ИНДУКТОР АПОПТОЗА Российский патент 2000 года по МПК A61K35/00 A61K35/12 

Изобретение относится к медицине, а именно к использованию органоспецифических гомеопатических препаратов, преимущественно стимулирующих миелоидный и лимфоидный ростки кроветворения в качестве индукторов апоптоза.

Существует два типа гибели клеток-некроз и апоптоз. Первый ассоциируется с действием вредоносных агентов и обстоятельств, приводящих к нарушению целостности клеточной мембраны (вследствие повреждения или формирования пор). При этом утрачивается способность клетки регулировать осмотическое давление, в результате чего клетка разбухает и разрывается. Окружающее тканевое пространство пропитывается клеточным содержимым, что вызывает воспалительную реакцию. Апоптоз характеризует более мягкий процесс клеточной гибели и как термин предлагает серию морфологических изменений в процессе гибели. Слово "апоптоз" по-гречески означает "опадание листьев с деревьев". Эти изменения отличаются от изменений морфологии клетки и ее окружения при некрозе. Они ассоциированы с нормальной тканевой регуляцией.

Современный интерес к апоптозу возник после того, как понятие апоптоза слилось с представлениями о запрограммированной смерти клеток, информация о которой закодирована в клеточном геноме и подается регуляции. Таким образом, апоптоз является такой же фундаментальной генетической программой, как пролиферация, дифференцировке или пребывание клеток в покоящемся состоянии (А.Н. Маянский и сооавт. Нижегородский медицинский журнал. 1977, N 2, с. 70 - 76).

Общепризнано, что апоптоз занимает ключевые позиции в физиологии эмбрионального морфогенеза, метаморфозе, элиминации аутореактивных T-лимфоцитов, уничтожении опухолевых и вирусинфицированных клеток. Широко обсуждается его роль в патологии при аутоиммунных заболеваниях, злокачественных опухолях, дегенеративных и атрофических процессах.

Большинство факторов, вызывающих некроз клеток, способно инициировать апоптоз, если они действуют в малых дозировках. К ним относятся физические и химические факторы, давно известные как цитоксические агенты. Но в отличие от некроза, апоптоз наблюдается не только при внешнем повреждении. Он возникает и как реакция на эндогенные факторы - гормоны, цитоксины, прямые межклеточные контакты. Такой апоптоз основан на рецепторе - зависимом взаимодействии с индуциирующими агентами и определяется типом клеток, степенью их зрелости, физиологического состояния и природой стимулов.

В настоящее время создано большое количество способов индукции и изучения апоптоза. Однако все они включают использование сложного, а часто и уникальное оборудования, дорогостоящих реактивов и систем для культивирования клеточных популяций (Программированная клеточная гибель. /Под ред. В.С.Новикова, - С.-Пб.: Наука, 1996, с. 276).

Однако данная методика является трудоемкой и индукции апоптоза может быть осуществлена in vitro.

Задачей настоящего изобретения является упрощение индукции апоптоза и проведение его в условиях in vivo.

Для решения поставленной задачи индукции апоптоза осуществляется с использованием органоспецифических гомеопатических препаратов, преимущественно стимулирующих миелоидный и лимфоидный ростки кроветворения.

Индукция апоптоза осуществляется методом "кожное окно". При этом на предметное стекло, извлеченное из 70%-ного спиртового раствора, после его высыхания фиксируют на скарифицированном участке предплечья на 24 часа, на другое предметное стекло наносят с помощью микропипетки 3 - 5 капель 70%-ного спиртового раствора органоспецифического гомеопатического препарата и после его высыхания фиксируют на скарифицированном участке свободного предплечья на 24 часа, затем стекла снимают, красят по Романовскому и под световым микроскопом проводят сравнительную морфологическую оценку с подсчетом процента клеток, находящихся в апоптозе, в каждом "кожном окне".

Метод оценки функционального состояния нейтрофилов, моноцитов и макрофагов в "кожном окне" был впервые предложен "Rebuck J.W.Crowley J.N. Ann. N.Y. Acad. Sci 1955, V. 59, p. 757 - 805. Метод заключается в том, что на скарифицированный участок кожи на внутренней поверхности предплечья фиксируют предметное стекло на 24 часа, после снятия стекла его подвергают окраске по Романовскому и под световым микроскопом подсчитывают клетки и описывают их морфологические особенности, которые отражают состояние миелоидного ростка кроветворения и способность организма реагировать на изменяющиеся условия гомеостаза.

Учение об апоптозе как о физиологически детерминированной клеточной смерти было создано около 25 лет назад (Kerr J.F.R. et all. Brit. J. Cancer 1972, - V. 26, p. 239 - 257). В рамках этого учения накоплены многочисленные сведения о гибели клеток не вследствие действия неблагоприятных факторов среды или токсических агентов, в объективной гибели, обусловленной физиологическими сигналами, передаваемыми с мембранных рецепторов в ядро.

При оценке результатов, полученных на контрольных "кожных окнах", выявлено, что среди клеточных элементов преобладают сегментоядерные нейтрофильные гранулоциты - 60-90%. Остальные клетки представлены преимущественно моноцитарномакрофагальными элементами. Процент клеток, находящихся в апоптозе, составил в среднем 5% к спонтанному апоптозу в контроле.

У 14 человек на предметное стекло в опытном "кожном окне" нанесен органоспецифический гомеопатический препарат (ОСГП), стимулирующий миелоидный росток кроветворения в потенциях C3-C30. Процент сегментоядерных нейтрофилов, вступивших в апоптоз, составил 40% (от 20% до 80%).

У 16 человек на предметное стекло в опытном "кожном окне" нанесен ОСГП, стимулирующий миелоидный росток кроветворения, в потенциях C3-C30.

Процент сегментоядерных нейтрофилов, вступивших в апоптоз, составил 40% (от 20% до 80%).

У 16 человек на предметное стекло в опытном "кожном окне" нанесен ОСГП, стимулирующий миелоидный росток кроветворения, в потенциях C3-C30.

Процент сегментоядерных нейтрофилов, вступивших в апоптоз под влиянием этого препарата, составил 60% (от 40% до 100%).

Таким образом, методика "кожного окна" с использованием контрольного и опытного стекол с ОСГП является иллюстрированной и экономичной.

Предложенную методику с использованием ОСГП в качестве индукторов апоптоза, в дальнейшем можно использовать как критерий точного подбора препаратов пациентам с различной патологией. Таким образом индукция образом индукция апоптоза является одним из наиболее существенных механизмов действия ОСГП как в методике "кожного окна", так и в условиях целостного организма.

Изобретение относится к медицине, а именно к использованию органоспецифических гомеопатических препаратов. В качестве индукторов апоптоза предложены органоспецифические гомеопатические препараты, стимулирующие миелоидный и лимфоидный ростки кроветворения. Данный препарат можно использовать как критерий точного подбора препаратов пациентам с различной патологией. 1 з.п.ф-лы.

1. Применение органоспецифических гомеопатических препаратов в качестве индукторов апоптоза. 2. Применение по п.1, отличающееся тем, что используют органоспецифические гомеопатические препараты, стимулирующие миелоидный и лимфоидный ростки кроветворения.