СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОТКАНИ ДЛЯ КСЕНОПРОТЕЗИРОВАНИЯ Российский патент 2000 года по МПК A01N1/00 A61L2/16 

Изобретение относится к области медицины, в частности к протезированию клапанов сердца.

Известны способы обработки биоткани с целью подавления ее минерализации путем контактирования ткани с водным раствором четвертичной аммониевой соли, в составе которой есть, по крайней мере, один из алкильных радикалов, содержащих 7-15 атомов углерода [Авт. св. СССР N 4405327, МКИ⁶ A 61 F 2/24, 1983] , а также способ, включающий обработку биоткани 2-5%-ным раствором диглицидилового эфира этиленгликоля с последующей обработкой раствором гепарина с концентрацией не менее 100 МЕ/мл [Пат.РФ N 2008767 C1, МКИ⁶ A 01 N 1/00, 1994].

Недостатком этих способов является тот факт, что обработка раствором четвертичной аммониевой соли либо последовательная обработка диглицидиловым эфиром этиленгликоля и гепарином лишь экранируют поверхность биоткани, ограничивая, таким образом, доступ минеральных (кальциевых и фосфатных) соединений, и при малейшем нарушении этого "экрана" процесс минерализации развивается. Кроме того отсутствие ферментативной обработки не обеспечивает снижение иммуногенности.

Наиболее близким к заявляемому является способ подготовки биоткани для ксенопротезирования путем помещения после ферментативной обработки и отмывки поочередно в 0.2%- и 0.5%-ный раствор глутарового альдегида в фосфатном буфере и трехнедельной выдержки биоткани в 0.5%-ном растворе глутарового альдегида при еженедельной замене указанного раствора [Авт.св. СССР N 1398855, МКИ⁶ A 61 F 2/24, 1988].

Недостатками данного способа являются: большой расход глутарового альдегида (избыток глутарового альдегида может привести к дополнительной минерализации биоткани - кальцификации), использование фосфатного буфера для приготовления раствора глутарового альдегида, что не исключает образования нежелательных фосфатных образований на поверхности биоткани, а также необходимость строгого поддержания достаточно низкой температуры 4^oC растворов глутарового альдегида.

Предлагаемый способ устраняет указанные недостатки.

Целью заявляемого способа является уменьшение времени подготовки биоткани для ксенопротезирования при сокращении расхода реактивов.

Сущность способа состоит в том, что биоткань для ксенопротезирования после ферментативной обработки и отмывки последовательно помещают в 0.10-0.15%- и 0.25-0.35%-ный раствор глутарового альдегида в боратном буфере при температуре 5-25^oC, выдерживают клапан в более насыщенном растворе, трехкратно заменяя его, и стерилизуют.

Отличием заявляемого способа является то, что концентрация первого раствора глутарового альдегида составляет 0.10-0.15%, концентрация второго раствора глутарового альдегида составляет 0.25-0.35%, в качестве растворителя глутарового альдегида используют боратный буфер, а выдержку биоткани ведут при температуре 5-25^oC. Помещение биоткани для ксенопротезирования в глутаровый альдегид необходимо для дубления биоткани для ее структурной стабилизации и увеличения иммуногенности.

Последовательное увеличение концентрации альдегида позволяет провести дубление сначала в более мягких условиях и дать возможность проникнуть глутаровому альдегиду во внутренние слои биоткани, образуя внутренние сшивки, а затем закрепить эффект, увеличив число сшивок в поверхностных слоях.

Замена фосфатного буфера на боратный уменьшает возможность минерализации биоткани за счет образования фосфатов при использовании фосфатного буфера.

Снижение концентрации глутарового альдегида в заявляемом способе по сравнению с прототипом позволяет не только снизить расход альдегида, но и уменьшает возможность проявления асептического некроза, к которому может привести избыток глутарового альдегида.

Снижение концентрации альдегида при этом не увеличивает времени дубления, так как температура, при которой оно производится, выше используемой в прототипе.

Использование для последовательной обработки концентраций глутарового альдегида ниже 0.10 и 0.25% могут не обеспечить качественное дубление, в то время как превышение концентраций 0.15 и 0.35% глутарового альдегида не имеет смысла, так как необходимый эффект достигается уже в указанном интервале.

Повышение температуры до 5-25^oC по сравнению с прототипом (4^oC) позволяет улучшить качество дубления за счет более глубокого проникновения глутарового альдегида во внутренние слои биоткани и ускорить протекание процесса.

Осуществление дубления при температуре выше 25^oC не имеет смысла, так как процесс протекает и так достаточно быстро, а повышенная температура требует введения в процесс дополнительной аппаратуры - термостатов или термошкафов.

Трехкратная смена раствора альдегида используется для поддержания постоянной концентрации и, таким образом, поддержания равновесных условий, которые могут нарушаться в процессе дубления.

Способ подготовки биоткани осуществляют следующим образом.

После ферментативной обработки и отмывки биоткань для ксенопротезирования помещают в 0.10-0.15%-ный раствор глутарового альдегида в стеклянные темные емкости из расчета 150 мл раствора на 100 г биоткани. Раствор альдегида приготавливают из 25%-ного раствора глутарового альдегида марки типа "Reanal" или "Merk" в боратном буфере (для приготовления 1 л буферного раствора берут 525 мл 0.05 M раствора тетрабората натрия + 475 мл 0.1 М раствора соляной кислоты) [Ю. Ю.Лурье. Справочник по аналитической химии. - М.: Химия, 1979, стр. 304-311]. Дубление проводят при температуре 5-25^oC. Через 10-30 часов сливают раствор и заменяют его на свежеприготовленный 0.10-15%-ный раствор глутарового альдегида, а еще через 10-30 часов биоткань помещают в 0.25-0.30%-ный раствор глутарового альдегида. В последующие 6 дней производят смену 0.25-0.35%-ного раствора еще три раза через каждые два дня. После этого биоткань стерилизуют и хранят до использования.

Применение заявляемого способа позволяет ускорить процесс подготовки биоткани для ксенопротезирования, сократить расход реактивов при сохранении качества обработки биоткани.

Изобретение относится к области медицины, в частности к протезированию клапанов сердца. Сущность способа состоит в том, что биоткань для ксенопротезирования после ферментативной обработки и отмывки последовательно помещают в 0,10-0,15% - и 0,25-0,35%-ный раствор глутарового альдегида в боратном буфере при температуре 5-25°С, выдерживают клапан в более насыщенном растворе, трехкратно заменяя его, и стерилизуют. Применение заявляемого способа позволяет ускорить процесс подготовки биоткани для ксенопротезирования, сократить расход реактивов при сохранении качества обработки биоткани. 1 з. п.ф-лы.

1. Способ подготовки биоткани для ксенопротезирования путем последовательного помещения после ферментативной обработки и отмывки в растворы глутарового альдегида в буфере с увеличивающейся концентрацией глутарового альдегида, выдержке биоткани в трехкратно заменяющимся растворе глутарового альдегида и стерилизации, отличающийся тем, что концентрация первого раствора глутарового альдегида составляет 0,10 - 0,15%, концентрация второго раствора глутарового альдегида составляет 0,25 - 0,35%, а в качестве растворителя глутарового альдегида используют боратный буфер. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что выдержку биоткани в растворах глутарового альдегида ведут при температуре 5 - 25^oC.