Способ выделения фитофторовых грибов из почвы Советский патент 1991 года по МПК C12Q1/02 C12N1/00 

ЩГ

е

Изобретение относится к фитопатологии и может быть использовано в сельском хозяйстве для оценки зараженности почвы фитофторовыми грибами. Цель изобретения - упрощение способа. Отбирают пробу почвы, помешают ее в чашку Петри или другой сосуд, заливают водой так, чтобы она полностью покрывала почву тонким слоем, помещают на поверхность воды несколько свежих лепестков земляники, закрывают чашку и выдерживают при комнатной температуре, а затем микроскопируют. Способ прост и позволяет сократить время на выделение фитофторовых грибов.

Изобретение относится к фитопатологии и может быть использовано в сельском хозяйстве для оценки зараженности почвы фитофторовыми грибами - опасными патогенами многих сельскохозяйственных культур.

Цель изобретения - упрощение способа.

Способ заключается в следующем. Небольшое количество почвы помещают в чашку Петри или в другой аналогичный сосуд, заливают водой так, чтобы она полностью покрывала почву тонким слоем, помещают на поверхность воды несколько свежих лепестков земляники, закрывают чашку и выдерживают при комнатной температуре. При наличии фитофторы в исследуемом образце почвы лепестки уже через 2-3 сут полностью или частично буреют, а при помещении их на предметном стекле

под микроскопом по краям лепестков хорошо видны зооспорангии гриба. По количеству побуревших лепестков, зооспорангиев и их морфологическим особенностям можно судить не только о наличии фитофторы в почве, и о виде гриба но и об интенсивности ее заселения патогеном. При отсутствии в почве фитофторы лепестки остаются свежими или на них развиваются другие виды грибов (Alternaria Fusarium).

Лепестки земляники чувствительны к фитофторовым и литиевым грибам . Уже через 1-2 дня на краях лепестков формируются зооспорангии, хламидоспоры грибов Грибы других родов на лепестках развиваются довольно слабо, лишь после продолжительного пребывания лепестков в почвенной суспензии (4-7 дн) и не мешают выявления фитофторовых грибов

Оч

О СА) О N СЛ

Пример. Проведен параллельный анализ трех образцов почвы: 1) почва из сада, естественно зараженная Phytophthora cactorum и Ph. citricola; 2) стерильная почвенная смесь из теплицы; 3)стерильная почвенная смесь, искусственно зараженная чистой культурой Ph. cactorum (смыв с одной чашки Петри на 100 см почвы). Каждый образец разделен на 3 части и проанализирован тремя способами, описанными ниже.

Исследуемую почву заливают водой в соотношении 1 объем воды на 2 объема почвы с таким расчетом,чтобы слитая с почвы отстоявшаяся вода образовала в сосуде диаметром 10 см слой толщиной 1 -2 см. В эту воду помещают зеленые ягоды земляники концом, противоположным плодоножка, и выдерживают. В случае наличия в почве спорангиев, при условиях, наиболее благоприятных, ягода может за 48 ч покрыться очень характерным войлоком белого мицелия.

Анализируемую почву заливают в чашках Петри водой слоем 5-10 мм и на поверхность воды помещают в каждую чашку по три отдельных доли листа растений земляники, полученных в культуре тканей, и выдерживают. Листья берут примерно через 5 недель после высадки этих растений в грунт. В случае наличия в почве фитофторы, через 3-5 дней на листьях должны появиться некротизмрованные участки, которые анализируют под микроскопом на наличие гриба.

Анализируемую почву заливают в чашках Петри водой слоем 1-2 мм над уровнем почвы и на поверхность воды помещают несколько лепестков цветков земляники (с растений, выращенных в стерилизованной почве и содержащихся в лаборатории и теплице) и выдерживают при комнатной температуре. В том случае, если почва заражена фитофторой, лепестки через 2-3 дня, а при наиболее благоприятных условиях и через сутки, заселяются грибом и буреют. Побуревшие лепестки просматривают под микроскопом для определения гриба.

При просмотре образцов обнаружено следующее. Через 3 дня лепестки земляники в обоих вариантах с зараженной почвой полностью побурели, тогда как на листьях и ягодах признаки поражения отсутствуют.

Опыт повторен для уточнения времени реакции приманки. Обнаружено, что на следующий день в вариантах с зараженной почвой часть лепестков побурела, а еще через сутки побурели все лепестки. Под микроскопом на них обнаружены зооспорангии соответствующих видов Phytophthora (в варианте с садовой почвой на часть лепестков выделилась Ph. cactorum, на часть - Ph. citricola, в некоторых случаях на одном и том же лепестке обнаруживались оба вида). Такая быстрая реакция лепестков объясняется, видимо, высокой температурой в лаборатории (24-25°С), обусловленной очень жаркой погодой и благоприятной для развития обоих исследовавшихся видов фитофторы.

0 На листьях земляники первые побуревшие участки отмечены в варианте с искусственно зараженной почвой только на 4-й, в варианте с садовой почвой - на 5-й день. Побурение ягод отмечено на 3-5-й день,

5 однако характерный белый мицелий не развился.

В вариантах с незараженной почвой лепестки, листья и ягоды оставались здоровыми в течение 10 дн, пока опыт не был

0 прекращен. Затем осуществляют идентификацию видов Phytophthora, развивающихся на лепестках. Для этого лепесток (или несколько лепестков) помещают в каплю воды на предметное стекло, накрывают покров5 ным и просматривают под микроскопом. На побуревших лепестках развиваются органы спороношения и мицелий, характерные для каждого вида. Виды идентифицируются по форме зооспорангиев (лимоновидные, гру0 шевидные, овальные и др.), по наличию и форме сосочка из зооспорангии (присутствует, отсутствует, резко выражен, представлен шиловидным выростом, представлен утолщением оболочки на вершине зооспо5 рангия), по наличию или отсутствию хлами- доспор, вздутий на мицелии, особенностям прорастания спорангиев и т.д.

На листьях идентификацию грибов до вида производят таким же образом, но ,от0 деляя пораженный участок или делая с него соскоб. При этом всегда есть опасность оторвать и зооспорангии. К тому же участок листа гораздо труднее просматривать из-за его большей толщины и непрозрачности.

5 При использовании в качестве приманки ягод необходимо после образования ми- целиального налета с органами спороношения изготовить из него препарат для микроскопирования и идентифициро0 вать гриб по тем же признакам, что и на других приманках. При отсутствии налета можно обнаружить в побуревших тканях зооспоры гриба, но по ним невозможно идентифицировать вид.

5 Таким образом, способ проще известных, так как не требует дополнительных операций по приготовлению препаратов для микроскопирования и сокращена продолжительность определения фитофторо- вых грибов.

Формула изобретенияпочвенного образца воды и помещение на

нее растительной ткани земляники, о т л иСпособ выделения фитофторовых гри- ч а ю щи и с я тем, что, с целью упрощения бов из почвы, предусматривающий нанесе- способа, из растительной ткани земляни- ние на поверхность исследуемого 5 ки используют лепестки цветков.