Способ определения внутрисосудистого свертывания крови Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к исследованию крови, и может быть использовано при лабораторной диагностике внутрисосудисто го свертывания крови.

Цель изобретения - повышение чувствительности способа диагностики вну трисосудистого свертывания крови за счет отделения и количественного определения поврежденных (мацериро- ванных) эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом.

Предварительно готовят 36,17%-ный раствор верографина и 9%-ньй раствор фиколла. Смешивают 10 частей раствора верографина с 24 частями раствора фиколла. Полученньй раствор имеет плотность 1,077.

Из.зоны исследуемого силикониро- ванной иглой берут кровь и смешивают ее в силиконированной пробирке с 3,8%-ным раствором цитрата натрия в соотношении 9:1. 2 мл стабилизированной крови разводят 6 мл физиологического раствора хлорида натрия В силиконированную пробирку набирают 3 мл раствора фиколла-верографи- на, сверху, при наклонном положении пробирки (под углом 30-35 ),, пипеткой осторожно наслаивают 8 мл разведенной крови. Затем пробирку центрифугируют в течение 40 мин при 400 g

, После центрифугирования содержимо пробирки разделяется на 3 слоя: верх НИИ - разведенная физиологическим раствором плазма, лишенная клеток/ средний слой - раствор фиколла-веро- графина, содержащий клетки крови, плотность которых меньше 1, ний слой - клетки крови, имеющие плотность выше 1,077. Между верхним и средним .слоями образуется видимое кольцо из всплывших клеток с плотностью менее 1,077. У здоровых доноров клеточное кольцо состоит, преимущественно, из лимфоцитов, моноцитов и тромбоцитов. у больных с внут- рисосудистым свертыванием крови в клеточном кольце.в большом количестве обнаруживаются поврежденные эритроциты.

Средний слой вместе с клеточным кольцом переносят пипеткой в другую пробирку и отмывают ,6-кратным объемом физиологического раствора хлорида натрия 2 раза, затем центрифугируют в течение 10 мин при 400 g.

0

15

20

25

-

.

е -35

2886082

Осадок ресуспендируют в 2 мл физиологического раствора хлорида натрия.

Подсчет количества эритроцитов в осадке производят в камере Горяе- ва. Для этого 0,,1 мл осадка разводят 1,9 мл физиологического раствора хлорида натрия, заполняют полученным разведением камеру Горяева и подсчитывают эритроциты в 100 средних квадратах. Полученная цифра умножается на 5040, Результат соответствует концентрации эритроцитов в 1 л раствора. Так как объем физиологического раствора, взятого- для разведения осадка, равен объему первоначально взятой крови (2 мл). то и полученное количество эритро- цитов среднего слоя в растворе равно их количеству в цельной крови.

У здоровых доноров плотность эритроцитов крови колеблется в интервале 1,070-1,090, но большинство эритроцитов имеет плотность 1,085±0,0025. Количество эритроцитов, имеющих плотность меньше 1,077 и выделяющихся при центрифугировании в среднем слое и клеточном кольце, не превьшгает у здоровых доноров крови.

У больных с внутрисосудистым свертыванием крови повреждение мембраны эритроцитов приводит к частичной потере вещества и снижению их плотности. При этом количество поврежденных эритроцитов в среднем слое и клеточном кольце возрастает и превышает этот показатель у здоровых людей в 10--100 раз.

Пример 1. Больная Д., 22 года. На фоне раннего излития околоплодных вод и длительного безводного периода наступила частичная отслойка плаценты с последующим про- фузным маточным кровотечением, кровоизлияниями в местах инъекций, острой почечной и дыхательной недостаточностью. При исследовании системы гемостаза выявлены глубокая .гипокоагу - ляция, снижение всех факторов свертывания, антитромбина-Ш, плазминоге- на, положительные тесты паракоагуля- ции, тромбоцитопения. На основании всех перечисленных данных бьш диагностирован острый акушерский ДВС-син- дром, фаза гипокоагуляции. Проведено определение фрагментированных эритроцитов известным и предлагаемым способами. Известным способом обнару30

40

45

50

55

жено 105-10 /л фрагментированных

эритроцитов, а предлагаемым - 387 х X .

Пример 2. Больной С., 62 года. После произведенной адено- мэктомии у больного наступила анурия затем кровотечение из дренажа, операционного шва и из мест инъекций. При исследовании системы гемостаза выявлены гипокоагуляция, положительные тесты паракоагуляции, гипофибриноге- немия, тромбоцитопения и повышение уровня продуктов деградации.фибрина. При определении фрагментированных эритроцитов обоими способами выявлено: предлагаемым способом 44- 10 /л фрагментированных эритроцитов, известным способом фрагментация эритроцитов не выявлена. На основании кли- нико-лабораторных данных у больного диагностирован острый послеопера- ционный ДВС-синдром, фаза гипокоагу- ляции.

Использование предлагаемого способа позволяет повысить чувствитель- ность диагностики внутрисосудистого свертывания крови за счет вьщеления и подсчета поврежденных эритроцитов При внутрисосудистом свертывании крови снижается деформобильность эритроцитов и повреждается их мембрана фибрином отложившимся в микрососудах. Это приводит к частичной потере вещества эритроцитов и сниже- нию их плотности. При осуществлении предлагаемого способа поврежденные эритроциты отделяются от обшей массы эритроцитов и вьщеляются в отдельное клеточное кольцо, что облегчает их выявление и подсчет. В крови здоровых людей (контроль) количество эритроцитов в этом слое колеблется в пределах (1-4)-10 /л. При внутрисосудистом свертывании крови регистрируется значительное увеличение их количества в выделяемом слое (в 10 |И более раз) .

Из таблицы видно, что при ис--- пользовании известного способа повы- шенная фрагментация эритроцитов обнаружена лишь у 7 из 24 больных (29%), а в предлагаемом способе - у 20 больных (83%). При этом выяснилось, что известный способ выявля- ет повьшенную фрагментацию лишь при очень высоком числе поврежденных эритроцитов, выявляемых предлагаемым способом (более 60 10 /л).

Результаты обследования больных с диссеминированным внутрисосудистым свертыванием приведены в таблице.

25 30 45

35

25 30 45

40

512886086

Формула иаобретения разводят физиологическим раствором

и центрифугируют в градиенте плотносСпособ определения внутрисосудис- ти фиколл-верографина, отделяют слой, того свертывания крови путем биохи- имеющий плотность .1,077, подсчитьша- мЯческого исследования крови под 5 юТ в нем число эритроцитов и при уве- микроскопом, отличающийся личении его относительно нормы опре- тем, что, с целью повышения чувст- деляют внутрисосудистое свертывание вительности способа, про Ву крови крови.

Изобретение относится к медицине, в частности к исследованию крови, и может быть использовано при лабораторной диагностике внутрисосудисто- го свертывания крови. Цель изобретения - повышение чувствительности способа диагностики внутрисосудисто- го свертывания крови за счет отделения и количественного определения поврежденных (мацерированных) эритроцитов. Стабилизированную и разведенную физиологическим раствором кровь исследуемого больного наслаивают на раствор верографина и фиколла с плотностью 1,077. После центрифугирования содержимое пробирки разделяется на 3 слоя: верхний - разведенная физиологическим раствором плазма, лишенная клеток, средний слой - раствор фиколла - верографина, содержащий клетки крови, плотность которых меньше 1,077, нижний слой - клетки крови, имеющие плотность вьш1е 1,077. Между верхним и средним слоем образуется видимое кольцо из всплывших клеток с плотностью менее 1,077. У здоровых доноров клеточное кольцо состоит преимущественно из лимфоцитов, моноцитов и тромбоцитов, у больных с внутрисо- судистым свертыванием крови в клеточном кольце в большом количестве обнаруживаются поврежденные эритроциты, которые отделяются и подсчитываются в камере Горяева. При внутрисосудис- том свертывании крови регистрируется значительное увеличение количества поврежденных эритроцитов (в 10 и более раз) по сравнению с контролем. I (Л to СХ) СХ) аР5