ШТАММ ACTINOBACULUM SUIS 2 A, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ АНТИГЕННЫХ ДИАГНОСТИКУМОВ ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ И РЕАКЦИЙ НЕПРЯМОЙ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ УРОЦИСТИТОВ И ПИЕЛОНЕФРИТОВ У СВИНОМАТОК Российский патент 2001 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/01 A61K39/05 

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, эпизоотологии и может быть использовано в работе бактериологических лабораторий.

При создании изобретения ставилась задача изыскания штамма бактерий, легко и быстро размножающегося на естественных и искусственных питательных средах и обладающего выраженными антигенными свойствами.

Известны штаммы Actinobaculum (Corynebacterium, Eubacterium, Actinomyces) suis, выделенные Soltys M.A., Spratling F.R.(1957) (1); Larsen, J.L. (1970) (2); Jones, J.E. T., E. Farries u. D. Smidt (1982) (3). Штамм Actinobaculum suis в отечественных коллекциях отсутствует.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является штамм Corynebacterium suis. В этой связи достаточно наглядным примером может служить работа Larsen J.L. (2). Из указанных свойств три характеристики данного возбудителя непостоянны - ферментация глюкозы, сахарозы, ксилозы. В отечественной специальной литературе сведений о выделении Actinobaculum suis нами не обнаружено.

Задача решается новым штаммом Actinobaculum suis 2A, используемым для приготовления диагностикума /антиген для реакции непрямой иммунофлюоресценции, антиген для серологических реакций/. Штамм получен с использованием традиционных микробиологических приемов 10 июля 1998 года из мочи свиноматки с клиническими признаками уроцистита и пиелонефрита, принадлежащей подсобному хозяйству Ачаирское Омской области.

Данному штамму присвоен регистрационный номер 0699 (22 декабря 1999 г.), депонированный в НИИ коллекции культур микроорганизмов Государственного научного центра ВБ "Вектор", 633159, НСО, г. Кольцово, ГНЦ ВБ "Вектор", НИИ ККМ, где он находится на хранении.

Штамм характеризуется следующими морфологическими, культуральными и физиолого-биохимическими признаками.

Морфологические признаки.

Указанный штамм обладает выраженным полиморфизмом. В мазках из культур микроорганизм присутствует в виде относительно мелких палочек с закругленными концами. Размеры клеток в длину в среднем составляют 1,5-3,5, а толщина - 0,3-0,7 мкм.

В мазках из молодых культур бактерии часто располагаются под углом друг к другу, что свидетельствует о разламывающимся типе деления. По Граму микроорганизм окрашивается положительно, неподвижен, спор и капсул не образует.

Культуральные и физиолого-биохимические признаки.

На специальной питательной среде, состоящей из колумбийского агара, 10% дефибринированной крови лошади, 2% глюкозы, колистина сульфата 10 мг/л, налидиксина ацида 15 мг/л, метронидазола 50 мг/л. Растет как факультативный анаэроб, на 3-и сутки образуя серо-белые, круглые с неровными волнистыми краями колонии, имеющие небольшие плоские возвышения в центре, с шероховатой и сухой поверхностью. Выросшие колонии, как правило, легко отделяются от поверхности среды, хорошо суспензируются в физиологическом растворе. Диаметр колоний на третьи сутки культивирования достигает 2-3 мм.

На поверхности мясопептонного агара в чашках Петри или на поверхности скошенного агара в пробирках образуются отдельные, мелкие, круглые колонии, серовато-белого цвета. Колонии, выросшие на поверхности МПА, не прилегают плотно к поверхности среды и легко смещаются с места и распадаются при соприкосновении с платиновой бактериологической петлей.

На МПБ штамм на третьи сутки культивирования дает слегка заметную пленку на поверхности среды и слабое помутнение бульона. При встряхивании пленка и осадок разрушаются и медленно оседают на дно пробирки.

В тиогликолат бульоне микроорганизм образует облакоподобный, мелкохлопчатый осадок на дне пробирки и вдоль ее стенки.

Максимальный рост на питательных средах отмечается на 3-4 сутки культивирования при температуре +37^oC в анаэробных условиях.

Штамм содержит уреазу, не содержит каталазу и желатиназу, не редуцирует нитраты в нитриты, ферментирует мальтозу, рибозу, ксилозу, сорбит, глюкозу, сахарозу.

У восприимчивых животных - свиноматок - при заражении в мочевой пузырь с помощью специального катетера в дозе 5 мл с содержанием 5•10⁸ микробных тел через 2-6 месяца при убое обнаруживается уроцистит, в большинстве случаев геморрагического или некротического характера, в некоторых случаях при хроническом течении инфекции - гнойный пиелонефрит.

Дополнительные сведения о штамме.

Микроорганизм не вызывает гемолиза и дает положительную CAMP-тест реакцию.

Молекулярная характеристика:
1. Спектральная характеристика:
D 260 - 1.51
D 280 - 0.78
A 260/280 - 2.4
A 260/230 - 1.93
2. Концентрация - 0.23 мг/мл
3. Температура плавления /Т.пл./ - 77.35
4. Величина содержания Г+Ц 54.5 моль/%
Особенностью штамма является сложность выделения нуклеиновых кислот из ДНК.

При получении 16S РНК последовательности нескольких десятков штаммов Actinobaculum suis, выделенных от больных свиноматок, а также из содержимого препуциального дивертикула клинически здоровых хряков в Омской области, штамм 2 А отнесен к первой группе (Плешакова В.И., Конин Д.В. - неопубликованные данные).

Микроорганизм относительно слабо устойчив к повышенным температурам при +55^oC сохраняет жизнеспособность в течение 30 минут, при +60^oC - 20 минут.

При ультрафиолетовом облучении с расстояния одного метра микроорганизм погибает в течение 30 минут (Липатов П.П., Буяльский К.М. (3)).

Штамм не чувствителен in vitro к гентамицину, однако на него губительно действуют: окситетрациклин, пенициллин, оксациллин, эритромицин, хлорамфеникол, амоксициллин, стрептомицин, ампициллин, моноцин, неомицин, линкомицин.

Учитывая наличие у предлагаемого штамма ряда отличительных свойств от описанных в зарубежной литературе аналогов, таких как несколько другое содержание Г+Ц в ДНК - 54,5 мол.%, отношение к определенной (1) группе микроорганизмов данного вида по 16S РНК последовательности, несколько иные биохимические свойства (ферментирует мальтозу, глюкозу и сахарозу), устойчивость к определенному антимикробному препарату (гентамицину), он может быть использован в качестве референтного штамма.

Кроме того, штамм Actinobaculum suis 2 А может быть использован для приготовления диагностикумов (антигена, для серологической реакции и реакции непрямой иммунофлюоресценции).

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано в работе бактериологических лабораторий для приготовления диагностикумов. Штамм получен с использованием традиционных микробиологических приемов из мочи свиноматки с клиническими признаками уроцистита и пиелонефрита. Штамм задепонирован в НИИ коллекции культур микроорганизмов ГНЦВБ "Вектор" под номером 0699. Выраженные антигенные свойства и способность быстро и легко размножаться на искусственных и естественных средах позволяют использовать данный штамм в качестве референтного штамма при приготовлении диагностикумов.

Штамм Actinobaculum suis 2 A 0699, депонированный в НИИ коллекции культур микроорганизмов Государственного научного центра ВБ "Вектор", используемый для приготовления антигенных диагностикумов для серологических реакций и реакций непрямой иммунофлюоресценции для диагностики уроциститов и пиелонефритов у свиноматок.