СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ УВЕАЛЬНОЙ МЕЛАНОМЫ Российский патент 2000 года по МПК G01N33/52 G01N33/53 

Изобретение относится к офтальмологии, а именно к офтальмоонкологии, и предназначено для прогнозирования клинического течения увеальной меланомы с целью увеличения продолжительности и качества жизни тяжелого контингента больных.

К настоящему моменту известен комбинированный 2-х этапный способ определения микрометастазирования при злокачественной увеальной меланоме норвежского автора Eide N [Eide N. "Micrometastases in Malignant Uveal Melanomas"- poster N 54 (p.54) at International Congress of Ocular Oncology, may 1999, Philadelphia].

На первом этапе осуществляют определение циркулирующих опухолевых клеток в периферической крови и костном мозге иммуномагнитным способом. Сущность способа заключается в том, что после выделения мононуклеаров из тестируемых проб производят их подсчет под микроскопом. Далее, антитела против мышиных иммуноглобулинов (lg), покрытые парамагнитными частичками (Danabeads SAM m-450, Dynal, Oslo, Norway), конъюгируют с меланомными антителами человека. Образующиеся конъюгаты добавляют в пробирки, содержащие суспензию выделенных из крови и костного мозга мононуклеарных клеток, и инкубируют при слабом вращении в течение 30 минут. Затем добавляют холодный буфер и пробирки помещают в магнитное поле; спустя 2 минуты супернатант сливают, после чего осуществляют пипеткой забор 20 мкл образца пробы и подсчитывают число розеткообразующих клеток, то есть связанных с парамагнитными частичками.

В "положительных" пробах розетки образуются 5 и более парамагнитными частичками на 1 мононуклеарную клетку. В "отрицательном" контроле клеток, связанных с конъюгатами, SAM-lg-парамагнитных частичек нет. Чувствительность теста составляет 1 опухолевая клетка на 10⁷ нормальных клеток.

Согласно отчету, представленному автором, в периферической крови всех больных с увеальной меланомой не обнаружено метастазирующих меланомных клеток. Но пробы костного мозга в 33,8% случаев оказались позитивными. При выявлении позитивных проб автор рекомендует переходить ко второму этапу - выявлению розеткообразующих клеток в пунктате печени этим же способом. Показание и обоснование для пункции печени исходит из установленного факта преимущественного поражения печени метастатическим процессом при увеальной меланоме.

Автор не смог определить корреляцию между полученными лабораторными данными и какими-либо клиническими показателями, в частности стадийностью по системе TNM, эффективностью последующего лечения или продолжительностью жизни из-за короткого срока наблюдения за больными. Однако он считает, что пациенты с позитивными костно-мозговыми пробами представляют группу риска развития генерализации процесса и им следует назначить системное лечение на этом этапе. Последнее возможно продлит сроки их жизни [там же].

Приведенный в качестве ближайшего аналога способ имеет преимущества и недостатки. Преимущества заключаются в следующем: во-первых, он специфичен, поскольку позволяет выявить блуждающие меланомные клетки, начало метастатической болезни; во-вторых, он достаточно информативен; в-третьих, легко воспроизводим.

Недостатками способа являются двухэтапность, инвазивность. Забор биоптатов костного мозга и печени небезопасен для пациента. Указанные процедуры, как известно, относятся к категории инвазивных методов и сопряжены с возможным инфицированием, вторичным кровотечением (в случаях забора печеночного биоптата) и т.д. Тестируются три тест-объекта: кровь, костный мозг и биоптат печени.

Известно, что печень является первым и единственным органом инвазии в 61% случаев [Zimmеrman L.E. Do growth and onset of symptoms of uveal melanomas indicate subclinical metastasis? - Ophthalmol.-1984- Vol. 91. N 6.-p. 685 - 691.] По материалам аутопсии Jensen изолированное поражение печени выявляется в еще меньшем % случаев-44,7% [Jensen ОА. Malignant melanomas of the human uvea: 25-year follow-up of cases in Demnark, 1943- 1952//Acta Ophthalm 1982-60-p l61 - 182]. Легкие поражаются метастатическим процессом в 55%, головной мозг в 22%, почки в 44%; желудочно-кишечный тракт, кожа, подкожная клетчатка, поровну, в 10% [Einchorn L.H. "Metastasis patterns of choroidal melanoma". - Cancer-1974-Vol 34, N 4-p 1001 - 1004]. В 17% случаев наблюдается полиорганная инвазия. Таким образом, способ выявления микрометастазов не срабатывает в 39% случаях, где печень не является первым органом инвазии, что существенно снижает его информативность.

Предлагаемый нами способ основан на клинико-иммунологических данных, полученных при исследовании системной и местной продукции ИФН-гамма у больных с увеальной меланомой. Изучение продукции ИФН-гамма обусловлено литературными данными о его роли в механизмах иммунной защиты при онкологических заболеваниях, в том числе увеальной меланомы, и их специфических антипролиферативных функций [Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии. Москва. -Медицина.- 1996.-стр. 135 - 146; Likhvantseva V. et al" lnterferon-production in patients with various stages of uveal melanoma."- Abstract N 35 - at International Congress of Ocular Oncology, may 1999, Philadelphia];
Клетками-продуцентами ИФН- γ являются T-лимфоциты, макрофаги, киллерные клетки и спленоциты [Cancer Res 1993,-vol 84-N 6- p. 387 - 9].

Установено, что ИФН- γ обладает свойствами фактора неспецифической и специфической иммунной защиты. [Ершов Ф.И. Интерфероны в норме и патологии. Москва. "Медицина" 1996. с 104]. При этом, с одной стороны, дефицит его продукции ассоциируется с ослаблением противовирусной и противораковой защиты. Так, дефицит ИФН- γ сопровождался повышением частоты возникновения спонтанных лейкозов, опухолей молочной железы и печени в экспериментальной модели у мышей. Продукция ИФН- γ на физиологическом уровне 200 ед/мл (≈ 6000 пг/мл) предотвращала опухолевый рост [Грачева Л. А. Цитокины в онкогематологии. Москва -1996. "Алтус", стр 55 - 57].

Подавление способности лимфоцитов к продукции ИФН- γ in vitro обнаружено у больных лимфобластным лейкозом, миелолейкозом, лимфомами и увеальной меланомой [Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и патологии. Москва. Медицина, 1996 - стр 18 - 146; Лихванцева В. и др. Тезисы N35 в сб. работ на Международном конгрессе Офтальмоонкологии в Филадельфии, 1999].

С другой стороны, системная гиперпродукция ИФН- γ (in vivo, в сыворотке) также ассоциируется с ухудшением клинического течения ряда заболеваний (саркоидоза, рассеянного склероза и некоторых болезней центральной нервной системы) [Чекнев С.Б. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1994 N 12, стр 6191.

ИФН- γ является мощным индуктором иммунного ответа. Эффекты ИФН - γ носят дозозависимый иммунорегуляторный характер. Гиперпродукция ИФН - γ может чрезмерно активировать иммунные реакции. Повышая экспрессию молекул МНС I и II класса опухолевыми клетками, он ускоряет распознавание опухолевых антигенов и представление их лимфоцитам, усиливая антиген-презентирующие функции макрофагов; диференцировку и пролиферацию натуральных киллеров и различных субпопуляций T-лимфоцитов, активацию реакции гиперчувствительности замедленного типа, естественного и антителозависимого киллинга, иммунной адгезии, антителопродукции, тромбоцитарного фагоцитоза [Teramura Y. et al. Jpn J Cancer Res 1993 -vol 84 - N 6-p.689 - 96]. 4-часовая инкубация с ИФН - γ многократно усиливает цитотоксичность макрофагов и нейтрофилов и цитолитический потенциал специфических и неспецифических киллеров [I de Waard-Siebinga et al British J. of Ophthalmology 1995 - vol 79- p. 847 - 855].

Указанные свойства явились основанием для использования препаратов ИФН - γ в клинической онкологической практике. Локальное введение его в участки остеолиза при костных метастазах рака молочной железы, предстательной железы, легкого вызывали полную или частичную ремиссию у 75% больных с исчезновением боли на срок 9 - 14 месяцев [Aguayo J et al. Rev Med Chil. 1993-vol 121-N 11- p 1252 - 9].

Если данные о системной продукции ИФН - γ в норме и при различной патологии в литературе представлены, то уровни его секреции в слезной жидкости в норме и при офтальмопатологии к настоящему моменту не изучены.

В целом, выше перечисленное определило актуальность исследований ИФН - γ при увеальных меланомах. Мы предположили, что изучение его продукции в сыворотке крови и слезной жидкости больных с увеальной меланомой может оказаться существенным при определении прогноза.

Основанием для разработки предлагаемого нами способа послужил материал, полученный при обследовании 59 больных с ретроспективным анализом клинического течения увеальной меланомы.

Под наблюдением находились 24 мужчины и 35 женщин с увеальной меланомой в клинических стадиях T₁N₀M₀_ T_3-4_N₀M_her с диаметром основания от 5,6 до 17,9 мм и высотой проминенции от 1,4 до 11,3 мм. Возраст пациентов колебался от 21 года до 84 лет. При анализе данных больные были разделены на три группы по размерам выявляемых опухолей: в первую вошли 8 пациентов с размерами опухоли не более 3 мм в высоту и 10 мм в диаметре, во вторую - 17 человек с проминенцией меланомы ≥ 3,1 мм, но < 6,0 мм, диаметром 10,1 - 15,0 мм; третью составили 34 больных, у которых размеры опухолей превышали 6 мм в высоту и 15,0 мм в диаметре. У 11 человек третьей группы гистологически установлен выход опухолевых клеток за пределы склеры с формированием эпибульбарных узлов (T₄N₀M₀. ). Они выделены в самостоятельную подгруппу. И отдельную подгруппу составили 4 пациента с увеальной меланомой больших размеров и метастазами в печени, выявленными при тщательном инструментальном обследовании (T_3-4N₀М_hep.)
Из 59-ти находившихся под наблюдением пациентов 24-м произведена энуклеация, в 31 случае - органосохранное лечение (30 брахитерапий, 1 - локальная эксцизия опухоли); 4 больных не оперированы в связи с диагностированием у них генерализации процесса. Энуклеацию проводили больным, имевшим, как правило, большие опухоли, проминенция которых превышала 6 мм, а максимальный диаметр - 15 мм.

Среди 24-х энуклеированных глаз и одной резецированной опухоли обнаружено 5 увеальных меланом эпителиоидно-клеточного строения, 11 - смешанно-клеточного и 6-веретено-клеточного строения. В трех случаях были удалены незрячие глаза с вторичной гипертензией, где ткань опухоли была представлена тотальным некрозом иридоцилиарной меланомы и идентифицировать тип клеток не удалось.

Всем пациентам проводили иммунологическое обследование накануне проводимого лечения и каждые 3 месяца после него. Сроки наблюдения за больными составляли от 1,5 до 5 лет. ИФН - γ определяли в сыворотке крови (СК; n = 59) и слезной жидкости (СЖ, n = 34). Исследовали с помощью иммуноферментного анализа с применением коммерческих тест-систем (фирма "IBL", Германия, чувствительность - 6 пкг/мл). В качестве контроля использовали СК (n = 20) и СЖ (n = 9) практически здоровых доноров.

В контрольной группе (у здоровых доноров) ИФН - γ в СК нами не выявлен. По литературным данным при исследовании СК методами Western Blot и твердофазным иммуносорбентным ELISA (сандвич-метод), ИФН- γ удавалось выявить в норме на уровне 1,1 ± 0,3 Ед/мл (≈ 33 ± 10 пкг/мл) (Aguayo J et al. Rev Med Chil. 1993-vol 121-N 11- p 1252 - 9]. В то же время в СЖ он был обнаружен у 8 из 9-ти доноров (88,9%), в концентрации от 6700 до 15000 пкг/мл (ср. уровень 7994 ± 960 пкг/мл). Известно, что секреторный ИФН - γ, обладая противовирусными свойствами и являясь первой линией неспецифической защиты, вырабатывается в норме на определенном физиологическом уровне слизистыми бронхов, желудочно-кишечного тракта [Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и патологии. Москва. Медицина, 1996 - стр 18-146]. Нами впервые обнаружена секреция ИФН - γ в СЖ у здоровых доноров, проживающих на территории РФ. Определены ориентировочные границы физиологических норм.

В группе пациентов с увеальной меланомой ИФН - γ обнаруживали в СЖ больного глаза так же часто (в 88,2%), как и в контроле; в СК - в отдельных случаях (у 6,8% больных). Полученные нами данные свидетельствуют о существующих отклонениях от нормы местной продукции ИФН - γ (тест-индикатором которой явилась СЖ). Отличия от контрольной группы проявлялись главным образом повышением уровня ИФН- γ в СЖ больных глаз (p < 0,01). Этот уровень был также выше, чем уровень ИФН - γ в СЖ парного, здорового глаза (p < 0.01). Концентрации ИФН - γ, превышающие 15000 пкг/мл, отмечались только в глазах с меланомой (за исключением одного случая - в парном глазу).

Дифференцированный анализ показал, что выраженная активизация местной продукции ИФН- γ наблюдалась в основном на ранних стадиях опухолевого роста T_1-2N₀M₀, тогда как на стадии метастазирования (T_3-4 N₀M_hep) частота обнаружения и уровень сто достоверно снижались, имитируя условную "нормализацию" (до 7000 пкг/мл и ниже, при 50% выявляемости). Гистологически верифицированная стадия Т₄N₀М₀ (выход опухолевых клеток за пределы склеральной капсулы) составила как бы промежуточную группу, в которой были зафиксированы как высокие (75000 пкг/мл), так и сравнительно низкие уровни (15000 пкг/мл) ИФН- γ в СЖ, что отразилось на среднестатистических показателях.

Исследование местной продукции ИФН - γ в динамике с последующим ретроспективным анализом клинического течения заболевания показало, что снижение его уровня ниже физиологических значений (самый высокий показатель на этой стадии - 7000 пкг/мл) или полное отсутствие продукции (50% случаев) выявляются либо на стадии метастазирования, либо предшествуют ей. В последнем случае инструментальное обследование подтверждает наличие метастазов 3 - 8 месяцев позднее иммунологического.

Для объяснения обнаруженной нами кинетики синтеза ИФН - γ в слезной жидкости мы предположили следующее. Рост местной продукции ИФН- γ в больном глазу с начальной увеальной меланомой можно трактовать как свидетельство активизации иммунных реакций в ответ на возникновение опухоли. В ходе этого ответа ИФН - γ, являясь первой линией защиты, вероятно, модулирует экспрессию опухолевых антигенов, усиливая иммунный ответ организма-опухоленосителя. Возможно, избыток ИФН - γ в СЖ отчасти объясняется дублированием антипролиферативных функций с ИФН - α, выработка которого в СЖ, по нашим данным, при увеальной меланоме отсутствует (Лихванцева В. и др. Тезисы N 35 в сб. работ на Международном конгрессе Офтальмоонкологии в Филадельфии, 1999]. Продуцентами ИФН- γ могут быть локальные инфильтрирующие клетки (макрофаги, туморинфильтрирующие нормальные киллеры, T- лимфоциты), сами опухолевые клетки или клетки окружающих тканей глаза, например фибробласты склеральной оболочки, ретинальный пигментный эпителий, активированные присутствием опухолевых клеток в глазу или их токсинов (Чекнев С.Б. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 1994 - N 12 - стр. 619]. Исходя из антипролиферативных и стимулирующих цитолиз свойств ИФН -γ, можно высказать предположение, что посредством секреции ИФН - γ местный иммунитет ингибирует прогрессирование злокачественного процесса. По мере достижения опухолью полной автономии, которая характеризуется общей иммуносупрессией с истощением ресурсов, блокадой миграционных путей иммуноцитов и угнетением реакций местного иммунитета, по мнению многих авторов (Савинов В.А "Местный иммунитет против автономной опухоли - стратегия лечения рака".- Москва.-1994-Медицина-стр.40 - 47.], по-видимому, происходит выключение регуляторных иммунных реакций с помощью системы ингибиторов/стимуляторов или иных, неизвестных пока механизмов, что, возможно, является одним из факторов, способствующих генерализации процесса с метастазированием опухоли в печень. Таким образом, снижение показателей местной продукции ИФН - γ до нормы и ниже отражает истощение местных ресурсов или прорыв противоопухолевой защиты и предшествует генерализации увеальной меланомы. Выявление показателей, отражающих этот процесс, позволяет прогнозировать метастазирование.

Полученные результаты, в целом, представляющие кинетику локальной продукции ИФН - γ на различных стадиях увеальной меланомы в виде повышения уровней секреции ИФН - γ в СЖ на стадиях T_1-3N₀М₀ по сравнению с донорскими показателями и ослабления его продукции на стадии метастазирования Т_3-4N₀M_hep по типу условной "нормализации", свидетельствуют в пользу предположения о важной патогенетической роли этого цитокина в противоопухолевом иммунитете.

Анализ системной продукции ИФН - γ показал, что редкие для группы в целом случаи (6,8%) его накопления в СК обнаруживались в основном при крупных меланомах в стадии T₄N₀M₀ (n = 4, в 36,4% случаев, концентрация от 200 до 93600 пкг/мл, p < 0,01 - по сравнению с остальными пациентами). Природа этого феномена к настоящему моменту не ясна и требует дальнейшего изучения.

Учитывая, что сывороточная продукция ИФН - γ ассоциируется со стадией T₄N₀M₀, при которой опухоль выходит за пределы склеральной оболочки, инфильтрирует ее и формирует эпибульбарные узлы, то есть с повышением риска метастазирования можно было предположить о возможности использования этого показателя для прогнозирования динамики опухолевого процесса. Последующий ретроспективный анализ клинического течения заболевания подтвердил предположения. Так, у взятых под контроль пациентов с системной гиперпродукцией ИФН - γ спустя 3 - 8 месяцев после первичного иммунологического мониторинга при инструментальном обследовании обнаружены метастазы в печени (n=3); и в одном случае в печени и легких.

Клиническое наблюдение с иммунологическим и инструментальным контролем в динамике пациентов с отрицательными сывороточными пробами на ИФН - γ не выявило случаев перехода к генерализации процесса.

Мы не выявили пациентов с двумя одновременно обнаруживаемыми прогностически неблагоприятными показателями продукции ИФН - γ (гиперпродукцией в сыворотке и отсутствием таковой в слезе больного глаза), что позволяло сделать вывод о независимой и равноценной информативной значимости обоих показателей при составлении прогноза клинического течения увеальной меланомы (см. таблицу)
Таким образом, обобщая результаты, мы считаем возможным говорить об отклонениях в продукции ИФН - γ, как о существенном патогенетическом факторе при увеальной меланоме. Патогенетически значимыми представляется системная его гиперпродукция, представляющая попытку организма развить компенсаторную иммунную реакцию с целью активизации противоопухолевых механизмов в ответ на возможный выход опухолевых метастазирующих клеток в кровоток. Сравнительный "дефицит" местной продукции на поздних стадиях увеальной меланомы связан с переходом в качественно новую стадию, ассоциирующуюся с повышением риска метастазирования увеальной меланомы.

Полученные данные по комплексному иммунологическому и инструментальному обследованию больных с различными стадиями увеальной меланомы в динамике с последующим ретроспективным анализом результатов легли в основу нашего изобретения.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа, позволяющего прогнозировать клиническое течение увеальной меланомы у каждого конкретного больного.

Техническим результатом является объективизация и повышение точности прогнозирования.

Технический результат достигается за счет исследования ИФН- γ как фактора противоопухолевой защиты, принимающего участие на различных патогенетических звеньях.

Тест по выявлению уровня ИФН- γ производится с помощью иммуноферментного анализа (используют коммерческие тест-системы, например, фирмы "IBL", Германия, или аналогичные)
Способ осуществляют следующим образом:
1. Забирают периферическую кровь из локтевой вены в сухую пробирку в объеме не менее 1 мл. Сыворотку и слезную жидкость получают обычным способом. Всего при постановке ELISA на ИФН - γ нужно не более 100 мк исследуемой пробы, которую можно получить из 1 мл сыворотки.

2. После двухкратного промывания лунок планшета вносят 300 мкл буфера, соответствующего разведения, предоставляемого тест-системой фирмой - изготовителем, в каждую лунку, затем аспирируют жидкость.

3. Растворяют содержимое ампул со стандартными препаратами, внося по 1 мл буфера для образцов в каждую лунку.

4. В ячейки планшета, предназначенные для нулевой пробы (Blank), вносят по 100 мкл буфера С. В ячейки планшета, предназначенные для калибровки значений, вносят по 100 мкл стандартов ИФН - γ.
5. В оставшиеся ячейки планшета вносят исследуемые образцы сыворотки в объеме 100 мкл. Инкубируют 1 час при 37^oC.

6. Удаляют жидкость из ячеек и трижды промывают их буфером В (300 мкл на одну ячейку). Проводят полную аспирацию оставшейся жидкости.

7. Пипеткой вносят в каждую лунку по 100 мкл раствора вторых антител (находящихся в тест-системе). Вновь инкубируют 1 час при комнатной температуре.

8. Удаляют жидкость из ячеек и трижды промывают их буфером В (300 мкл на одну ячейку). Вновь проводят полную аспирацию оставшейся жидкости.

9. Разбавляют необходимое для анализа количество в соотношении 1:10 конъюгата стрептовидина с пероксидазой хрена буфером С и вносят по 100 мкл раствора в каждую ячейку планшета.

10. Инкубируют 10 минут в темноте при комнатной температуре.

11. Удаляют жидкость из ячеек и трижды промывают их буфером В (300 мкл на одну ячейку). Проводят полную аспирацию оставшейся жидкости.

12. Дважды промывают ячейки путем постукивания по поверхности стока, покрытого фильтровальной бумагой.

13. Вносят во все лунки по 100 мкл раствора субстрата с красителями.

14. Инкубируют планшет 15 - 30 минут при комнатной температуре в защищенном от света месте. Наблюдают развитие голубой окраски.

15. Реакцию останавливают добавлением 100 мкл раствора серной кислоты в каждую лунку.

16. Проводят учет результатов с использованием автоматического фотометра при длине волны 490 нанометров, устанавливая нулевое поглощение по нулевой лунке.

17. Строят калибровочную кривую - оптическая плотность/концентрация, пользуясь данными по концентрациям, указанным для растворов стандартов. По калибровочной кривой определяют графически концентрацию ИФН - γ в образцах.

Пример N 1.

Больная М. , 52 лет, поступила в стационар с диагнозом: ОД-меланома хориоидеи в стадии T₃N₀М₀, вторичная внутриглазная гипертензия с болевым синдромом; ОС-здоров. Накануне лечения проведено иммунологичсское исследование сыворотки крови и слезной жидкости обоих глаз.

Уровень ИФН - γ в сыворотке составил 93000 пкг/мл, что превышало нормальный физиологический уровень, как по нашим собственным наблюдениям, так и по литературным данным. ИФН - γ в слезе больного глаза обнаружен в концентрации (15500 пкг/мл - превышал нормальный уровень).

На основании предшествующих наблюдений была заподозрена стадия скрытого (субклинического) метастазирования, несмотря на отсутствие инструментального подтверждения. Учитывая наличие у больной абсолютно болящей вторичной глаукомы, в качестве паллиативного симптоматического лечения ей была предложена энуклеация больного глаза. Операция была произведена незамедлительно. Гистологическое исследование выявило эпителиоидную меланому хориоидеи с признаками эпибульбарного роста (T₄N₀M_x).

На контрольном осмотре спустя 3 месяца больная пожаловалась на тупую боль в правом подреберье. Назначена компьютерная томография печени. Исследование выявило два "холодных" узла в левой доле.

Таким образом, выявление системной гиперпродукции ИФН- γ предшествовало инструментальному выявлению метастазов.

Пример N 2. Пациент 34 лет поступил с диагнозом: увеальная меланома в стадии T₃N₀М₀ левого глаза. Миопия средней степени обоих глаз.

Накануне проведено иммунологическое исследование с определением ИФН- γ в сыворотке крови и слезной жидкости больного глаза. В сыворотке ИФН- γ не обнаружен, секреторный уровень ИФН - γ в слезной жидкости 6800 пкг/мл.

Размеры опухоли не позволяли провести органосохранное лечение, поэтому безальтернативным методом лечения являлась только энуклеация больного глаза. Операция была проведена в плановом порядке. Гистологически верифицирована смешанно-клеточная меланома с инфильтрацией двух третей склеры и опухолевым эмболом в устье вортикозной вены. Больной отнесен в группу риска развития метастазов как по данным иммунологического исследования, так и гисто-морфологического.

С целью профилактики рецидива опухоли в культе проведена протонотерапия. Однако 6 месяцев спустя при ультразвуковом исследовании печени обнаружены узлы пониженной эхогенной плотности. Сцинтиграфия подтвердила метастатический характер поражения.

Пример N 3. Пациент 60 лет поступила в стационар с диагнозом цилиохориоидальная меланома левого глаза в стадии T₂N₀M₀, факосклероз обоих глаз. Иммунологическое обследование: в сыворотке крови ИФН - γ не обнаружен (то есть в пределах нормы), уровень ИФН - γ в слезной жидкости 30000 пкг/мл. Данные иммунологического и инструментального исследования позволяли предложить больному органосохранное лечение, которое было проведено в плановом порядке (брахитерапия).

Данные иммунологического скрининга позволяли прогнозировать благоприятное течение заболевания. Прогноз оправдался. При обследовании год спустя: плоский рубец, практически не выявляемый на УЗИ. КТ печени и рентгенография легких не выявили признаков органной инвазии.

Таким образом, полученные данные с ретроспективным анализом клинического течения позволяют утверждать, что с помощью иммунологических исследований продукции ИФН- γ в сыворотке крови и слезной жидкости больного глаза возможно проведение прогноза клинического течения увеальной меланомы. Ценность предлагаемого нами способа заключается в том, что он также позволяет выделить группу риска перехода в стадию метастазирования, может оказаться полезным при оценке эффективности проводимого лечения скорректировать его на каждом анализируемом этапе. Способ информативен, малотрудоемок при большой практической ценности.

Способ может быть использован в медицине, а именно в офтальмологии. У пациента проводят исследование уровня интерферон-гамма в сыворотке крови и в слезной жидкости больного глаза. При повышении его уровня в сыворотке крови до 200 пкг/мл и более или снижении в слезной жидкости до 7000 пкг/мл и ниже прогнозируют ухудшение клинического течения заболевания. Способ более точен и позволяет оценить состояние больного в отношении риска возникновения метастазов и осуществить выбор адекватного метода лечения больного. 1 табл.

Способ прогнозирования клинического течения увеальной меланомы путем исследования сыворотки крови, отличающийся тем, что дополнительно исследуют слезную жидкость больного глаза, при этом определяют концентрацию интерферона-гамма в сыворотке и в слезной жидкости и при повышении его уровня в сыворотке крови до 200 пкг/мл и более или снижении в слезной жидкости до 7000 пкг/мл и ниже прогнозируют ухудшение клинического течения.