ют 5 мл воды, фильтруют, фильтрат после извлечения эфиром размешивают с 5 г угля. Уголь отфильтровывают, промывают 100,ил воды и элюируют 2%-ным спиртовым раствором триэтиламина. Элюаты упаривают в вакууме досуха, остаток растворяют в 1 мл метанола и добавляют раствор 0,06 г (0,5 ммоль) перхлората натрия в 1 мл метанола. Вьшавший осадок отфильтровывают, промывают спиртом и выделяют целевой продукт препаративпым электрофорезом на бумаге ФН-18 в буфере 0,05 М ацетат натрия, рН 4,1 при напряжении 4000 В. Полосу с лодвиЖНОстью -f 0,76 относительно АМФ элюируют при +4 -4,5° С, элюат лиофилизуют, остаток промывают абсолютным метанолом, эфиром и сушат в вакууме над РгОз. Выход натриевой соли а-аминоу - (метилтио) - проииЛфосфонил-5 - аденилата 0,067 г (25%), А.МФ -fO,76, (s,i;o 13250, рН 7). На хроматогра.ммах и электрофореграммах поглошаюшее в УФ пятно окрашивается иингидрином, вещество окисляется периодатом натрия до соответствующего диальдегида (цыс-гликольиая группировка) и п,ри гидролизе 1н. соля-ная кислота, 100° С, 10 мин} дает только аденозин-5-фосфат и а-амино-(7-метилтио)-пропилфосфоновую кислоту (наличие ангидридной связи). Исследовалось вл.ияиие а-амино-у-(метилтио) -пропилфосфонил -5-аденилата на реакции, катализируемые валилфенилалатюл- и метионял-тРНК - синтетазами из Е. соИ В. В ходе этих реакций осиовными промежуточными соединениями являются соответственно валил-, феиилаланил-, метио-нил-5-адеиилаты. Фоофонатным аналогом последнего из иих является целевой продукт, что подразумевало специфическое торможение только метиоиииового фермента. Результаты иредставлены в таблице. Иигибирование аминоацил-тРНК-синтетаз а-амино-7- (метилтио) -нропилфосфонил -5-аденилатомКак видно из данных таблицы {а-амино7-(метилтио) - пропилфосфонил -5-адени лат дейсгвует в случае метионил-тРНК,синтетазы на 3-4 -порядка лучше, чем по отношению к другим ферментам. Пример 2. Ингибирование метионилтРПК-синтетазы натриевой солью а-амино -(метилтио) - иропилфосфоиил - 5 - адеиилата. Метионил-тРПК-синтетазу Е. соИ В иолучают, а мотиониновую тРНК из суммарной тРН Е. соН В очищают известными методами. При определении активности фермента использовали АТФ-Na соль, восстановленный глутатион C-L-метионин (56 К.) Р 2-пирофосфат натрия (10 Ки1моль), активированный уголь Norit А трис НС1 и р-меркаптоэталол и остальные вещества коммерческой чистоты без предварительной очистки. Ингибирование реакций аминоацилироваиия тРНК и АТФ-ФФ обмена проводят в стандартных условиях три 37-37,5° С в течение 15 мин. 50 мкл 9-ilO- -9- раствора а-амино-у- (метилтио)-иропилфосфонил -5-аде-нилата вносят в инкубадионную пробу непосредственно перед добавлением фермента. Инкубационная смесь содержит в пересчете на 0,5 мл: 0 мкмоль грмс НС1 (рН 7,4), 5 мкмоль хлористого магния, 5 мкмоль хлористого калия, 1 мкмоль восстановленного глутатиона, 1мкмоль АТФ, 10 нмоль C -L-метионина, 0,2 мг тРПК и 0,007 мг фермента. Выход С -метионил-тРИК определяют по известному методу. Скорость АТФ-ФФг обмена определяют в реакционной смеси, содержащей в 1 мл: 100 мкмоль грыс НС1 (рН 8,0), 5 мкмоль хлористого магиия, 100 мкмоль фтористого калия, 10 мкмоль (З-меркаптоэтанола, 2мкмоль АТФ, 2 мкмоль Р -пирофосфата натрия, 0,015 мк фермента. Пробы анализируют известным методом. Константа ,ингибирования метионил-тРНК синтетазы в реакции АТФ-ФФ,- обмена равна Кг(М) , 3 реакции а.миноацилироваиия тРНК К,(М) 5. 10-S.
АТФ-аденозинтрифосфат; ФФ;-пипофосфатший обмеи.
Формула изобретения
CHj- й- СНг-йнг-.Сн-Р - о-Р КiiH20ifa
для избирательного инпгбирозания ферментов биосинтеза белка в клетке.
конденсируют с аденозин-5-фосфатом в присутствии К,М-ди1Циклогекс11Лкарбодиимида в водном пиридине, содержащем СОЛЯНУЮ КИСЛОТУ.
