СПОСОБ АКТИВАЦИИ ПРОЛИФЕРАЦИИ ЭНДОТЕЛИЯ РОГОВИЦЫ С ПОМОЩЬЮ РАСТВОРА "ГЛЕКОМЕН" Российский патент 2000 года по МПК A61F9/00 A61K33/34 

Изобретение относится к области медицины, а более конкретно к офтальмологии.

Известно, что возможности митотического деления в эндотелии роговицы человека крайне ограничены. Регенерация эндотелия, как правило, происходит в результате гипертрофии и увеличения площади клеток эндотелия и их миграции. При снижении плотности клеток эндотелия в результате травмы случайной или операционной, или заболевания глаза ниже критического уровня (меньше 1000 клеток/мм²), может развиваться эндотелиально-эпителиальная дистрофия роговицы.

Известен способ активации пролиферации эндотелия роговицы с помощью раствора, содержащего гепарин, ионы меди и сбалансированный солевой раствор при следующем соотношении компонентов: гепарин 200 ед., ионы меди 0,002 мг в 1 мл 0,15М фосфатного буфера при pH 7,4 (Пат. РФ N2077878 от 30.06.93). Такой раствор оказывает стимулирующее действие на активность эндотелия, однако при использовании такого раствора в небольшом проценте случаев наблюдается возникновение гифемы за счет несбалансированного количества гепарина, что снижает эффективность воздействия.

Задачей изобретения является создание безопасного и эффективного способа активации пролиферации эндотелия роговицы для предотвращения снижения плотности эндотелия при оперативных вмешательствах, а также восстановления поврежденного эндотелия роговицы человека при послеоперационной кератопатии и развитии вторичной эндотелиально-эпителиальной дистрофии.

Техническим результатом изобретения является снижение потери эндотелия в послеоперационном периоде, а при послеоперационной кератопатии и начальной стадии вторичной эндотелиально- эпителиальной дистрофии уменьшение отека роговицы, увеличение плотности эндотелия и исчезновения ощущения дискомфорта у больного.

Технический результат достигается тем, что в способе активации пролиферации эндотелия роговицы, включающем введение раствора гепарина в сбалансированной солевом растворе в передний сегмент глаза, согласно изобретению пролиферацию эндотелия роговицы активируют с помощью раствора "Глекомен" следующего состава:
Гепарин - 5-100 ед.

Гликозаминогликаны - 0,01-0,5 мг
Комплекс гликозаминогликаны-медь - 0,005-0,15 мг
в 1 мл сбалансированного солевого раствора, при этом в качестве сбалансированного солевого раствора используют раствор с pH 7,2 - 7,6 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Хлористый натрий - 0,85 - 0,95
Однозамещенный фосфат натрия - 0,0025 - 0,0040
Двузамещенный фосфат натрия - 0,0115-0,0135
Вода очищенная - Остальное
Один из вариантов изобретения заключается в том, что при экстракции катаракты с имплантацией интраокулярной линзы (ИОЛ) или при имплантации ИОЛ с рефракционной целью активизирующим раствором заполняют переднюю камеру глаза по окончании операции, или проводят ирригацию в течение всей операции активизирующим раствором в количестве 50 - 200 мл.

Для снижения потери плотности эндотелиальных клеток после операции активизирующий раствор вводят субконъюнктивально по 0.3 мл ежедневно в течение 3 дней.

В послеоперационном периоде при кератопатии, или при развитии начальной стадии вторичной эндотелиально-эпителиальной дистрофии активизирующий раствор вводят субконъюнктивально по 0,3 мл ежедневно в течение 5 - 10 дней, или методом фонофореза через роговицу в непрерывном режиме в течение 10 минут при интенсивности 0,2 - 0,3 Вт/см² с использованием 5 мл раствора ежедневно, при этом проводят 5-8 сеансов.

Активизирующий раствор может дополнительно содержать вискоэластик в количестве 90 - 99 мас.% и им заполняют переднюю камеру глаза на начальном этапе операции.

Гепарин и гликозаминогликаны являются природными полисахаридами, построенными из повторяющуюся дисахаридных компонентов, которые обычно содержат аминосахара и уроновую кислоту. Помимо гепарина к гликозаминогликанам относятся кератансульфат, хондроитинсульфат, гиалуроновая кислота, гепарансульфат, дерматансульфат. Все гликозаминогликаны (ГАГ) являются полианионами благодаря наличию в их структуре кислых сульфатных групп или карбоксильных групп уроновых кислот. С этой особенностью ГАГ связаны многие их функциональные свойства. ГАГ являются неотъемлемыми компонентами соединительной ткани. Они активно участвуют в водно-солевом обмене, способны снижать воспалительную и экссудативную реакцию при травмах, стимулируют репарацию поврежденных тканей роговицы и прежде всего эндотелия и кератоцитов.

Гепарин помимо перечисленных свойств обладает специфическим действием - он активизирует фибробластический фактор роста из десцеметовой мембраны роговой оболочки, который в свою очередь вызывает пролиферацию эндотелия.

Комплекс ГАГ-медь, полученный в условиях, соответствующих физиологическим (осмомолярность и pH, равные тканевой жидкости), содержит ионы меди, которые увеличивают подвижность клеток - необходимой составной части процессов регенерации.

Граничные концентрации компонентов активизирующего раствора определяли экспериментально. Концентрацию гепарина выражали в ед. антикоагулянтной активности, т.к. при выделении гепарина из разных источников одной весовой единице соответствует разная антикоагулянтная активность. Поэтому одинаковые весовые единицы гепарина могут обладать различной антикоагулянтной активностью, в том числе такой, которая приводит к повышенной кровоточивости. Это может привести к осложнениям при использовании активизирующего раствора. Концентрация гепарина 5 ед/мл является минимально необходимой для активизации фибробластического фактора роста, а при концентрации гепарина выше 100 ед/мл наблюдается повышенная кровоточивость.

При концентрации ГАГ ниже 0,01 мг/мл не наблюдали эффекта усиления пролиферации эндотелия роговицы кролика в зоне дозированной травмы. При концентрации ГАГ выше 0,5 мг/мл наблюдали снижение пролиферации кератоцитов стромы роговицы электронно-микроскопически.

При концентрации комплекса ГАГ-медь от 0,005 до 0,15 мг/мл наблюдали ускорение восстановления эндотелия роговицы кролика в зоне дозированного дефекта. При концентрации комплекса ГАГ-медь выше 0,15 мг/мл наблюдали угнетение эндотелия, а при концентрации комплекса ГАГ-медь ниже 0,005 мг/мл не отмечали ускорения восстановления эндотелия.

Вискоэластики - это вязкие растворы различных субстанция, используемые в офтальмохирургии для поддержания объема передней камеры и механической защиты эндотелия роговицы от травмы во время операции. Они вводятся в переднюю камеру глаза на начальном этапе операции и выводятся на заключительном этапе. В настоящее время в хирургической практике используются растворы производных метилцеллюлозы - Occucoat (Eye World, v.2, N3, p.62, 1997), Визитон (пат. РФ N 2114587), гиалуроната натрия - Provisc, Healon (J. Cataract Refract Surg. , 1998, 24, 1130 - 1135), хондроитинсульфата натрия - Viscoat (J. Cataract Refract Surg., 1998, 24, 678 - 683).

Раствор для стимуляции пролиферации эндотелия роговицы получают следующим образом. Вначале получают комплекс ГАГ с ионами меди (ГАГ-медь). Для этого к раствору ГАГ концентрацией от 0,5 до 2,0 мг/мл в 0,1М Трис-HCl буфере pH 7,4 добавляют сульфат меди в пятикратном избытке по массе, перемешивают и оставляют при 4 - 8^oC на сутки. Комплекс ГАГ-медь выделяют с помощью гель-хроматографии, освобождаясь от низкомолекулярных примесей. Концентрацию полученного раствора ГАГ-медь измеряют спектрофотометрически при длине волны 535 нм с красителем 1,9-диметилметиленовым синим (Connective Tissue Research. , 1982, v.9, p. 247-248.). Затем производят смешение компонентов активизирующего раствора в концентрациях согласно формуле изобретения.

Способ осуществляют следующим образом.

При хирургических вмешательствах, сопровождающихся вскрытием передней камеры глаза, например экстракции катаракты или имплантации ИОЛ и т.д., активизирующим раствором "Глекомен" наполняют переднюю камеру на конечном этапе операции для того, чтобы он непосредственно контактировал с эндотелием роговицы в первые послеоперационные часы, постепенно замещаясь секретируемой камерной влагой пациента. При аналогичных оперативных вмешательствах активизирующим раствором может осуществляться ирригация передней камеры на протяжении всего периода операции.

При выполнении тех же хирургических вмешательств активизирующим раствором "Глекомен", дополнительно содержащим вискоэластик, заполняют переднюю камеру вместо традиционно используемых вискоэластиков на начальном этапе операции. На конечном этапе операции указанный активизирующий раствор выводят из передней камеры.

Для снижения потери клеток эндотелия в раннем послеоперационном периоде после экстракции катаракты, имплантации ИОЛ и др. проводят курс субконъюнктивальных инъекций активизирующего раствора "Глекомен" после операции ежедневно в течение 3-х дней по 0,3 мл.

В случаях послеоперационной кератопатии или начальной стадии эндотелиально-эпителиальной дистрофии роговой оболочки активизирующий раствор "Глекомен" вводят субконъюнктивально ежедневно в течение 5-10 дней по 0,3 мл. В аналогичных случаях активизирующий раствор "Глекомен" может быть введен путем фонофореза. С этой целью помещают 5 мл раствора в форетическую ванночку, размещенную на роговице, и проводят фонофорез в непрерывном режиме в течение 10 минут при интенсивности 0,2-0,3 Вт/см². Фонофорез проводят ежедневно в течение 5-8 дней.

Примеры.

Пример 1. Пациент М., 53 л., диагноз - незрелая осложненная катаракта правого глаза. Плотность эндотелиальных клеток (ПЭК) 2500-2600 кл/мм². Проведена факоэмульсификация с имплантацией ИОЛ. По окончании операции в переднюю камеру было введено 0,3 мл активизирующего раствора "Глекомен" следующего состава: гепарин 100 ед. , ГАГ 0,01 мг, комплекс ГАГ-медь 0,005 мг в 1 мл сбалансированного солевого раствора. Через 1 месяц после операции ПЭК 2300-2500 кл/мм², через 6 месяцев ПЭК 2300-2500 кл/мм². Потеря ПЭК составила 5,9%, тогда как средняя потеря ПЭК при выполнении аналогичной операции без применения "Глекомена" составляет 10,6%.

Пример 2. Пациент Г. , 68 л., диагноз - незрелая возрастная катаракта левого глаза, ПЭК 2 700-2 900 кл/мм². Выполнена факоэмульсификация с имплантацией ИОЛ. Во время операции на этапах проведения капсулорексиса, факоэмульсификации ядра, аспирации-ирригации хрусталиковых масс и вымывания вискоэластика в качестве ирригационного раствора использовали "Глекомен" в количестве 120 мл следующего состава: гепарин 5 ед., ГАГ 0,01 мг, комплекс ГАГ- медь 0,01 мг в 1 мл сбалансированного солевого раствора. Через 1 месяц после операции ПЭК 2600 - 2700 кл/мм², через 6 месяцев 2500-2700 кл/мм². Потеря ПЭК составила 7,1%, тогда как средняя потеря ПЭК при выполнении аналогичных операций без применения "Глекомена" составляет 13,7%.

Пример 3. Пациентка Ж. , 70 л., диагноз - зрелая возрастная катаракта левого глаза, ПЭК 2500-2700 кл/мм². Выполнена экстракапсулярная экстракция катаракты с имплантацией ИОЛ. По окончании операции субконъюнктивально вводили по 0,3 мл "Глекомена" ежедневно в течение 3-х дней следующего состава: гепарин 5 ед., ГАГ 0,2 мг, комплекс ГАГ-медь 0,15 мг в 1 мл сбалансированного солевого раствора. Через 1 месяц после операции ПЭК 2500-2600 кл/мм², через 6 месяцев ПЭК 2400-2600 кл/мм². Потеря ПЭК составила 3,8%, тогда как средняя потеря ПЭК при выполнении аналогичных операций без применения "Глекомена" составляет 12,5%.

Пример 4. Пациентка С., 72 л., диагноз - вторичная эндотелиально-эпителиальная дистрофия роговицы 1 степени, ПЭК 700-800 кл/мм², толщина роговицы в центральной оптической зоне 607 мкм. Проведен курс консервативного лечения, включающий ежедневный фонофорез роговицы в течение 5 дней с применением активизирующего раствора "Глекомен" следующего состава: гепарин 5 ед. , ГАГ 0,5 мг, комплекс ГАГ-медь 0,15 мг в 1 мл сбалансированного солевого раствора. Для проведения фонофореза в форетическую ванночку помещали 5 мл "Глекомена" указанного состава и проводили фонофорез в непрерывном режиме в течение 10 минут при интенсивности 0,2-0,3 Вт/см². Через 1 месяц после лечения ПЭК 1000-1100 кл/мм², через 3 месяца после лечения 800-1000. Проведен повторный курс фонофореза, после чего ПЭК повысилась до 900-1000 кл/мм² и продолжала оставаться стабильной в течение 1 года. Толщина роговицы в центральной оптической зоне роговицы после лечения уменьшилась до 534 мкм.

Пример 5. Пациентка П., 72 л., диагноз - зрелая бурая катаракта правого глаза, ПЭК 1900-2100 кл/мм². Выполнена экстракапсулярная экстракция катаракты с имплантацией ИОЛ. В качестве активизирующего раствора использовали "Глекомен", дополнительно содержащий вискоэластик, следующего состава: гепарин 100 ед., ГАГ 0,01 мг, комплекс ГАГ-медь 0,15 мг, вискоэластик 0,99 г в 1 мл сбалансированного солевого раствора. Через 1 месяц после операции ПЭК 1800-1900 кл/мм², через 3 месяца ПЭК 1800-1900 кл/мм². Потеря ПЭК составила 7,5%, тогда как средняя потеря ПЭК при выполнении аналогичных операций без применения "Глекомен" составляет 11,6%.

Изобретение относится к офтальмологии. Способ включает введение раствора "Глекомен" следующего состава: гепарин 5-100 ед.; гликозаминогликаны 0,01-0,5 мг; комплекс гликозаминогликаны-медь 0,005-0,15 мг в 1 мл сбалансированного солевого раствора. Способ позволяет снизить потери эндотелия в послеоперационном периоде, а при кератопатии и начальной стадии эндотелиально-эпителиальной дистрофии уменьшить отек роговицы, увеличить плотность эндотелия. 5 з.п. ф-лы.

1. Способ активации пролиферации эндотелия роговицы, включающий введение раствора гепарина в сбалансированном солевом растворе в передний сегмент глаза, отличающийся тем, что активизирующий раствор дополнительно содержит гликозаминогликаны и комплекс гликозаминогликанов с ионами меди при следующем соотношении компонентов в 1 мл сбалансированного солевого раствора:
Гепарин - 5 - 100 ед.

Гликозаминогликаны - 0,01 - 0,5 мг
Комплекс гликозаминогликаны - медь - 0,005 - 0,15 мг
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве сбалансированного солевого раствора используют раствор с pH 7,2 - 7,6 при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Хлористый натрий - 0,85 - 0,95
Однозамещенный фосфат натрия - 0,0025 - 0,0040
Двузамещенный фосфат натрия - 0,0115 - 0,0135
Вода очищенная - Остальное
3. Способ по п.1 - 2, отличающийся тем, что при экстракции катаракты с имплантацией ИОЛ или при имплантации ИОЛ с рефракционной целью активизирующим раствором заполняют переднюю камеру глаза по окончании операции, или проводят ирригацию активизирующим раствором в течение всей операции в количестве 50 - 200 мл.