ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО В МАЗЕВОЙ ФОРМЕ НА ОСНОВЕ ИНТЕРФЕРОНА-АЛЬФА-2 Российский патент 2000 года по МПК A61K9/06 A61K38/21 A61P31/12 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, производству лекарственных средств.

Противовирусный препарат предназначен для лечения герпетических поражений кожи и слизистых оболочек.

Среди разнообразных заболеваний человека вирусной этиологии герпетическая инфекция занимает по распространенности одно из первых мест. Терапия герпеса представляет значительные трудности ввиду отсутствия четкого понимания патогенеза заболевания, длительного, часто бессимптомного и рецидивирующего течения болезни. При герпетических поражениях кожи и слизистых оболочек следует отдавать предпочтение местному применению лекарственных препаратов, т.е. мазевым лекарственным формам [1].

Известны противогерпетического действия мази "Зовиракс" английской фирмы Wellcom, "Ацикловир" югославской фирмы Zdravel, "Герпекс" индийской фирмы Torrent, "Виролекс" словенской фирмы KRKA и др. [2]. Противовирусное действие этих препаратов обусловлено наличием в их составе ацикловира.

Недостатками перечисленных препаратов являются требование частых аппликаций на пораженный участок кожи (до 5 раз в сутки) и то, что качестве действующего начала используют химически синтезированные вещества, а также высокая рыночная стоимость.

Интерфероновые препараты в форме мазей и гелей расширяют возможности терапевтического применения интерферона.

Известны мазевые и ректальные формы интерферона, оказывающие длительное противовирусное, противоопухолевое действие и предназначенные для лечения герпес-стоматитов у детей, бородавок на коже, генитальных бородавок и преканцероза. В большинстве случаев состав препаратов включена виниловая основа и анастезин [3] . Для терапии больных с ослабленным иммунитетом используют физически и химически модифицированный желатин в качестве носителя физиологически активных веществ, таких как интерферон [4,5]. В рецептуры этих интерфероновых мазей и гелей входят воски, вазелины, минеральное масло, миндальное масло, прованское масло, желатин, поливиниловый спирт, карбоксиметилцеллюлоза, оксиэтилцеллюлоза, полимеры полиакриловой кислоты, карбоксивинильные полимеры.

Недостатком этих препаратов является сложный набор компонентов, в том числе консервантов, включенных в составы для обеспечения стабильности противовирусных свойств мази. Наличие консервантов и других вспомогательных веществ может вызвать аллергические реакции.

Известен новый гелеобразователь - аксам. С учетом физико-химических и технологических свойств полимера экспериментально обосновано его применение в качестве гелеобразующего вспомогательного вещества в фармацевтической технологии, показана целесообразность создания лекарственных гелей пролонгированного действия на его основе. Этот полимер оказался подходящей средой высушивания для приготовления лиофилизированных форм гелевых препаратов интерферона и реаферона. Однако наличие в готовой лекарственной форме консерванта-нипагина создает аллергенный фон при аппликациях на кожу, а выпуск готовой лекарственной формы в лиофильно-высушенном виде усложняет производство. Кроме того, необходимость добавки воды для набухания геля создает некоторые неудобства при использовании в быту, где отсутствует апирогенная вода, и, следовательно, есть вероятность микробного загрязнения. Поскольку носитель аксам представляет собой аммониевую соль редкосшитого сополимера акриловой кислоты с аллиловым эфиром пентаэритрита, то есть достаточно сложный химически синтезированный полимер, постольку нельзя исключить в процессе приготовления, хранения и использования мази возможности деструкции полимерной цепи с образованием низкомолекулярных фрагментов, которые могут оказать вредное действие на организм человека [1].

В медицинскую практику все шире входят иммобилизованные препараты, в которых лекарственное вещество физически или химически связано с твердым носителем-матрицей с целью его стабилизации или пролонгированного действия. Иммобилизация лекарственных веществ на синтетических и природных матрицах уменьшает дозы и частоту введения лекарственных препаратов, защищает ткани от их раздражающего действия.

Использование иммобилизованных форм интерферона в препаратах для наружного применения увеличивает биологическую стабильность молекулы интерферона за счет образования дополнительных внешних и внутримолекулярных связей, не нарушающих конфигурацию белковой молекулы.

Известен способ приготовления иммобилизованных форм интерферона-альфа-2 на основе гидроокиси этилцеллюлозы, поливинилового спирта и/или полимеров полиакриловой кислоты (прототип). Носители в данном случае являются одновременно и стабилизаторами, и носителями содержащей мази. Кроме них в состав рецептур входят желатин, глицерин, антиадгезионные средства, консерванты и другие вспомогательные вещества. Достаточно многочисленный набор компонентов в составе предлагаемых лекарственных форм не гарантирует сохранения противовирусной активности мази в течение полугода и более, даже при хранении в условиях холодильной камеры, т.е. при +4^oC [6].

Недостатки мази-прототипа:
- многочисленный набор компонентов, включенный в состав для обеспечения стабильности противовирусных свойств мази в процессе ее хранения, что значительно удорожает мазь (таблица 2);
- наличие консерванта, который может вызвать аллергические реакции;
- существенные потери активности мази-прототипа при хранении в течение 3,5 месяца при температуре (20±1)^oC (таблица 1).

Задачей технического решения является создание нового противовирусного средства в мазевой форме с более простым составом, с более длительным сроком хранения при комнатной температуре, не вызывающим аллергические реакции.

Указанная задача решается тем, что в противовирусном средстве в мазевой форме на основе интерферона-альфа-2, включающем основу, пластификатор, субстанцию интерферона-альфа-2, согласно изобретению в качестве основы используют гель гидроксида алюминия, в качестве пластификатора - поливиниловый спирт, а субстанцию интерферона-альфа-2 используют с активностью не менее 1•10⁷ ME, при следующем количественном соотношении, мас.%:
Интерферон-альфа-2 с активностью не менее 1•10⁷ ME - 0,00005 - 0,00015
Поливиниловый спирт - 1,5-2,5
Гель гидроксида алюминия - Остальное до 100%
Одна упаковка средства содержит 1-5 г готовой формы препарата.

Использование в качестве мазевой основы геля гидроксида алюминия позволяет получить препарат интерферона в сорбированном на твердом носителе виде, и тем самым защитить белковую молекулу интерферона от действия протеологических ферментов, имеющихся в биологических жидкостях организма, обеспечив эффективное действие интерферона в течение длительного времени в очаге поражения. Гель гидроксида алюминия является хорошим адсорбентом и достаточно дешевым носителем, производимым в больших количествах именно для медицинских целей. Гель легко стерилизуется и стабилен при хранении. Отсутствие в гидрогелевой мази антибиотиков и консервантов удешевляет ее и расширяет круг возможных потребителей. Введение пленкообразующего полимера, поливинилового спирта (ПВС), в состав мази придает ей пластичность, и за счет образования пленки при аппликациях на кожу увеличивает пролонгирующее действие мази. Выбор ПВС в качестве загустителя, пластификатора и пролонгатора обусловлен тем, что он разрешен к применению в медицине, в частности для изготовления противоожоговых пленок. ПВС широко используется в составе кровезаменителей и лекарственных препаратов пролонгированного действия [7,8] . При применении ПВС в качестве пролонгатора действия глазных лекарственных форм показано, что он не раздражает слизистую оболочку глаза, не нарушает целостность роговицы и в то же время ускоряет эпителизацию эрозированной роговицы [9]. Кроме того, при использовании 5-10%-ных растворов ПВС для получения глазных капель с антибиотиками было обнаружено, что эти растворы обеспечивают пролонгирование действия и более высокий уровень концентрации препаратов по сравнению с введением водных растворов в гели мази, повышение скорости проникновения антибиотиков в жидкие среды глаза, отсутствие раздражающего действия на ткани глаза при многократных инстилляциях, а также сохранение активности ряда нестабильных антибиотиков [10]. Подбор концентрации раствора ПВС и содержание его в мази осуществлялся в зависимости от реологических свойств мази и от наличия токсичности в приготовленном растворе ПВС и в готовой лекарственной форме.

Соотношение компонентов мази выбрано с учетом адсорбционной способности геля гидроксида алюминия и реологических свойств мази, а также ориентируясь на данные аналогичных разработок зарубежных и отечественных фирм, где содержание интерферона в различных мазевых композициях колеблется от 1х10e2 до 1х10e8 ME/г [6,11]. По мнению врачей-дерматологов, выраженный лечебный эффект достигается при содержании интерферона 1х10e3 ME/г мази [1]. Противовирусная активность гидрогелевой мази составляет не менее 1х10e4 МЕ/г. Высокая стабильность мази обусловлена хорошими иммобилизационными свойствами геля гидроксида алюминия.

Пример 1. Технология приготовления мази.

Технология включает следующие стадии.

1. Приготовление 10%-ного раствора ПВС в деионизованной воде и натрийфосфатного буфера, pH 5,5.

2. Стерилизация всех компонентов мази, вспомогательных материалов и инструмента с использованием парового стерилизатора.

3. Промывка геля гидроксида алюминия натрийфосфатным буфером в условиях ламинарбокса с использованием центрифуги.

4. Адсорбция интерферона-альфа-2, рекомбинантного на геле гидроксида алюминия, путем перемешивания стандартизованного раствора интерферона (активность не менее 2,5 х 10e4 ME/мл) с плотным осадком геля, полученным в результате центрифугирования при 1500 об/мин в течение 20 мин. Перемешивание осуществляется при комнатной температуре в плотно укупоренных флаконах на встряхивателе в течение 3-3,5 ч.

5. Приготовление готовой лекарственной формы путем добавления к адсорбату (плотный осадок после центрифугирования и удаления надосадочной жидкости) расчетного количества 10%-ного раствора ПВС (25 об.% от объема осадка). Тщательное перемешивание в условиях ламинарбокса.

6. Фасовка мази в микробиологически чистом помещении в стерильную упаковочную тару.

Величина дозы в упаковке составляет 1, 2, 3, 5 г и выбрана в соответствии с потребностью мази на один курс лечения при 2-кратной аппликации в сутки в течение 5-6 дней с учетом площади пораженного участка.

Пример 2. Определение безвредности мази.

Безвредность мази оценивается на лабораторных животных. Местно-раздражающее действие при длительном применении и кожно-резорбтивное действие мази оценивают на крысах. Препарат наносят на выстриженный участок кожи животных размером 2 см² в течение 10 дней в дозе 200 мкг мази. В качестве контроля используют крыс, которым амплицировали основу мази либо физиологический раствор в эквивалентном количестве. Исследование кожно-сенсибилизирующих свойств проводят методом накожных аппликаций в соответствии с методическими рекомендациями по оценке аллергенных свойств фармакологических средств и инструкцией по экспериментально-клинической апробации косметических средств.

Оценку безвредности производят по результатам физиологического обследования животных, биохимического и гематологического анализа крови. В микроструктуре кожи опытных животных не обнаружено грубых нарушений в виде поражения эпидермиса, изменения структуры сальных и потовых желез, деструкции волосяных фолликулов. Эпитемальный покров сохранен полностью, базальный слой прослеживается на всем протяжении. Не обнаружено признаков воспалительной реакции или изменения митотической активности клеток кожи.

Таким образом, изменения состояния кожных покровов незначительны и носят обратимый характер.

Проведенное исследование мазевой формы интерферона и основы мази геля гидроксида алюминия показывает отсутствие токсического, кожно-раздражающего и аллергизирующего действия на организм лабораторных животных, что позволяет сделать вывод о безвредности новой мазевой формы интерферона-альфа-2.

Результаты проведенных доклинических исследований показали, что мазевая форма альфа-2 интерферона стабильна при хранении в течение одного года, не влияет на слизистую, не обладает токсическим, кожно-раздражающим и аллергизирующим действием на организм лабораторных животных и обладает противовирусным действием.

Клинические испытания мази альфа-2 интерферона на гидрогелевой основе проводились на базе Московского городского противогерпетического центра. Под наблюдением находились 19 человек, больных простым рецидивирующим герпесом кожи и слизистых оболочек (добровольцы) в возрасте от 17 до 32 лет.

Препарат наносили тонким слоем на пораженный участок кожи слизистых оболочек 2 раза в сутки в течение 3-5 дней.

Группа сравнения состояла из 10 человек, страдающих рецидивирующим герпесом. Им проводилась наружная терапия 5%-ным кремом "Зовиракс" в течение 5 дней (таблица 3).

Результаты лечения оценивались по следующим критериям:
- значительное улучшение - сокращение сроков разрешения высыпаний в 2,5 раза;
- улучшение - сокращение длительности рецидивов в 2 раза;
- без эффекта - менее выраженная динамика в процессе терапии.

Результаты приведены в таблице 3.

Пример 3. Определение срока годности мази рекомбинантного альфа-2 интерферона на гидрогелевой основе.

При изучении стабильности свойств мазевой формы образцы пяти серий мази (по 60 флаконов каждой серии) хранили в холодильнике при температуре от 0 до 10^oC и при комнатной температуре (20±2)^oC в течение 15 месяцев. Через три, шесть, двенадцать, пятнадцать месяцев хранения образцы мази анализировали на соответствие качества требованиям проекта ВФС [12]. По внешнему виду, цвету, консистенции, показателю концентрации водородных ионов мазь полностью сохраняла свойства в течение всего периода хранения.

Результаты определения показателей при хранении образцов представлены в таблице 4.

Из сопоставления данных по сохранению противовирусной активности мази-прототипа (таблица 1) и предлагаемой мази (таблица 4) в процессе хранения при различных температурах видно, что последняя более стабильна, так как при хранении в течение 1 года даже при комнатной температуре (20±2)^oC у нее наблюдается лишь незначительное снижение активности в пределах ошибки метода анализа, в то время как у мази-прототипа при хранении в этих же условиях, но в течение всего лишь 3,5 месяца наблюдается снижение активности на 43% без желатина и на 11% с желатином в составе мази. Таким образом, чтобы избежать значительных потерь активности мази-прототипа в процессе хранения, в ее состав необходимо вводить дополнительный компонент-стабилизатор. Но даже присутствие стабилизатора, в данном случае желатина, не дает такого уровня стабильности мази-прототипа, который характерен для предлагаемой мази.

Результаты определения противовирусной активности мази при выбранных сроках хранения показали, что противовирусная активность практически не меняется даже при комнатной температуре в течение одного года. Важным условием сохранения активности мази является микробиологическая чистота препарата.

Противовирусное средство на основе высокоактивного рекомбинантного интерферона-альфа-2 в два-три раза дешевле зарубежных аналогов и гораздо экономичнее, так как достаточно двух аппликаций мази в сутки, чтобы получить выраженный лечебный эффект, имеет в своем составе всего три компонента, сохраняет противовирусную активность без изменения в течение года и более при хранении в условиях холодильной камеры (+4^oC). Незначительное снижение активности наблюдается при хранении при комнатной температуре (+20^oC).

Новое противовирусное средство в мазевой форме с более простым составом, с более длительным сроком хранения при комнатной температуре, не вызывающее аллергические реакции дает возможность получить выраженный лечебный эффект.

Использование данного средства мазевой формы интерферона и основы мази геля гидроксида алюминия позволяет получить сокращение сроков лечения в 2,5 раза, сокращение длительности рецидивов в 2 раза и менее выраженную динамику в процессе терапии.

Список литературы
1. Клявина Е. А. Технология и исследование лекарственных форм интерферона: Автореферат дисс.канд.фарм.н. - М., 1991 г.

2. Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник. М.: Астрафарм Сервис. - 1995. - L168C.

3. Бикбулатов Р.М., Кукашева З.Ш., Иовлев В.И., Степанов А.Н. Клинико-иммунологическое обоснование применения высокоактивного человеческого альфа-интерферона в терапии герпес-стоматитов у детей. B кн.: Герпесвирусные инфекции. Сб.науч.тр. - М., 1990, с. 153-157.

4. Заявка DE N 3803312, A 61 K 45/02, опубл. 10.08.89. Verwendung eines interferonent paltenden Gels.

5. Заявка EP N 0162332, A 61 K 45/02. Применение физического и химического модифицированного желатина в физиологически активных веществах, таких как интерферон.

6. Заявка DE N 3603444, A 61 K 45/02, опубл. 06.08.87 г. Pharmaleutische Lubereitungsformen lur Stabilisierung von Interferon alpha.

7 Ершов Ф.И., Новохатский А.С. Интерферон и его индукторы. - М.: Медицина, 1980 г.

8. Вирник А.Д., Снежко В.А., Хомяков К.П. Полимеры в медицине. - 1976. - T. 6, N 4. - C. 191-210.

9. Березин И.В., Антонов В.К., Мартинек К. Иммобилизованные ферменты. - МГУ. - 1976. - Т. 1-2.

10. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов. - М.: Агропромиздат, 1987. - С. 137-142.

11. Joester Karl - Eduard, Wolf Wieland Interferon Stabilisierende pharmaleutishe Lubereitung: Заявка (ДЕ) N 3642223, опубл. 23.06.88 г.

12. Фармакопейная статья. "Мазь рекомбинантная альфа-2 интерферона на гидрогелевой основе", ВФС-42-2992-97.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, производству лекарственных средств и предназначено для лечения герпетических поражений кожи и слизистых оболочек. Предложено противовирусное средство в мазевой форме на основе интерферона-альфа-2 с удельной активностью не менее 1 х 10⁷ ME, сорбированного на геле гидроксида алюминия с последующим смешиванием с пленкообразующим полимером - поливиниловым спиртом. Средство позволяет сократить сроки лечения в 2,5 раза и длительность рецидивов в 2 раза. 1 з.п. ф-лы, 4 табл.

1. Противовирусное средство в мазевой форме на основе интерферона-альфа-2, включающее основу, пластификатор, субстанцию интерферона-альфа-2, отличающееся тем, что в качестве основы используют гель гидроксида алюминия, в качестве пластификатора поливиниловый спирт, а субстанцию интерферона-альфа-2 используют с активностью не менее 1,7 x 10⁷ МЕ, при следующем количественном соотношении компонентов, мас.%:
Интерферон-альфа-2 с активностью не менее 1,7 x 10⁷ МЕ - 0,00005 - 0,00015
Поливиниловый спирт - 1,5 - 2,5
Гель гидроксида алюминия - Остальное до 100%
2. Противовирусное средство по п.1, отличающееся тем, что одна упаковка средства содержит 1 - 5 г готовой формы препарата.