СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ НИЗШИХ ГРИБОВ НА ПЛОДАХ САДОВЫХ КУЛЬТУР Российский патент 2001 года по МПК C12Q1/02 C12N1/00 

Изобретение относится к фитопатологии и может быть использовано в сельском хозяйстве, для оценки зараженности плодов садовых культур низшими грибами.

Важные для сельского хозяйства микроскопические грибы редко встречаются в природе изолированно от других микроорганизмов. Известен способ выделения низших грибов, включающий в себя непосредственно посев на соответствующую питательную среду. Для определения патогенных грибов не всегда нужно выращивать их в чистой культуре. Выделение спороносящих грибов с живых растений нередко проводят непосредственным переносом мицелия или спор с их поверхности на соответствующую питательную среду. Если гриб или споры нельзя выделить с поверхности растения, пораженные части растений нужно поместить во влажную камеру. Для этой цели обычно используют чашки Петри с влажной фильтровальной бумагой. Грибы, развивающиеся внутри органа, помещают на влажную фильтровальную бумагу во влажной атмосфере.

Выделение жизнеспособных фитопатогенных грибов из пораженных тканей растения-хозяина этим способом проходит в течение нескольких дней. Часто за это время происходит зарастание и задержка роста выделяемого гриба вторичными сапрофитными микроорганизмами, присутствующими на поверхности растений, которые отличаются более быстрым ростом в условиях влажной камеры (см. З. Кирай, З. Клемент, Ф.Шоймоши, Й.Вереш, Методы фитопатологии. М.: Колос, с. 178-179).

Наиболее близким техническим решением из известных является способ выделения фитофторовых грибов из почвы, согласно которому на поверхность исследуемого образца почвы наносят воду и размещают на ней лепестки цветков земляники, а о наличии грибов судят по росту мицелия гриба на лепестках (см. С. А.Острейко, Э.М.Дроздовский и Г.А.Барбатунова. Способ выделения фитофторовых грибов из почвы. Авт. св-во СССР N 1663025, М. кл. C 12 O 1/02, C 12 N 1/00, 1988 г., опубл. Бюл. N 26, 1999 г. - прототип).

Однако этот известный способ требует для выявления низших грибов большого количества времени и не приемлем для выявления их на плодах садовых культур.

Задачей, на решение которой направлено изобретение, является сокращение срока выявления низших грибов и повышение достоверности результата.

Поставленная задача достигается тем, что в способе выделения низших грибов на плодах садовых культур, включающем нанесение на поверхность исследуемых плодов воды, выдерживание их во влажных камерах и последующее микроскопирование, новым в способе является нанесение на поверхность исследуемых плодов католита, полученного при электролизе воды, при этом весовое соотношение плодов и католита равно 1:12.

Новым техническим результатом является увеличение скорости роста мицелия гриба на исследуемых плодах.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемого изобретения, позволил установить, что заявителем не обнаружено техническое решение, характеризующееся признаками, идентичными всем существенным признакам предлагаемого изобретения.

В частности анализ предложенного технического решения по сравнению с прототипом позволил установить его существенное отличие от прототипа, выразившееся в том, что в предлагаемом способе выделения низших грибов на плодах садовых культур для увеличения скорости прорастания мицеллия гриба на плодах, на поверхность последних наносят католит ("живую воду"), полученный при электролизе воды.

Следовательно, предложенное изобретение соответствует критерию "новизна".

Для проверки соответствия предлагаемого изобретения требованию "изобретательский уровень" был проведен дополнительный поиск известных решений с целью выявления признаков, совпадающих с отличительными от прототипа признаками предлагаемого изобретения, результаты которого показывают, что предлагаемое изобретение не следует явным образом из известного уровня техники, определенного заявителем, не выявлено влияния предусматриваемых существенными признаками предлагаемого изобретения преобразований на достижение технического результата.

Так, авторами предложено помимо нового технического приема еще учитывать и соотношение масс католита, полученного при электролизе воды, и массы плодов.

Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует требованию "изобретательский уровень".

Способ поясняется чертежом, где изображено устройство для получения католита.

Устройство состоит из сосуда 1, в котором размещены электроды 2 и 3, соединенные с диодом 4 (300 В, 10 А), при этом электроды закреплены на крышке 5, выполненной из изоляционного материала. Оба электрода могут быть выполнены из нержавеющей стали (лучше графита), посредством электрических проводов подключены к электросети.

Электрод, соединенный с диодом, размещен в мешочке 6, выполненном из полупроницаемого для воды материала, например из брезента, и размещен в упомянутом сосуде 1. При получении католита сначала наливают обычную питьевую воду в мешочек 6 и затем устанавливают его в сосуд 1, который также заполняют водой, после этого сосуд 1 накрывают крышкой 5 так, чтобы электрод 3, соединенный с диодом 4, был размещен в мешочке 6, а электрод 2 - в сосуде. Подключают устройство к электросети. При пропускании электрического тока через воду на электроде 3 образуется кислая вода, на электроде 2 - католит (щелочная вода). Процесс получения католита длится примерно 3 мин. После этого устройство отключают от сети, быстро поднимают крышку 5 с электродами и извлекают мешочек 6 с аналитом А (кислой водой), а в сосуде остается католит К (щелочная вода), которую и используют для дальнейшей работы.

Для ускорения процесс производят в электромагнитном поле, формируемом с помощью индуктора 7, охватывающего снаружи корпус 1 и подключенного параллельно посредством проводов 8 электропроводам питания устройства для получения католита и аналита.

Свежесобранные ягоды земляники (в период созревания) тщательно мыли и после этого помещали в чашку Петри или другой лабораторный сосуд. Фильтровальная бумага, на которую укладывают ягоды, смачивается католитом, при этом весовое соотношение ягод к католиту 1:12.

Чашку Петри закрывают и ставят в условия температуры, оптимальной для образования колоний гриба (20^oC). В течение нескольких часов, при наличии патогена в ягоде, происходит под действием католита стимуляция образования его мицелия и спорообразование. При отсутствии патогена ягоды оставались неповрежденными, либо на них развивались другие грибы (Penicillium spp.).

Католит активно стимулировал прорастание патогенов таких видов грибов, как Botrytis cinerea Pers., Rhizopus spp.

При традиционном способе выявления патогенов, для прорастания мицелия и появления спороношения, по которому определяется вид патогена, необходимо более 12 ч. Предлагаемый способ позволяет уже через 5 ч (табл. 1) после закладки плодов увидеть мицелий и/или спороношение гриба на плодах.

Для определения вида гриба проводилось микроскопирование. Для этого делается соскоб с плода, имеющего на поверхности мицелий со спороношением. Анализируемый участок кладется на предметное стекло в каплю воды, накрывается покровным стеклом и просматривается под микроскопом. Вид определяется по наличию характерных конидиеносцев (Botrytis cinerea Pers.): буроватых, прямостоячих, более или менее разветвленных, в виде "небольшого деревца".

Результаты были подтверждены при искусственном заражении плодов спорами Botrytis cinerea 10⁹ тыс. спор/мл.

Изучалась возможность широкого применения данного способа выявления патогенов, был проведен опыт на плодах яблони сорта Оттава (табл. 1).

Свежеубранные яблоки в период созревания были собраны и положены во влажные камеры, где фильтровальная бумага была смочена католитом. По истечении 16 ч началось загнивание яблок (табл. 2).

Данный способ выявления патогенов позволяет достоверно определять гриб-патоген, его вид и вредоносность.

Предлагаемый способ дает возможность определить степень поражения плодов и прогнозировать, насколько велики будут потери урожая на данном участке сада. Кроме своей простоты и значительного сокращения времени способ обладает большей степенью достоверности, так как в качестве испытуемых биологических объектов используются непосредственно сами плоды культуры.

Изобретение относится к фитопатологии, а именно к способу выявления низших грибов на плодах садовых культур. Свежесобранные плоды берут в период созревания, тщательно моют, укладывают в чашки Петри на поверхность фильтровальной бумаги, которую предварительно смачивают католитом, при этом весовое соотношение ягод и католита 1:12. Чашки Петри закрывают и ставят в условия температуры, оптимальной для образования колоний гриба. В течение нескольких часов, при наличии патогена в плодах, происходит образование его мицелия и спор. При отсутствии патогена плоды оставались неповрежденными, либо на них развивались другие грибы. Католит активно стимулировал прорастание патогенов таких видов грибов, как Botrytis cinerea Pers., Rhizopus spp. Предлагаемый способ позволяет уже через 5 ч после закладки плодов увидеть мицелий и/или спороношение гриба на плодах. Для определения вида гриба проводят микроскопирование. Способ позволяет значительно сократить срок выявления патогенов и повысить достоверность результата. 2 табл., 1 ил.

Способ определения низших грибов на плодах садовых культур, включающий нанесение плодов на поверхность, выдерживание их во влажной камере и последующее микроскопирование, отличающийся тем, что поверхность предварительно смачивают католитом, полученным при электролизе воды, при весовом соотношении плодов и католита 1 : 12.