ПРОТИВОЯЗВЕННОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2002 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для лечения больных с язвенной болезнью.

Известны синтетические противоязвенные препараты, например, гастроцепин, циметидин, фамотидин и др. Однако до настоящего времени применяемые синтетические противоязвенные средства имеют узконаправленное действие, направленное только на купирование симптомов заболевания, и нередко обладают побочными эффектами.

Известны противоязвенные препараты природного происхождения: бефунгин - экстракт чаги, плантаглюцид - экстракт листьев подорожника [7, 8].

Наиболее близким (прототипом) к предлагаемому изобретению является противоязвенное средство - отвар из цветков лабазника [1].

Проблема язвенной болезни занимает одно из центральных мест в гастроэнтерологии. В связи с этим расширение арсенала средств, обладающих противоязвенным действием, наиболее выраженными биологическими эффектами, из растительного сырья является актуальной задачей.

Задачей предлагаемого изобретения является расширение арсенала средств, обладающих противоязвенным действием, из природного сырья и повышение их биологического действия.

Поставленная задача достигается тем, что противоязвенное средство содержит водную вытяжку из высушенных измельченных листьев и стеблей лабазника вязолистного (ЛВ) при следующем соотношении компонентов, %: листья и стебли лабазника 10; вода - 90.

В народной медицине ЛВ широко используется как вяжущее средство при кровотечениях, геморрое, как противоревматическое, противовоспалительное, мочегонное и потогонное средства [3, 6]. Впервые показано, что настой листьев и стеблей ЛВ (в предлагаемом соотношении) оказывает противоязвенное действие. Применение листьев и стеблей ЛВ позволит не только расширить биологическое действие данного препарата, но и сделать его сбор более ресурсосберегающим. Экспериментально установлена возможность использования водной вытяжки из высушенных измельченных листьев и стеблей ЛВ в качестве противоязвенного средства в медицине. В литературе не найдены данные совокупности отличительных признаков и они явным образом не следуют для специалиста. Таким образом, предлагаемое решение соответствует критериям изобретения "новизна", "изобретательский уровень", "промышленная применимость".

Предлагаемое противоязвенное средство получают следующим образом: листья и стебли собранного в июле ЛВ высушивают, измельчают до 3 мм. Взвешенное количество измельченного сырья помещают в стеклянный, фарфоровый или эмалированный сосуд и заливают кипящей водой (при следующем соотношении компонентов: листья и стебли ЛВ 10%; вода 90%), настаивают в теплом месте 30 мин, остужают при комнатной температуре 45 минут, процеживают, растительный остаток хорошо отжимают, доводят извлечение до первоначального объема.

Конкретный пример выполнения способа.

10 г собранных в июле, высушенных и измельченных листьев и стеблей заливают до 100 мл кипящей водой и настаивают в теплом месте 30 мин, остужают при комнатной температуре 45 мин, процеживают, растительный остаток хорошо отжимают, доводят извлечение до первоначального объема (100 мл). Настой необходимо готовить ежедневно перед употреблением.

Для доказательства противоязвенного действия водной вытяжки из высушенных и измельченных листьев и стеблей ЛВ были проведены четыре исследования: первое - на модели острого стресса (нейрогенная язва [5]), второе - на модели резерпиновой язвы [2], третье - на модели аспириновой язвы [9], четвертое - на модели болевого стресса (острое асептическое воспаление [11]). В качестве препаратов сравнения использовали отвар из цветков ЛВ (прототип), плантаглюцид - 250 мг/кг (для моделей острого стресса, резерпиновой и аспириновой язв) и ацетилсалициловую кислоту - 300 мг/кг (для модели болевого стресса) [1, 7]. Исследование противоязвенной активности проводили в эксперименте на беспородных мышах массой 18-20 г, крысах линии Wistar массой 200-250 г. Экспериментальные животные были распределены на три группы: контрольная, группа сравнения, опытная. В группе сравнения в качестве препаратов сравнения использовали отвар из цветков ЛВ (прототип), плантаглюцид (250 мг/кг) или ацетилсалициловую кислоту (300 мл/кг) [1, 7]. В контрольной группе животные получали эквивалентный объем дистиллированной воды. В опытных группах животные получали настой листьев и стеблей лабазника в широком диапазоне доз. Животных содержали на обычном пищевом рационе в условиях вивария. Эвтаназию производили, соблюдая "Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных", утвержденные Министерством Здравоохранения России, путем дислокации шейных позвонков.

Полученные результаты обрабатывали статистически, используя для количественных характеристик непараметрический критерий Вилкоксона-Манна-Уитни, для качественных - метод углового преобразования Фишера [4].

При остром стрессе (модель нейрогенного язвообразования) у мышей язвы желудка являются одним из ведущих показателей и по своим патофизиологическим параметрам и происхождению наиболее близки к таковым у человека. Для изучения влияния предлагаемого нами средства из листьев и стеблей ЛВ на течение острого стресса в качестве препаратов сравнения были взяты отвар из цветков ЛВ (прототип) [1], плантаглюцид.

Конкретный пример выполнения первого эксперимента.

Для моделирования нейрогенной язвы предлагаемые нами средства или воду (в контрольной группе) вводили через зонд в желудок профилактическим курсом в течение 5 дней однократно, последнее введение - за 1 ч до воздействия на животных. Язвы нейрогенного происхождения получали путем стресс-подвешивания мышей за шейную складку на 18-22 ч по методу Добрякова [5]. После стресс-воздействия животных забивали. У мышей извлекали желудок, разрезали его по большой кривизне и с помощью лупы подсчитывали количество крупных (>1 мм), точечных (<1 мм), полосовидных язв и определяли степень гиперемии слизистой желудка по 3-балльной системе. Основные критерии эффективности: процент животных с язвами, степень изъязвления (среднее число язв на одно животное в группе), индекс Паулса (степень изъязвления х процент животных с язвами / 100%), противоязвенная активность (индекс Паулса в контроле / на индекс Паулса в группе).

Наши исследования показали, что в условиях острого стресса известный препарат плантаглюцид и отвар из цветков ЛВ (прототип) достоверно снижали общее количество язв в желудке на 69,2% и 49,7% (жесткая фиксация), 45,8% (иммобилизация) соответственно по сравнению с контролем и, как следствие, наблюдалось уменьшение степени изъязвления и индекса Паулса под действием данных препаратов (табл. 1). Однако настой из листьев и стеблей ЛВ проявлял во много раз превышающий противоязвенный эффект в отличие от препаратов сравнения. Так, предлагаемое средство в дозах 0,7; 10,0; 1,25; 5,0 мл/кг снижало общее количество язв в желудке в 22,1; 10,0; 7,4; 5,8 раза соответственно (р<0,001) по сравнению с контрольной группой, увеличивая противоязвенную активность до 110,5 (0,7 мл/кг), 24,6 (10,0 мл/кг), 12,3 (1,25 мл/кг), 7,4 (5,0 мл/кг). При этом наблюдалось увеличение числа животных без язв: в дозе 0,7 мл/кг до 80%, 10,0 мл/кг - до 60% и 5,0 мл/кг - до 40% в отличие от контрольной группы, где 100% животных имели повреждение слизистой желудка, и групп, получавших препараты сравнения (для плантаглюцида - 60%, для отвара цветков ЛВ - 93,8% (жесткая фиксация) и 42,2% (иммобилизация) животных с язвами) (табл. 1). Полосовидные язвы не были обнаружены ни в одной из групп животных данного эксперимента.

Второй эксперимент был выполнен на модели резерпиновой язвы [2], так как известно, что резерпин является химическим агентом, участвующим в процессе язвообразования [7]. Исследуемый растительный препарат, препараты сравнения - отвар из цветков ЛВ (прототип), плантаглюцид и воду (контрольная группа) вводили через зонд в желудок профилактическим курсом в течение 5 дней однократно, последнее введение - за 1 ч до воздействия на животных. Язвы химического происхождения получали однократным внутрижелудочным введением 30 мг/кг резерпина с последующим охлаждением животных до 7^oС в течение 2 ч. Число язв подсчитывали через 1 сутки. У мышей извлекали желудок, разрезали его по большой кривизне и с помощью лупы подсчитывали количество крупных (>1 мм), точечных (<1 мм), полосовидных язв и определяли степень гиперемии слизистой желудка по 3-балльной системе. При обработке результатов основными критериями эффективности явились процент животных с язвами, степень изъязвления (среднее число язв на одно животное в группе), индекс Паулса (степень изъязвления х процент животных с язвами / 100%), противоязвенная активность (индекс Паулса в контроле / на индекс Паулса в группе).

Результаты проведенного исследования показали, что настой из листьев и стеблей ЛВ обладает противоязвенной активностью. Об этом свидетельствовало достоверное уменьшение на 70,8% общего количества язв у животных, получавших препарат в дозе 1.25 мл/кг, а также тенденция к их уменьшению в дозах 10,0; 0,7 мл/кг (на 48,7% и 34,2% соответственно) в отличие от контроля. При этом противоязвенная активность у мышей, принимавших настой из листьев и стеблей ЛВ, наблюдалась во всех исследуемых дозах, что превышало таковую в группах мышей, получавших препараты сравнения. В то же время используемый препарат сравнения - отвар из цветков ЛВ (прототип) снижал общее количество язв по сравнению с контрольной группой всего на 48,6%, а плантаглюцид вообще не изменял данного показателя (табл. 2). Назначение исследуемого фитопрепарата увеличивало число животных, у которых язвы не были обнаружены вообще: до 40% - в дозе 1,25 мл/кг, до 33,3% -в дозе 10,0 мл/кг, до 28,6% - в дозе 0,7 мл/кг, в то время как у 100% животных, принимавших воду (контроль) или плантаглюцид, наблюдались повреждения слизистой желудка в виде точечных язв (табл. 2). Полосовидные язвы не были обнаружены ни в одной из групп животных данного эксперимента.

Третий эксперимент - изучение защитного действия настоя листьев и стеблей ЛВ на модели аспириновой язвы [9]. Исследуемый растительный препарат, препараты сравнения (отвар из цветков ЛВ, плантаглюцид) или воду (контрольная группа) вводили белым крысам через зонд в желудок профилактическим курсом в течение 5 дней однократно. Животных за 24 ч до воздействия ульцерогенного агента лишали пищи. Повреждение слизистой оболочки желудка вызывали введением белым крысам ацетилсалициловой кислоты в дозе 128 мг/кг внутрижелудочно в течение суток дважды с интервалом в 4 ч. За 1 ч до второго введения аспирина животные получали исследуемые препараты. Число язв подсчитывали через 1 сутки. У крыс извлекали желудок, разрезали его по большой кривизне и с помощью лупы подсчитывали количество крупных (>1 мм), точечных (< 1 мм), полосовидных язв и определяли степень гиперемии слизистой желудка по 3-балльной системе. Основными критериями эффективности явились: процент животных с язвами, степень изъязвления (среднее число язв на одно животное в группе), индекс Паулса (степень изъязвления х процент животных с язвами / 100%), противоязвенная активность (индекс Паулса в контроле / на индекс Паулса в группе).

Полученные нами экспериментальные данные подтверждают, что препарат лабазника во всех исследуемых дозах (5,0; 2,5; 1,25; 0,35 мл/кг) достоверно уменьшал общее число язв на 56,8%, 66,7%, 59,5%,73,2% соответственно, аналогично снижая число язв менее 1 мм при отсутствии более крупных по сравнению с контрольной группой животных (табл.3). Об этом свидетельствовала противоязвенная активность: для дозы 5,0 мл/кг - 2,3; 2,5 мл/кг - 3,0; 1,25 мл/кг - 2,5; 0,35 мл/кг - 3,7. При этом у контрольных животных, в отличие от вышеперечисленных групп, отмечалось наличие крупных ( > 1 мм) язв. При сравнении групп, получавших воду (контроль) и препарат сравнения (плантаглюцид), также наблюдались достоверные различия. Однако последние были менее выраженными (снижение общего числа язв на 54,8% по сравнению с контролем, противоязвенная активность - 2,2), чем в наблюдаемых группах животных, принимавших настой лабазника (табл.3). Полосовидные язвы не наблюдались ни в одной из групп животных этого эксперимента.

Четвертый эксперимент был выполнен на модели болевого стресса, развивающегося на фоне острой воспалительной реакции [11]. Болевой стресс, как обязательное составляющее любого воспаления, является одним из ведущих компонентов в патогенезе язвенной болезни и оказывает выраженное деструктивное действие на слизистую желудка. Препаратом сравнения в этой серии экспериментов являлась ацетилсалициловая кислота, так как содержащийся в листьях и стеблях ЛВ гликозид салицин под действием салипазы гидролитически расщепляется на глюкозу и спирт салигенин, который в свою очередь окисляется в салициловую кислоту [10].

Предлагаемое нами средство, ацетилсалициловую кислоту, воду (контрольная группа) вводили через зонд в желудок профилактическим курсом в течение 5 дней однократно, последнее - за 1 ч до воздействия. Острое асептическое воспаление вызывали введением под плантарный апоневроз левой задней лапки мыши 0,05 мл 1% раствора каррагенина на изотоническом растворе хлорида натрия. Через 3,5 ч животных забивали. У мышей извлекали желудок, разрезали его по большой кривизне и с помощью лупы подсчитывали количество крупных (>1 мм), точечных (<1 мм), полосовидных язв и определяли степень гиперемии слизистой желудка по 3-балльной системе. Основные критерии эффективности: процент животных с язвами, степень изъязвления (среднее число на одно животное в группе), индекс Паулса (степень изъязвления х процент животных с язвами / 100%), противоязвенная активность (индекс Паулса в контроле / на индекс Паулса в группе).

Защитное действие предлагаемого нами средства на слизистую желудка оценивалось по достоверному (р<0,01) снижению общего количества язв на 66-100% для всего диапазона доз (10,0-0,175 мл/кг). При этом 100% мышей в группах, принимавших настой ЛВ в дозах 10,0; 5,0; 1,25; 0,35 мл/кг, вообще не имели каких-либо изменений на слизистой. Противоязвенная активность исследуемого препарата во всех изученных нами концентрациях многократно превышала 2 единицы (табл. 4). Полосовидные, крупные язвы и гиперемия слизистой желудка не наблюдались ни в одной группе животных.

Таким образом, предлагаемое средство обладает выраженной противоязвенной активностью. При сравнении с отваром из цветков лабазника (прототип), плантаглюцидом и ацетилсалициловой кислотой предлагаемое средство из листьев и стеблей лабазника вязолистного (Filipendula ulmaria (L.) Maxim.) не уступает по эффективности, а в ряде случаев и превосходит ее (табл. 1, 2, 3, 4).

Список литературы
1. Барнаулов О. Д. , Денисенко П.П. Противоязвенное действие отвара из цветков лабазника вязколистного - Filipendula ulmaria (L.) Maxim. // Фармакол. и токсикол. - 1980. - 6. - С.700-705.

2. Барнаулов О.Д., Маничева О.А., Комиссаренко Н.Ф. Сравнительная оценка влияния некоторых флавоноидов на альтерацию стенки желудка у резерпированных мышей // Хим. - фармац. Журнал - 1983. - 8. - С.946-951.

3. Горбунова Т. А. Лечение растениями. Рецептурный справочник. - М., 1996. - 304 с.

4. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. - Л., 1978. - 193 с.

5. Добряков Ю. И. Скрининговый метод оценки антистрессорного действия препаратов // Всесоюзный симпозиум "Стресс и адаптация": Тез. докл. - Кишинев, 1978. - 172 с.

6. Кучеров В.Е., Лазарев Д.Н. Целебные растения и их применение. - Уфа, 1993. - 288 с.

7. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М., 1993, Т.1. - 731 с.

8. Муравьев И.А. Технология лекарств. - М.: Медицина, 1980, Т.1 - 704 с.

9. Оболенцева Г. В., Хаджая Я.И. О влиянии некоторых природных полисахаридов на дистрофические процессы в желудке // Фармакологическая регуляция обменных процессов: Тез. докл. респ. конф. - Л., - 1972. - С.121-122.

10. Фармакологическая регуляция воспаления / Тринус Ф.П., Клебанов Б.М., Ганджа И.М., Сейфулла Р.Д. - Киев: Здоров'я, 1987. - 144с.

11. Winter C A., Risley, Nuss G.W. Carragenininduced edema in hind paw of rat as an assay for antiinflam matory drags // Proc. Soc. Expr. Biol. and Med. - 1962. - Vol.111, 3. - Р. 544 - 547.

Изобретение относится к области медицины, а именно к созданию лекарственных средств природного происхождения, которое может быть использовано в гастроэнтерологии при лечении больных с язвенной болезнью. Предложено средство, представляющее собой водную вытяжку листьев и стеблей лабазника вязолистного. Предложенное средство не обладает побочным действием и проявляет высокое терапевтическое воздействие. 4 табл.

Противоязвенное средство, содержащее водную вытяжку из высушенной и измельченной надземной части лабазника вязолистного, отличающееся тем, что в качестве надземной части используют листья и стебли лабазника вязолистного при следующем соотношении компонентов, вес. %:
Листья и стебли лабазника вязолистного - 10
Вода - 90