СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДОНОЗОЛОГИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ В ОРГАНИЗМЕ ДЕТЕЙ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к гигиене.

В зонах экологического риска и неблагополучия, в условиях, когда возможность быстрого устранения загрязнения окружающей среды представляется проблематичной, возрастает актуальность разработки методических подходов к проведению, массовых первично-профилактических и лечебных мероприятий по периодической очистке внутренней среды организма, детей на стадии адаптационного напряжения. Для этого требуется разработка критериев диагностики состояний адаптационного напряжения организма ребенка под действием неблагоприятных факторов окружающей среды.

Донозологическая диагностика представляет собой систему методов исследования, целью которой является определение адаптационных возможностей или уровня здоровья человека, посредством изучения ранних неспецифических изменений на уровне биохимических, физиологических иммунологических микробиологических реакций в организме человека под воздействием различных факторов окружающей среды. К таким методам следует отнести хромато-масс-спектрометрические и иммунологические, биохимические [4,6].

Здесь представлено описание одного из биохимических методов донозологической диагностики [4].

Среди обследованных были практически здоровые лица: сотрудники СПСГМИ, рабочие целлюлозно-бумажного комбината, школьники, воспитанники детских садов. В процессе обследования различных групп населения были выявлены изменения функциональной активности защитно-приспособительной системы организма в зависимости от сезона, пола и возраста. Так, к январю-февралю у практически здоровых людей наблюдалось снижение мощности адаптационной системы вследствие статистически достоверного снижения восстановительного потенциала организма (-SH/ -SH-), активности антиперекисных ферментов (ГПО) к ферментов конъюгации (Г-S-T). По ряду показателей во все периоды обследования отмечено снижение функциональной активности системы неспецифической резистентности у мужчин по сравнению с женщинами.

Этот способ применим к использованию в донозологической диагностике, но имеет ряд недостатков: 1. Способ достаточно дорогостоящий. 2. Неудобен при массовых исследованиях, т. к., связан с определением активности ферментов, которые в обычных условиях быстро разлагаются.

В качестве прототипа авторами выбран способ более близкий для сравнения с предлагаемым способом донозологической диагностики - донозологический метод определения гемоглобина и его дериватов в крови детей. Это метод предложен Е.И. Балашовым, Д.А. Резаевым, В.В. Ярыгой в статье: Содержание гемоглобина и его дериватов в крови детей, проживающих в населенных пунктах санитарно-защитной зоны Астраханского газового комплекса [1]. //Педиатрия - 1995. - N 5. - С. 75-78. В его основе лежит метод М.С. Кушаковского, описанный в монографии: Клинические нормы повреждения гемоглобина [2]. - Л.: Медицина, - 1968. - 325 с. Сущность метода заключается в определении содержания гемоглобина и его дериватов в крови и сравнении с нормой, характерной для детей из регионов с повышенной техногенной нагрузкой, рассчитанной в данном исследовании. В норме : гемоглобин - от 119 до 157 г/л; метгемоглобин - от 0,25 до 1.7% от общ. Hb. Все значения больше или меньше указанных говорят о срыве адаптации. Данный способ не пригоден для проведения скрининговых обследований в полевых условиях, так как требует специальное оборудование (фотоэлектроколориметры). Этот способ предполагает использование крови в качестве исследуемого материала, что при обследовании детского населения является нежелательным. К тому же гематологические показатели обладают значительной вариабельностью, зависящих от возрастных, физиологических и других факторов, что вызывает затруднение в определении стадий адаптации.

Новизной предлагаемого способа является определение процентного соотношения различных морфоструктур кристаллов в препарате слюны с учетом однотипных морфотипов кристаллов в пределе 30 - 70% от площади всего препарата (Таблица 1).

Способ диагностики донозологических изменений в организме детей путем исследования биологической жидкости, отличающийся тем, что исследуют слюну с добавлением кристаллообразующего вещества NaCl посредством световой микроскопии и определяют процентное содержание однотипных морфоструктур кристаллов, где при содержании разрозненных кристаллов, разветвленных систем или линейных структур, а также кристаллов смешанного типа, занимающих площадь 30 - 70% от площади всего препарата говорят, об адаптационном напряжении организма.

В основе предлагаемого способа донозологической диагностики лежит метод кристаллографии слюны [5].

Изучение твердокристалических структур осуществляется с помощью микрометода кристаллизации биологических субстратов на предметном стекле с 0,9%-ным раствором NaCl в качестве кристаллообразующего вещества. На новое, чисто вымытое водой и обезжиренное в спирте предметное стекло наносится капля биологического субстрата, и капля раствора NaCl. Препарат выдерживается 24 часа в строго горизонтальном положении при комнатной температуре и нормальной влажности, для контроля качества исследования необходимо проводить две параллельные опытные пробы и контроль (1 капля дистиллированной воды и 1 капля кристаллообразующего вещества). Микроскопия проводится в световом микроскопе при увеличении 7х8.

Диагностическая ценность этого метода определяется тем, что характер роста кристаллов зависит от "структуры" и плотности сложнобелкового геля. Доказано, что сложный разветвленный рисунок кристаллизации NaCl зависит в большей степени не от количества, а от гетерогенности состава аминокислот в белковом субстрате.

Было обследовано 108 детей до 3 лет и 90 детей 13-16 лет, проживающих в зоне с высокой техногенной нагрузкой, и 39 детей до 3 лет и 41 ребенок 13-16 лет, проживающих в зоне с относительно низким уровнем антропогенного загрязнения. Для изучения были набраны группы здоровых детей, с I или II группой здоровья из семей с одинаковым социальным статусом и профессиями родителей, не имеющих производственных вредностей. Полученные результаты были обработаны математико-статистическим методом по Стьюденту и подверглись корреляционному анализу.

Дети раннего возраста, как правило, являются наиболее чувствительной и чистой моделью при изучении влияния на здоровье населения химического загрязнения окружающей среды, в силу особенностей обменных процессов растущего организма, однотипности условий жизни, отсутствия профессионального анамнеза и вредных привычек, относительно высокого уровня организации медицинского обслуживания.

Дети 13-16 лет благодаря физиологическим особенностям этого возраста являются также чувствительной категорией детского населения, так как именно в этот период у детей идет кардинальная перестройка нейро-эндокринной системы [3].

Полученные данные (таблицы 2, 3) определяют достоверность предлагаемого интервала, в содержании морфоструктур, говорящего об адаптационном напряжении (от 30% до 70% кристаллов однотипной структуры). Кроме того, при процентном содержании разрозненных кристаллов выше 70%, а разветвленных систем, линейных структур или кристаллов смешанного типа ниже 30% от общей площади препарата состояние оценивают как нормальное, при процентном содержании разрозненных кристаллов занимающих ниже 70% от общей площади препарата, а разветвленных систем, линейных структур или кристаллов смешанного типа ниже 30% от общей площади препарата, говорят о срыве адаптации.

У детей основной и контрольной групп для объективности предлагаемого способа была проведена оценка физического развития методом центильных таблиц. В крови были определены метгемоглобин фотоэлектроколориметрическим методом по Боярчуку И.Ф. (1966), показатель проницаемости эритроцитарных мембран по В.Н. Колмакову (1976), перекисная резистентность эритроцитов по Покровскому А.А. (1964), проницаемость мембран лейкоцитов (по Сторти), активность фруктозо-1-фосфатальдолазы (по Раймону, Френкелю, 1957), активность гаммаглутамилтрансферазы. Полученные данные были обработаны статистическим методом по Стьюденту, также был проведен корреляционный анализ.

Пример 1: Мальчик, - 2 года 5 мес (основная группа). Результат кристаллографии показал, что 60% площади препарата, занимают разрозненные кристаллы, 20% разветвленные системы и 20% линейные структуры. То есть нет четкой картины характера кристаллографического рисунка препарата. При проведении корреляции результатов кристаллографии слюны с результатами биохимических исследований и оценки физического развития можно говорить о напряжении адаптации организма данного ребенка. Группа здоровья - II. Физическое развитие - дисгармоничное. Биохимические показатели:
1. Проницаемость мембран эритроцитов - 4210 (норма 2000-4000).

2. Степень гемолиза эритроцитов - 15,0%.

3. Метгемоглобин - 1,3% (в норме меньше 1%).

4. Аскорбиновая кислота в моче - 0.48 мг/час (в норме от 0,7 и выше).

Пример 2. Мальчик, - 1 год 3 мес (контрольная группа). Результат кристаллографии показал, что 90% площади препарата занимают разрозненные кристаллы, 10% кристаллы "аллергического" типа. По характеру кристаллографического рисунка препарата в данном случае можно говорить о полном здоровье, что подтверждает проведенная корреляция результатов кристаллографии слюны с результатами биохимических исследований и оценки физического развития ребенка. Группа здоровья - II. Физическое развитие - гармоничное. Биохимические показатели:
1. Проницаемость мембран эритроцитов - 2075
2. Степень гемолиза эритроцитов - 5,0%
3. Метгемоглобин - 0,32%
4. Аскорбиновая кислота в моче - 0,4 мг/час
Пример 3. Девочка - 13 лет (основная группа). Результат кристаллографии показал, что 60% площади препарата занимают разрозненные кристаллы, 40% линейные структуры. То есть нет четкой картины характера кристаллографического рисунка препарата. При проведении корреляции результатов кристаллографии слюны с результатами биохимических исследований и оценки физического развития можно говорить о напряжении адаптации организма данного ребенка. Группа здоровья - I. Физическое развитие - дисгармоничное. Биохимические показатели: 1. Проницаемость мембран лейкоцитов - 69,2% через 30', 53,8% через 120'(норма 45-60% через 30', 20-30% через 120'; активность фруктозо-1-фосфатальдолазы - 5 ЕД (норма 0-1 ЕД); активность гаммаглутамилтрансферазы - 131 Е/л (норма - 10-66 Е/л).

Пример 4. Девочка - 13 лет (контрольная группа). Результат кристаллографии показал, что 100% площади препарата занимают разрозненные кристаллы. По характеру кристаллографического рисунка препарата, в данном случае можно говорить о полном здоровье, что подтверждает проведенная корреляция результатов кристаллографии слюны с результатами биохимических исследований и оценки физического развития ребенка. Группа здоровья - I. Физическое развитие - гармоничное. Биохимические показатели: 1. Проницаемость мембран лейкоцитов - 44% через 30', 28% через 120'; активность фруктозо-1-фосфатальдолазы - 1 ЕД; активность гаммаглутамилтрансферазы - 35 Е/л.

Таким образом, слюна как биосубстрат отражает все физиологические процессы, происходящие в организме, т.е. достоверно определяет состояние организма на данный момент. Важным аспектом исследований адаптационного статуса становится разработка неинвазивных методов, исключающих опасность инфицирования организма при массовых обследованиях. Неинвазивность данного способа позволяет широко использовать его в качестве метода диагностики донозологических состояний у детей. Способ не требует использование сложных приборов, что составляет его простоту и возможность применения в полевых условиях и массовых скриннингах.

Данные собственных исследований выявили достоверные отличия в результатах кристаллографии слюны детей, находящиеся в корреляционной зависимости от уровня антропогенной нагрузки.

Способ прогнозирования осуществляется по нижеуказанному описанию.

Литература
1. Балашов В. И. , А.А.Резаев, В.В.Ярыга. Содержание гемоглобина и его дериватов в крови детей, проживающих в населенных пунктах санитарно-защитной зоны Астраханского газового комплекса". //Педиатрия - 1995. -N5. -С.75 - 78.

2. Кушаковского М.С. //Клинические формы повреждения гемоглобина", - Л.: Медицина, - 1968. -325 С.

3. Я. М. Луцкий, В.А.Таболин, Е.В.Неудахин и др. Экопатологические состояния у детей как проявление латентных форм антропогенных экотоксикозов //Экопатология детского возраста - М., - 1995. -С.172.

4. Маймулов В. Г., Баскович Г.А., Дадали В.А. Методологические аспекты биохимических исследований адаптационного статуса организма. //Гигиена и санитария. - 1993. - N 10. -С.61 - 63.

5. Плаксина Г. В., Римарчук Г.В., Савельева Л.А., Урсова Н.И. Кристаллографический метод исследования детской гастроэнтерологии //Методические рекомендации, Москва - 1995. -С.4 - 5.).

6. Сидоренко Г.И., Захарченко М.П., Морозовым В.Г., Кошелевым Н.Ф. О некоторых методологических проблемах донозологической гигиенической диагностики //Гигиена и санитария. - 1993, N 7. - С.60 - 64.

Изобретение относится к медицине, в частности к гигиене, и может быть использовано для диагностики состояний адаптационного напряжения организма и разработки методов профилактических мероприятий. Исследуют слюну с добавлением кристаллообразующего вещества NaCl посредством световой микроскопии и определяют процентное содержание однотипных морфоструктур кристаллов, где при содержании разрозненных кристаллов, разветвленных систем или линейных структур, а также кристаллов смешанного типа, занимающих площадь 30 - 70% от площади всего препарата, говорят об адаптационном напряжении организма, при содержании разрозненных кристаллов выше 70%, а разветвленных систем, линейных структур или кристаллов смешанного типа ниже 30% от общей площади препарата состояние оценивают как нормальное, при содержании разрозненных кристаллов ниже 70% от общей площади препарата, а разветвленных систем, линейных структур или кристаллов смешанного типа ниже 30% от общей площади препарата говорят о срыве адаптации. Неинвазивность данного способа позволяет широко использовать его в качестве метода диагностики донозологических состояний у детей. Способ не требует использования сложных приборов, что составляет его простоту и возможность применения в полевых условиях и массовых скриннингах. 4 табл.

Способ диагностики донозологических изменений в организме детей путем исследования биологической жидкости, отличающийся тем, что исследуют слюну с добавлением кристаллообразующего вещества NaCl посредством световой микроскопии и определяют процентное содержание однотипных морфоструктур кристаллов, где при содержании разрозненных кристаллов, разветвленных систем или линейных структур, а также кристаллов смешанного типа, занимающих площадь 30 - 70% от площади всего препарата, говорят об адаптационном напряжении организма, при содержании разрозненных кристаллов выше 70%, а разветвленных систем, линейных структур или кристаллов смешанного типа ниже 30% от общей площади препарата состояние оценивают как нормальное, при содержании разрозненных кристаллов ниже 70% от общей площади препарата, а разветвленных систем, линейных структур или кристаллов смешанного типа ниже 30% от общей площади препарата говорят о срыве адаптации.