнение к применению на коже композиции для наружного применения по настоящему изобретению могут быть также использованы при лечении воспалений слизистых оболочек в тех местах, где такие оболочки являются доступными для наружной лекарственной обработки. Например, композиция для наружного применения может быть использована на слизистом покрове рта или нижней части толстой кишки.

Пример 1
(1α,3β, 5Z, 7E)-1-фтор-3-[[(1,1-диметилэтил)диметилсилил] окси] -25- [(триметилсилил)окси]-9,10-секохолеста-5,7,10(19),16-тетраен-23-ин
К раствору 217 мг (0,461 ммоль) [3S-(1Z, 3α,5β ]-[2-[3-фтор-5- [[(1,1-диметилэтил)диметилсилил] окси] -2-метиленциклогексилиден] этил]дифенилфосфиноксида в 6 мл сухого тетрагидрофурана прибавляют по каплям при -75^oC 0,27 мл (0,43 ммоль) 1,6 М раствора н-бутиллития в гексане. После перемешивания смеси в течение 6 минут прибавляют по каплям 120 мг (0,346 ммоль) [1(R^*), 3aR^* - 3aβ,7aα ]-3,3a,5,6,7,7a- гексагидро-1-(1,5-диметил-5-[(триметилсилил)окси] -3-гексинил)-7а-метил-4Н- инден-4-она в 5 мл сухого тетрагидрофурана. Смесь перемешивают при -75^oC в течение 1,5 часа и гасят добавлением смеси 1: 1 1М водного калиево-натриевого тартрата и 2М водного бикарбоната калия. Смесь экстрагируют этилацетатом и органическую фазу промывают насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄), фильтруют и упаривают досуха. Осадок очищают колоночной хроматографией на силикагеле с использованием этилацетата-гексана (1: 15) с получением 136 мг (66%) (1α,3β, 5Z,7E)-1-фтор-3-[[(1,1-диметилэтил)диметилсилил] окси] -25- [(триметилсилил)окси] -9,10-секохолеста-5,7,10(19), 16-тетраен-23-ина в стеклообразном виде: ИК (CHCl₃) 2230, 840 см^-1; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 0,08 (с, 6H), 0,17 (с, 9H), 0,72 (с, 3H), 0,88 (с, 9H), 1,13 (д, J=8 Гц, 1H), 5,37 (с, 2H), 6,10 (д, J=12 Гц, 1H), 6,34 (д, J=12 Гц, 1H), масс-спектр, m/e 578 (M⁺-HF).

Пример 2
1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол)
К раствору 132 мг (0,220 ммоль) (1 1α,3β, 5Z,7E)-1-фтop-3- [[(1,1-диметилэтил)диметилсилил] окси] -25-[(триметилсилил)окси] -9,10- секохолеста-5,7,10(19), 16-тетраен-23-ина в 8 мл сухого тетрагидрофурана прибавляют 1,38 мл (1,38 ммоль) 1М тетрабутиламмонийфторида в тетрагидрофуране. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов. После разбавления водой смесь экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой, насыщенным раствором соли, сушат (Na₂SO₄) и упаривают досуха. Осадок очищают колоночной хроматографией на силикагеле с использованием этилацетата-гексана (1: 13) в качестве элюента с получением 81 мг (89%) 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферола в стеклообразном виде: [α]20D

+74,7 (с 0,15, МеОН); ИК (CHCl₃) 3600, 2230, 1649 см^-1; УФ_макс. (EtOH)242, 267 нм; ¹H ЯМР (CDCl₃) δ 0,72 (с, 3H), 1,13 (д, J=8 Гц, 1H), 1,48 (с, 6H), 2,63 (м, 1H), 2,83 (м, 1H), 4,24 (ушир. с, 1H), 5,12 (с, 1H), 5,14 (дм, J=48 Гц, 1H), 5,38 (с, 1H), 5,40 (с, 1H), 6,12 (д, J=12 Гц, 1H), 6,41 (д, J=12 Гц, 1H); масс-спектр, m/e 392 (M⁺ -HF).

Пример 3
Оральные дозированные формы мягких желатиновых капсул A и B
A - мг/капсулу
1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол - 0,00001-0,010
Бутилированный гидрокситолуол (БГТ) - 0,016
Бутилированный гидроксианизол (БГА) - 0,016
Myglyol^® -812 или полиэтиленгликоль 400 qs - 160
B - мг/капсулу
1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферол - 0,00001-0,010
α -токоферол - 0,016
Myglyol^® -812 или полиэтиленгликоль 400 qs - 160-

Изобретение относится к медицине и касается применения 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферола в качестве агента для лечения заболеваний сальной железы, таких, как угревая сыпь или себорейный дерматит. Он может быть получен удалением силильных защитных групп из соответствующего соединения с защищающими гидроксилсилильными группами. Предложена также фармацевтическая композиция на его основе. Предложенный агент более эффективен при лечении указанных заболеваний. 2 с. и 4 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Применение 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферола в качестве агента для лечения заболеваний сальной железы. 2. Применение по п.1, в котором указанным заболеванием является угревая сыпь. 3. Применение по п.1, в котором указанным заболеванием является себорейный дерматит. 4. Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний сальной железы, отличающаяся тем, что содержит эффективное количество 1α-фтор-25-гидрокси-16-ен-23-ин-холекальциферола и фармацевтически приемлемый носитель. 5. Композиция по п.4, отличающаяся тем, что указанным заболеванием является угревая сыпь. 6. Композиция по п.4, отличающаяся тем, что указанным заболеванием является себорейный дерматит.