СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПОЛЛИНОЗА Российский патент 2000 года по МПК G01N33/483 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической аллергологии, и предназначено для диагностики поллинозов.

Цель изобретения - повышение точности способа диагностики поллинозов путем выявления аллергенов.

Поллинозы - это аллергические заболевания, вызываемые пыльцой растений. Наиболее эффективным способом лечения поллиноза является устранение контакта пациента с аллергенами (пыльцой растений, вызвавшей сенсибилизацию пациентов). Диагностика поллинозов путем выявления растений, к пыльце которых возникла сенсибилизация, позволяет пациентам избегать мест произрастания этих растений во время их цветения, что в свою очередь предупреждает появление клинических признаков заболевания.

Существуют различные способы диагностики поллинозов. Наиболее близкими к заявляемому способу является диагностика пыльцевой аллергии путем постановки внутрикожных проб с аллергенами (разведениями экстракта пыльцы растений), а также различных провокационных проб (назальной, конъюктивальной, бронхиальной) [1, 3]. Перечисленные способы являются достаточно информативными, однако существенным недостатком всех перечисленных аллергологических проб с экстрактами пыльцы растений является тот момент, что они проводятся in vivo, поэтому их постановка сопровождается неприятными субъективными ощущениями пациентов, а также риском развития осложнений. Вместе с тем аллергологические пробы являются достаточно трудоемкими, требуют специального обучения медицинского персонала, их проведение возможно только в условиях специализированного аллергологического кабинета.

В качестве прототипа заявляемого способа известен способ выявления аллергенов при поллинозе путем постановки антиген-индуцированной (в качестве аллергенов используются экстракты пыльцы растений) реакции дегрануляции базофилов in vitro [2]. При этом определяют число дегранулированных базофилов в лейкоцитарной взвеси, окрашенной 0,3% спиртовым раствором нейтрального красного, до и после инкубации с аллергенами. Положительным результатом реакции является увеличение числа дегранулированных базофилов на 15% по сравнению с контролем. Недостатком этого способа является его недостаточная точность, значительная трудоемкость и необходимость работы с кровью пациентов.

Авторы предлагают оригинальный способ диагностики поллинозов путем проведения спектрофотометрического исследования слюны пациентов. Преимуществом предложенного способа по сравнению с существующими является его достаточная точность, которая достигается определением коэффициента пропускания инфракрасного излучения слюной до и после инкубации слюны с экстрактами пыльцы растений. Достоинством способа являются: простота и быстрота выполнения исследования (в среднем 5 минут на 1 пробу); небольшое количество биологического материала (0,1 мл слюны) для постановки одной пробы; возможность проведения исследования с любым числом аллергенов; объектом исследования является слюна, что обеспечивает легкость ее забора пациентами самостоятельно без участия медицинских работников; постановка реакции с аллергеном осуществляется in vitro, что делает метод безопасным для больных.

Способ осуществляется следующим образом. Пациентом утром натощак в стерильные флаконы осуществляется забор слюны в объеме 3-5 мл. Спектрофотометрическое исследование слюны осуществляется с помощью 9-канального спектрофотометра, соединенного с персональным компьютером. Вначале проводится постановка контрольной пробы. С этой целью 0,1 мл слюны помещается в специальную микрокювету; определение пропускания слюной инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1 проводится в динамике в течение 60 секунд (с интервалом в 6 секунд), результаты определения фиксируются в персональном компьютере. Для постановки опытной пробы к 0,1 мл слюны добавляют 0,01 мл раствора экстракта пыльцы растений в концентрации 10^-7 - 10^-10 и повторно проводят определение пропускания слюной инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1. Для каждой пробы вычисляют коэффициент пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1, сравнивают результаты опытных и контрольных проб.

Положительной считается реакция, при которой коэффициент пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1 слюной при добавлении экстракта пыльцы или других предполагаемых аллергенов снижается на 10% и более по сравнению с контролем.

Пример 1. Пациентка М., 34 года проходила обследование в аллергологическом кабинете поликлиники N 1 городской больницы N 4. г. Твери с диагнозом: поллиноз, риноконъюнктивит. В процессе постановки внутрикожных аллергологических проб у пациентки была выявлена сенсибилизация к пыльце луговых трав. Спектрофотометрическое исследование слюны показало, что в контрольной пробе коэффициент пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1 был равен 53,4; после добавления к слюне экстрактов пыльцы растений в опытных пробах коэффициент пропускания инфракрасного излучения составил: для пыльцы полыни, одуванчика и подсолнечника - 51,4; для пыльцы березы, ольхи, орешника - 57,3; для пыльцы луговых трав - 35,4. На основании анализа полученных данных было выявлено, что при добавлении к слюне экстракта пыльцы луговых трав коэффициент пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1 снизился более чем на 10%, в остальных опытных пробах этого не отмечалось. Результаты спектрофотометрического исследования слюны подтвердили наличие сенсибилизации к пыльце луговых трав.

Пример 2. Пациент Ш., 26 лет проходил обследование в аллергическом кабинете поликлиники N 1 городской больницы N 4. г. Твери с диагнозом: бронхиальная астма, средней тяжести, ремиссия. В процессе постановки внутрикожных аллергологических проб у пациента была выявлена сенсибилизация к пыльце луговых трав и домашней пыли. Спектрофотометрическое исследование слюны показало, что в контрольной пробе коэффициент пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1 был равен 42,8; после добавления к слюне экстрактов пыльцы растений в опытных пробах коэффициент пропускания инфракрасного излучения составил: для пыльцы полыни, одуванчика и подсолнечника - 44,7; для пыльцы березы, ольхи, орешника - 49,3; для пыльцы луговых трав - 32,2. На основании анализа полученных данных было выявлено, что при добавлении к слюне экстракта пыльцы луговых трав коэффициент пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1 снизился более чем на 10%. Результаты спектрофотометрического исследования слюны подтвердили наличие сенсибилизации к пыльце луговых трав. Дополнительная постановка пробы с экстрактом домашней пыли также показала снижение коэффициента пропускания слюной инфракрасного излучения до 36,7 (более чем на 10%), что подтвердило сенсибилизацию к домашней пыли.

Список литературы
1. Зисельсон А.Д. Поллиноз у детей. - М., 1989,159 с.

2. Новиков Д.К., Доценко Э.А., Жаков Г.Я. Применение прямого теста дегрануляции базофилов для диагностики аллергии // Лабораторное дело, 1990, N 9, с. 58-61.

3. Пыцкий В.И., Адрианова Н.В., Артомасова А.В. Аллергические заболевания. - М., 1991, с. 197-207.

Изобретение относится к медицине, в частности к аллергологии, и может быть использовано для диагностики пыльцевой аллергии. Цель изобретения - повышение точности способа диагностики поллинозов. Для этого проводится спектрофотометрическое исследование слюны с помощью 9-канального спектрофотометра, соединенного с персональным компьютером, до и через 5 мин после добавления к слюне экстрактов пыльцы растений. Результат считается положительным, если коэффициент пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302-1468 см^-1 в опытной пробе слюны снижается на 10% и более по сравнению с контрольной пробой до добавления к слюне предполагаемого аллергена. Способ оригинален, легко воспроизводим, безопасен для пациентов, позволяет одновременно проводить тестирование большого числа предполагаемых аллергенов.

Способ диагностики поллиноза, включающий проведение аллергологической пробы in vitro, отличающийся тем, что проводят определение коэффициента пропускания инфракрасного излучения длиной волны 1302 - 1468 см^-1 в течение 60 с с интервалом в 6 с в контрольной пробе 0,1 мл слюны и в опытной пробе через 5 мин после добавления к слюне экстракта пыльцы растений, наличие сенсибилизации к исследуемому веществу определяют при снижении коэффициента пропускания инфракрасного излучения для опытной пробы слюны по сравнению с контрольной на 10% и более.