СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТАКТИКИ ИММУНОДЕПРЕССИВНОЙ ТЕРАПИИ ПРИ МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКОМ СИНДРОМЕ Российский патент 2003 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для диагностики активности Т-лимфоцитов при миелодиспластическим синдроме (МДС).

Миелодиспластический синдром (МДС) представляет собой гетерогенную группу клональных прогрессирующих заболеваний системы крови с высоким риском трансформации в острый лейкоз (ОЛ). На основании клинико-морфологических критериев, согласно франко-американо-британской классификации (Bennet J.M. et al. Proposals for the classification of myelodysplastic syndromes /Brit. J. Haemat.- 1982.- Vol. 51.- P. 189-199), диагностируют пять форм МДС - рефракторную анемию (РА), РА с кольцевидными сидеробластами (РАС), РА с избытком бластов (РАИБ), РА с избытком бластов в трансформации (РАИБТ) и хронический миеломоноцитарный лейкоз (ХММЛ).

Одним из основных патогенетических механизмов МДС является высокий уровень программированной клеточной гибели, другими словами, апотоза (Новиков B.C. Программированная клеточная гибель /СПб.: Наука, 1996. - 276с.). Инициализация данного процесса осуществляется или на генетическом уровне, или определенными субпопуляциями Т-лимфоцитов (Т-супрессорами и Т-киллерами). Следует отметить, что иммунная система организма не только отвечает за противоопухолевый иммунитет, но и активно участвует в регуляции гемопоэза путем прямых клеточных взаимодействий или опосредованно через цитокины.

Известно, что абсолютное и относительное количество лимфоцитов не отражает функциональную активность лимфоцитов. В связи с этим был предложен метод оценки функциональной активности Т-лимфоцитов в тесте активного розеткообразования с левамизолом (декарисом) in vitro (Ляпон А.О. Комплексный анализ Т-лимфоцитов в тесте розеткообразования /Лаб. Дело-1980.- 1.- С.36-39). Предлагаемый в данной работе тест был использован, с высокой эффективностью, для определения активности Т-лимфоцитов при гипопластической анемии (АС СССР 1651213 от 23.05.91, кл. G 01 N 33/53).

Исследования нарушений различных звеньев клеточного иммунитета у больных МДС немногочисленны и характеризуют, в основном, относительное содержание популяций и субпопуляций лимфоцитов (Яворковский Л.И. и соавт. Миелодиспластический синдром. Первичная миелопоэтическая дисплазия /Рига "ЗИНАТНЕ".- 1992.- 168 с.). Недостатком прототипа является отсутствие методов определения функциональной активности лимфоцитов.

В нашей клинике впервые проведены исследования по изучению функциональной активности Т-лимфоцитов у больных МДС для определения показаний к иммунодепрессивной терапии данной категории пациентов.

Цель изобретения - повышение точности определения активности Т-лимфоцитов при диагностике и лечении МДС.

Поставленная цель достигается следующим образом: кровь из вены больного в количестве 10 мл стабилизировали гепарином из расчета 15 Ед/мл и разводили физиологическим раствором в соотношении 1:1. Обработанную таким образом кровь наслаивали на фикол-верографин плотностью 1,077 г/мл и центрифугировали 30 минут при 400-500g. Собирали слой лимфоцитов с интерфазного кольца и дважды отмывали клетки раствором Хенкса. Для постановки пробы с левамизолом in vitro в одну пробирку вносили 0,1 мл взвеси выделенных лимфоцитов с содержанием клеток 2•10⁹/л, а в другую - 0,1 мл взвеси лимфоцитов в этой же концентрации, предварительно проинкубированных в соотношении 1:1 с левамизолом (10^-5) при 20^oС в течение 1 часа. Затем в каждую из пробирок добавляли 0,1 мл 0,5% взвеси эритроцитов барана и 0,1 мл 1% раствора сыворотки AB(IV) группы крови. Инкубировали 15 минут в термостате при 37^oС, центрифугировали 5 минут при 270-330 g и помещали на 18 часов в холодильник при 4^oС, после чего в каждой из пробирок производили подсчет в камере Горяева процентного содержания Т-лимфоцитов. Определяют индекс сдвига в реакции Т-розеткообразования по отношению процентного содержания розеткообразующих клеток до инкубации к процентному содержанию их после инкубации с левамизолом in vitro.

На основании проведенных исследований установлено, что использование данного теста у больных МДС позволяет диагностировать функциональную активность Т-лимфоцитов при значении индекса сдвига 1,13 и более и отсутствие активности Т-клеток при значении 0,9 и менее. В результате изучения обоснованности иммунодепрессивной терапии у больных МДС мы получили следующие данные: назначение иммунодепрессантов при индексе сдвига 1,13 и более сопровождается положительным клиническим эффектом в 82% случаев, а при 0,9 и менее в 17%.

Пример 1. Больной И., 70 лет, наблюдался в гематологической клинике с 15.06.98. На основании комплексного обследования установлен диагноз: миелодиспластический синдром, рефракторная анемия с избытком бластов.

При поступлении состояние больнго тяжелое. Бледность, кровоизлияния на коже и слизистых. Фебрильная гипертермия, слабость, утомляемость. В анализе крови: Hb - 68 г/л, Эр. - 2.5•10¹²/л, Лек. - 1,0•10⁹/л, мбл - 1%, м/м - 2%, п/я - 4%, с/я - 38⁹/л, лф - 30%, мон - 15%, тромб. - 10•10⁹/л, СОЭ - 70 мм/ч. В миелограмме -повышено содержание миелобластов - 9,8%. Проведена индукционная терапия малыми дозами цитозара. Однако состояние пациента оставалось тяжелым - сохранялась анемия, тромбоцитопения, агранулоцитоз, высокая зависимость от гемотрансфузий. При исследовании иммунологического статуса индекс сдвига в тесте активного Т-розеткообразования с левамизолом in vitro составил 1,56. На основании этого больному был назначен курс иммунодепрессии метилпреднизолоном по интермитирующей схеме в течение 3-х недель. После проведенного лечения состояние пациента стабилизировалось - повысились показатели гемограммы (Нb - 100 г/л, Лейк. - 2.5•10⁹/л, тромб. - 120•10⁹/л), сократилась зависимость от гемотрансфузий, нормализовалась температура. Больной выписан на амбулаторное лечение в удовлетворительном состоянии.

Пример 2. Больной К., 65 лет, наблюдался в гематологической клинике с 10.04.95. На основании комплексного обследования установлен диагноз: миелодиспластический синдром, рефракторная анемия.

При поступлении состояние больного средней степени тяжести. Умеренная бледность кожи и слизистых. Слабость, утомляемость. В анализе крови: Нb - 67 г/л, Эр. - 2,2•10¹²/л, Лек. - 2,8•10⁹/л, п/я - 1%, с/я - 41%, лф - 77%, мон - 1%, тромб. - 60•10⁹/л, СОЭ - 40 мм/ч. В миелограмме - пониженная клеточность, костный мозг полиморфный, имеет место дисплазия всех ростков кроветворения, повышено содержание эритроидных элементов, среди которых встречаются клетки с признаками мегалобластоидности. По иммунограмме индекс сдвига - 0,74. Учитывая гипоклеточность костного мозга и панцитопению с относительным лимфоцитозом, пациенту проведена иммунодепрессивная терапия преднизолоном по интермитирующей схеме в течение 3-х недель. После проведенного лечения эффекта не получено - сохранялась панцитопения и зависимость от гемотрансфузий. Больной переведен на монотерапию 6-меркаптопурином.

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии. Способ заключается в том, что у больного до начала лечения в периферической крови определяют содержание Т-лимфоцитов и их функциональную активность в тесте активного Т-розеткообразования с левамизолом in vitro с последующим вычислением индекса сдвига. При значении указанного показателя 1,13 и более диагностируют активность Т-лимфоцитов и назначают курс иммунодепрессивной терапии, а при значении 0,9 и менее - отсутствие активности. Изобретение позволяет более точно определить активность Т-лимфоцитов для определения показаний к иммунодепрессивной терапии.

Способ определения тактики иммунодепрессивной терапии при миелодиспластическом синдроме, включающий иммунологическое обследование, отличающийся тем, что исследуют лимфоциты периферической крови больного в реакции Т-розеткообразования до и после инкубации с левамизолом in vitro с последующим вычислением индекса сдвига, и при значении указанного показателя 1,13 и более диагностируют активность Т-лимфоцитов и назначают курс иммунодепрессивной терапии, а при значении 0,9 и менее - отсутствие активности.