СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ПРОСТЕЙШИХ ГРИБОВ НА САДОВЫХ КУЛЬТУРАХ Российский патент 2003 года по МПК C12Q1/02 C12N1/14 C12N13/00 A01G1/00 

Изобретение относится к фитопатологии и может быть использовано в сельском хозяйстве для оценки зараженности садовых культур простейшими грибами.

Важные для садоводства микроскопические грибы изолированно от других микроорганизмов в природе встречаются крайне редко. Для выделения их необходимо осуществить определенный перечень последовательных операций.

Известен способ выделения простейших грибов, включающий в себя непосредственно посев на соответствующую питательную среду. Для определения патогенных грибов не всегда нужно выращивать их в чистой культуре. Выделение спороносящих грибов с живых растений нередко проводят непосредственным переносом мицелия или спор с их поверхности на соответствующую питательную среду. Если гриб или споры нельзя выделить с поверхности растения, пораженные части следует поместить во влажную камеру. Для этой цели обычно используют чашки Петри с влажной фильтровальной бумагой. Грибы, развивающиеся внутри органа, помещают на влажную фильтровальную бумагу во влажной атмосфере.

Выделение жизнеспособных фитопатогенных грибов из пораженных тканей растения-хозяина этим способом проходит в течение нескольких дней. Часто за это время происходит зарастание и задержка роста выделяемого гриба вторичными сапрофитными микроорганизмами, присутствующими на поверхности растений, которые отличаются более быстрым ростом в условиях влажной камеры (см. З. Кирай, З. Клемент, Ф. Шоймоши, И. Вереш. Методы фитопатологии. М.: Колос, с. 178-179).

Известен также способ выделения фитофторовых грибов из почвы, согласно которому на поверхность исследуемого образца почвы наносят воду и размещают в ней лепестки цветков земляники, а о наличии грибов судят по росту мицелия гриба на лепестках (см. авт. св. СССР 1663025, М. кл. C 12 Q 1/02, С 12 N 1/00, 1988 г., опубл. Бюл. 26, 1989 г.).

Однако этот известный способ требует для выявления низших грибов большого количества времени и не приемлем для выявления их на плодах садовых культур.

Наиболее близким техническим решением из известных является способ выявления грибов патогенов на плодах, согласно которому производят омагничивание наносимого на поверхность тестируемых образцов водного раствора, выдержку их во влажной камере и последующее микроскопирование (см. Бешнов Г.В., Воробьева С. В., Ундрицова И.А. Выявление патогенов на плодах. Ж-л "Защита и карантин растений", 4, 2001 г., с. 34-35 - прототип).

Однако и этот, несомненно, прогрессивный способ требует длительного времени как для обработки тестируемых образцов, так и для тщательной подготовки наносимого на поверхность тестируемых образцов водного раствора, что в современных условиях приводит к дополнительным потерям энергетических и трудовых затрат.

Задачей, на решение которой направлено изобретение, является сокращение периода выявления простейших грибов и снижение энергетических и трудовых затрат.

Поставленная задача решается тем, что в способе выявления простейших грибов на садовых культурах, включающем физическую обработку тестируемых образцов, выдержку их во влажной камере и последующее микроскопирование, новым является то, что тестируемые образцы садовых культур обрабатывают не менее чем тремя сериями однонаправленных импульсов магнитной индукции при соотношении количества импульсов в сериях соответственно 13:21:34 с амплитудным значением магнитной индукции 0,05 Тл, периодом 5,12 с и скважностью от 100 до 4500, а интервал времени между второй и третьей сериями импульсов в два раза больше интервала времени между первой и второй сериями импульсов.

Новым техническим результатом является увеличение скорости роста мицелия гриба на тестируемых образцах и повышение достоверности результата.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемого изобретения, позволил установить, что заявителем не обнаружено техническое решение, характеризующееся признаками, идентичными всем существенным признакам предлагаемого изобретения.

В частности анализ предложенного технического решения по сравнению с прототипом позволил установить его существенное отличие от прототипа, выразившееся в том, что в предложенном способе выделения простейших грибов на садовых культурах тестируемые образцы садовых культур обрабатывают не менее чем тремя сериями однонаправленных импульсов магнитной индукции. То есть магнитной обработке подвергают сами тестируемые объекты садовых культур, а не раствор, впоследствии наносимый на поверхность тестируемых объектов как в прототипе.

Следовательно, предложенное техническое решение соответствует критерию "новизна".

Для проверки соответствия заявленного изобретения условию "изобретательский уровень" был проведен дополнительный поиск известных решений с целью выявления признаков, совпадающих с отличительными от прототипа признаками предлагаемого изобретения. Результаты дополнительного поиска показывают, что предлагаемое изобретение не следует явным образом из известного уровня техники, определенного заявителем, не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками предлагаемого изобретения преобразований на достижение технического результата. Так, авторами предложено помимо нового технического приема еще учитывать и соотношение числа однонаправленных импульсов магнитной индукции в сериях и интервалов времени между второй и третьей сериями импульсов.

Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует требованию "изобретательский уровень".

Способ осуществляют следующим образом.

Пример 1. Свежесобранные ягоды земляники (в период созревания) тщательно мыли дистиллированной водой и помещали по 5 шт. в каждую чашку Петри. Затем чашку Петри закрыли и поместили внутрь многовитковой цилиндрической катушки (индуктора), подключенной к источнику однонаправленных импульсов тока, в качестве которого использовали генератор омагничивающих импульсов (ГОИ), разработанный в институте. Принцип действия ГОИ основан на медленном, в течение 5,12 с, заряде конденсатора большой емкости и последующем быстром разряде его через открытый электронный ключ и индуктор. В результате этого импульсы намагничивающего тока, следующие через индуктор с периодом 5,12 с, создают внутри него импульсы магнитной индукции 0,05 Тл скважностью 100, которые воздействуют на тестируемые ягоды земляники, размещенные внутри индуктора. Тестируемые ягоды земляники обрабатывали тремя сериями однонаправленных импульсов магнитной индукции при соотношении количества импульсов в сериях соответственно 13: 21:34, а интервал времени (180 с) между второй и третьей сериями импульсов в два раза больше интервала времени (90 с) между первой и второй сериями импульсов.

После обработки тестируемых ягод земляники однонаправленными импульсами магнитной индукции чашки Петри с ягодами поместили в условия воздействия температуры, оптимальной для образования колоний гриба (20^oС). Такое же количество чашек Петри с необработанными ягодами также поместили в условия, оптимальные для образования колоний гриба (20^oС) и обработанных по методу, принятому за прототип.

В течение нескольких часов, при наличии патогена в ягоде, под действием однонаправленных импульсов магнитной индукции произошла стимуляция образования его мицелия и спорообразования.

Однонаправленные импульсы магнитной индукции активно стимулировали рост патогенов таких видов грибов, как Botrytis cinerea Pers., Rizopus spp.

Уже через 4 ч (табл.1) после закладки ягод земляники можно было увидеть мицелий и/или спороношение на ягодах.

При отсутствии патогена ягоды оставались неповрежденными.

При традиционном способе выявления патогенов (метод влажных камер), для прорастания мицелия и появления спороношения, по которому определяется вид патогена, необходимо более 12 ч.

Для определения вида гриба проводили микроскопирование. Для этого делали соскоб с ягоды, имеющей на поверхности мицелий со спороношением. Анализируемый участок клали на предметное стекло в каплю воды, накрывали покровным стеклом и просматривали под микроскопом. Вид гриба определяли по наличию характерных конидиеносцев (Botrytis cinerea Pers.): буроватых, прямостоящих, более или менее разветвленных, в виде "небольшого деревца".

Пример 2. Было проведено испытание предложенного способа по выявлению патогенов на плодах сорта Оттава.

Свежеубранные яблоки в период созревания были собраны и после обработки их тремя сериями (13:21:34) однонаправленных импульсов магнитной индукции 0,05 Тл периодом 5,12 с и скважностью 4500, с интервалом времени между сериями теми же, что и в первом примере с ягодами земляники, были так же, как и в первом примере, положены в сосудах во влажные камеры. По истечении 6 ч началось загнивание яблок (табл.2). Для определения вида гриба так же, как и в 1-м примере, с пораженного плода был сделан соскоб и с помощью микроскопа установлен его вид Botrytis cinerea Pers.

Установление одинакового временного интервала между сериями однонаправленных импульсов магнитной индукции не позволило сократить срок выявления патогенных грибов на плодах, а трехкратное увеличение интервала между второй и третьей сериями по отношению к интервалу времени обработки между первой и второй сериями приводило к увеличению длительности процесса выявления патогенов на плодах.

Таким образом предлагаемый способ позволяет за более короткий по сравнению с прототипом срок определить с большей степенью достоверности гриб-патоген, его вид и вредоносность для садовой культуры, так как в качестве используемых объектов используются непосредственно сами плоды садовой культуры, то есть отсутствуют какие-либо промежуточные элементы, которые присущи прототипу, что упрощает сам способ выделения грибов и в 4 раза сокращает энерго- и трудозатраты.

Изобретение относится к фитопатологии и может быть использовано в сельском хозяйстве для оценки заражаемости садовых культур простейшими грибами. Способ включает обработку тестируемых образцов садовых культур не менее чем тремя сериями однонаправленных импульсов магнитной индукции при соотношении количества импульсов в сериях соответственно 13:21:34. Амплитудное значение магнитной индукции 0,05 Тл. Период 5,12 с, скважность от 100 до 4500. Интервал времени между второй и третьей сериями импульсов в два раза больше интервала времени между первой и второй сериями импульсов. Способ позволяет увеличить скорость роста мицелия гриба на тестируемых растениях, повысить достоверность результата. 2 табл.

Способ выявления простейших грибов на садовых культурах, включающий физическую обработку тестируемых образцов, выдержку их во влажной камере и последующее микроскопирование, отличающийся тем, что тестируемые образцы садовых культур обрабатывают не менее чем тремя сериями однонаправленных импульсов магнитной индукции при соотношении количества импульсов в сериях соответственно 13: 21:34 с амплитудным значением магнитной индукции 0,05 Тл, периодом 5,12 с и скважностью от 100 до 4500, а интервал времени между второй и третьей сериями импульсов в два раза больше интервала времени между первой и второй сериями импульсов.